Что такое джен эксперт при туберкулезе

Новый диагностический тест на туберкулез, включая его самую распространенную устойчивую форму, рекордными темпами вводится в использование, а его основным потребителем является Южная Африка. Теперь необходимо обеспечить лечение для новых случаев заболевания. Репортаж Клэр Китон (Claire Keeton).

Молекулярная технология, первоначально разработанная для выявления возбудителя сибирской язвы в почтовых отправлениях в Соединенных Штатах Америки, приводит к радикальным изменениям в области диагностики туберкулеза, особенно в странах, где туберкулез является одной из основных причин смерти среди ВИЧ-инфицированных людей. Xpert MTB/RIF — это полностью автоматизированный экспресс-тест на основе амплификации нуклеиновых кислот, ставший первым крупным прорывом в области диагностики туберкулеза после того, как более 100 лет назад была разработана микроскопия мазка мокроты.

Но в отличие от микроскопии мазка мокроты, для которой характерна низкая чувствительность в отношении ВИЧ-позитивных людей, или от посева мокроты, при проведении которого на получение основных результатов уходит от трех до шести недель, а на получение результатов тестов на лекарственную чувствительность еще больше времени, новый тест позволяет выявлять Mycobacterium tuberculosis и устойчивость к рифампицину, широко используемому противотуберкулезному препарату, менее чем за два часа.

Новый тест начинает применяться в 77 странах, но ни в одной из этих стран его внедрение не осуществляется с таким энтузиазмом, как в Южной Африке. На сегодняшний день эта страна, расположенная к югу от Сахары, приобрела 288 аппаратов Xpert и более одного миллиона картриджей для проведения тестов на туберкулез, что составляет 59% глобальных поставок.

Для проведения нового теста пациенты сдают образцы мокроты (жидкости, выделяемой из легких), как и в случае таких диагностических методик, как микроскопия и посев. Образец смешивается с реагентом, и смесь вводится в картридж, который вставляется в модуль аппарата. Результаты выводятся на экран компьютера.

С тех пор как в Южной Африке был введен новый тест, показатели диагностирования туберкулеза среди людей с симптомами в центрах первичной медико-санитарной помощи почти что удвоились — с 9 до примерно 16%. Примерно в 7% всех подтвержденных случаях заболевания туберкулез является устойчивым к рифампицину.

Лекарственно-устойчивый туберкулез представляет большую проблему, в частности, потому что пациентам необходимо лечение дорогими препаратами второй линии, которые приводят к более тяжелым побочным эффектам, чем препараты первой линии, а на эффективное лечение уходит до 24 месяцев. А если эти пациенты имеют ВИЧ-инфекцию, шансов выжить у них немного.

И хотя на сегодняшний день новый туберкулезный тест наиболее широко применяется в Южной Африке, последние данные мониторинга ВОЗ за его глобальным внедрением свидетельствуют о том, что Индия, Китай, Российская Федерация и Филиппины, на которые, по оценкам, приходится 60% случаев заболевания туберкулезом с лекарственной устойчивостью в мире, заказали аппараты Xpert, имеющие, в общей сложности, 404 модуля, и 131 820 картриджей MTB/RIF.

В то время как ВОЗ играет ключевую роль во внедрении этой технологии с точки зрения разработки политики и руководящих принципов, Фонд для инновационных и новых диагностических средств (ФИНД), некоммерческая структура, базирующаяся в Женеве и работающая над улучшением диагностики в бедных странах, первым признал потенциальные возможности этой технологии в борьбе с туберкулезом.

Система Xpert была разработана в 2002 году компанией Cepheid Inc., базирующейся в Саннивейле, США, для тестирования на сибирскую язву после серии терактов, произошедших в почтовых службах в 2001 году.

ФИНД обратился к Cepheid Inc. и заключил с ней соглашение о совместной разработке. Впоследствии эта компания адаптировала эту технологию для диагностики туберкулеза в партнерстве с Университетом медицины и стоматологии Нью-Джерси и при финансировании, предоставляемом Национальными институтами здоровья США и Фондом Билла и Мелинды Гейтс.

На переговорах, посредником на которых был ФИНД, Cepheid Inc. согласилась поставлять аппараты Xpert MTB/RIF в государственный сектор 145 стран по льготным ценам. Первоначально была достигнута договоренность о снижении цены на аппараты и картриджи на 75%. Таким образом, стоимость одного картриджа составляла около 18 долларов США, значительно меньше, чем в частном секторе (60-80 долларов США).

Но даже при такой уступке тест все равно был вне досягаемости для бедных стран, поэтому к решению этой проблемы присоединились Правительство США (ЮСЭЙД и ПЕПФАР), Фонд Билла и Мелинды Гейтс и финансовая организация в области здравоохранения ЮНИТЭЙД. Это привело к соглашению с Cepheid Inc. в августе 2012 года о снижении цены на картридж до 9,98 доллара США для 145 стран.

