Гамма интерфероновый тест на туберкулез индекс стимуляции 3 7

Заболевание туберкулёзом (ТБ) широко распространено в мире, по данным ВОЗ в 2013 году было впервые зарегистрировано 9 миллионов случаев заболевания туберкулезом. Туберкулез у человека вызывают микобактерии туберкулеза (МБТ), объединяемые в группу микобактерий, называемую Mycobacterium tuberculosis complex .

МБТ передаются в основном воздушно-капельным путем. При этом возможно несколько вариантов исхода проникновения возбудителя в организм человека:

• полная элиминация МБТ;
• развитие заболевания;
• латентная туберкулезная инфекция (ЛТИ);
• реактивация туберкулеза.

Примерно 1/3 часть населения мира инфицирована МБТ, и только у 5-10% инфицированных лиц развивается заболевание. Состояние, когда МБТ присутствуют в организме человека, но при этом отсутствуют клинические и рентгенологические признаки туберкулеза, носит название латентная туберкулезная инфекция ( Latent tuberculosis infection , LTBI ). ЛТИ характеризуется наличием положительных кожных реакций на туберкулин . При наличии неблагоприятных факторов ЛТИ может перейти в активную форму туберкулеза. К группе высокого риска инфицирования МБТ относятся лица, имевшие контакт с больным ТБ, или имеющие высокую вероятность контакта (работники противотуберкулезных диспансеров, приютов, исправительных учреждений и др.), а также лица с сопутствующими заболеваниями (ВИЧ-инфекцией, сахарным диабетом и др.). Поэтому выявление лиц с ЛТИ, входящих в группу высокого риска развития активной формы туберкулеза, и их своевременное лечение имеют важное значение в борьбе с этим заболеванием.

В настоящее время для диагностики латентной ТБИ доступны кожные тесты: проба Манту и Диаскинтест®; а также γ-интерфероновые тесты (квантифероновый тест).

· у лиц с различными иммунодефицитами, в том числе ВИЧ-инфекцией;

· у недавно инфицированных лиц – в течение последних 10 недель ;

· у детей младше 6 месяцев.

С другой стороны, у пациентов с индивидуальной гиперчувствительностью к туберкулину, после вакцинации M . bovis BCG (БЦЖ) или же в силу других неопределенных факторов может наблюдаться ложноположительная реакция.

Противопоказания к проведению пробы Манту:

· Индивидуальная непереносимость туберкулина;

· Острые и хронические (в период обострения) инфекционные заболевания;

· Соматические заболевания в период обострения;

· Аллергические состояния (период обострения);

· Период карантина в детских коллективах.

* Также есть ряд ограничений по времени проведения:

• не ранее чем через 3 месяца с момента постановки последней пробы;
• не ранее чем через месяц после последней профилактической прививки.

*Приказ Минздрава РФ № 109 от 21.03.2003 г.

Недавно стал доступен препарат рекомбинантного туберкулезного аллергена ­– Диаскинтест®, который представляет собой рекомбинантный белок. Однако, поскольку ДИАСКИНТЕСТ® является разновидностью кожного теста, к его постановке существуют противопоказания, а также ограничения по времени проведения, свойственные пробе Манту.

В настоящее время за рубежом для диагностики всех видов туберкулеза широко применяется КВАНТИФЕРОНОВЫЙ ТЕСТ, который имеет ряд преимуществ перед кожными туберкулиновыми тестами.

Квантифероновый тест ( QuantiFERON®-ТВ Gold ) основан на количественном определении INF -γ, высвобождаемого сенсибилизированными Т-клетками, стимулированными in vitro специфическими протеинами ( ESAT -6, CFP -10, TB 7.7 ( p 4) ) M . tuberculosis . Эти протеины отсутствуют во всех штаммах M . bovis BCG и в большинстве нетуберкулезных микобактерий, за исключением M . kansasii , M . szulagai , M . marinum .

Преимущества Квантиферонового теста:

· не имеет противопоказаний и ограничений по времени проведения в отличие от кожных туберкулиновых тестов;

· не дает ложноположительных результатов в случае вакцинации БЦЖ;

· безопасность процедуры и отсутствие побочных реакций;

· интерпретация результатов этого теста менее субъективна, чем интерпретация результатов кожной туберкулиновой пробы;

· высокая специфичность (99,1%) и высокая чувствительность (89,0%).

