Препараты пробиотиков содержащие кишечную палочку штамм м-17
Ю.М. Дронова, кандидат медицинских наук, ассистент кафедры клинической фармакологии ВГМА им. Н.Н. Бурденко (Воронеж)
Микроэкологическая система кишечника насчитывает сотни разных видов микроорганизмов. Многообразными и очень важными для человека являются функции, которые выполняет нормальная кишечная микрофлора. Она обеспечивает резистентность открытых полостей к патогенным микроорганизмам за счет межмикробного антагонизма и активации иммунной системы. Представители нормальной микрофлоры участвуют в обезвреживании токсичных продуктов метаболизма и ксенобиотиков, в т.ч. с проканцерогенной активностью. Важную роль микроорганизмы играют в поддержании нормального уровня обменных процессов, осуществляя синтез ряда биологически активных веществ. Нормальная микрофлора кишечника оптимизирует процессы пищеварения, усиливая активность ферментов и моторную функцию желудочно-кишечного тракта (ЖКТ).
Выраженные качественные и количественные изменения в составе микробиоценоза могут быть вызваны действием различных стрессов, ослаблением иммунных реакций организма, широким и бесконтрольным применением антибиотиков, лучевой и гормональной терапии, инфекционными процессами, различными заболеваниями ЖКТ.
При этом селективное преимущество приобретают патогенные и условнопатогенные микроорганизмы, что может привести к целому ряду серьезных последствий. В частности, нарушения в составе нормальной микрофлоры нередко являются причиной развития инфекционных заболеваний, сенсибилизации, возникновения аллергических состояний (пищевой аллергии, атопического дерматита и т.д.). Избыточное размножение патогенной микрофлоры создает так называемый банк генов, участвующих в формировании особо вирулентных клонов микроорганизмов, обладающих лекарственной устойчивостью к антибактериальным препаратам.
Терапия заболеваний, сопровождающихся развитием дисбиотических нарушений, обязательно должна включать лекарственные средства, корригирующие количественный и качественный состав микрофлоры, т.е. средства с пробиотическим действием.
Пробиотиками называют бактерийные препараты, которые содержат те или иные микроорганизмы, являющиеся представителями облигатной микрофлоры человека (бифидобактерии, лактобактерии, эшерихии, энтерококки), а также не являющиеся представителями облигатной микрофлоры, но способствующие ее размножению (самоэлиминирующиеся штаммы апатогенных представителей рода Bacillus, Saccharomyces Boulardii). При естественном способе введения они оказывают положительное влияние на физиологические, биохимические и иммунные реакции организма за счет стабилизации и оптимизации функции микробиоценоза.
Пробиотики по своему составу являются гетерогенной группой лекарственных средств. При их классификации учитывается видовая принадлежность и количество штаммов содержащихся бактерий.
По составу выделяют следующие группы пробиотиков:
- Монопробиотики — препараты, содержащие микроорганизмы одного вида и штамма. В свою очередь они подразделяются на бифидосодержащие, колисодержащие, лактосодержащие, бациллярные и сахаромицетосодержащие препараты.
- Полипробиотики содержат бактерии одного вида, но разных штаммов. По составу они могут быть бифидосодержащими, лактосодержащими и бациллярными.
- Комбинированные пробиотики содержат микроорганизмы разных видов. Они представляют собой сочетания бифидо- и лактобактерий, бифидобактерий и апатогенных штаммов E. сoli, бифидобактерий, лактобактерий и апатогенных энтерококков.
Действующим началом бифидосодержащих пробиотиков являются живые бифидобактерии, которые составляют основную часть микробиоты кишечника человека. Кроме того, они являются представителями нормальной вагинальной микрофлоры. Эти бактерии обладают антагонистической активностью по отношению к широкому спектру патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.
Препараты, содержащие бифидобактерии, назначают детям и взрослым в составе комплексной терапии заболеваний ЖКТ, а также при лечении острых кишечных инфекций, бактерионосительстве (шигеллез, сальмонеллез, стафилококковый энтероколит и т.д.). В гинекологической практике препараты бифидобактерий в свечах применяют для лечения и профилактики бактериального вагиноза. В родильных домах и больницах бифидосодержащие пробиотики используют для предупреждения госпитальных инфекций. Новорожденным детям они назначаются с целью профилактики микробной колонизации кишечника, а также при раннем переводе детей грудного возраста на искусственное вскармливание. Кроме того, эти препараты находят широкое применение в составе комплексной терапии аллергодерматозов.