Почему важно улучшить диагностику внелегочного туберкулёза?

Туберкулёз является ведущей инфекционной причиной смерти в мире. Туберкулёз в основном влияет на легкие (легочный туберкулёз), но может также возникнуть в других частях тела (внелегочной туберкулёз). У большинства людей туберкулёз можно вылечить, если заболевание диагностировано и должным образом лечится. Одной из проблем, связанных с лечением туберкулёза, является то, что бактерии становятся устойчивыми (резистентными) к антибиотикам. Нераспознавание туберкулёза на ранней стадии (ложно-отрицательный результат) может привести к задержке диагностики и лечения, увеличению заболеваемости и смерти. Неправильный диагноз туберкулёза (ложно-положительный результат) может привести к повышенной тревожности и ненужному лечению.

Какова цель этого обзора?

Цель этого обзора в том, чтобы узнать, насколько точен Xpert ® MTB/RIF (Xpert) для диагностики внелегочного туберкулёза и лекарственной резистентности. Мы включили восемь форм внелегочного туберкулёза: туберкулёзный менингит, а также плевральный, лимфатический, костный или суставной, мочеполовой, перитонеальный, перикардиальный и диссеминированный туберкулёз.

Что было изучено в этом обзоре?

Xpert является относительно новым, автоматизированным, быстрым тестом, который обнаруживает туберкулёз и резистентность к рифампицину одновременно. Рифампицин является важным препаратом для лечения людей с туберкулёзом. Другой Кокрейновский обзор показал, что Xpert точен для диагностики легочного туберкулёза. Текущий обзор оценил точность Xpert для обнаружения восьми форм внелегочного туберкулёза, а также различных проб, которые могут быть собраны для диагностики, например, проба спинномозговой жидкости, плевральной жидкости и мочи. Результаты Xpert были сравнены с результатами культуры бактерий (эталонный тест).

Каковы основные результаты этого обзора?

Мы включили 66 исследований, которые проверили 16 213 проб на внелегочный туберкулёз и резистентность к рифампицину. Новейший вариант теста (Xpert Ultra (Ultra)) использовали только в одном исследовании для оценки проб на туберкулёзный менингит.

В моче, костной или суставной жидкости и ткани Xpert был чувствителен (более 80%). Это значит, что он показал положительный результат у людей, у которых действительно был туберкулёз. В спинномозговой, плевральной и перитонеальной жидкости и моче Xpert был очень четким (98% или более). Это значит, что он не показал положительный результат у людей, у которых на самом деле не было туберкулёза.

Для населения в 1000 человек:

• когда у 100 человек присутствует туберкулёзный менингит по культуре бактерий, 89 будут Xpert-положительными: из них 18 (20%) не будут иметь туберкулёз. 911 будут Xpert-отрицательными: из них, 29 (3%) будут иметь туберкулёз.

• когда у 150 человек присутствует плевральный туберкулёз по культуре бактерий, 83 будут Xpert-положительными: из них семь (8%) не будут иметь туберкулёз. 917 будут Xpert-отрицательными: из них, 74 (8%) будут иметь туберкулёз.

• когда у 70 человек присутствует мочеполовой туберкулез по культуре бактерий, 70 будут Xpert-положительными: из них, 12 (17%) не будет иметь туберкулёз. 930 будут Xpert-отрицательными: из них, 12 (1%) будут иметь туберкулёз.

• когда у 120 человек есть рифампицин-резистентный туберкулёз, 125 будут положительными на рифампицин-резистентный туберкулёз: из них, у 11 (9%) не будет резистентности к рифампицину, а 875 будут отрицательными на рифампицин-резистентных туберкулёз: из них, 6 (1%) будет иметь резистентность к рифампицину.

Насколько мы уверенны в результатах этого обзора?

Диагноз внелегочного туберкулёз был поставлен путем оценки проб пациентов на культуру бактерий. Это, как правило, считается наилучшим эталонным стандартом. Однако, похоже, что культура бактерий не хорошо сработала в качестве эталонного теста для туберкулёза лимфатических узлов.

К кому относятся результаты обзора?

Результаты обзора относятся к людям, у которых предположительно есть внелегочный туберкулёз. Большинство исследований включали только стационарных пациентов в центрах третичного ухода или не сообщали о клинических условиях. Таким образом, мы не могли бы сказать, как этот тест будет работать в условиях первичной медико-санитарной помощи.

Какие выводы можно сделать из этого обзора?