В настоящий момент в различных странах разработано и выпущено большое число национальных рекомендаций по применению данного теста. В исследуемой крови пациента (из пробирки с ТВ-антигеном) определяется содержание гамма-интерферона (INF-γ), результат анализируется в совокупности с данными, полученными из 2-х других пробирок (выполняющих роль контрольных).

Сравнение тестов для диагностики туберкулезной инфекции

Основными методами активного выявления туберкулезной инфекции у детей в России остаются проба Манту с 2 ТЕ ППД-Л (туберкулин) и диаскинтест (ДСТ) [3, 4].

В качестве альтернативных специфических тестов в последнее время в нашей стране используются тесты in vitro. Гибрид двух антигенов — ESAT6 и CFP10 — включен в специфические диагностические тесты, основанные на продукции ИФН-g в ответ на стимуляцию этими антигенами (IGRA – Interferon Gamma Release Assays) [7]. Тесты IGRA оказались высокоспецифичными (до 99%), но имели низкую чувствительность [1, 5, 13].

Для повышения специфичности и чувствительности иммуноферментного анализа (ИФА) продолжаются поиски более специфичных антигенов, в том числе полученных генно-инженерным путем [6]. Среди нескольких групп антигенов M. tu­berculosis с протективной активностью цент­ральное место занимают секретируемые белки [12].

Недавно у лиц, инфицированных МБТ, был обнаружен белок CFP32 [11]. По результатам ИФА у 32% больных легочной фор­мой туберкулеза в сыворотке обнаруживались антитела против CFP32, а сам белок выявлялся в сыворотке 56% больных [11]. Результаты другого исследования показали, что CFP32 (также известен как Rv0577 и TB27.3) мог регулировать врожденный и адаптивный иммунитет [8].

Группа ученых под руководством профессора Андерсена (2011) обнаружила шесть генов, экспрессия которых не зависела от стадии инфекции, и продуктом одного из этих генов являлся белок Rv2660c. В исследованиях Stefan Ehlers и Ulrich E. Schaible (2013) Rv2660c определялся на протяжении всего периода инфекции у мышей, но при этом оставался слабым индуктором ИФН-g [9].

Таким образом, несмотря на проводимые исследования, данные по специфическим антигенам противоречивы; требуется дальнейшее их изучение.

Цель исследования

Оценка специфических антигенов для ранней диагностики туберкулезной инфекции у детей.

Материал и методы исследования

Диагноз ТБ основывался на результатах клинических, лабораторных, в том числе бактериологических (бактериоскопия на кислотоустойчивые микобактерии – окраска мазка патологического материала по Циль—Нильсену, посев на МБТ – на жидкие среды системы Bactec 960 и твердые среды Левенштейна—Йенсена), молекулярно-генетических (ПЦР на ДНК к МБТ), лучевых (рентгенография органов грудной клетки, простая томография и мультиспиральная компьютерная томография органов грудной клетки, ультразвуковое исследование органов брюшной полости) методов. Учитывались результаты туберкулинодиагностики (проба Манту с 2 ТЕ ППД-Л) и пробы с ДСТ.

Дополнительно всем детям было проведено специфическое иммунологическое исследование. Исследование включало определение ИФН-g в цельной крови после 72-часовой индукции специфическими антигенами: ППД-Л, CFP32B, Rv2660c, ES­AT6, 85а, ESAT6-CFP10. Оценку уровня специфического ИФН-g проводили по определению индекса стимуляции (и.с.) и в пг/мл [2]. Специфические антигены (CFP32B, Rv2660c, ES­AT6, 85а, ESAT6-CFP10) были выделены в лаборатории трансляционной биомедицины отдела генетики и молекулярной биологии бактерий ФНИЦ эпидемиологии и микробиологии имени Н.Ф. Гамалеи.

Размер выборки пациентов, минимально достаточный для получения доказательных данных, был рассчитан в программе OpenEpi, версии 3. Полученные данные обрабатывались с использованием статистических программ Statistica 6,0 и Biostat.

На проведение данного исследования получено разрешение этического комитета Омской государственной медицинской академии (протокол № 51 от 10.10.2012 г.). Для участия детей в иммунологическом исследовании от родителей или их законных представителей было получено добровольное информированное согласие.

Публикация подготовлена в рамках поддержанного РГНФ научного проекта № 16-16-55001 (исследование проведено за счет средств областного бюджета Омской области и Фонда).