Большое значение имеют и лактосодержащие препараты. Они назначаются детям и взрослым при лечении острых кишечных инфекций, хронических воспалительных заболеваний ЖКТ, сопровождающихся выраженными дисбиотическими явлениями, особенно в случае дефицита лактофлоры. Особенностью этих препаратов является их устойчивость к большинству антибиотиков. Поэтому при необходимости их можно назначать на фоне одновременно проводимой антибактериальной терапии. Применение лактосодержащих препаратов вместо антибактериальных средств эффективно при лечении больных с острыми вирусными кишечными инфекциями (ротавирусный гастроэнтерит и др.). Как правило, антибиотики неэффективны у этих пациентов и только усугубляют у них явления дисбактериоза, что затрудняет последующее лечение. Препараты молочнокислых бактерий в суппозиториях используют в акушерско-гинекологической практике для санации половых путей при неспецифических воспалительных заболеваниях гениталий у девочек-подростков. Лиофилизированная биомасса лактобактерий штамма 317/402 в виде водной суспензии применяется в составе комплексной терапии заболеваний урогенитального тракта (хронический пиелонефрит, аднексит). Пробиотики, содержащие лактобациллы, включают в состав комплексной терапии аллергических поражений кожи (экссудативно-катаральный диатез, атопический дерматит и др.). Следует помнить о том, что лактосодержащие препараты нецелесообразно использовать при кандидозах, т.к. продуцируемые молочнокислыми бактериями органические кислоты способствуют размножению грибов рода Candida.
Основным действующим началом колисодержащих пробиотиков являются живые бактерии E. сoli М-17. Данные препараты применяют для долечивания реконвалесцентов после острых кишечных инфекций (шигеллез, сальмонеллез, пищевая токсикоинфекция неустановленной этиологии и др.), при хронических заболеваниях ЖКТ с выраженными дисбиотическими нарушениями. Комбинированный пробиотик, содержащий бифидобактерии и кишечные палочки штамма М-17, может быть использован только при обнаружении в фекалиях энтеропатогенных E. сoli. Следует знать, что колисодержащие препараты обладают универсальным фактором патогенности, каким является эндотоксин кишечной палочки. Это в ряде случаев при их употреблении приводит к утяжелению синдрома хронической диареи. Данные пробиотики не следует применять больным с неспецифическим язвенным колитом и болезнью Крона в стадии обострения. Не допускается назначение колисодержащих препаратов на фоне одновременно проводимой антибактериальной терапии.
Лечебное действие препаратов из апатогенных аэробных спорообразующих представителей рода Bacillus и лечебных дрожжей Saccharomyces Boulardii обусловлено их выраженными антагонистическими свойствами против широкого спектра патогенных и условно-патогенных бактерий. Имеются разные точки зрения на применение пробиотиков, содержащих аэробные спорообразущие бактерии. Существуют указания на то, что искусственное введение в кишечник этих бактерий в больших количествах и излишнее размножение бацилл в нехарактерном для них микробиотопе с развитием транслокационного синдрома может ухудшить состояние пациента. Эти препараты рекомендуется назначать кратковременно с последующим применением пробиотиков из представителей нормофлоры кишечника. Препараты данной группы широко применяются в терапии острых кишечных инфекций, дисбактериозов на фоне различных заболеваний ЖКТ. Монокомпонентный пробиотик, содержащий Bacillus subtilis штамма № 3Н, включают в схемы комплексного лечения бактериального вагиноза. Поликомпонентный препарат на основе Bacillus subtilis штаммов № 3 и № 31 находит применение в терапии как бактериального, так и кандидозного вагиноза. Одновременное назначение споровых пробиотиков и антибактериальных препаратов является нецелесообразным.
Генетической природной особенностью дрожжевых грибов Saccharomyces Boulardii является устойчивость к действию всех групп антибиотиков. В то же время они чувствительны к фунгицидным препаратам. Пробиотик, содержащий Saccharomyces Boulardii, широко применяется для коррекции дисбактериозов различной этиологии, для лечения антибиотико-ассоциированной диареи, рецидивирующего клостридиоза.
