Наборы для экспресс диагностики туберкулеза

В 2004 году по инициативе д.м.н., профессора Михаила Александровича Владимирского, заведующего сектором молекулярной диагностики туберкулёза НИИ Фтизиопульмонологии Первого МГМУ им. И.М.Сеченова, мы начали разработки в области ПЦР-диагностики туберкулёза.

Выделение ДНК: использование оригинальных реагентов и магнитных частиц обеспечивает получение максимального количества чистой ДНК и позволяет автоматизировать процесс выделения ДНК.

ПЦР в реальном времени: одновременная детекция нескольких различных участков генома комплекса микобактерий туберкулёза (МБТ) увеличивает информативность и достоверность анализа.

I этап – Пробоподготовка, инактивация

II этап – Выделение ДНК

набор реагентов для выделения ДНК (на магнитных частицах)

набор реагентов для выделения ДНК микобактерий из клинических образцов и культур клеток на автоматизированных станциях TECAN

Снижение риска контаминации во время выделения ДНК практически до нуля.
Значительное уменьшение трудоёмкости процесса выделения ДНК.
Стандартизированное выделение ДНК из клинических образцов.
Экономическая выгода: низкий расход пластика и реактивов.

набор реагентов для ускоренной пробоподготовки и выделения ДНК микобактерий из образцов мокроты

III этап – ПЦР в реальном времени

Обнаружение и количественное определение комплекса МБТ

Набор реагентов АМПЛИТУБ-РВ — это:

высокая достоверность анализа благодаря одновременному обнаружению двух специфичных генов M.tuberculosis complex: IS6110 и regX3;
оценка пригодности образца ДНК для определения антибиотикоустойчивости;
высокая чувствительность (не более 100 КОЕ/мл мокроты или 1–10 копий фрагментов ДНК в реакции) и 100%‑ая специфичность, подтверждённые на панели QCMD (Quality Control for Molecular Diagnostics) Mtb EQA (UK).

Определение антибиотикоустойчивости МБТ к препаратам I и II ряда

Наборы реагентов АМПЛИТУБ-МЛУ-РВ, АМПЛИТУБ-FQ-РВ — это:

диагностика форм туберкулеза с лекарственной устойчивостью, в том числе множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ) и широкой лекарственной устойчивостью (ШЛУ);
быстрая детекция мутаций M.tuberculosis, ассоциирующихся с устойчивостью к антибиотикам первого и второго ряда (рифампицину, изониазиду, этамбутолу, фторхинолонам);
достоверность результатов, ежегодно подтверждаемая при проведении Федеральной службой внешней оценки качества (ФСВОК) Росздравнадзора испытаний шифрованных тест-культур и образцов.

Наборы АМПЛИТУБ-МЛУ-РВ и АМПЛИТУБ-FQ-РВ основаны на использовании оригинальной мультиконкурентной аллель-специфичной методики ПЦР в реальном времени, позволяющей выявлять мутации в генах микобактерий туберкулеза, ответственных за устойчивость к конкретным антибиотикам.

Принцип мультиконкурентной аллель-специфичной методики ПЦР в реальном времени

В формате одной пробирки используются 5’-флуоресцентно-меченые аллель-специфичные праймеры с общим комплементарным им 3’-меченым олигонуклеотидом-гасителем и контрольный флуоресцентный зонд, комплементарный участку ДНК без мутаций.
При отсутствии мутаций в ДНК нарастание флуоресценции в ходе ПЦР-РВ наблюдается только по флуорофору зонда.
При наличии мутаций в ДНК нарастание флуоресценции в ходе ПЦР-РВ наблюдается как по флуорофору зонда, так и по флуорофору 5’-флуоресцентно-меченого аллель-специфичного праймера. Данный метод позволяет определить не только точку мутации, но и процент устойчивого мутантного штамма МБТ на фоне дикого.

Интерпретация результатов выявления мутаций на примере
531 кодона rpoB гена M.tuberculosis

Гены, кодоны, замены, используемые в наборах реагентов
АМПЛИТУБ-МЛУ-РВ при определении антибиотикоустойчивости

Использование автоматизированных станций Freedom EVO (TECAN, Швейцария) для молекулярно-генетической диагностики туберкулёза

Трудозатраты — 1 час
Продолжительность выделения ДНК — не более 2 часов
Подготовка к амплификации и ПЦР-РВ — 1,5 часа

ИТОГО: результаты анализа будут готовы через 3,5 часа
Оператор затратит 1 час своего рабочего времени.