Результаты исследования и их обсуждение

Средний возраст детей, включенных в исследование, составил 6,9±0,7 лет, девочек было 53,7% (N=54, n=29) и мальчиков 46,3% (N=54, n=25). Половина детей была из социально-благополучных семей (N=54, n=27). Из социально-неблагополучных семей в основном были дети с установленным диагнозом ТБ (р=0,005), также чаще эти дети были из семейного (р=0,015), бациллярного (р=0,013) очага туберкулеза. Среди детей с ЛТИ чаще регистрировали отягощенный аллергологический анамнез (р=0,001), частые респираторные заболевания (р=0,027).

Среди детей, больных ТБ, уровень чувствительности к ППД-Л был достоверно выше, чем среди детей с ЛТИ и не инфицированных МБТ (р

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Плеханова Мария Александровна, Мордык Аяна Владимировна, Пацула Юрий Иванович

С целью определения уровня ИФН-γ спонтанного и индуцированного проведено настоящее исследование для диагностики туберкулезной инфекции у 116 детей , больных туберкулезом, инфицированных микобактериями туберкулеза (МБТ) и не инфицированных. Определение уровня ИФН-γ имеет диагностическое значение только при стимуляции туберкулином для оценки активности специфического процесса, а определение уровня пролиферации лимфоцитов туберкулином позволяет оценить уровень напряженности специфического клеточного иммунного ответа, что дает возможность специфические иммунологические тесты использовать как дополнительные в ранней диагностике туберкулезной инфекции у детей .

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Плеханова Мария Александровна, Мордык Аяна Владимировна, Пацула Юрий Иванович

INTERFERON-GAMMA IN DIAGNOSTICS OF TUBERCULOSIS IN CHILDREN

We studied 116 children with tuberculosis disease, infected and not infected by mycobacterium tuberculosis by detecting spontaneous and inductive INF-γ level. Level of the INF-γ is diagnostically significant for specific process only after tuberculin stimulation. The rate of lymphocytes proliferation after tuberculin estimates the intensity of specific cell immune response. The specific immunological tests may be used as additional tests in early tuberculosis infection diagnostics in children .

Пробл туберкулеза и болезней легких. - 2009. - № 1. - С. 3-4.

9. Шилова М.В. Туберкулез у подростков в России / М.В. Шилова, Л.В. Лебедева // Рос. педиатрич. журн. - 2010. -№ 3. - С. 4-10.

10. Amat-Roze J.M. Les cossets humans et lair environment

face aux risqua climatiques J.M. Amat-Roze // Med. et malad. infec. - 1999. - № 5. - P. 277-284.

11. Schlüter P.J. Weather temperatures and sudden infant death syndrome / P.J. Schluter // J. Epidemiology and Community Health. - 1998. - № 1. - P. 27-33.

ГАММА-ИНТЕРФЕРОН В ДИАГНОСТИКЕ ТУБЕРКУЛЕЗНОЙ ИНФЕКЦИИ У ДЕТЕЙ

М.А. Плеханова, А.В. Мордык, Ю.И. Пацула Омская государственная медицинская академия, ректор - д.м.н., проф. А.И . Новиков; кафедра фтизиатрии и фтизиохирургии, зав. - д.м.н., проф. А. В. Лысов, Городская детская клиническая больница № 2 им. В.П. Бисяриной, Омск, гл. врач - С.В. Быструшкин.

Резюме. С целью определения уровня ИФН-у спонтанного и индуцированного проведено настоящее исследование для диагностики туберкулезной инфекции у 116 детей, больных туберкулезом, инфицированных микобактериями туберкулеза (МБТ) и не инфицированных. Определение уровня ИФН-у имеет диагностическое значение только при стимуляции туберкулином для оценки активности специфического процесса, а определение уровня пролиферации лимфоцитов туберкулином позволяет оценить уровень напряженности специфического клеточного иммунного ответа, что дает возможность специфические иммунологические тесты использовать как дополнительные в ранней диагностике туберкулезной инфекции у детей.

Ключевые слова: туберкулезная инфекция, специфические иммунологические тесты, дети.

Применение в диагностике туберкулеза у детей современных иммунологических тестов в комплексе с уже имеющимися методами позволяет адекватно оценить активность туберкулезной инфекции [1, 2, 7]. Согласно современным данным, одним из маркеров функционального состояния иммунокомпетентных клеток является цитокиновый спектр [5, 6, 7]. Среди Т-цитокинов важное значение имеет гамма-интерферон (ИФН-у), стимулирующий макрофаги, а также способствующий презентации антигена, что ведет к накоплению СD4+-Т-лимфоцитов и/ или цитотоксических Т-лимфоцитов [5]. Данные о высоком содержании ИФН-у-продуцирующих лимфоцитов у больных активным туберкулезом позволяют считать, что количество ИФН-у-продуцирующих клеток может являться мерой микобактериальной нагрузки и использоваться для диагностики туберкулеза.