Особенностью комбинированных пробиотиков является благоприятное сочетание нескольких синергидных видов микроорганизмов облигатной микрофлоры кишечника, что существенно усиливает антагонистическую активность к патогенным возбудителям. Кроме того, это способствует нормализации состава микрофлоры на уровне нескольких микробиотопов ЖКТ.
Особого внимания среди комбинированных пробиотиков заслуживает Линекс® — препарат, который содержит три основных вида микроорганизмов нормальной микрофлоры человека — Lactobacillus acidophius, Bifidobacterium infantis, Enterococcus faecium.
Содержание этих бактерий в каждой капсуле гарантировано в течение всего срока годности препарата в количестве не менее 1,2×10 7 . Такой количественно и качественно сбалансированный состав позволяет обеспечить нормализацию микробиоценоза на всем протяжении кишечника. Особенностью микроорганизмов, входящих в состав Линекса®, является их устойчивость к кислотной среде желудка, а также резистентность к большинству антибактериальных средств. В исследованиях было показано, что переноса резистентности к другим микроорганизмам на фоне терапии Линексом® не происходит.
Достоинством препарата является его высокая безопасность. Хорошая переносимость позволяет применять Линекс® у взрослых и детей, в т.ч. новорожденных, у беременных и кормящих грудью женщин. В многочисленных исследованиях Линекс® проявил высокую эффективность в терапии дисбактериозов на фоне различных заболеваний ЖКТ, иммунодефицитных состояний. Результаты клинических исследований показали, что препарат обладает выраженным терапевтическим эффектом при суперинфекциях, обусловленных приемом антибиотиков широкого спектра действия. Преимуществом Линекса® является то, что он может назначаться одновременно с антибактериальной терапией, предупреждая развитие дисбиотических расстройств. Есть данные о том, что Линекс® существенно улучшает состояние пациентов, страдающих аллергическими дерматитами, поэтому обоснованным является включение данного препарата в схемы комбинированной терапии аллергодерматозов.
Таким образом, на современном этапе развития медицины в арсенале врача существует достаточно большое количество препаратов с пробиотическим действием. Выбор того или иного пробиотика должен основываться на знании характера нарушения микрофлоры, особенностей состава препарата, возможностей его взаимодействия с антибиотиками. Препаратами выбора на сегодняшний день являются комбинированные пробиотики, наиболее эффективные и безопасные средства в терапии дисбиотических расстройств.
Для того, чтобы восстановить кишечную флору или поддержать ее в нормальном состоянии, применяют пробиотики, пребиотики, синбиотики.
Пробиотики – живые коли, бифидо- и лактобактерии, дрожжи. Эти микроорганизмы - нормальные обитатели кишечника здорового человека.Пребиотики - плохо перевариваемые пищевые субстраты, которые служат для питания и роста одной или нескольких групп полезных бактерий, обитающих в толстом кишечнике.Эти питательные вещества не должны разрушаться пищеварительными ферментами в желудке и тонком кишечнике, поэтому они состоят из сложных углеводов - клетчатки.
КОЛИСОДЕРЖАЩИЕ ПРЕПАРАТЫ
К данной группе пробиотических препаратов относится колибактерин, бификол и биофлор.
Колибактерин. В одной дозе препарата содержится не менее 10 10 живых клеток E.coli М-17, лифилизированных в среде культивирования. Лечебное действие обусловлено антагонистической активностью кишечной палочки в отношении патогенных и условнопатогенных микроорганизмов, включая шигеллы, сальмонеллы, протей и др. Применяется для лечения затяжной и хронической дизентерии, долечивания реконвалесцентов после острых кишечных инфекций, хронических колитов и энтероколитов различной этиологии. Показан при формах дисбактериоза кишечника, протекающих на фоне дефицита нормальных кишечных палочек.
Бификол. Представляет собой лиофильно высушенную в среде культивирования микробную массу живых антагонистически активных штаммов бифидобактерий (B.bifidum 1) и кишечной палочки (E.coli М-17). Препарат выпускают во флаконах или ампулах (5 доз). Одна доза содержит не менее 10 8 живых бактерий каждого штамма. Препарат во флаконах (ампулах) применяют для больных детей с 6-месячного возраста и взрослых. Терапевтический эффект бификола определяют содержащиеся в нем живые бифидобактерии и кишечные палочки.