Ключевое событие в области диагностики и лечения туберкулеза во всем мире

8 декабря 2010 г. | Лондон | Женева - Сегодня Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) одобрила новый и новаторский экспресс-тест на туберкулез (ТБ), особенно подходящий для стран, наиболее пораженных этой болезнью. Этот тест может кардинальным образом изменить лечение ТБ и борьбу с ним, так как с его помощью можно будет ставить точный диагноз для многочисленных пациентов примерно через 100 минут, в то время как на получение результатов тестов, применяемых в настоящее время, уходит до трех месяцев.

"Этот новый тест является ключевым событием в области диагностики и лечения ТБ на глобальном уровне. Он также подает новую надежду миллионам людей, подвергающихся наибольшему риску заболевания ТБ и развития лекарственно-устойчивой болезни, – заявил д-р Марио Равильоне, директор Департамента ВОЗ "Остановить ТБ". – У нас есть научные данные, мы определили политику, и теперь нашей целью является оказание поддержки в целях успешной реализации в странах".

ВОЗ одобрила экспресс-тест, который является полностью автоматизированным тестом амплификации нуклеиновых кислот (ТАНК), после 18 месяцев тщательной работы на местах для оценки его эффективности в раннем диагностировании ТБ, а также ТБ с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ-ТБ) и ТБ, осложненного ВИЧ-инфекцией, диагностировать которые сложнее.

Имеющиеся на сегодняшний день фактические данные свидетельствуют о том, что проведение этого теста может привести к троекратному увеличению числа пациентов с диагностированным лекарственно-устойчивым ТБ и удвоению числа случаев ВИЧ-ассоциированного ТБ, диагностированных в районах с высокими показателями ТБ и ВИЧ.

Многие страны до сих полагаются в большинстве случаев на микроскопию мазка мокроты – диагностический метод, разработанный более века назад. Но этот новый тест, выполняемый "в присутствии пациента", основан на современной ДНК-технологии, которая может быть использована за пределами обычных лабораторий. Одним из преимуществ этого теста является полная автоматизация, поэтому проводить его просто и безопасно.

Сейчас ВОЗ призывает к развертыванию полностью автоматизированного ТАНК в соответствии с четко определенными условиями и в качестве составной части национальных планов по лечению ТБ и МЛУ-ТБ и борьбе с ними. Будет также выпущено руководство в отношении политики и оперативной деятельности, основанное на заключениях ряда экспертных обзоров и глобальной консультации, проведенной на прошлой неделе в Женеве. В этой консультации приняли участие более ста представителей национальных программ, агентств по содействию развитию и международных партнеров.

Основным вопросом в процессе оценки была доступность по стоимости. Сегодня один из разработчиков, ФИНД (Фонд для инновационных и новых диагностических средств), объявляет о достигнутой с производителем, фирмой Цефеид, договоренности о снижении цены на 75% по сравнению с нынешней рыночной ценой для стран, наиболее пораженных ТБ. Льготные цены будут предоставлены 116 странам с низким и средним уровнем дохода, эндемичным по ТБ, причем при значительном спросе цена будет снижена дополнительно.

"Существует твердая решимость преодолеть все трудности, включая финансовые барьеры, которые могут помешать успешному развертыванию этой новой технологии, – заявил д-р Джорджио Россиньо, Исполнительный директор ФИНД. – Впервые за всю историю борьбы с ТБ мы делаем возможным доступ к самой современной технологии одновременно в странах с низким, средним и высоким уровнем дохода. Эта технология позволяет также проводить тестирование других болезней, что должно еще больше повысить ее эффективность".

ВОЗ также выпускает рекомендации и руководство для стран по включению этого теста в их программы. Сюда входят протоколы тестирования (или алгоритмы) для оптимизации использования и преимуществ новой технологии среди наиболее нуждающихся в ней людей.

Несмотря на значительные улучшения в области лечения ТБ и борьбы с ним, по оценкам, в 2009 году от туберкулеза умерло 1,7 миллиона человек, а в прошлом году у 9,4 миллиона человек развился активный ТБ.

Главная /
Лабораторная диагностика /
Экспресс-диагностика /
Экспресс-диагностика ABON

Наборы для экспресс-диагностики ABON