С целью определения уровня ИФН-у спонтанного и индуцированного проведено настоящее исследование для диагностики туберкулезной инфекции у детей.

Материалы и методы Исследование проводилось на базе иммунологической лаборатории МУЗ «Городская детская клиническая боль-

Плеханова Мария Александровна - к.м.н., доц. каф. фтизиатрии и фтизиохирургии ОмГМА; e-mail: dina-plus@mail.ru.

Мордык Анна Владимировна- д.м.н., проф. каф. фтизиатрии и фтизиохирургии ОмГМА; e-mail: amordik@mail.ru.

Пацула Юрий Иванович - врач иммунологической лаборатории, Городская детская клиническая больница № 2 им. В.П. Бисяриной; e-mail: patsulaui@mail.ru.

Специфический иммунный ответ оценивали модифицированной реакцией бластной трансформации лимфоцитов при стимуляции туберкулином с использованием микрокультур цельной крови без выделения лимфоцитов [3]. У всех детей проводили оценку спонтанного уровня ИФН-у в контроле и уровня ИФН-у после стимуляции лимфоцитов туберкулином [4].

Для анализа и оценки полученных данных были использованы методы описательной статистики. Проводили расчет среднего значения и стандартную ошибку среднего, дисперсионный анализ. Достоверность различий между группами определяли с помощью критерия Стьюдента и непараметрическими методами. Различия считали досто-

Сибирское медицинское обозрение, 2011, 6

верными при р Не можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Определение уровня ИФН-у имеет диагностическое значение только при стимуляции туберкулином для оценки активности специфического процесса, при этом определение уровня пролиферации лимфоцитов туберкулином позволяет оценить уровень напряженности специфического клеточного иммунного ответа, что дает возможность данные специфические иммунологические тесты использовать как дополнительные в ранней диагностике туберкулезной инфекции.

INTERFERON-GAMMA IN DIAGNOSTICS OF TUBERCULOSIS IN CHILDREN

М. A. Plehanova, А. V. Mordyk, U.I. Pacula Omsk state medical academy, the rector, The Omsk City children's hospital № 2 of V.P. Bisjarinoj

Abstract. We studied 116 children with tuberculosis disease, infected and not infected by mycobacterium tuberculosis by detecting spontaneous and inductive INF-y level. Level of the INF-y is diagnostically significant for specific process only after tuberculin stimulation. The rate of lymphocytes proliferation after tuberculin estimates the intensity of specific cell immune response. The specific immunological tests may be used as additional tests in early tuberculosis infection diagnostics in children

Key words: tuberculosis infection, specific immunological tests, children.

1. Ефремова С. Н. Оценка уровня специфической сенсибилизации организма ребенка и других показателей иммунитета у детей в период лечения туберкулеза вну-тригрудных лимфатических узлов / С.Н. Ефремова, И.Ф. Довгалюк, И.Я. Сахарова // Пробл. туберкулеза и болезней легких. - 2007. - № 12. - С. 22-26.

2. Ефремова С.Н. Показатели иммунного статуса при оценке активности специфического процесса у инфицированных микобактериями туберкулеза детей и больных туберкулезом внутригрудных лимфатических узлов / С.Н. Ефремова, И.Ф. Довгалюк, И.Я. Сахарова // Пробл. туберкулеза и болезней легких. - 2009. - № 1. - С. 48-51.

3. Патент № 2315315 Рос. Федерация. Способ ранней диагностики туберкулезной инфекции у детей / Л.И. Ве-ремеевич, А.В. Лысов, Ю.И. Пацула, М.А. Плеханова, Н.В. Соботюк. - № 2005110511/15. -Опубл. - 20.01.2008.-Бюл. 2. - 3 с.

4. Приоритетная справка № 2011 110 673 от 21.03.11 г. Способ оценки активности туберкулеза у детей и подростков / А.В. Мордык, М.А. Плеханова, Ю.И. Пацула.

5. Тюлькова Т.Е. Особенности функционирования иммунной системы при туберкулезной инфекции / Т.Е. Тюлькова [и др.] // Пробл. туберкулеза. - 2002. - № 11. - С. 48-55.

6. Тюлькова Т.Е. Изменения иммунной системы детей старшей возрастной группы при первичных и вторичных формах туберкулезной инфекции / Т.Е. Тюлькова [и др.] // Пробл. туберкулеза и болезней легких. - 2009. - № 1. - С. 51-55.

7. Хасанова Р.Р. Роль цитокинов в модуляции субпопу-ляционного состава лимфоцитов крови у больных туберкулезом легких / Р.Р. Хасанова [и др.] // Пробл. туберкулеза и болезней легких. - 2008. - № 3. - С. 31-35.

Васильева Е.В. 1 , Вербов В.Н. 1 , Беклемишев А.Б. 2 , Перемолотова И.А. 3 , Тотолян А.А. 1

• 1 ФГУН научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера Роспотребнадзора, Санкт-Петербург.
• 2 НИИ биохимии СО РАМН, Новосибирск.
• 3 ФГУП "Гос.НИИ ОЧБ" ФМБА России, Санкт-Петербург, E-mail: alenalenkina@gmail.com.

Основная цель иммунологических исследований при туберкулезе - оценка состояния и выявление возможных изменений в иммунной системе, которые могут быть использованы для дифференциальной диагностики. Учитывая многокомпонентность и сложность структуры иммунного ответа, для его оценки необходимо использовать комплекс тестов, отражающих интенсивность как клеточного, так и гуморального иммунитета [1].

Цель работы заключалась в сравнении туберкулезных антигенов, используемых в непрямом варианте ИФА при обнаружении IgG - антител к возбудителю туберкулеза, для оценки гуморального иммунитета. Были изучены два антигена: первый антиген - PPDN-3, который представляет собой ультрафильтрат культур возбудителя туберкулеза штаммов DТSТ и Valee и используется в тест-системе "ИФА-анти-ТУБ", выпускаемой НИИЭМ имени Пастера (г.Санкт-Петербург); второй антиген - специфический рекомбинантный антиген P38 M. tuberculosis, полученный одним из авторов методом генетической инженерии в НИИ биохимии СО РАМН (г.Новосибирск). Сорбцию антигенов в лунках полистирольных планшетов проводили при следующих концентрациях: 2,5 мкг/мл для P38 и 40 мкг/мл для PPDN-3. Методика постановки ИФА - согласно инструкции по применению "ИФА-анти-ТУБ". Для каждого антигена было исследовано в диагностическом разведении 97 сывороток крови, полученных от больных с активным туберкулезным процессом, и 45 сывороток крови от здоровых доноров.

При этом у 12,5 % больных был ответ только на антиген Р38 и у 17,5 % - только на антиген PPDN-3, 52,5 % больных имели антитела к обоим белкам. Из полученных данных следует, что совместное использование микобактериальных антигенов P38 и PPDN- 3 в серодиагностике туберкулеза позволит достигнуть чувствительности 82,5% и специфичности 93,2% (табл. 1). Отсутствие антител у 17,5% больных туберкулезом позволяет предположить, что у них гуморальное звено иммунного ответа не является преимущественным.

Таблица 1.

В качестве маркера для оценки напряженности клеточного иммунного ответа используют гамма-интерферон [2]. Количественное измерение гамма-интерферона (ИФН-гамма) позволяет диагностировать не только острые формы туберкулезной инфекции, протекающие преимущественно с клеточным типом иммунного ответа, но и латентную туберкулезную инфекцию (ЛТБИ). В качестве индуктора гамма-интерферона используют микобактериальный белок ESAT-6, секретируемый микобактериями на ранней стадии роста. Этот белок содержит эпитопы, распознаваемые протективными Т-клетками [3].

Иммунодоминантный белок ESAT-6 был разбит на отдельные, 15-ти членные фрагменты с перекрыванием в 9 аминокислотных остатков с помощью программы PeptGen. Для выделенных фрагментов были синтезированы 15 пептидов длиной 13-15 аминокислотных остатков. Синтез пептидов проводили на многоканальном синтезаторе пептидов Apex 396 на TentaGel полимерах (Rapp Polymere, GmbH) с использованием Fmoc-технологии твердофазного синтеза. В качестве временной защитной группы использовали флюоренилметилоксикарбонильную группу, для защиты боковых цепей трифункциональных аминокислот применялись защиты третбутильного и тритильного типов. После сборки полипептидной цепи полученные пептиды отщепляли от полимера с одновременным удалением постоянных защитных групп под действием трифторуксусной кислоты в присутствии скавенджеров. Чистоту полученных соединений определяли с помощью аналитической обращено-фазовой хроматографии. Масс-спектральный анализ выявил наличие пика молекулярного иона с расчетной молекулярной массой в каждом продукте синтеза.

Для предварительной оценки диагностической значимости полученных пептидов было обследовано 7 больных в возрасте 27-55 лет, проходивших лечение в СПб НИИ Фтизиопульмонологии. Из них с установленными диагнозами: фиброзно-кавернозный туберкулез легких, МБТ(+) - 6 пациентов; туберкулема S6 правого легкого, МБТ(-) - 1 пациент. Обследовано также 3 здоровых донора.

Образцы цельной венозной гепаринизированной крови были разлиты по 1 мл в 3 разные маркированные пробирки: контрольная проба без антигена и 2 опытные пробы, в одну из которых вносили 10 мкл фитогемаглютинина (ФГА) с концентрацией 25 мкг/мл, а в другую - 10 мкл исследуемых пептидов с концентрацией 10 мкг/мл. Лунки с ФГА использовали в качестве положительного контроля. Образцы крови инкубировали при 37 °С в течение 20-24 ч на ротаторе. Затем отбирали по 200 мкл образцов полученной плазмы, в которых определяли концентрацию ИФН-гамма методом твердофазного ИФА. Для оценки продукции ИФН-гамма использовали следующий коэффицент:

ИС = Кинд/Кспн, где ИС - индекс стимуляции, Кинд - значение индуцированной продукции цитокина (пг/мл), Кспн - значение спонтанной продукции цитокина (пг/мл).

Были получены следующие результаты. У больных туберкулезом наблюдается резкое увеличение спонтанной продукции ИФН-гамма (343,5 пг/мл - среднее значение, 289-398 пг/мл - разброс) по сравнению с группой здоровых (111,5 (58-165)). При оценке ИС индуцированной продукции ИФН-гамма у больных туберкулезом наблюдается угнетение продукции ИФН-гамма (1,162 (0,78-1,544)) в присутствии ФГА по сравнению с группой здоровых доноров (3,69 (1,38-6,00)). В случае стимуляции пептидами наблюдается обратная закономерность: у больных туберкулезом имеет место увеличение продукции ИФН-гамма (2,31 (0,58-4,04)) по сравнению с группой здоровых доноров (0,93 (0,68-1,18).

Таким образом, комплексное определение наличия антител в диагностическом разведении и количественное определение гамма-интерферона до и после стимуляции иммунокомпетентных клеток крови специфическими митогенами позволит с большей уверенностью ставить диагноз заболевания и, возможно, прогнозировать его тяжесть и излечиваемость.

1. Чернушенко Е. Ф., Кадан Л. П., Панасюкова О. Р., Петишкина В.Н. Цитокиновая регуляция и развитие вторичных иммунодефицитных состояний при туберкулезе легких (научный доклад на заседании Ученого совета ДУ "Национальный институт фтизиатрии и пульмонологии имени Ф.Г. Яновского АМН Украины" 16.06.2009 года).
2. Г.-Р. Бурместер, А. Пецутто Наглядная иммунология // Пер.с англ. - М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2007. - С. 230-231.
3. Doherty TM, Demessie A, Olobo J, et al // Immune responses to the Mycobacterium tuberculosis-specific antigen ESAT-6 signal subclinical infection among contacts of tuberculosis patients.J Clin Microbiol 2002. - P. 704-06.

Links

• Espacenet
• Global Dossier
• Discuss

• 102100016020 IFNG Human genes 0 abstract 4
• 229940079593 drugs Drugs 0 abstract 2
• 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0 abstract 1
• 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0 abstract 1
• 230000000694 effects Effects 0 abstract 1
• 239000000126 substances Substances 0 abstract 1

Abstract

Description

Изобретение относится к медицине, преимущественно к фтизиатрии и гинекологии.

- исчезновение клинических и лабораторных признаков туберкулезного воспаления;

- стойкое прекращение бактериовыделения, подтвержденное микроскопическим и культуральным исследованиями;

- регрессия рентгенологических проявлений туберкулеза (очаговых, инфильтративных, деструктивных);

- восстановление функциональных возможностей и трудоспособности.

Учитывая неспецифический характер проявлений генитального туберкулеза, сходный с другими воспалительными гинекологическими заболеваниями: скрытое начало, волнообразное торпидное течение, отсутствие патогномоничных симптомов, субъективность клинических признаков (Зангиева З.А., Жученко О.Г., Габарник А.Е., Айдамирова P.M. Ранняя диагностика урогенитального туберкулеза у женщин репродуктивного возраста во фтизиатрической практике // Проблемы туберкулеза и болезней легких: материалы 9 съезда фтизиатров России. - М., 2011. - С. 149), отсутствие яркой манифестной клинической картины, в том числе отсутствие признаков воспаления по результатам методов общеклинического обследования, динамика клинических и лабораторных показателей не может служить основополагающим критерием эффективности лечения больных туберкулезом гениталий.

Бактериологические и гистологические методы далеко не всегда позволяют подтвердить диагноз внелегочного туберкулеза, при котором бактериовыделение обычно скудное и трудноуловимое: чувствительность посева, как правило, не превышает 3-5%, увеличиваясь до 30% в тяжелых случаях, при использовании нескольких видов питательных сред, строгом соблюдении условий и техники (Кульчавеня Е.В., Краснов В.А., Щербань М.Н. Избранные вопросы фтизиоурологии. - Новосибирск: Наука, 2010. - 142 с., [0,25] л. вкл.).

Технической задачей изобретения является повышение качества оценки эффективности противотуберкулезной терапии активного генитального туберкулеза у женщин в целях своевременной коррекции противотуберкулезной терапии.

Способ оценки эффективности противотуберкулезной терапии у пациенток с генитальным туберкулезом осуществляют следующим образом: применяют специфические иммунологические тесты, позволяющие оценить как клеточный, так и гуморальный иммунитет, при этом тесты применяют в 2 этапа:

- через 2-3 месяца по окончании интенсивной фазы основного курса противотуберкулезной терапии (60-90 доз противотуберкулезных препаратов) проводят 1-й контроль, который включает определение индекса стимуляции интерферона-гамма (ИФН-γ) с туберкулином очищенным (ППД-Л), определение уровней специфических иммуноглобулинов (IgA, IgM) к микобактерии туберкулеза (МБТ) методом иммуноферментного анализа (ИФА);

- 2-й контроль проводят через 6-11 месяцев после окончания основного курса противотуберкулезной терапии (интенсивная фаза от 2х до 4х месяцев - 60-120 доз ПТП + фаза продолжения 6-7 месяцев - 180-210 доз ПТП). В случае если индекс стимуляции ИФН-γ с ППД-Л по окончании интенсивной фазы основного курса противотуберкулезной терапии был выше 7,8 - контроль проводят только по ИФН-γ с ППД-Л. При условии, что оптическая плотность при IgM к МБТ по окончании интенсивной фазы основного курса противотуберкулезной терапии была более 0,600 - контроль проводят только по IgM к МБТ. При условии, что оптическая плотность при IgA к МБТ была более 0,450 - контроль проводят только по IgA к МБТ.

По результатам контрольных исследований рекомендуют:

- при сохранении специфических иммунологических показателей на том уровне, который был до начала проведения противотуберкулезной терапии, или их нарастание по окончании интенсивной фазы (2-3 месяца, 60-90 доз противотуберкулезных препаратов) - проводят коррекцию противотуберкулезной терапии (дополнительное введение резервных препаратов);

- при снижении после окончания интенсивной фазы (60-90 доз противотуберкулезных препаратов) специфических иммунологических показателей ниже уровня, существовавшего до начала проведения противотуберкулезной терапии - коррекцию не проводят;

- при снижении специфических иммунологических показателей и сохранении уровня активности туберкулеза по окончании основного курса противотуберкулезной терапии (интенсивная фаза 2-3 месяца - 60-90 доз ПТП + фаза продолжения 6 месяцев - 180 доз ПТП) проводимая противотуберкулезная терапия считается неэффективной, показана ее коррекция и продление;

- при снижении специфических иммунологических показателей ниже уровня активности туберкулеза (восстановление до нормы: индекс стимуляции ИФН-γ с ППД-Л ниже 7,8; оптическая плотность при IgM к МБТ менее 0,600; оптическая плотность при IgA к МБТ менее 0,450) после окончания основного курса противотуберкулезной терапии (интенсивная фаза 60-90 доз ПТП + фаза продолжения 180 доз ПТП) проводимая противотуберкулезная терапия считается эффективной и законченной.

Все пациентки основной группы по результатам 1-го контрольного иммунологического исследования были разделены на 2 группы. При снижении специфических иммунологических показателей ниже уровня до начала проведения противотуберкулезной терапии сохранили I режим химиотерапии - 31 (62,2%) (1-я группа). Среднее значение у пациенток данной группы специфического IgA составило 0,286±0,03 ОП сыворотки, специфического IgM - 0,403±0,06 ОП сыворотки. При сохранении специфических иммунологических показателей на уровне до начала проведения противотуберкулезной терапии или их нарастание пациенток перевели на IIБ режим (к основным противотуберкулезным препаратам были добавлены резервные) - 22 (37,8%) (2-я группа). Среднее значение специфического IgM у пациенток 2-й группы составило 0,739±0,12 ОП сыворотки и имело статистически значимое отличие от аналогичного показателя пациенток 1-й группы (р=0,019). В 1-й группе женщины получали лечение противотуберкулезными препаратами (ПТП) по I режиму химиотерапии: интенсивная фаза 60-90 доз 4 ПТП, фаза продолжения 2 ПТП 120-180 доз, длительность терапии составила 8,4±0,27 месяцев на фоне патогенетической, в том числе местной, терапии в условиях стационара и амбулаторно. Во 2-й группе пациентки получали лечение специфическими препаратами по IIБ режиму химиотерапии: интенсивная фаза 90 доз 5-6 ПТП, фаза продолжения 2-3 ПТП 120-180 доз, длительность лечения составила 10,46±0,41 месяцев на фоне патогенетической, в том числе местной терапии, что имело статистически значимое превышение аналогичного показателя 1-й группы (t=4,329, р=0,000).

По результатам 2-го контроля по окончании основного курса комплексного лечения в группе пациенток, получавших лечение по IIБ режиму химиотерапии, отмечено статистически значимое снижение IgM, среднее значение которого составило 0,265±0,04 ОП сыворотки (парный критерий Стьюдента t=4,674, р=0,002). У 4 (18,2%) пациенток - сохранение уровня активности по результатам ИФН-γ с ППД-Л.

По результатам 2-го контроля в группе пациенток, получавших лечение по I режиму химиотерапии, после окончания лечения сохранились повышенными специфические иммунологические показатели у 7 (22,5%) женщин (у 3 пациенток отмечено превышение уровня специфического IgM, отражающего активность туберкулеза, у 4 - сохранение уровня активности по результатам ИФН-γ с ППД-Л согласно патенту).

Таким образом, при проведении терапии основными противотуберкулезными препаратами (при отсутствии необходимости коррекции противотуберкулезной терапии) эффективность лечения согласно данным исследования составила 77,5%. При своевременной коррекции противотуберкулезной терапии (введение резервных препаратов) отмечено повышение эффективности до 81,8%.

Пациентки группы сравнения, проходившие лечение по поводу туберкулеза гениталий в 2008-2010 гг., получали в 93% (28) случаев химиотерапию по I режиму в течение 7,53±0,2 месяцев (уровень статистически значимых различий p 2 =1,274, р=0,259). У пациенток группы сравнения беременность наступила лишь в 13,3% (4) случаев, что имело статистически значимые различия с пациентками основной группы (χ 2 =4,974, р=0,026).

Пример 1. Пациентка Т., 36 лет, обратилась в КПТД №4 с жалобами на вторичное бесплодие (7 лет), частые обострения хронического аднексита, похудение, слабость, утомляемость, субфебрильную температуру в течение 1 года. Эпид. анамнез: родственница состояла на учете в ПТД, получала XT ПТП.

Пример 2. Пациентка Ж., 33 лет, обратилась в КПТД №4 5.07.10 с жалобами на первичное бесплодие (5 лет), тянущие боли внизу живота, нарушение менструального цикла по типу олигоаменорреи (редкие менструации в течение 5 лет), слабость, утомляемость, частые респираторные заболевания. Эпид. анамнез: контакт с больным туберкулезом органов дыхания сотрудником.

St. genitalis: НПО сформированы правильно, оволосение по женскому типу, в зеркалах: шейка матки без видимой патологии; бимануально: матка anteflexio-versio, обычных размеров, безболезненна при пальпации, подвижна, придатки слева не определяются, безболезненны, справа уплотнены, свод справа несколько укорочен, выделения светлые. Через 4 месяца на фоне прегравидарной подготовки наступила желанная беременность (в ходе лечения применяла барьерный метод контрацепции). Пациентка планирует вынашивание беременности.

Технический результат: разработанный способ оценки эффективности противотуберкулезной терапии активного генитального туберкулеза у женщин позволил повысить качество противотуберкулезной терапии (при своевременной коррекции) и ее эффективность при внелегочном туберкулезе. При проведении терапии основными противотуберкулезными препаратами (при отсутствии необходимости коррекции противотуберкулезной терапии) - повышение эффективности до 77,5%, при коррекции противотуберкулезной терапии (введение резервных препаратов) - повышение эффективности до 81,8%.