По механизму действия является многофакторным лечебным средством; обладает антагонистической активностью в отношении широкого спектра патогенных и условнопатогенных микроорганизмов, включая шигеллы, сальмонеллы, протей; оказывает корригирующее воздействие на нарушенный микробиоценоз; стимулирует местные репаративные процессы в кишечнике; способствует улучшению пищеварения и обмена веществ; стимулирует естественные факторы защиты.
Бификол применяется для лечения больных хроническими колитами разной этиологии, реконвалесцентов острых кишечных инфекций при наличии дисфункций кишечника, протекающих на фоне дисбактериоза.
Биофлор. Комплексный препарат, жидкий, содержит биологически активный экстракт из сои, овощей и прополиса, сквашенный по специальной технологии бактериями E.coli М-17. Механизм действия биофлора заключается в подавлении жизнедеятельности болезнетворных микроорганизмов, конкурентном вытеснении условнопатогенных бактерий, нормализации иммунологических процессов, улучшении всасывания соединений железа, кальция, фосфора и др.
Биофлор показан при лечении ОКИ и хронических заболеваний ЖКТ, а также при выраженных проявлениях дисбактериоза кишечника и при онкологических заболеваниях, проведении лучевой и химиотерапии.
ПРЕПАРАТЫ ИЗ АПАТОГЕННЫХ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ ДРУГИХ ТАКСОНОМИЧЕСКИХ ГРУПП И МИКРОБНЫХ МЕТАБОЛИТОВ
К этой группе относятся препараты из апатогенных представителей родов Bacillus, Aerococcus и Saccharomyces.. Из спорообразующих бацилл готовят препараты бактисубтил, споробактерин, бактиспорин и биоспорин, из A.viridans –А-бактерин и на основе S.boulardii – энтерол.
Препараты из представителей рода Bacillus. Лечебное действие споровых препаратов обусловлено их выраженными антагонистическими свойствами против широкого спектра патогенных и условнопатогенных бактерий, в том числе протеев, стафилококков и грибов рода Candida.
Эти препараты содержат комплекс ферментов, стимулирующих пищеварение и способствующих лучшему усвоению и всасыванию нутриентов, обладают протеолитическим и фибринолитическим действием, чем способствуют очищению воспалительных очагов от некротических тканей.
А-бактерин создан на основе штамма A.viridans, антагонистическая активность которого связана с синтезом перекиси водорода и бактериальной мурамидазы. Пептидогликан и тейхоевые кислоты, входящие в состав клеточной стенки аэрококков, обладают иммуномодулирующим действием.
Энтерол. Дрожжевые грибки Saccharomyces boulardii активны в отношении Clostridium difficile и рекомендованы для профилактики и лечения антибиотико-индуцированных диарей, амебной дизентерии и различных дисфункций желудочно-кишечного тракта.
ПРЕБИОТИКИ
Пребиотики – это препараты немикробного происхождения, способные оказывать позитивный эффект на организм хозяина через селективную стимуляцию роста или усиления метаболической активности нормальной микрофлоры кишечника. В эту группу входят препараты, относящиеся к различным фармакотерапевтическим группам, но обладающие общим свойством – стимулирововать рост и развитие нормальной микрофлоры кишечника.
Пребиотики и синбиотики
Биовестин-лакто (B.bifidum,B.adolescentis,L.plantarum и бифидогенные факторы).
Мальтодофилюс (B.bifidum, L.acidiphilus, L.bulgaricus и мальтодекстрин).
Бифидо-бак (комплекс лакто- и бифидобактерий и комплекс фруктоолигосахаридов из топинамбура).
Ламинолакт (Enterococcus faecium L-3, аминокислоты, пектины, морская капуста).
Лактулоза (дюфалак) Большую группу пребиотиков натурального или искусственного происхождения составляют олигосахара с углеводной цепью 2-10 углеводных остатков. Олигосахара не перевариваются и не всасываются в тонкой кишке, т.к. в щеточной кайме нет ферментов для их расщепления. В неизменном виде олигосахара поступают в толстую кишку, где подвергаются бактериальной ферментации.
К этой группе пребиотиков относится дюфалак (лактулоза), невсасывающийся и непереваривающийся в тонкой кишке синтетический дисахарид, состоящий из фруктозы и галактозы. Лактулоза реализует свое действие только в толстой кишке, где по данным некоторых исследователей, служит источником энергии и питательным субстратом, главным образом для бифидо и лактобактерий. Таким образом, лактулоза является бифидо и лактогенным пребиотиком, нормализующим нарушенный микробиоценоз кишечника.
Развитие указанных бактерий на фоне оптимальной для их развития рН содержимого толстой кишки приводит к увеличению их биомассы и соответственно объема кишечного содержимого. Конечными продуктами метаболизма лактулозы являются молочная, муравьиная и летучие жирные кислоты (уксусная, масляная, пропионовая). Последние, среди прочих биологических эффектов (гипохолестеринемическое, гиполипидемическое, антипролиферативное действие) обладают осмотическим действием и соответствующим послабляющим эффектом. Таким образом, лактулоза сочетает в себе свойства пребиотика и мягкого осмотического слабительного.
Кальция пантотенат – участвует в процессах ацетилирования и окисления в клетках, углеводном и жировом обменах, синтезе ацетилхолина, стимулирует образование кортикостероидов в коре надпочечников. Утилизируется бифидобактериями и способствует увеличению их биомассы.
ПАМБА – пара-амино-метил-бензойная кислота (аналог амбен), ингибирующая действие протеолитических ферментов условнопатогенных бактерий и грибов, стимулирующая рост и размножение бифидо- и лактофлоры и полноценных кишечных палочек.
Лизоцим – способствует нормализации нарушенной микрофлоры. Наиболее активен в отношении грамположительных патогенных и условнопатогенных бактерий. Лизоцим обладает бифидогенным, иммуномодулирующим, противовоспалительным действием, стимулирует метаболические и репаративные процессы и эритропоэз, улучшает пищеварение, повышает противоинфекционную и антитоксическую резистентность организма, оказывает антибактериальное действие и проявляет синергизм со многими антибиотиками.
СИНБИОТИКИ
Синбиотики - это препараты, полученные в результате рациональной комбинации пробиотиков и пребиотиков. Часто это биологически активные добавки, входящие в состав функционального питания, обогащенные одним или несколькими штаммами представителей родов Lactobacillus и/или Bifidobacterium .Широко используются : биовестин-лакто, сордержащий бифидогенные факторы и биомассу B.bifidum, B.adolescentis, L.plantarum; мальтидофилюс, содержащий мальтодекстрин и биомассу B.bifidum, L.acidоphilus, L.bulgaricus; бифидо-бак, включающий фруктоолигосахариды из топинамбура и комплекс из бифидобактерий и лактобацилл, ламинолакт, содержащий аминокислоты, пектины, морскую капусту и энтерококки..
Схемы коррекции дисбактериозов кишечника.
Применять пробиотические препараты целесообразно в соответствии с принципом микроэкологической адекватности с учетом микробиологических нарушений, фазы и стадии дисбактериоза кишечника. Одни препараты у взрослых целесообразно использовать с профилактической целью, другие назначаются для лечения. Важным является характер основного заболевания, при котором развивается дисбактериоз кишечника. Так, при вирусных заболеваниях более целесообразно использовать лактосодержащие препараты, при бактериальных – бифидо- и лактосодержащие. Споровые пробиотики рекомендуются для лечения дисбактериозов, протекающих с доминированием протеев и грибков рода Candida.
Коррекция, как правило, комплексное с назначением специфических бактериофагов, витаминов, сорбентов, десенсибилизирующих средств, в ряде случаев кишечных антисептиков и антибактериальных препаратов (в этих случаях с последующим назначением пробиотиков).
Кроме описанных лекарственных средств, зарубежными компаниями выпускаются многочисленные препараты с пробиотической функций аналогичного действия, относящиеся к классу биологически активных добавок к пище..
В заключение следует отметить, что клинический микробиолог при назначении пробиотиков предусматривает возможность ассоциации того или иного заболевания с развитием микроэкологических нарушений ЖКТ, оцениваемых по результатам исследования тонкой и толстой кишки, включая бактериологический анализ фекалий на дисбактериоз.
Результаты коррекции нарушенной микрофлоры неоспоримо доказывают, что в большинстве случаев применение препаратов с пробиотической функцией наиболее физиологично и клинически значимо для больного. Использование пробиотических препаратов показало их явное клинико-микробиологическое преимущество и выраженный терапевтический эффект.
Содержимое (Table of Contents)
ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Вводится впервые
Колисодержащие пробиотики представляют собой биомассу живых антагонистически активных штаммов кишечной палочки, лиофильно высушенную в среде культивирования с добавлением защитной среды высушивания.
Колисодержащие пробиотики по составу подразделяются на:
- Монокомпонентные,– полученные на основе одного производственного штамма кишечной палочки (например, Escherichiacoli M-17);
- Поликомпонентные,– полученные на основе нескольких производственных штаммов бактерий, принадлежащих к разным родам и семействам (например, Escherichiacoli M-17 и Bifidobacteriumbifidum 1), дополняющие или потенцирующие друг друга по ферментативным свойствам, антагонистической активности, продукции биологически активных веществ, механизму действия или другим свойствам.
Производственные штаммы бактерий Escherichia coli
Штаммы бактерий E. coli, используемые для производства колисодержащих пробиотиков, депонируют в официальных коллекциях (табл. 1).
Таблица 1 – Производственные штаммы бактерий E. coli, используемые в производстве колисодержащих пробиотиков, зарегистрированных в РФ
| Название производственного штамма бактерий
Escherichia coli | Место депонирования,
коллекционный номер штамма-депозита |
| E. coli М-17 | Государственная коллекция патогенных микроорганизмов, Россия (ГКПМ) № 240418 |
| E. coli Г-35-1/59 | Государственная коллекция патогенных микроорганизмов, Россия (ГКПМ) № 790059 |
| E. coli Г-35-1/60 | Государственная коллекция патогенных микроорганизмов, Россия (ГКПМ) № 790060 |
| E. coli Г-35-1/61 | Государственная коллекция патогенных микроорганизмов, Россия (ГКПМ) № 790061 |
Таблица 2 – Морфологические, тинкториальные и культуральные свойства производственных штаммов бактерий E. coli
| Название штамма | Описание морфологических и культуральных свойств |
| E.coli M-17 | В мазках, окрашенных по Граму, должны обнаруживаться подвижные грамотрицательные одиночные палочки с закругленными концами длиной от 1,5 до 4,0 мкм.
Факультативный анаэроб; через (15 ± 3) ч инкубации при температуре (37 ± 1) 0 С на мясопептонном агаре образует бесцветные круглые с ровными краями выпуклые колонии; на среде Эндо образует красные колонии с зеленоватым металлическим блеском; на мясопептонном бульоне через (3 ± 1) ч происходит равномерное помутнение среды. Оптимальная температура роста (37 ± 1) 0 С |
| E. coli Г-35-1/59 | В мазках, окрашенных по Граму, должны быть подвижные прямые грамотрицательные одиночные палочки с закругленными концами длиной от 1,5 до 4,0 мкм.
Факультативный анаэроб; через (15 ± 3) ч инкубации при температуре (37 ± 1) 0 С на мясопептонном агаре образует круглые гладкие полупрозрачные слабовыпуклые колонии диаметром (2,0 ± 0,5) мм с ровными краями; на среде Эндо образует красные колонии без металлического блеска; на мясопептонном бульоне через (3 ± 1) ч происходит равномерное помутнение среды. Оптимальная температура роста (37 ± 1) 0 С |
| E. coli Г-35-1/60 | В мазках, окрашенных по Граму, должны присутствовать подвижные прямые грамотрицательные одиночные палочки с закругленными концами длиной от 1,5 до 4,0 мкм.
Факультативный анаэроб; через (15 ± 3) ч инкубации при температуре (37 ± 1) 0 С на мясопептонном агаре образует круглые гладкие полупрозрачные слабовыпуклые колонии диаметром (2,0 ± 0,5) мм с ровными краями; на среде Эндо образует красные колонии с металлическим блеском; на мясопептонном бульоне через (3 ± 1) ч происходит равномерное помутнение среды. Оптимальная температура роста (37 ± 1) 0 С |
| E. coli Г-35-1/61 | В мазках, окрашенных по Граму, должны определяться подвижные прямые грамотрицательные одиночные палочки с закругленными концами длиной от 1,5 до 4,0 мкм.
Факультативный анаэроб; через (15 ± 3) ч инкубации при температуре (37 ± 1) 0 С на мясопептонном агаре образует круглые гладкие полупрозрачные слабовыпуклые колонии диаметром (2,0 ± 0,5) мм с ровными краями; на среде Эндо образует светло-красные колонии без металлического блеска; на мясопептонном бульоне через (3 ± 1) ч происходит равномерное помутнение среды. Оптимальная температура роста (37 ± 1) 0 С |
Таблица 3 – Физиолого-биохимические свойства производственных штаммов бактерий E. coli
| Свойства | Штаммы бактерий вида Escherichia coli | |||
| E. coli М-17 | E. coli Г-35-1/59 | E. coli Г-35-1/60 | E. coli Г-35-1/61 | |
| Ферментирует: | ||||
| сорбит | + | + | + | +
— |
| арабинозу | + | + | + | |
| лизин | + | + | + | |
| сахарозу | + | + | +/- | |
| инозит | — | — | — | |
| Ферментирует
кислоты и газа: | ||||
| глюкозу | + | + | + | + |
| лактозу | + | + | +/- | + |
| мальтозу | + | + | + | + |
| маннит | + | + | + | + |
| Образует: | ||||
| индол | + | + | + | + |
| сероводород | — | — | — | — |
| Разжижает
желатин | — | — | — | — |
| Гидролизует
мочевину | — | — | — | — |
| Гемолитическая
активность | — | — | — | — |
| Адгезивная
активность | + | + | + | + |
| Антагонистическая активность (зоны задержки роста тест-штаммов на агаризованной среде Гаузе №2, мм) | не менее 10 | не менее 10 | не менее 10 | не менее 10 |
Таблица 4 – Изучение безопасности штаммов бактерий E. coli
| № штамма | Безвредность | Вирулентность | Токсичность | Токсигенность | ||||
| Вводимая доза живых E.coli,
х10 10 КОЕ/ 0,5 мл | Кол-во живых/ павших мышей | Вводимая доза живых E.coli,
х10 9 КОЕ/ 0,5 мл | Кол-во живых/ пав-ших мышей | Вводимая доза инактиви-рованных E. coli, х10 9 КОЕ/мл | Кол-во живых/ павших мышей | Вводимая доза,
мл | Кол-во живых/ павших мышей | |
| E. coli
M-17 | 1 | 10/0 | 0,1 | 10/0 | 0,1 | 10/0 | 0,1 | 10/0 |
| 5 | 10/0 | 0,5 | 5/5 | 0,5 | 5/5 | 10/0 | ||
| 10 | 10/0 | 1 | 10/0 | 1 | 10/0 | |||
| E. coli
Г-35-1/59 | 1 | 10/0 | 0,1 | 10/0 | 0,1 | 10/0 | 0,1 | 10/0 |
| 5 | 10/0 | 0,5 | 5/5 | 0,5 | 5/5 | |||
| 10 | 10/0 | 1 | 10/0 | 1 | 10/0 | 0,5 | 10/0 | |
| E. coli
Г-35-1/60 | 1 | 10/0 | 0,1 | 10/0 | 0,1 | 10/0 | 0,1 | 10/0 |
| 5 | 10/0 | 0,5 | 5/5 | 0,5 | 5/5 | |||
| 10 | 10/0 | 1 | 10/0 | 1 | 10/0 | 0,5 | 10/0 | |
| E. coli
Г-35-1/51 | 1 | 10/0 | 0,1 | 10/0 | 0,1 | 10/0 | 0,1 | 10/0 |
| 5 | 10/0 | 0,5 | 5/5 | 0,5 | 5/5 | 0,5 | 10/0 | |
| 10 | 10/0 | 1 | 10/0 | 1 | 10/0 | |||
ПРОИЗВОДСТВО
Производство колисодержащих пробиотиков основано на выращивании/культивировании производственного штамма бактерий E. coli на оптимальной питательной среде в соответствующих условиях методом глубинного культивирования с последующей лиофилизацией биомассы в защитной среде.
При производстве колисодержащих пробиотиков проводят валидацию технологического процесса и методов контроля, которые в соответствии с требованиями правил организации производства и контроля качества ИЛП доказывают, что производственный процесс, оборудование, исходное сырье, деятельность персонала, конкретная методика действительно приводят к ожидаемым результатам и гарантируют, что лекарственное средство изготовлено в соответствии со своим составом, не содержит контаминантов и бактериофагов, маркировано надлежащим образом, упаковано и сохраняет свои свойства в течение всего срока годности.
При производстве колисодержащих пробиотиков особое значение имеет постоянное выполнение на всех этапах производства внутрипроизводственного анализа основных показателей качества для оценки их воспроизводимости, осуществляется контроль качества готовой продукции при выпуске и в течение всего срока хранения.
Колисодержащие пробиотики для медицинского применения выпускают в следующих лекарственных формах: лиофилизаты (флаконы), таблетки, порошки. Показатели качества лекарственного средства оценивают по соответствующей лекарственной форме.
ИСПЫТАНИЯ
Приводится описание внешнего вида соответствующей лекарственной формы лекарственного средства.
Указывают время, необходимое для растворения лекарственного препарата, применяемый растворитель (среда восстановления), его объем и, при необходимости, условия растворения (температуру растворителя, перемешивание, встряхивание).
Время распадаемости для таблеток не должно превышать 15 мин, если в нормативной документации не указаны другие требования.
- лиофилизатов – не более 3,5 %;
- таблеток – не более 4,5 %;
- порошков – не более 5,0 %.
Категория 5.3.А (лиофилизаты, порошки)
- отсутствие бактерий-контаминантов в единице препарата, г/мл;
- отсутствие дрожжевых и плесневых грибов в единице препарата, г/мл;
- для монокомпонентных препаратов – не более 10 БОЕ бактериофага в единице препарата, г/мл;
- для поликомпонентных препаратов – отсутствие БОЕ бактериофага в единице препарата, г/мл.
Категория 5.3.Б (таблетки)
- общее число аэробных бактерий – не более 10 2 КОЕ в единице препарата, г;
- общее число дрожжевых и плесневых грибов – менее 10 КОЕ в единице препарата, г;
- отсутствие энтеробактерий в единице препарата, г;
- отсутствие Pseudomonas aeruginosa в единице препарата, г;
- отсутствие Staphylococcus aureus в единице препарата, г;
- для монокомпонентных препаратов – не более 10 БОЕ бактериофага в единице препарата, г/мл;
- для поликомпонентных препаратов – отсутствие БОЕ бактериофага в единице препарата, г/мл.
Указывают используемые питательные среды, количество и объем испытуемого материала, условия инкубации и ее продолжительность, правила учета результатов.
Определение количества живых бактериальных клеток в 1 дозе проводят методом серийных разведений с последующим высевом на агаризованные питательные среды (агар Эндо или мясопептонный агар, если в нормативной документации не приведены другие среды). При проведении контроля поликомпонентных пробиотиков необходимо учитывать количество и соотношение всех штаммов, входящих в препарат. В одной дозе монокомпонентного препарата E. coli должно содержаться не менее 6 10 9 КОЕ, если в нормативной документации не приведены другие требования.
Антагонистическая активность лекарственного средства в отношении штаммов патогенных и условно-патогенных микроорганизмов определяется методом отсроченного антагонизма на среде Гаузе № 2 или на полусинтетической среде с дрожжевым диализатом (если в нормативной документации не приведены другие среды) по зонам задержки роста тест-штаммов. Зоны задержки роста тест-штаммов условно-патогенных и патогенных бактерий и грибов рода Candida должны быть не менее 10 мм, если в нормативной документации не указаны другие требования.
В разделе должна содержаться следующая информация:
- Наименование производственных штаммов и штаммов для контроля, обоснование для включения в производство (депонирование в официальных коллекциях).
- Производственные штаммы и штаммы для контроля должны быть проверены на отсутствие контаминации и соответствующим образом охарактеризованы по биологическим и биохимическим свойствам.
Контроль качества производственных пробиотических штаммов и штаммов для контроля пробиотиков рекомендуется проводить не реже 1 раза в год, если в нормативной документации нет других указаний.
При температуре от 2 до 8 о С, если нет других указаний в нормативной документации. Указывают условия транспортирования и хранения, обеспечивающие стабильность лекарственного средства.
Читайте также:
