Наборы для пцр диагностики при туберкулезе

В 2004 году по инициативе д.м.н., профессора Михаила Александровича Владимирского, заведующего сектором молекулярной диагностики туберкулёза НИИ Фтизиопульмонологии Первого МГМУ им. И.М.Сеченова, мы начали разработки в области ПЦР-диагностики туберкулёза.

Выделение ДНК: использование оригинальных реагентов и магнитных частиц обеспечивает получение максимального количества чистой ДНК и позволяет автоматизировать процесс выделения ДНК.

ПЦР в реальном времени: одновременная детекция нескольких различных участков генома комплекса микобактерий туберкулёза (МБТ) увеличивает информативность и достоверность анализа.

I этап – Пробоподготовка, инактивация

II этап – Выделение ДНК

набор реагентов для выделения ДНК (на магнитных частицах)

набор реагентов для выделения ДНК микобактерий из клинических образцов и культур клеток на автоматизированных станциях TECAN

• Снижение риска контаминации во время выделения ДНК практически до нуля.
• Значительное уменьшение трудоёмкости процесса выделения ДНК.
• Стандартизированное выделение ДНК из клинических образцов.
• Экономическая выгода: низкий расход пластика и реактивов.

набор реагентов для ускоренной пробоподготовки и выделения ДНК микобактерий из образцов мокроты

III этап – ПЦР в реальном времени

Обнаружение и количественное определение комплекса МБТ

Набор реагентов АМПЛИТУБ-РВ — это:

• высокая достоверность анализа благодаря одновременному обнаружению двух специфичных генов M.tuberculosis complex: IS6110 и regX3;
• оценка пригодности образца ДНК для определения антибиотикоустойчивости;
• высокая чувствительность (не более 100 КОЕ/мл мокроты или 1–10 копий фрагментов ДНК в реакции) и 100%‑ая специфичность, подтверждённые на панели QCMD (Quality Control for Molecular Diagnostics) Mtb EQA (UK).

Определение антибиотикоустойчивости МБТ к препаратам I и II ряда

Наборы реагентов АМПЛИТУБ-МЛУ-РВ, АМПЛИТУБ-FQ-РВ — это:

• диагностика форм туберкулеза с лекарственной устойчивостью, в том числе множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ) и широкой лекарственной устойчивостью (ШЛУ);
• быстрая детекция мутаций M.tuberculosis, ассоциирующихся с устойчивостью к антибиотикам первого и второго ряда (рифампицину, изониазиду, этамбутолу, фторхинолонам);
• достоверность результатов, ежегодно подтверждаемая при проведении Федеральной службой внешней оценки качества (ФСВОК) Росздравнадзора испытаний шифрованных тест-культур и образцов.

Наборы АМПЛИТУБ-МЛУ-РВ и АМПЛИТУБ-FQ-РВ основаны на использовании оригинальной мультиконкурентной аллель-специфичной методики ПЦР в реальном времени, позволяющей выявлять мутации в генах микобактерий туберкулеза, ответственных за устойчивость к конкретным антибиотикам.

Принцип мультиконкурентной аллель-специфичной методики ПЦР в реальном времени

• В формате одной пробирки используются 5’-флуоресцентно-меченые аллель-специфичные праймеры с общим комплементарным им 3’-меченым олигонуклеотидом-гасителем и контрольный флуоресцентный зонд, комплементарный участку ДНК без мутаций.
• При отсутствии мутаций в ДНК нарастание флуоресценции в ходе ПЦР-РВ наблюдается только по флуорофору зонда.
• При наличии мутаций в ДНК нарастание флуоресценции в ходе ПЦР-РВ наблюдается как по флуорофору зонда, так и по флуорофору 5’-флуоресцентно-меченого аллель-специфичного праймера. Данный метод позволяет определить не только точку мутации, но и процент устойчивого мутантного штамма МБТ на фоне дикого.

Интерпретация результатов выявления мутаций на примере
531 кодона rpoB гена M.tuberculosis

Гены, кодоны, замены, используемые в наборах реагентов
АМПЛИТУБ-МЛУ-РВ при определении антибиотикоустойчивости

Использование автоматизированных станций Freedom EVO (TECAN, Швейцария) для молекулярно-генетической диагностики туберкулёза

Трудозатраты — 1 час
Продолжительность выделения ДНК — не более 2 часов
Подготовка к амплификации и ПЦР-РВ — 1,5 часа

ИТОГО: результаты анализа будут готовы через 3,5 часа
Оператор затратит 1 час своего рабочего времени.

Туберкулез - хроническая инфекция с длительным периодом выделения возбудителя, многообразием клинических проявлений, поражением различных органов и систем - представляет непростую задачу для лабораторной диагностики. Молекулярно-биологические методы (ПЦР) используются для выявления, видовой дифференциации и определении лекарственной устойчивости микобактерий туберкулезного комплекса.

Ввиду биологических особенностей возбудителя и иммунного ответа человека диагностика туберкулеза не может ограничиваться каким-либо одним методом и должна проводиться комплексно.

Возбудители туберкулеза могут быть обнаружены в различных биоматериалах, природа которых определяет выбор наборов реагентов для экстракции ДНК. Ключевой принцип выбора биоматериала для диагностики туберкулеза методом ПЦР: необходимо выбирать биоматериал, соответствующий клинической форме туберкулезной инфекции.

Например, для диагностики туберкулеза мочеполовой системы нужно исследовать мочу или менструальную кровь, рекомендуется также исследовать биоптаты из подозрительного очага. Для диагностики туберкулеза легких используется мокрота, бронхо-альвеолярный лаваж.

Реагенты и оборудование для предобработки биоматериалов и экстракции ДНК

Наборы реагентов для экстракции ДНК из мокроты, бронхо-альвеолярного лаважа, мочи, синовиальной жидкости и смывов с объектов окружающей среды	АмплиПрайм ДНК-сорб-В и АмплиПрайм РИБО-преп
Реагент для разжижения мокроты и синовиальной жидкости	Муколизин
Набор для экстракции ДНК, используемый при исследовании биоптатов (легкие, лимфатические узлы, почки, печень, мозг, селезенка)	ДНК-сорб-С
Оборудование для гомогенизации биоптатов	TissueLyser LT или TissueLyser II
Парафиновые блоки нарезают на микротоме или вырезают фрагмент ткани одноразовым скальпелем, а затем проводят экстракцию ДНК, например, с помощью набора реагентов QIAamp DNA FFPE Tissue Kit (50)	QIAamp DNA FFPE Tissue Kit (50)

Наборы реагентов для ПЦР-диагностики туберкулеза

Применение молекулярно-биологических методов (в частности, выявление ДНК методом ПЦР) в диагностике туберкулеза регламентировано Приказом Минздрава РФ от 21.03.2003 № 109 "О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации" (ред. от 29.10.2009).

Выявление микобактерий туберкулезного комплекса

Набор реагентов АмплиСенс® МТС-FL предназначен для обнаружения ДНК микобактерий туберкулеза – Mycobacterium tuberculosis complex (MTC), включающий в себя виды микобактерий разной степени вирулентности, вызывающих туберкулез у человека (M.tuberculosis, M.bovis, M.africanum, M.microti, M.canetti, М.pinipedii).

Микобактерии туберкулеза выявляются без видовой дифференциации; микобактерии, не относящиеся к MTC (например, M.avium и M.paratuberculosis) - не выявляются. Данный набор реагентов используется в топической диагностике туберкулеза и позволяет быстро (за несколько часов) с высокой чувствительностью и специфичностью (близким к 100%) определять наличие микобактерий туберкулеза в образце биоматериала.

Благодаря высокой скорости и информативности в диагностике туберкулеза, методы амплификации нуклеиновых кислот (в том числе ПЦР) в 2010 году были предложены CDC США для подтверждения диагноза туберкулеза наряду с культуральным методом.

Видовая дифференциация микобактерий туберкулеза методом ПЦР

Не менее важно дифференцирование до вида внутри группы MTC. Это связано с необходимостью определения источника заболевания, определения тактики противотуберкулезной терапии, а также для подтверждения случаев поствакцинальных осложнений.

С этой задачей позволяет справиться набор реагентов АмплиСенс® МТС-diff-FL, предназначенный для дифференцирования видов микобактерий туберкулеза внутри MTC: человеческого (M.tuberculosis), бычьего (M.bovis) и вакцинного штамма (M.bovis BCG) – в клиническом материале и культурах микроорганизмов.

Актуальность видовой дифференциации определяется, например, тем, что разные виды микобактерий отличаются профилем лекарственной устойчивости. Например, M.bovis и её вакцинный штамм M.bovis BCG отличаются природной резистентностью к одному из основных противотуберкулезных препаратов - пиразинамиду. Поэтому при туберкулезе, вызванной M.bovis, и БЦЖите пиразинамид не назначается.

Приказом Минздрава РФ от 21.03.2003 № 109 "О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации" (ред. от 29.10.2009) регламентировано применение наборов реагентов, дифференцирующих M.bovis от ее вакцинного штамма M.bovis BCG, для диагностики БЦЖита.

Определение лекарственной устойчивости туберкулеза

Распространение штаммов туберкулеза с лекарственной устойчивостью, в том числе с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ, или MDR) составляет одну из серьезнейших проблем современного здравоохранения. Определение лекарственной устойчивости туберкулеза с помощью молекулярно-биологических методов всё шире применяется ввиду высокой скорости получения результатов (1-2 дня), что становится возможным благодаря использованию не только первичной культуры, но и непосредственно клинического материала.

Важно понимать, что наборы реагентов, основанные на разных молекулярно-биологических методах, характеризуются разными показателями диагностической чувствительности и специфичности.

Наименование набора реагентов	АмплиСенс® MTC-Rif-Seq	АмплиСенс® MTC-PZA-Seq
Исследуемый ген	rpo B	pnc A
Препараты, к которым определяется устойчивость	рифампицин	пиразинамид
Кол-во выявляемых мутаций	более 200	более 500

Наборы включают реагенты для амплификации фрагментов ДНК микобактерий туберкулеза, очистки продуктов амплификации (сорбентным методом), определения концентрации очищенного продукта амплификации и праймеры для секвенирования. Наборы для экстракции ДНК (АмплиПрайм РИБО-преп или ДНК-сорб-С ) и реагенты для проведения реакции секвенирования приобретаются отдельно.

Нормативные документы, публикации, информационные материалы >>

Т. Ю. Салина, Т. И. Морозова Государственный медицинский университет, областной противотуберкулёзный диспансер, Саратов.

Важной проблемой фтизиатрии остаётся диаг­ностика и верификация диагноза туберкулёза у больных без выделения микобактерии. Туберкулёз без бактериовыделения часто труден для диагно­стики и дифференциальной диагностики [4]. До настоящего времени, несмотря на внедрение таких современных технологий, как компьютерная и маг­нитно-резонансная томография, и целый ряд ин­струментальных и инвазивных методов, диагноз туберкулёза и рака лёгких нередко ставится методом проб и ошибок. По-прежнему высок (34-40%) удельный вес ошибочной диагностики туберкулёза [3, 5]. Кроме того, существует определённая категория больных, у которых морфологическая вери­фикация диагноза невозможна из-за возраста, тяжёлых сопутствующих заболеваний или отказа па­циентов от применения инвазивных методов об­следования. Разработка и внедрение в практику относительно простых, преимущественно нелучевых методов диагностики туберкулёза и его дифференциальной диагностики с другой лёгочной патоло­гией позволяют обосновать реальные пути сниже­ния смертности от этих заболеваний.
Целью исследования является изучение диагностической информативности прямых (молекулярно-генетических) и непрямых (серологических) методов в дифференциальной диагностике туберкулёза и других заболеваний лёгких, особенно он­кологической природы.
Обследовано 96 больных с трудностями дифференциальной диагностики туберкулёза и другой лёгочной патологии, находившихся на стационарном обследовании и лечении в Саратовском областном противотуберкулёзном диспансере. Пациенты бы­ли в возрасте от 18 до 75 лет. Из них было 50 муж­чин, 46 женщин. Отбор пациентов проводили сле­пым методом с последующей ретроспективной оценкой результатов обследования по окончатель­ному диагнозу.
Для верификации диагноза применяли ком­плекс обследований, включающий микробиологи­ческие, рентгенотомографические и в ряде случаев инструментальные методы (фибробронхоскопию, компьютерную томографию органов грудной клет­ки, УЗИ внутренних органов, диагностическую торакотомию, плевроскопию с биопсией и последующим гистологическим и цитологическим исследо­ванием материала).

Т. Ю. Салина, Т. И. Морозова Государственный медицинский университет, областной противотуберкулёзный диспансер, Саратов.

После комплексного клинико-рентгенологиче­ского и инструментального обследования диагноз активного туберкулёза установлен у 52 пациентов, онкологические заболевания - у 28, другие лёгочные заболевания - у 16. Морфологически при ди­агностической торакотомии и оперативном лече­нии диагноз верифицирован у 12 (12,5%) пациен­тов, посмертно по результатам патолого-анатомического вскрытия — у 2 (2,1%). В группе больных активным туберкулёзом у 25 пациентов установлен диагноз туберкуломы, у 21 больного - инфильтративного туберкулёза лёгких и у 6 - диссеминиро­ванного туберкулёза лёгких.
Среди онкологических больных перифериче­ский рак лёгкого установлен у 19 (67,9%) пациен­тов, центральный рак лёгкого - у 5 (17,9%), доброкачественные опухоли лёгких - у 3 (10,7%), метастатические поражения лёгких - у 1 (3,6%) пациента. Другие лёгочные заболевания были пред­ставлены пневмониями у 3 (18,8%) пациентов, саркоидозом у 2 (12,5%), паразитарными кистами лёгких у 2 (12,5%), хронической обструктивной болезнью лёгких у 8 (50%), лимфогранулематозом у 1 (6,3%) больного.
Всем пациентам проводили однократное исследование мокроты молекулярно-генетическим методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР Real Time ) и параллельное исследование сыворотки крови на антитела к микобактериям туберкулёза методом иммуноферментного анализа (ИФА). Забор материала для ис­следования проводили на догоспитальном этапе.
Базовая методология ПЦР в режиме реального времени основана на выделении очищенных нуклеиновых кислот, проведении ПЦР и гибридиза­ции с высокоспецифичными ДНК-зондами, ме­ченными флуорохромами, совмещении этапов ам­плификации и детекции результатов исследования.
Реакцию проводили с использованием ДНК- амплификатора с оптическим блоком iCycler Q ("BioRad", США). Исключение в данной методике этапа гель-электрофореза для детекции результатов позволило значительно снизить риск внутрилабораторной контаминации продуктами реакции. Ис­пользовали отечественные наборы реагентов ("ДНК-технология", Москва). Для детекции специ­фического продукта применяли краситель FAM, для внутреннего контроля - HEX. Результаты оце­нивали в соответствии с числом циклов, после которых детектировался подъем флюоресценции от изолинии.
Специфические антитела к М. tuberculosis в сыворотке крови определяли методом твердофазного ИФА (тест-система "АТ-ТУБ-Бест-стрип" ЗАО "Вектор-Бест", Новосибирск). Учет результатов проводили на многоканальном оптическом компа­раторе марки "Линкей" (НПО "Научные приборы", Санкт- Петербург).
Для оценки диагностической значимости ука­занных выше методов проводили вычисление их операционных характеристик: диагностической чувствительности, диагностической специфично­сти, диагностической эффективности, прогности­ческой ценности положительного результата и прогностической ценности отрицательного резуль­тата.
Статистическую обработку результатов исследо­вания проводили с помощью компьютерных про­грамм " Microsoft Excel " для Windows и " Statistica ". Использовали специальные статистические мето­дики - критерий соответствия % 2 на основе табли­цы взаимной сопряженности ("четырехпольной таблицы"), для оценки достоверности разности от­носительных величин рассчитывали величину р, указывающую вероятность безошибочного про­гноза.
Сравнительный анализ эффективности ПЦР ( Real Time ) и метода ИФА показал, что ПЦР отли­чается большей чувствительностью и специфично­стью получаемых результатов. Так, методом ПЦР ( Real Time ) было обнаружено 40 (76,9%) положи­тельных результатов в группе из 52 больных актив­ным туберкулезом, в то время как методом ИФА антитела к М. tuberculosis были выявлены только у 29 (55,8%) из 52 пациентов (р = 0,0254). Из них при туберкулемах (п = 25) методом ПЦР обнаружено 20 (80%) положительных результатов, методом ИФА — 13 (52%) (р = 0,420) Не получены досто­верные различия при обследовании пациентов с инфильтративным туберкулёзом (п = 21), чувстви­тельность ПЦР составила 16 (76,2%) из 21, ИФА - 13 (61,9%) из 21 (р = 0,3325). Ложноположитель­ные результаты ПЦР ( Real Time ) получены у 1 (3,6%) из 28 пациентов с онкологическими заболе­ваниями лёгких, методом ИФА - у 4 (14,3%) боль­ных (у 2 пациентов с центральным раком лёгкого и у 2 - с периферическим раком лёгкого). Среди па­циентов с неспецифическими заболеваниями лёгких получен 1 (6,3%) ложноположительный резуль­тат методом ПЦР у пациентки с лимфогранулема­тозом и 1 (6,3%) - методом ИФА у больного с эхи­нококковой кистой. Совпадение результатов ис­следования при использовании обоих методов на­блюдалось у 31 (59,6%) из 52 больных активным туберкулёзом, у 21 (75%) из 28 больных с онкологи­ческими заболеваниями лёгких и у 15 (93,8%) из 16 больных с неспецифическими заболеваниями лёгких, всего у 67 (69,8%) из 96 диагностированных больных. Обращает на себя внимание высокий удельный вес (14,3%) ложноположительных ре­зультатов, полученных методом ИФА, у больных с онкологическими заболеваниями лёгких.
По данным литературы [2], при постановке лю­бых серологических проб у некоторых лиц, не больных туберкулёзом, могут определяться антите­ла к М. tuberculosis, что связано с возможностью перекрестных реакций на антигены других бактерий, общих с микобактериями туберкулёза, про­дукции антител в результате контакта с микобакте­риями окружающей среды, увеличением фонового уровня антител в результате поликлональной сти­муляции и неспецифического связывания других сывороточных факторов. Кроме того, существуют некоторые виды опухолей (эпидермоидный рак лёгкого), которые, вероятно, обладают способно­стью экспрессировать антигены, сходные с антиге­нами микобактерий туберкулёза [1].
Сравнительная операционная характеристика ИФА и ПЦР ( Real Time ) представлена в таблице. Как следует из таблицы, метод ПЦР обладает боль­шей чувствительностью (76,9%) и специфичностью (95,5%), чем метод ИФА (соответственно 55,8 и 88,6%). При обследовании онкологических боль­ных специфичность метода ПЦР достигает 96,4%, тогда как специфичность ИФА на 10,7% ниже.

В результате исследования установлено, что использование новой молекулярно-генетиче­ской технологии ПЦР ( Real Time ) позволяет улучшить качество диагностики туберкулёза за счёт увеличения прогностической ценности по­ложительного результата до 95,2% против 85,3% в ИФА (р = 0,0220) и прогностической ценности отрицательного результата до 77,7% против 62,9% соответственно (р = 0,0238), что особенно важно при обследовании дифференциально-ди­агностических больных. Однако методы сероло­гической диагностики туберкулёза очень важны при обследовании пациентов, не выделяющих мокроту.

1. Кноринг Б. Е., Ариель Б. М. Оценка клинической значимо­сти туберкулиновой сенсибилизации у больных раком лег­кого // Пробл. туб. - 1996. -№ 2. - С. 26-30.
2. Литвинов В. И., Гергерт В. Я., Мороз А. М. и др. Иммуно­логия туберкулеза: современное состояние проблемы // Вестн. РАМН. -1999. - № 7. - С. 8-11.
3. Мишин В. Ю., Дейкина О. Н., Назарова Н. В. Дифференци­альная диагностика туберкулеза легких и внебольничной пневмонии // Consilium Medicum . -2004. -Т. 6, № 4. - С. 232-238.
4. Хоменко А. Г. Туберкулез вчера, сегодня, завтра // Пробл. туб. — 1997. -№ 5. - С. 9-11.
5. ЮкелисЛ. И., Садиков П. В., Евфимьевский Л. В. Проблема раннего выявления и диагностики туберкулеза // Рус. мед. журн. - 2002. - Т. 10, № 16 (160). -С. 699-700.

Новый набор реагентов для выявления ДНК вируса герпеса человека 8 типа методом ПЦР в режиме реального времени РеалБест ДНК ВГЧ-8 more

Получена СЕ марка на ПЦР-наборы для диагностики ИППП, респираторных инфекций, кандидоза, ВПЧ-инфекции. more

ID] => 2423 [TIMESTAMP_X] => 18.06.2019 09:49:15 [

TIMESTAMP_X] => 18.06.2019 09:49:15 [MODIFIED_BY] => 9321 [

MODIFIED_BY] => 9321 [DATE_CREATE] => 18.06.2019 09:49:15 [

DATE_CREATE] => 18.06.2019 09:49:15 [CREATED_BY] => 9321 [

CREATED_BY] => 9321 [IBLOCK_ID] => 17 [

IBLOCK_ID] => 17 [IBLOCK_SECTION_ID] => 2403 [

IBLOCK_SECTION_ID] => 2403 [ACTIVE] => Y [

ACTIVE] => Y [GLOBAL_ACTIVE] => Y [

GLOBAL_ACTIVE] => Y [SORT] => 10800 [

SORT] => 10800 [NAME] => Туберкулёз [

NAME] => Туберкулёз [PICTURE] => [

PICTURE] => [LEFT_MARGIN] => 236 [

LEFT_MARGIN] => 236 [RIGHT_MARGIN] => 237 [

RIGHT_MARGIN] => 237 [DEPTH_LEVEL] => 2 [

DEPTH_LEVEL] => 2 [DESCRIPTION] => [

DESCRIPTION] => [DESCRIPTION_TYPE] => text [

DESCRIPTION_TYPE] => text [SEARCHABLE_CONTENT] => ТУБЕРКУЛЁЗ [

SEARCHABLE_CONTENT] => ТУБЕРКУЛЁЗ [CODE] => [

SOCNET_GROUP_ID] => [LIST_PAGE_URL] => /prod/index.php [

LIST_PAGE_URL] => /prod/index.php [SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2423 [

SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2423 [IBLOCK_TYPE_ID] => products [

IBLOCK_TYPE_ID] => products [IBLOCK_CODE] => catalog [

IBLOCK_CODE] => catalog [IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [

EXTERNAL_ID] => [IPROPERTY_VALUES] => Array ( ) [PATH] => Array ( [0] => Array ( [ID] => 2403 [

ID] => 2403 [CODE] => root_pcr [

CODE] => root_pcr [XML_ID] => [

EXTERNAL_ID] => [IBLOCK_ID] => 17 [

IBLOCK_ID] => 17 [IBLOCK_SECTION_ID] => [

IBLOCK_SECTION_ID] => [SORT] => 8800 [

SORT] => 8800 [NAME] => ПЦР диагностика [

NAME] => ПЦР диагностика [ACTIVE] => Y [

ACTIVE] => Y [DEPTH_LEVEL] => 1 [

DEPTH_LEVEL] => 1 [SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2403 [

SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2403 [IBLOCK_TYPE_ID] => products [

IBLOCK_TYPE_ID] => products [IBLOCK_CODE] => catalog [

IBLOCK_CODE] => catalog [IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [

IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [GLOBAL_ACTIVE] => Y [

GLOBAL_ACTIVE] => Y [IPROPERTY_VALUES] => Array ( ) ) [1] => Array ( [ID] => 2423 [

EXTERNAL_ID] => [IBLOCK_ID] => 17 [

IBLOCK_ID] => 17 [IBLOCK_SECTION_ID] => 2403 [

IBLOCK_SECTION_ID] => 2403 [SORT] => 10800 [

SORT] => 10800 [NAME] => Туберкулёз [

NAME] => Туберкулёз [ACTIVE] => Y [

ACTIVE] => Y [DEPTH_LEVEL] => 2 [

DEPTH_LEVEL] => 2 [SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2423 [

SECTION_PAGE_URL] => /prod/index.php?SECTION_ID=2423 [IBLOCK_TYPE_ID] => products [

IBLOCK_TYPE_ID] => products [IBLOCK_CODE] => catalog [

IBLOCK_CODE] => catalog [IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [

IBLOCK_EXTERNAL_ID] => [GLOBAL_ACTIVE] => Y [

GLOBAL_ACTIVE] => Y [IPROPERTY_VALUES] => Array ( ) ) ) ) [SECTIONS_COUNT] => 0 )

РеалБест ДНК МВТС (форма 2)

Набор реагентов для выявления ДНК микобактерий туберкулёзного комплекса методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Не содержит реагентов для выделения ДНК.

Россия готовится к тотальному тестированию, новые тест-системы позволяют быстро провести масштабную проверку на вирус. К массовому выпуску приступил один из разработчиков нового продукта, два других начинают производство. Олег Гусев, ведущий научный сотрудник Научно-клинического центра прецизионной и регенеративной медицины Казанского федерального университета и института физико-химических исследований RIKEN (Япония) помог РБК Тренды разобраться в том, как устроено тестирование на коронавирус в России и в мире.

Что предлагает ВОЗ

Глава Всемирной организации здравоохранения Тедрос Гебреисус еще в середине марта призвал страны проводить как можно больше тестов на вирус, который вызывает заболевание SARS-CoV-2, даже людям без симптомов. Согласно руководству ВОЗ, анализы на коронавирус COVID-19 должны проводиться методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с обратной транскрипцией. Как говорится в рекомендациях, на сегодня это самый точный и надежный метод диагностики вирусной инфекции. Он позволяет определить даже очень небольшое количество РНК вируса в биологическом материале человека. Это помогает выявить болезнь в инкубационном периоде.

Изобретенный в 1983 году метод и сейчас считается фундаментальным в молекулярной диагностике. Американский ученый, который придумал способ значительного увеличения малых концентраций фрагментов ДНК в биологической пробе, получил за него Нобелевскую премию. Выявление ДНК/РНК методом ПЦР позволяет диагностировать такие заболевания, как ВИЧ, вирусные гепатиты, инфекции, передающиеся половым путем, туберкулез, боррелиоз, энцефалит и многие другие. Метод используют в археологии, криминалистике, генетике.

Как работает ПЦР-тест

Для анализа из физиологических жидкостей извлекают одноцепочечную РНК, моделируют на ее основе двуцепочечную ДНК и многократно дублируют с помощью специального фермента (полимеразы). Увеличение числа копий ДНК называется амплификацией. В результате концентрация определенных фрагментов ДНК/РНК в биологическом образце, изначально минимальная, значительно увеличивается. При исследовании копируется только необходимый для теста участок ДНК. И, конечно, дублирование происходит только в том случае, если искомый участок вирусной ДНК или РНК присутствует в исследуемом биоматериале. В случае с коронавирусом мазок для анализа берут из ротоглотки или носоглотки, поскольку в крови или в кале вирус появляется на более продвинутой стадии болезни.

Тест-система EMG — продукт совместной разработки российских и японских разработчиков, проводившейся с 2016 года, рассказывает Олег Гусев. На данный момент эти тесты включены в систему обязательного медицинского страхования в Японии.

В ближайшее время планируется производить до 2,5 млн. тестов и 1 тыс. портативных лабораторий в неделю. Сами тесты, как и многие реагенты производятся в России. Планируется, что цена на тесты EMG будет в среднем в пять раз меньше, чем на стандартные ПЦР-тесты в Европе.

Российско-японские тесты основаны на методе изотермальной молекулярной диагностики SmartAmp, превосходящем метод ПЦР по скорости работы в восемь раз, а переносная лаборатория позволяет тестировать до 20 пациентов в час, говорит Гусев.

Ключевое отличие теста EMG в том, что многие тесты, которые производятся сейчас, это тесты ИФА (имунноферментный анализ), а не ПЦР. Данные системы определяют антитела, которые организм начинает вырабатывать не ранее, чем через неделю после заражения. Российско-японская разработка позволяет получать результат уже за 30 минут, с точностью, равной почти 100%. Кроме того, тест EMG позволяет определить наличие вируса уже на самых ранних стадиях, в то время как другие системы диагностики короновируса обладают меньшей чувствительностью и не могут выявлять вирус на ранней стадии инфицирования.

Принцип технологии российско-японского теста, по сути, не отличается от классической ПЦР — это наращивание количества целевых фрагментов ДНК и их детекция. Однако в изотермической амплификации, в отличие от классической ПЦР, где необходимы циклы нагрева и охлаждения, все происходит при одной температуре. Это позволяет многократно увеличивать скорость реакции. Метод SmartAmp был изобретен более 15 лет назад (как и LAMP — другая популярная технология изотермальной амплификации, предшествующая SmartAmp). Впервые для инфекционных заболеваний эту технологию применили в 2009 году для быстрого выявления пандемического гриппа (H1N1) в Японии.

Повторные тесты необходимы при любом методе. Отрицательный тест на COVID-19 не гарантирует, что человек не заразится этим вирусом на следующий день. Поэтому, например, в японских лабораториях персонал тестируют каждые несколько дней. Повторный тест нужен и для того, чтобы подтвердить, что человек излечился.

Эта тест-система будет использоваться для диагностики COVID-19 не только в России и Японии. 40 тыс. тестов закупила Австрия, поступили заказы из других стран Европы, Ближнего Востока, и Латинской Америки. Подана заявка в Управление по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных препаратов США (FDA) для поставок в эту страну.

На данный момент в России прошли регистрацию еще три теста на коронавирус.

По некоторым данным, в Москве проводится около 700 тестов на коронавирус в сутки. В планах у московских властей увеличить этот показатель до 10 тыс. тестов в сутки, а затем довести его до 25—28 тыс. тестов ежедневно.

Новые разработки за рубежом

Компания Bosch выводит на рынок свой тест на коронавирус, который сначала будет доступен в Германии, а вскоре появится в других странах. В его основе лежит диагностический аппарат Vivalytic, который, по словам изготовителей, станет первым автоматизированным тестом на COVID-19. Тест распознает не только коронавирус, но еще шесть респираторных заболеваний, например, вирусы гриппа А и B. Во время лабораторных испытаний аппарата его точность составила 95%.

Как пишет издание ZME Science, анализ может проводиться прямо в стационаре или медицинском центре — не нужно отправлять образцы в лабораторию и ждать, пока придет ответ. Врачи смогут быстрее идентифицировать и изолировать зараженных, а пациентам не придется пребывать в неизвестности несколько дней. Тест прост в обслуживании и не требует специальной подготовки. Медперсоналу нужно только взять мазок из носа или горла пациента, нанести его на картридж, содержащий реагент, и вставить картридж в анализатор. Каждый аппарат может выполнять до десяти анализов за 24 часа.

Еще более оперативный тест на COVID-19 разработали в Великобритании. Он позволяет выявить COVID-19 всего за 30 минут. Чтобы провести его, достаточно портативного оборудования стоимостью около $120 и набора полосок для мазков из носа и горла по $5 каждая. Одновременно проходить тест могут до шести человек.

FDA в экстренном порядке одобрило сверхбыстрый тест на коронавирус, разработанный калифорнийской компанией Cepheid. С его помощью диагноз можно будет поставить всего за 45 минут. Как отмечает Business Insider, для обработки результатов теста не требуется специальное обучение. Нужен лишь доступ к системе Cepheid GeneXpert — в США их 5 тыс., а по всему миру — 23 тыс.

Начало тотального тестирования людей на COVID-19 во всем мире — хорошая новость как для людей, так и для национальных органов здравоохранения. До сих пор в мире нет четкого представления о том, сколько людей заражены коронавирусом и выявление тех, у кого он уже есть: их госпитализация или отправка на домашний карантин позволит быстрее оценить масштаб угрозы и вовремя принять правильные меры.

Читайте также:

• Кто не является источником заражения туберкулезом
• Основные методы выявления микобактерий туберкулеза
• Туберкулез легких и пневмокониозы
• Может ли ребенок заразиться туберкулезом если у него есть прививка
• Кого принимают в туберкулезный диспансер

№ по каталогу	Наименование и краткое описание	Количество определений
D-2398	РеалБест ДНК МВТС (форма 1) Набор реагентов для выявления ДНК микобактерий туберкулёзного комплекса методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Содержит реагенты для выделения ДНК и предобработки проб.	48
D-2399