Xpert может быть полезен в диагностике внелегочной туберкулёза. Способность Xpert обнаруживать туберкулез изменяется при использовании различных проб, в то время как Xpert редко дает положительный результат для людей без туберкулёза (определяемый культурой бактерий). Xpert точен для диагностики резистентности к рифампицину. Врачи, которые считают, что у их пациентов есть туберкулёзный менингит, который нуждается в неотложной медицинской помощи, должны использовать клиническое суждение и не должны полагаться только на результат Xpert при принятии решения о воздержании от лечения. Воздержание от лечения является обычной практикой, когда результаты бактериальной культуры отрицательные.

Насколько актуален этот обзор?

Авторы обзора провели поиск исследований, опубликованных по 7 августа 2017.

*Импакт фактор за 2018 г. по данным РИНЦ

Журнал входит в Перечень рецензируемых научных изданий ВАК.

Читайте в новом номере

Выявление – составная часть борьбы с туберкулезом. Для выявления и диагностики туберкулеза применяются различные методы (туберкулинодиагностика, рентгено-флюорографические, бактериологические), но наиболее информативным, быстрым и экономичным является бактериоскопия мокроты по Цилю – Нельсену у лиц с симптомами, подозрительными на туберкулез (кашель с выделением мокроты более 3 нед, кровохарканье, боли в грудной клетке, потеря массы тела) и рентгенография грудной клетки.

To detect tuberculosis is part of its control programme. For identification and diagnosis of the disease, different (tuberculin diagnostic, X-ray, fluorographic, and bacteriological) methods are used, but the most informative, rapid, and cost-effective ones are Ziehl-Neelsen’s sputum bacterioscopy in individuals with signs of suspected tuberculosis (over 3-week productive cough, hemoptysis, chest pain, weight loss) and chest X-ray.

В.В. Пунга — доктор мед. наук, руководитель отдела Центрального НИИ туберкулеза РАМН, Москва
V.V. Punga — MD, Head of Department, Central Research Institute of Tuberculosis, Russian Academy of Medical Sciences, Moscow

В ыявление – составная часть борьбы с туберкулезом, направленная на идентификацию случаев туберкулеза в обществе. Выявление больных туберкулезом осуществляется медицинским персоналом учреждений общей лечебной сети при обследовании пациентов, обратившихся за медицинской помощью, а также при плановых профилактических обследованиях определенных групп населения.
Основными методами выявления туберкулеза остаются:
– туберкулинодиагностика;
– рентгенофлюорографические обследования;
– бактериологическая диагностика.
Все эти методы, каждый в отдельности или в комбинации, применяются у разных групп населения: туберкулинодиагностика – у детей и подростков; профилактические флюорографические обследования – у лиц старше 15 лет; бактериологические, рентгенологические обследования, туберкулинодиагностика – у лиц с повышенным риском заболевания туберкулезом, находящихся на диспансерном учете, обращающихся в поликлиники и поступающих в стационар на лечение с симптомами заболевания, подозрительными на туберкулез. Туберкулез поражает различные органы и системы, поэтому для диагностики внелегочного туберкулеза применяются специальные методы обследования в зависимости от локализации заболевания.
Одним из приоритетных направлений в системе противотуберкулезных мероприятий в сложившихся социально-экономических условиях является выявление туберкулеза в учреждениях общей лечебно-профилактической сети среди лиц, обратившихся за медицинской помощью. У всех лиц с симптомами, подозрительными на туберкулез органов дыхания (кашель с мокротой более 2 – 3 нед, боли в грудной клетке, потеря массы тела, субфебрильная температура, потливость, кровохарканье), необходимо исследовать мокроту на микобактерии туберкулеза (МБТ) методом микроскопии мазка по Цилю – Нельсену и провести рентгенографию (флюорографию) грудной клетки. Как показали исследования, проводимые в ряде территорий Российской Федерации (Ивановская, Томская области, республика Марий Эл), этот подход позволяет выявить более половины впервые заболевших туберкулезом органов дыхания с бактериовыделением, наиболее опасных в эпидемиологическом отношении, сократить сроки диагностики туберкулеза и время от первого обращения больного в медицинское учреждение до начала противотуберкулезного лечения. Исследования мокроты методом микроскопии мазка по Цилю – Нельсену необходимо осуществлять во всех клинико-диагностических лабораториях общей лечебной сети. Больных, у которых выявлены МБТ, следует направлять в противотуберкулезные диспансеры для дообследования, подтверждения диагноза туберкулеза, лечения и постановки на учет.
Бактериоскопический метод прост, экономичен и позволяет при положительном результате исследования мазка мокроты установить диагноз туберкулеза органов дыхания. Бактериоскопическому обследованию подлежат обратившиеся в медицинское учреждение лица:
– с явными симптомами заболевания;
– с наличием продолжительного (более 3 нед) кашля с выделением мокроты, кровохарканьем и болями в грудной клетке;
– контактировавшие с бациллярными больными туберкулезом;
– имеющие рентгенологические изменения в легких, подозрительные на туберкулез.
Выявление больных туберкулезом легких бактериоскопическим методом должно осуществляться во всех клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений общей сети: взрослых и детских поликлиниках, республиканских, краевых, областных, городских и центральных районных больницах, клиниках научно-исследовательских институтов, участковых больницах и сельских врачебных амбулаториях, психиатрических больницах, медико-санитарных частях пенитенциарных учреждений и др. Как минимум 3 мазка мокроты необходимо исследовать в лаборатории методом микроскопии по Цилю – Нельсену на кислотоустойчивые бактерии. Первую и вторую пробы мокроты берут в присутствии медицинского работника в день обращения пациента (с промежутком 1,5 – 2 ч), затем ему выделяют посуду для сбора утренней мокроты перед вторым посещением врача. Для получения положительного результата важно правильно организовать сбор мокроты, который следует проводить в отсутствии посторонних людей в отдельной, хорошо проветриваемой комнате. Пациенту необходимо объяснить, как следует откашливать мокроту из более глубоких отделов легких. В поликлинике или больнице все медицинские сестры должны быть обучены методике сбора мокроты. Больной должен откашливать мокроту в присутствии медицинской сестры. Следует попросить больного сделать несколько глубоких вдохов и покашлять в емкость, после чего проверить наличие в емкости мокроты. Если больной не может откашлять мокроту или она отсутствует, материал для исследования можно получить с помощью раздражающих ингаляций, промывания бронхов и желудка.
В первый же день необходимо сделать рентгенографию грудной клетки. В отдельных случаях (например, когда больной живет далеко от лечебного учреждения или ему трудно добираться до него, или его состояние неудовлетворительное) пациента можно госпитализировать на 2 – 3 дня для обследования. В некоторых отдаленных населенных пунктах более целесообразно обучить фельдшеров или других медицинских работников правильному сбору мокроты, консервации и быстрой доставке ее в ближайшую клинико-диагностическую лабораторию; можно также обучить персонал приготовлению мазков мокроты, высушиванию, фиксации с последующей доставкой в ближайшую лабораторию для окрашивания и исследования. Необходимо исследовать не менее 100 микроскопических полей зрения. Если кислотоустойчивые бактерии не обнаружены в 100 полях зрения, необходимо исследовать дополнительно еще 100 полей.
У взрослых диагноз туберкулеза легких подтверждается обнаружением МБТ в мокроте. У детей до 10 лет в связи с трудностью получения мокроты исследуют промывные воды желудка или мазок из гортани. Процедуру проводят рано утром натощак, полученное содержимое собирают в стерильную посуду и направляют в лабораторию для бактериоскопического и культурального исследования.
Чтобы предупредить заражение туберкулезом при сборе мокроты, медицинский работник обязан быть в шапочке, маске, клеенчатом фартуке и резиновых перчатках. Меры предосторожности также должны применяться при хранении и доставке мокроты в лабораторию на исследование. Для хранения и перевозки используют специальные контейнеры или металлические биксы. Если первые мазки оказались положительными, а больной не пришел к врачу повторно, его следует срочно разыскать и вызвать для дообследования, установления диагноза и направления на лечение.
Кроме микроскопии мазка мокроты, окрашенного по Цилю – Нельсену, в лабораториях, оснащенных люминесцентными микроскопами, возможно исследование материала методом люминесцентной микроскопии. Необходимо обязательно проводить посев мокроты на питательные среды у всех больных, так как у части больных МБТ выявляются только культуральным методом. Посев мокроты или другого материала на выделение возбудителя туберкулеза осуществляют в специализированных лабораториях противотуберкулезных учреждений.
Посев мокроты или другого материала (крови, промывных вод желудка, бронхоальвеолярных смывов, плевральной жидкости) повышает число положительных результатов, которые становятся известными через 4 – 8 нед. В настоящее время существуют методы, которые позволяют сократить длительность выявления МБТ: применение сред для бифазного посева, системы БАКТЕК-460, сокращающие в среднем наполовину сроки роста МБТ. Использование системы БАКТЕК-460 технически просто и позволяет идентифицировать МБТ, определить их лекарственную чувствительность в течение недели.
Кроме прямых методов диагностики туберкулеза (бактериоскопия, культуральный метод), используют и непрямые, основанные на серодиагностике и определении в исследуемом материале нуклеиновых кислот МБТ (полимеразно-цепная реакция – ПЦР). Данные, касающиеся чувствительности и специфичности ПЦР, не позволяют еще в настоящее время использовать этот метод в широкой практике. Микроскопическое исследование патологического материала остается пока наиболее быстрым, чувствительным и дешевым методом, позволяющим установить диагноз туберкулеза.
Активный метод выявления туберкулеза, основанный на массовом рентгенофлюорографическом обследовании населения, для большинства территорий в настоящее время крайне затруднен вследствие его высокой стоимости, изношенности аппаратуры и недостаточной результативности. Проведенный в Ивановской области анализ соотношения стоимости – эффективности выявления случая туберкулеза показал, что на выявление больного по обращаемости затрачивается $ 1590, а при профилактическом осмотре – $ 4000. Сплошные профилактические флюорографические обследования всего населения в возрасте 15 лет и старше, проводимые в прежние годы, в настоящее время также могут быть осуществлены по эпидемиологическим показаниям и при достаточных ресурсах. Профилактические флюорографические обследования для активного выявления туберкулеза в настоящее время следует использовать среди отдельных групп населения, где наиболее часто выявляется туберкулез. Рентгенофлюорографический метод в основном позволяет выявить все случаи “абациллярного” туберкулеза легких (в настоящее время регистрируется 45 – 50% случаев).
Туберкулинодиагностика является основным методом раннего выявления инфицирования туберкулезом детей и подростков. Туберкулинодиагностика как специфический диагностический тест применяется при массовых обследованиях населения на туберкулез, а также в клинической практике для диагностики туберкулеза. Для этих целей используется единая внутрикожная туберкулиновая проба Манту с 2 туберкулиновыми единицами (ТЕ) очищенного туберкулина PPD-L. Ежегодная постановка пробы Манту с 2 ТЕ позволяет своевременно выявить лиц с гиперергическими и усиливающимися реакциями на туберкулин, у которых высок риск заболевания, возможны начальные и локальные формы туберкулеза. Проба Манту считается положительной при размере папулы более 5 мм.
Массовую туберкулинодиагностику среди детей и подростков, посещающих детские ясли, сады, школы, колледжи, проводят специальными бригадами (2 медсестры и врач), сформированными при детских поликлиниках. Детям раннего и дошкольного возраста, не посещающим детские учреждения, пробу Манту ставят в детской поликлинике, а в сельской местности ее производят медицинские работники районных сельских больниц и фельдшерско-акушерских пунктов. При правильной организации мероприятий по раннему выявлению туберкулеза ежегодно туберкулинодиагностикой должно охватываться 90 – 95% детского и подросткового населения административной территории.
Проба Манту с 2 ТЕ безвредна как для здоровых детей и подростков, так и для лиц с различными соматическими заболеваниями. Противопоказаниями для постановки туберкулиновой пробы являются кожные заболевания, аллергические состояния, эпилепсия, острые инфекционные заболевания и хронические заболевания в период обострения. В условиях массовой внутрикожной вакцинации (ревакцинации БЦЖ) проба Манту 2 ТЕ выявляет как послевакцинную, так и инфекционную аллергию. Систематическое проведение детям и подросткам внутрикожных туберкулиновых проб позволяет установить первичное инфицирование и осуществлять поиск очага туберкулезной инфекции среди взрослых.
Таким образом, в настоящее время для выявления больных туберкулезом применяются различные методы. Наиболее информативными, простыми, достоверными и экономичными являются бактериоскопическое исследование мокроты у лиц с симптомами, подозрительными на туберкулез (кашель с выделением мокроты более 3 нед, боли в грудной клетке, кровохарканье, потеря массы тела), рентгенография грудной клетки и туберкулинодиагностика у детей и подростков.

1. Джон Крофтон, Норман Хорн, Фред Миллер. // Клиника туберкулеза. – М., 1996.
2. Диагностика туберкулеза легких бактериоскопическим методом. Метод указания МСБТЛЗ. – Париж, Франция, 1995.

Related JoVE Videos

The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.

If that doesn't help, please let us know.

Xpert MTB / RIF тест включает образец обеззараживания, в режиме громкой связи, бортовой обработки образцов, и сверхчувствительных полу-ПЦР для одновременного обнаружения Микобактерий туберкулеза И рифампицин сопротивления, либо в отхаркиваемой мокроты или концентрированного осадка мокроты, примерно в два часа. Тестирование является стандартизированным и требует лишь умеренного лабораторной инфраструктуры и подготовки кадров.

Bodmer, T., Ströhle, A. Diagnosing Pulmonary Tuberculosis with the Xpert MTB/RIF Test. J. Vis. Exp. (62), e3547, doi:10.3791/3547 (2012).

Translate text to:

Please note that all translations are automatically generated.

Стандартный 2 Международные стандарты медицинской помощи больным туберкулезом утверждает, что все пациентов с подозрением на туберкулез легких должны представить не менее двух образцов мокроты для бактериологического исследования. Когда это возможно, по крайней мере одного утреннего образца должны быть получены, как мокроты, собранных на данный момент имеет самый высокий урожай. 11 Xpert MTB / RIF анализ может быть применен к мокроте или концентрированного осадка мокроты готовили из индуцированных или отхаркиваемой мокроты, которые . либо кислотоустойчивых микобактерий (КУМ) мазок положительный или отрицательный 6, 12, 13 тест предназначен для использования с образцами от пациентов, у которых есть клиническое подозрение на туберкулез легких, которые имеют: 1) не получили противотуберкулезные терапии, 2 ) было 7, так как бактериальная ДНК может сохраняться после антибактериальной терапии.

Лечение клинических образцов, в том числе использованные картриджи, как если бы способны передавать инфекционные агенты. Использование надлежащих мер предосторожности, таких как ношение защитной одноразовые перчатки, лабораторный халат и защитные очки, и следуй за безопасность вашей организации процедур и руководящих принципов.

1. Отхаркивается Образцы мокроты

Примечание: Процесс ровно столько образцов в одно время, так как есть GeneXpert системы Dx модули, доступные для выполнения теста!

На каждом Xpert MTB / RIF картридж с соответствующим идентификатором экземпляра.
Передача 1,0 мл мокроты отхаркивается к конической, с завинчивающимися крышками трубки с помощью стерильной пипетки передачи. Кроме того, весь образец могут быть обработаны в оригинальной герметичной контейнер забора мокроты.
Добавить 2,0 мл Xpert MTB / RIF образец реагента (2:1, об / об) в отхаркиваемой мокроты помощью стерильной пипетки передачи.
Замените крышку и встряхнуть трубку энергично 10-20 Раз. Кроме того, смесь может быть встряхивали (30 сек).
Позвольте трубку стоять в течение 5 мин при комнатной температуре.
Встряхните трубка энергично 10-20 раз. Кроме того, использование вихря (30 сек).
Позвольте трубку стоять еще 10 мин при комнатной температуре.
Проверка образцов: Образцы должны быть сжиженный без видимых сгустков мокроты.

2. Концентрированный осадков

Примечание: Процесс ровно столько образцов в одно время, как есть GeneXpert системы Dx модули, доступные для запуска тестов!

На каждом Xpert MTB / RIF картридж с соответствующим идентификатором экземпляра.
Передача 1,5 мл Xpert MTB / RIF образец реагента конические, завинчивающимися крышками трубки с помощью стерильной пипетки передачи.
Добавить по крайней мере, 0,5 мл концентрированного осадка для образца содержащего реагента трубки с помощью стерильной пипетки передачи.
Замените крышку и встряхнуть трубку Vigorously 10-20 раз. Кроме того, использование вихря (30 сек).
Позвольте трубку стоять в течение 5 мин при комнатной температуре.
Встряхните трубка энергично 10-20 раз. Кроме того, использование вихря (30 сек).
Позвольте трубку стоять еще 10 мин при комнатной температуре.
Проверка образцов: Образцы должны быть сжиженный без видимых сгустков мокроты.

3. Загрузка Xpert MTB / RIF картридж

Обратите внимание: Начало тестов в течение 30 минут после пробы в картридже!

Проверьте этикетки на Xpert MTB / RIF-картридж и образца ID.
Откройте крышку картриджа.
С помощью стерильной пипетки передачи при условии, аспирации сжиженного образец в передачи пипетки, пока мениск выше минимальной отметки и передачи образцов в открытый порт Xpert MTB / RIF картриджа.

Примечание:Внесите медленно, чтобы минимизировать риск образования аэрозоля!

Закройте крышку картриджа.

4. Начало испытаний

Примечание: Перед началом теста, убедитесь, что система GeneXpert Dx оснащен GX2.1 программного обеспечения, и Xpert MTB / RIF анализа импортируется в программу 9!

Включите компьютер, а затем включить прибор GeneXpert Dx.
На рабочем столе дважды щелкните ярлык GeneXpert Dx значок.
Вход в систему GeneXpert Dx программного обеспечения с использованием имени пользователя и пароля.
В системе окно GeneXpert Dx, нажмите кнопку Создать тест. Штрих-код сканирования картриджа появляется диалоговое окно.
В поле ID примера, сканирование или введите образец ID.
Сканирование штрих-кодов на Xpert MTB / RIF картриджа. В окне Создать тест.
Нажмите кнопку Пуск испытаний и введите пароль в появившемся диалоговом окне.
Откройте дверь, приборного отсека с мигающий зеленый свет, и загрузить картридж.
Закройте дверь. Тест начинается и перестанет мигать и остается постоянно зеленый. Когда тест закончен, свет выключается.
Подождите, пока система не освобождает замок в конце хода, откройте двери и модуль удаления картриджа.
Утилизация использованных картриджей в соответствующие контейнеры для отходов в соответствии со стандартной практикой вашей организации.

5. Представитель Результаты

Каждый Xpert MTB / RIF картриджа включает в себя реагенты для обнаружения сложных и MTB РИФ сопротивление, а также контроль обработки образцов (SPC) для контроля за адекватную обработку целевой бактерий и контролировать присутствие ингибитора (ы) в реакции ПЦР . Управление Probe Check (PCC) проверяет реагент регидратации, ПЦР трубки заполнениякартридж, датчик целостности и стабильности красителя. 9 праймеров в Xpert MTB / RIF анализа усилить часть гроВ ген содержащей 81 пар оснований, "ядро" региона. Пять разноцветных флуорогенных нуклеиновой кислоты зондов гибридизации, называются молекулярными маяками, допросить всего 81 б.п. ядра. 14 Каждая молекулярная маяк был разработан, чтобы быть настолько специфичны, что он не привязан к своей цели, если цель отличается от последовательности дикого типа гроВ последовательности всего один нуклеотид замены. С молекулярной флуоресценции маяки только тогда, когда они привязаны к своей цели, то есть дикий тип гроВ последовательность, отсутствие одного из пяти цветов в анализ различий между сохраняющейся дикого типа и мутации в ключевом регионе, которые связаны с РИФ сопротивление 6.

СПК должны быть положительными в отрицательной пробы и может быть положительным или отрицательным в положительном образце. ТестРезультатом будет "Неверная", если НПФ не обнаружен в отрицательном. Перед началом реакции ПЦР, система GeneXpert Dx измеряет сигнал флуоресценции от датчиков контролировать шарик регидратации, реакция трубки наполнения, датчик целостности и стабильности красителя. PCC проходит, если флуоресцентного сигнала от датчиков соответствует заданным критериям признания. Полученные результаты интерпретируются в системе GeneXpert Dx от измеряемых сигналов флуоресценции и встроенные алгоритмы расчета и отображаются в окне просмотра результатов 9, как указано ниже:

MTB Обнаружено: MTB ДНК цель обнаружена, как управление, SPC и PCC, отвечают заданным критериям признания. Нижняя Ct значения представляют собой более высокий исходной концентрации ДНК-матрицы, выше Ct значения представляют собой более низкую концентрацию ДНК. В MTB ОБНАРУЖЕН результаты "РИФ сопротивления ОБНАРУЖЕН" (рис. 1А), "РИФ сопротивления не обнаружен" ( Рисунок 1B), или "РИФ сопротивление неопределенный" будет отображаться на отдельной линии.

МТБ не обнаружена: MTB целевой ДНК не обнаружено, оба управления, SPC и PCC, отвечают назначены критерии приемки (рис. 2).

Неверная: Наличие или отсутствие MTB не может быть определена: SPC не соответствуют критериям приемлемости, то есть образец не был должным образом обработан, или ПЦР подавляется (рис. 3). Примечание: повторный тест с дополнительным образца!

Ошибка: один или несколько результатов удалось PCC (FAIL). И MTB и SPC отображения результата нет. Примечание: повторный тест с дополнительным образца! Если прошло PCC (PASS), ошибка вызвана отказом компонентов системы.

Рисунок 1: MTB целевой ДНК обнаруживается, как управление, SPC и PCC, отвечают заданным критериям признания. Нижняя Ct значения представляют собой более высокий исходныйКонцентрация ДНК-матрицы, более высокие значения Ct представляет собой низкую концентрацию ДНК. В MTB ОБНАРУЖЕН результаты "РИФ сопротивления не обнаружен" (рис. 1А), «РИФ сопротивления ОБНАРУЖЕН" (рис. 1в), или "РИФ сопротивление неопределенный" будет отображаться на отдельной линии.

На рис. 1А MTB обнаружены; РИФ сопротивления не обнаружено, то есть только дикий тип нуклеиновой кислоты из 81-ВР РИФ сопротивления определения региона (RRDR) гена гроВ присутствовало 6. Нажмите здесь, чтобы увеличить рисунок .

На рис. 1B MTB обнаружены; РИФ сопротивления обнаружено. Заполните бросают Probe B (стрелка), которая охватывает позиции 513 до 517 R RDR гена гроВ. 6 В, например, частичное секвенирование показало, что ген мутации гроВ D516V было обнаружено 8. Нажмите здесь, чтобы увеличить рисунок .

Рисунок 2 MTB целевой ДНК не была обнаружена. И управления, SPC и PCC, отвечают заданным критериям принятия Нажмите здесь, чтобы увеличить рисунок .

Рисунок 3. Неверный результат теста, то есть наличие или отсутствие MTB не может быть определена: SPC не соответствуют критериям приемлемости, поскольку выборка не была должным образом обработана, или потому, что ПЦР было законсервировано.3547fig3large.jpg "целевых =" _blank "> Нажмите здесь, чтобы увеличить цифру.

Xpert MTB / RIF анализ включает образец обеззараживания, в режиме громкой связи, бортовой обработки образцов, и сверхчувствительных полу-ПЦР для одновременного обнаружения и MTB РИФ сопротивления, либо в отхаркиваемой мокроты или концентрированные отложения, в одном , простая в использовании система. Аналитического предела анализ на обнаружение оказалось 131 КОЕ / мл мокроты. 6 лог-линейная зависимость между значениями Ct и количество MTB клетки, присутствующие справедливо от 10 2 до 10 7 КОЕ / мл мокроты. Как клинически значимых концентрациях MTB все попадают в линейный диапазон анализа, анализа обеспечивает полу-количественные оценки бактериальной нагрузки 7. Анализ требует только умеренного лабораторной инфраструктуры и подготовки кадров. Предел обнаружения лежит по крайней мере на два порядка ниже, чем у обычной микроскопии. 6 Специфика отлично. Кроме того, одновременное обнаружение РИФ-resistanт MTB является существенным преимуществом в условиях точка-в-санитарной тестирования в эпоху лекарственно-устойчивый туберкулез 3.

На сегодняшний день лишь ограниченное опубликованы данные по производительности тест для диагностики туберкулеза легких в лечебных учреждениях имеются 12, 13. Общей клинической чувствительности Xpert MTB / RIF тест на выявления MTB в мокроте больных с подозрением на туберкулез легких было 97,6% по сравнению с культурой в качестве опорного. Это были результаты перспективных многоцентровых исследований, которые участвуют пять исследовательских центров (Лима, Перу, Баку, Азербайджан, Кейптауне и Дурбане, Южная Африка, Мумбай, Индия) и в общей сложности 1462 пациентов. В целом предварительные испытания вероятность культуры подтвержденным ТБ в исследуемой популяции было 50,7%. Чувствительность 99,8% за мазком и культурой-инфицированных и 90,2% для с отрицательным мазком, культурно-положительных случаев. Среди ВИЧ-положительных пациентов с туберкулезом легких, чувствительность MTB / RIF тест был 93,9%, по сравнению с 98,4% в. ВИЧ-негативных пациентов 12 В настройки с низкой распространенностью туберкулеза, общее соглашение для обнаружения MTB составил 89% по сравнению с культурой, чувствительность 98% с положительным мазком и 72% с отрицательным мазком образцов, соответственно, и Специфика была отличная. 13 Существовал никаких существенных различий в чувствительности между тестами на необработанных мокроты и те, на концентрированные отложения. 12 В том же исследовании, MTB / RIF тест правильно обнаружен РИФ сопротивление в 209 из 211 пациентов (99,1% чувствительность) и в Все 506 пациентов с предрасположенностью РИФ (100% специфичности), когда последовательность результаты были приняты во внимание. 12 авторы обнаружили, что производительность как для выявления случаев заболевания и дискриминации сопротивления РИФ, было одинаковым во всех разнообразных сайтов, предполагая, что результаты, скорее всего, быть широко применимым 12. Кроме того, концентрированный осадков респираторных образцов, кроме мокроты, таких как бронхо-альвеолярной и промывание бронховл выделений, были протестированы с сопоставимой чувствительностью и специфичностью. 13 Данные по производительности анализа, когда тестирование внелегочного туберкулеза становится 15.

Глобальная борьба с туберкулезом срочно нуждается в эффективных инструментов, которые позволяют экспресс-диагностика новых случаев заболевания туберкулезом и обнаружения РИФ-устойчивыми в MTB всеобщего доступа точка-в-санитарной помощи. 3 Текущий амплификации нуклеиновых кислот методы, используемые для обнаружения MTB являются сложными, трудоемкими, и технически сложных. Xpert MTB / RIF анализа имеет потенциал, чтобы довести стандартизированного, чувствительной и очень конкретные диагностическое тестирование на ТБ и лекарственной устойчивости этих параметров, при условии, что они смогут себе это позволить. В целях облегчения доступа, Фонд для инновационных и новых диагностических средств (FIND) заключила значительное снижение цен на Xpert MTB / RIF тест. Текущий НАЙТИ-договорным ценам, а также список стран, имеющих право на скидки, можно ознакомиться на веб-10.

Нет конфликта интересов объявлены.

Авторы признают, WJ Looney для тщательного анализа рукописи.

Name	Company	Catalog Number	Comments
Xpert MTB/RIF test	Cepheid	GXMTB/RIF-10
Transfer pipettes	Sarstedt Ltd	86.1172.001
Conical tubes, 15 ml, 120 x 17 mm, PS	Sarstedt Ltd	62.553.542

You must be signed in to post a comment. Please sign in or create an account.

This content is Free Access.

Читайте также: