Отличие сальмонелл от кишечной палочки на среде

S. paratyphi вызывает паратифы, они различаются по типу заболевания и делятся на А, В и С. Salmonellatyphi вызывает брюшной тиф. Эти инфекционные заболевания сопровождаются циркуляцией возбудителя в крови, высокой температурой тела, реакцией лимфатических узлов и токсическими проявлениями. Сальмонеллы вызывают сальмонеллез, который протекает несколько легче чем тифы и паратифы. Эти патологии трудно отличить, основываясь лишь на клинических явлениях - для этого используются лабораторные методы исследования. Их объединяет то, что они тропны к пищеварительному тракту и большинство симптомов наблюдается именно со стороны этих органов.

Эпидемиологические особенности патологий

Важным моментом при постановке диагноза являются особенности проникновения возбудителя в организм. В зависимости от этого различают несколько типов инфекций. К примеру, бактерии, которые приводят к развитию тифа и паратифов, являются антропонозными - передача инфекции наблюдается от людей, которые болеют и являются носителями. Сальмонеллез и некоторые паратифы являются зооантропонозами - инфекциями, которые общие и для животных. и для людей.

Строение сальмонелл позволяет им переживать условия внешней среды и продолжать свой жизненный цикл в воде, почве. Чтобы уничтожить их, необходимо использовать дезинфектанты и другие агрессивные вещества. В сточные воды и землю бактерии поступают, в основном, с испражнениями, поэтому путь передачи называется фекально-оральным. Кроме кала и мочи, значительное количество бактерий содержит слюна пациента, из чего также можно сделать выводы о передаче заболевания.

Когда необходимо пройти диагностику?

Анализы необходимо сдать тем, кто работает на пищевом производстве, посещает детский коллектив или работает в нем. Это нужно для того, чтобы исключить факт носительства бактерии. Пищевая промышленность опасна в эпидемиологическом плане, так как возбудитель превосходно чувствует себя на питательных средах, которые используются в производстве готовых блюд или продуктов. Детские коллективы также имеют свою особенность - в детском возрасте не так серьезно соблюдаются гигиенические меры, чаще наблюдается некачественное мытье рук, контакт грязных поверхностей со слизистой рта. Особенно важна диагностика и для беременных. В остальных случаях, анализы проводятся при наличии следующих симптомов:

острое повышение температуры;
нарастающая интоксикация, которая проявляется слабостью, головной болью, ломотой в костях и суставах;
боль в животе, которая имеет спастический характер, локализуется вокруг пупочного кольца и в месте, где сходятся реберные дуги;
тошнота, за которой следует неоднократная рвота;
диарея, при которой может наблюдаться зеленоватый оттенок каловых масс и их неприятный запах;
бледность кожных покровов;
сухость слизистых;
мелкопятнистая сыпь красного цвета, которая постепенно становится более бледной.

Наблюдаются различные формы и особенности течения заболеваний, поэтому симптомы могут несколько отличаться. Как правило, при подозрительной клинической картине пациенты обращаются к врачу, а он направляет их на сдачу анализов. Лабораторная диагностика используется и ретроспективно - после выздоровления, для определения иммунологической картины, а также для выявления устойчивых форм патологии.

Виды исследований при данных инфекционных заболеваниях

Начало диагностики - забор материала. Биологические жидкости и ткани необходимо правильно собрать, в зависимости от фазы развития болезни. Лучше сделать это до начала приема антибактериальной терапии.

Постановка диагноза “брюшной тиф” происходит такими методами:

Данные методы актуальны для ранней постановки диагноза. Возбудителя можно выявить в крови, тканях костного мозга, дуоденальном содержимом, в каловых массах и в моче. Посев палочек тифа дает точную информацию для постановки диагноза.

Для исследования берется кровь пациента, 10 мл, венозная. Посев производится на специфические питательные среды. В некоторых случаях, часть крови используется для посева, а сыворотка - для серологического анализа. Ожидается рост культур, которые идентифицирует с помощью макро- и микроскопического исследования.

На определенных стадиях патологического процесса можно выделять возбудитель из костного мозга - для этого проводится стернальная пункция и забор небольшого количества материала. Это безопасно и безболезненно, так как проходит на фоне анестезии. Посев происходит на питательные среды. Особенность метода - большая чувствительность. Методика обладает диагностической точностью даже при стертых формах болезни, которые невозможно определить методом гемокультуры.

Забор желчи происходит путем зондирования 12-перстной кишки. Сеются 3 порции кишечного содержимого. Особенность методики - эффективность при поиске носителей или устойчивых форм болезни у носителей.

Материал находится в элементах сыпи - это прозрачная жидкость в центре розеолы. Используется при негативном ответе на другие методы исследования и при наличии характерной сыпи. Для забора крови необходимо обработать кожу и скарифицировать её острием скальпеля. Содержимое элемента сыпи наносится на питательную среду, как и в остальных случаях.

Определение культур в моче больше направлено на поиск бактерионосителей, чем пациентов с активной формой болезни. Мочу собирают после тщательного туалета, а еще лучше с помощью катетера. В остальном, исследование происходит также, как и в случае с остальным биологическим материалом.

Методика используется не так часто, так как в каловых массах возбудитель появляется через время после заболевания. Исследование используется для здоровых лиц и носителей.

Для выявления тифозных микроорганизмов может использоваться исследование воды.

Для того, чтобы идентифицировать сам микроорганизм используется специальный метод окраски - он позволяет увидеть под микроскопом типичные палочки, красного цвета, которые на концах имеют закругленные образования. Исследуют её форму, размеры, биохимические свойства и идентифицируют вид микроорганизма. Производится также фаготипирование, то есть определение конкретного вида возбудителя.

Используются для определения носительства или наличия патологического процесса. В диагностике тифа используется реакция Видаля, а также РИГА. Еще один серологический метод - иммуноферментный анализ.

Реакция Видаля позволяет выделить возбудитель из сыворотки крови. Реакция специфическая, начиная с 7-10 дня болезни. Особенность брюшного тифа - разные скорости повышения тех или иных типов антигенов. Определение всех антигенов позволяет правильно диагностировать процесс. Реакция имеет специфические особенности в плане забора материала и постановки исследования, поэтому её точность зависит от условий лаборатории.

Реакция гемагглютинации широко используется для диагностики тифа и паратифа. Особенно важна методика для определения носительства бактерий. Достоверность реакции подтверждается выделением чистой культуры микроорганизмов. Для носителей используются методики исследования мочи, желчи или каловых масс.

Серологические пробы более достоверны, если использовать методику парных сывороток и отслеживать динамическое изменение количества антител. Также, определение вида антител позволяет сказать, какая стадия процесса происходит в организме.

Аллергопроба при тифе основана на воздействии тифина, который обладает аллергеном. Он вызывает реакцию, если в организме есть антитела к нему. Реакция сопровождается небольшим местным отеком, покраснением. Проба используется для реконвалесцентов и необходима в ретроспективном плане.

Диагностика сальмонеллеза происходит с помощью таких процедур:

Бактериологическое исследование каловых масс используется наряду с аналогичным исследованием рвотных масс, мочи, желчи, промывных вод желудка. Посев производится на питательные среды, в которых созданы наиболее благоприятные условия для роста культур. Такие реактивы создаются на основе биохимических свойств возбудителя. Если в исследуемом материале есть культура сальмонелл, в благоприятных условиях она даст рост на среде. Исследователь ждет необходимое количество дней (от 7 до 10) и осматривает реактивы. Сальмонеллы отличаются характерным ростом, который дает основания для постановки диагноза.

Копрограмма при сальмонеллезе - один из наиболее быстрых методов постановки диагноза. Макроскопическое исследование дает основания заподозрить патологические изменения слизистой пищеварительного тракта. Об этом говорят непереваренные частицы клетчатки, воспалительные клетки, выделения слизи и крови вместе с калом, крахмальные зерна. Это говорит о том, что нарушена пищеварительная функция и многие компоненты пищи не расщепляются до своих единиц. Такие изменения вместе с клиническими данными позволяют поставить диагноз и начать лечение. Сбор каловых масс нельзя проводить после приема слабительных препаратов.

Для постановки полимеразно-цепной реакции используется кровь пациента. Современные методы диагностики позволяют обнаружить частицы генетического материала и составить из них фрагмент нуклеиновой кислоты. Полученный образец сопоставляют с таковым у искомого возбудителя и при их совпадении ставят диагноз. Метод обладает высокой чувствительностью, он является точным основанием для постановки диагноза.

Серологические методы диагностики основаны на поиске антител в крови пациента. Если в организме находятся антитела, они создадут иммунокомплекс вместе с антигеном, который добавляют к биологическому материалу. Если реакция произошла, её повторяют через время, чтобы увидеть динамическую картину заболевания. Это называется методом парных сывороток, определяется нарастание титра антител. Различают виды антител, которые есть в острой стадии, у носителей, у пациентов с реконвалесцентной формой патологии. Среди серологических методов - иммуноферментный анализ, реакции гемагглютинации, иммунофлюоресцентные методики. Они различаются добавлением дополнительных реактивов, прицельным изучением эритроцитов.

Каждый из методов диагностики используется при определенных обстоятельствах - в зависимости от состояния пациента, дня с начала болезни, а также для разных целей диагностики. Это важно и для назначения лекарственной тактики, и для получения эпидемиологических данных.

Острые кишечные инфекции опасны тем, что приводят к интоксикации и быстрому обезвоживанию. Вместе с жидкостью из организма выводятся полезные минералы, соли и другие вещества. За короткий срок может наступить критическое состояние организма, ведь потеря влаги происходит также за счет высокой температуры, частого дыхания, потоотделения и других процессов. Особенно опасно это для тех, кто имеет ослабленный иммунитет, для детей. Поэтому, своевременная и качественная диагностика настолько важна, ведь именно на её основе можно назначить необходимое лечение, которое приведет к положительному результату.

Лаборатория АО "СЗЦДМ" предлагает услуги, обеспечивающие комплексное и преемственное лабораторное обследование пациента

Диагностика В медицинских центрах АО "СЗЦДМ" проводят качественные диагностические исследования всего организма

Лечение Наши медицинские центры ориентированы на обслуживание пациентов в амбулаторном режиме и объединены единым подходом к обследованию и лечению пациентов.

Реабилитация Реабилитация - это действия, направленные на всестороннюю помощь больному человеку или инвалиду для достижения им максимально возможной полноценности, в том числе и социальной или экономической.

Выезд на дом Внимание! Действует акция "Выезд на дом - 0 рублей"

Профосмотры АО "СЗЦДМ" проводит профилактические осмотры работников, которые включают в себя - комплексы лечебных и профилактических мероприятий, проводимых для выявления отклонений в состоянии здоровья, профилактики развития и распространения заболеваний.

Основные факты

Salmonella является одной из четырех основных причин диарейных болезней во всем мире.
Большинство случаев заболевания сальмонеллезом протекает в легкой форме; однако иногда сальмонеллез может представлять угрозу для жизни. Степень тяжести болезни зависит от факторов, связанных с хозяином, и от серотипа Salmonella.
Устойчивость к противомикробным препаратам —проблема общественного здравоохранения, вызывающая озабоченность во всем мире, и Salmonella входит в число микроорганизмов, у которых появилось определенное количество устойчивых серотипов, встречающихся в пищевой цепи.
В качестве профилактической меры, защищающей от сальмонеллеза, рекомендуется следовать элементарным практическим правилам пищевой гигиены, таким как проведение тщательной тепловой обработки.

Обзор

Бремя болезней пищевого происхождения весьма значительно: каждый год заболевает почти каждый десятый человек, что приводит к потере 33 миллионов лет здоровой жизни. Болезни пищевого происхождения могут быть тяжелыми, особенно у детей раннего возраста. Диарейные болезни — наиболее распространенные заболевания, вызванные нездоровой пищей. Ими ежегодно заболевает 550 миллионов человек, в том числе 220 миллионов детей младше 5 лет. Salmonella является одной из четырех основных причин диарейных болезней во всем мире.

Хотя вызывать заболевание людей могут все серотипы, некоторые из них являются специфичными по хозяину и могут жить лишь в одном или нескольких видах животных: так, например, серотип Dublin Salmonella enterica живет в крупном рогатом скоте, а серотип Choleraesuis Salmonella enterica — в свиньях. Когда эти конкретные серотипы вызывают болезнь у человека, такая болезнь часто бывает инвазивной и может представлять угрозу для жизни.

Однако большинство серотипов присутствует в широком ряде носителей. Такие серотипы обычно вызывают гастроэнтерит, который часто протекает без осложнений и не требует лечения, но может протекать в тяжелой форме у детей, пожилых людей и пациентов с ослабленным иммунитетом. К этой группе относятся серотип Enteritidis Salmonella enterica и серотип Typhimurium Salmonella enterica два наиболее важных серотипа Salmonella передаваемых от животных человеку в большинстве регионов мира.

Болезнь

Сальмонеллез — это болезнь, вызываемая бактерией Salmonella. Для нее обычно характерны резкое повышение температуры, боль в области живота, диарея, тошнота и иногда рвота.

Симптомы болезни появляются через 6-72 часа (обычно через 12-36 часов) после поглощения Salmonella, и болезнь длится от 2 до 7 дней.

Симптомы сальмонеллеза протекают относительно легко, и в большинстве случаев пациенты выздоравливают без специального лечения. Однако в некоторых случаях, особенно у детей и пожилых пациентов, связанное с болезнью обезвоживание может становиться тяжелым и представлять угрозу для жизни.

Хотя крупные вспышки Salmonella обычно привлекают внимание СМИ, от 60 до 80% всех случаев заболевания сальмонеллезом не регистрируется в рамках известных вспышек болезни. Такие случаи заболевания классифицируются как спорадические или же вообще не диагностируются в этом качестве.

Источники и передача инфекции

Бактерия Salmonella широко распространена среди домашних и диких животных, преимущественно среди животных, используемых в пищу, таких как домашняя птица, свиньи и крупный рогатый скот; а также среди домашних животных, включая кошек, собак, птиц и рептилий, таких как черепахи.
Salmonella может проходить через всю пищевую цепь — от корма для животных, первичного производства и до дома или предприятий общественного питания.
Люди заражаются сальмонеллезом, как правило, в результате потребления зараженных пищевых продуктов животного происхождения (в основном яиц, мяса, домашней птицы и молока), хотя к передаче инфекции могут быть причастны и другие пищевые продукты, включая зеленые овощи, загрязненные навозом.
Может иметь место и передача инфекции от человека человеку фекально-оральным путем.
Случаи заболевания людей происходят также при контактах с инфицированными животными, включая домашних животных. У инфицированных животных признаки болезни часто не проявляются.

Лечение

В тяжелых случаях заболевания лечение заключается в восполнении электролитов (для обеспечения поступления в организм электролитов, таких как ионы натрия, калия и хлора, выведенных с рвотой и диареей) и регидратации.

При легких случаях заболевания или заболевании средней тяжести у здоровых людей обычная терапия противомикробными препаратами не рекомендуется. Это связано с тем, что противомикробные препараты могут не уничтожить бактерию полностью и способствовать селекции устойчивых штаммов, что может впоследствии привести к тому, что лекарство станет неэффективным. .

Однако такие группы риска, как дети грудного возраста, пожилые люди и пациенты с ослабленным иммунитетом, могут нуждаться в лечении противомикробными препаратами. Противомикробные препараты обычно назначаются и в случаях, когда инфекция распространяется из кишечника на другие части организма.

В связи с глобальным усилением устойчивости к противомикробным препаратам необходимо регулярно пересматривать руководящие принципы лечения, принимая во внимание модель устойчивости бактерии с учетом данных местной системы эпиднадзора

Методы профилактики

Для профилактики требуются контрольные меры во всех звеньях пищевой цепи — от сельскохозяйственного производства до обработки, производства и приготовления пищевых продуктов как в коммерческих организациях, так и в домашних условиях.

Контакты между детьми грудного или раннего возраста и домашними животными (кошками, собаками, черепахами и т. п.), которые могут быть носителями Salmonella, должны происходить под тщательным наблюдением.

Национальные и региональные системы эпиднадзора за болезнями пищевого происхождения являются важными средствами для изучения и отслеживании ситуации с таким болезнями, а также для выявления сальмонеллеза и других кишечных инфекций на ранних стадиях и принятия ответных мер, что позволяет предотвращать дальнейшее распространение таких болезней.

Деятельность ВОЗ

В сотрудничестве с другими заинтересованными сторонами ВОЗ решительно отстаивает важную роль безопасности пищевых продуктов как одной из ключевых составляющих обеспечения доступа к безопасной и питательной диете. ВОЗ разрабатывает меры политики и рекомендации, охватывающие всю пищевую цепь от производства до потребления, опираясь при этом на разные виды экспертных знаний и опыта в самых разных областях.

ВОЗ работает над укреплением систем обеспечения безопасности пищевых продуктов во все более глобализованном мире. Установление международных стандартов безопасности пищевых продуктов, повышение качества эпидназдора за болезнями, просвещение потребителей и подготовка лиц, занимающихся обработкой и приготовлением пищевых продуктов, в области безопасного обращения с пищевыми продуктами входят в число важнейших способов предотвращения болезней пищевого происхождения.

ВОЗ укрепляет потенциал национальных и региональных лабораторий в области эпиднадзора за патогенами пищевого происхождения, такими как Campylobacter и Salmonella.

Кроме того, ВОЗ способствует комплексному эпиднадзору за устойчивостью патогенов, присутствующих в пищевой цепи, к противомикробным препаратам, собирая образцы у людей, животных и образцы пищевых продуктов и анализируя данные, полученные в разных секторах.

ВОЗ совместно с ФАО оказывает помощь государствам-членам, координируя международные усилия по раннему выявлению вспышек болезней пищевого происхождения и соответствующим ответным мерам через сеть национальных органов в государствах-членах.

Кроме того, ВОЗ осуществляет научную оценку, которая используется в качестве основы для разрабатываемых Комиссией ФАО/ВОЗ по Кодекс алиментариус международных стандартов, принципов и рекомендаций в отношении пищевых продуктов для профилактики болезней пищевого происхождения.

Более 30 калининградцев отравились салатами, приобретенными в супермаркете, 27 пострадавших госпитализированы, сообщает в четверг региональный Роспотребнадзор.

Сальмонеллез (salmonellosis) ‑ острая инфекционная болезнь, вызываемая бактериями рода Salmonella (кроме брюшного тифа и паратифов), попадающими в организм человека с пищевыми продуктами животного происхождения. Название бактерии происходит от имени американского микробиолога Даниеля Сальмона, открывшего ее в 1885 году.

Сальмонеллы ‑ мелкие подвижные бактерии, которые могут длительно сохранять жизнеспособность во внешней среде. Так, в воде открытых водоемов они могут жить до 5 месяцев, в почве - до 18 месяцев, в мясе и колбасных изделиях ‑ от 2 до 4 месяцев, в замороженном мясе - около 6 месяцев (в тушках птиц - более года), в молоке - до 20 дней, кефире - до 2 месяцев, в сливочном масле - до 4 месяцев, в сырах - до 1 года, в пиве - до 2 месяцев. При комнатной температуре бактерии активно размножаются в пищевых продуктах, особенно мясных и молочных, при этом внешний вид и вкус пищи не меняется. Сальмонеллы не погибают и при консервации, если концентрация поваренной соли составляет от 2‑18%. Губительной для сальмонелл является только высокая температура ‑ кипячение их убивает мгновенно. А обычные дезинфицирующие средства, содержащие хлор, не всегда эффективны.

Пути заражения сальмонеллезом многообразны: наиболее частый ‑ пищевой, чаще всего при употреблении мяса животных и птиц, а также яиц. Микробы попадают в продукты при недостаточной кулинарной обработке (полусырые бифштексы, яйца сырые и всмятку, яичница‑глазунья), неправильном хранении и нарушении элементарных правил личной гигиены. Источником заражения могут быть также и животные, чаще всего домашние (крупный рогатый скот, свиньи, кошки, собаки), птицы, люди, больные сальмонеллезом или здоровые носители инфекции (когда человек является источником заражения для окружающих, но сам не болеет). Заразиться сальмонеллезом можно и через загрязненную воду ‑ при ее питье или купании.

Попадая в организм, сальмонеллы поселяются в тонком кишечнике и выделяют токсин, способствующий потере воды через кишечник, нарушению тонуса сосудов и повреждению нервной системы. Болезнь развивается через 6‑72 часа после попадания сальмонелл в организм. Различают несколько клинических форм сальмонеллеза:

Желудочно‑кишечная форма, при которой заболевание обычно начинается остро, обильной рвотой и поносом. Наблюдаются боли, урчание и вздутие живота, слабость, головная боль, головокружение, озноб, повышение температуры до 38-40°С, боли в мышцах и суставах, судороги мышц конечностей. Длительность заболевания обычно 3-7 суток.

Тифоподобная форма, для которой характерны лихорадка в течение 10-14 суток, увеличение печени и селезенки, более выраженные симптомы общей интоксикации (головная боль, вялость), иногда появляется сыпь.

Септическая форма, при которой после короткого начального периода развивается картина сепсиса.

Симптомы заболевания могут быть выражены ярко, а могут и не проявляться. Однако в большинстве случаев отмечаются следующие симптомы: повышение температуры, общая слабость, головная боль, тошнота, рвота, боли в животе, многократный жидкий водянистый стул.

При тяжелом течении болезни наблюдаются обезвоживание, увеличение печени и селезенки. Возможно развитие почечной недостаточности. Если иммунитет больного не ослаблен, то сальмонеллез проходит на десятый день.

Чаще болезнь протекает в форме острого гастрита, гастроэнтерита или гастроэнтероколита, реже в форме септикопиемии; возможно длительное носительство.

Лечение. При сальмонеллезе госпитализация показана только детям, старикам, работникам пищевой и медицинской отраслей.

В лечении сальмонеллеза выделяют несколько ведущих направлений: промывание желудка и кишечника, обильное горячее сладкое питье; при более тяжелом течении болезни - введение солевых растворов (борьба с обезвоживанием); спазмолитические средства; антибиотики. Важное значение имеет диета: механически и химически щадящая пища (молоко исключается) - в первые дни болезни; исключение вредных для деятельности желудочно‑кишечного тракта факторов (переедание, употребление алкоголя и продуктов, богатых грубой клетчаткой, консервов и копченостей, острых, пряных и жирных блюд) в течение всего периода заболевания и не менее 1 месяца после выздоровления.

При грамотном лечении от сальмонеллеза можно полностью избавиться.

Профилактика сальмонеллеза осуществляется как на государственном уровне (санитарно‑эпидемиологической и ветеринарной службами), так и на индивидуальном.

Основные способы профилактики ‑ ветеринарно‑санитарный надзор за убоем скота и обработкой туш; выполнение санитарных правил приготовления, хранения и реализации пищевых продуктов; обследование поступающих на работу на предприятия общественного питания и торговли, детские учреждения.

Необходимо также избегать употребления в пищу парного молока, сырых яиц, правильно обрабатывать игрушки и предметы ухода за детьми, особенно соски. И, конечно, не надо забывать, что мытье рук ‑ наиболее простой и самый действенный способ профилактики сальмонеллеза.

Материал подготовлен на основе информации открытых источников

Универсальные среды с 1905 года широко применяют в лабораторной практике для выделения энтеробактерий: Мак-Конки агар, эозин-метиленовый синий агар (Левина). Они обеспечивают также рост многих видов грамотрицательных бактерий других семейств и некоторых грамположительных бактерий (энтерококков).

Для выделения патогенных энтеробактерий (сальмонелл, шигелл, иерсиний, энтеропатогенных эшерихий) используется большой арсенал селективно-дифференциальных сред: сальмонелла-шигелла агар, гектоен-энтерик агар, дезоксихолат-цитратный агар, дезоксихолат-цитрат-лактоза-сульфит агар, ксилоза-лизин-дезоксихолат агар, бактоагар Плоскирева, висмут-сульфит агар, ЦИН-агар и др. Указанные среды не обеспечивают прямой идентификации бактерий, в связи с чем необходимо выделение их в чистой культуре и последующая идентификация широким набором тестов, что длительно и трудоемко.

Хромогенные среды

В целях ускорения исследования, значительного сокращения объема работы и материальных средств в последние годы разработана группа хромогенных питательных сред для одноэтапного выделения и прямой идентификации значимых в медицине ("проблемных") энтеробактерий. К проблемным энтеробактериям относятся сальмонеллы и другие возбудители острых диарейных инфекций, возбудители раневых и госпитальных инфекций (Esherihia coli, Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae, Proteus mirabilis). Эти же энтеробактерии важны для санитарной микробиологии.

Хромогенные среды основаны на выявлении специфических или уникальных ферментов микроорганизмов. Для обнаружения специфического фермента в состав среды включают хромогенные субстраты вещества, при расщеплении которых образуются окрашенные или флюоресцирующие продукты (светятся в УФ свете). В результате хромогенная среда контрастно изменяет свой цвет или флюоресцирует при обнаружении искомого микроорганизма. Большинство хромогенных сред содержат также селективные добавки, подавляющие рост нежелательных бактерий. При использовании хромогенных сред искомые бактерии ускоренно (в течение суток), одноэтапно выделяются и одновременно идентифицируются без проведения дальнейших, дополнительных тестов (или при помощи 1 - 2 тестов, выполняемых в течение нескольких часов в пределах первых суток).

По таксономическому уровню различают хромогенные среды групповой, родовой, видовой и внутривидовой идентификации. По завершенности исследования среды одноэтапной прямой идентификации подразделяют на среды первичной и окончательной идентификации.

Для прямой групповой идентификации колиформных бактерий и видовой идентификации E.coli в клиническом материале, воде, пищевых продуктах производятся среды Chromacult Coliform Agar (фирмы Mercк KGaA, Германия). Комбинацией двух хромогенных субстратов одновременно определяются колиформные бактерии и E.coli. Фермент β-галактозидаза, характерный для колиформных бактерий, расщепляет хромогенный субстрат SalmonGal, что приводит к окрашиванию колоний колиформных бактерий в розовый (красный) цвет. Фермент β-глюкуронидаза, характерный для E.coli, расщепляет хромогенный субстрат Х-глюкуронид. E.coli имеет оба фермента, поэтому их колонии окрашиваются в темно-синий (фиолетовый) цвет и четко отличаются от колоний колиформных бактерий. Рост грамположительных бактерий подавляется тергитолом-7. Для подтверждения E.coli необходима постановка теста на индол на чашке или микрообъемным методом. Однако среда не обладает полной специфичностью (около 5 % E.coli, в том числе E.coli 0157:Н7, не обладают β-галактозидазой, а некоторые штаммы шигелл, сальмонелл, иерсиний ее имеют).

Для прямой идентификации колиформных бактерий и E.coli в жидкой среде предназначена среда Fluorocult LMX (фирмы Mercк KGaA, Германия). Колиформные бактерии выявляются по расщеплению хромогенного субстрата X-Gal специфическим ферментом β-галактозидазой, в результате чего исходный цвет среды в пробирке меняется от светло-желтого до сине-зеленого. E.coli выявляются по расщеплению флюорогеннго субстрата MUG ферментом β-глюкуронидазой, в результате чего образуется флюоресцирующий в УФ-свете (366 нм) продукт реакции. Постановка теста на индол реактивом Ковача в той же пробирке надежно выявляет E.coli. Все исследование завершается в течение 18 - 20 ч после посева материала.

К хромогенным средам внутривидовой идентификации относятся питательные среды для выделения и идентификации энтерогеморрагической E.coli 0157:H7 Fluorocult HC Agar acc. tо SZABO и CT-Sorbitol MacConkey Agar (CT-SMAK Agar), производимые фирмой Merck (Германия). Среды предназначены для выделения этих бактерий из пищевых продуктов и клинического материала. В состав среды Fluorocult HC Agar acc. to SZABO входит сорбит с индикатором бромкрезоловый пурпурный и хромогенный субстрат 4-метилумбеллиферил-β-глюкуронид, который расщепляется β-глюкуронидазой с образованием флюоресцирующего 4-метилумбеллиферона. Грамположительная микрофлора подавляется солями желчных кислот. В отличие от остальных кишечных палочек E.coli 0157:H7 не ферментирует сорбит и не имеет β-глюкуронидазы. После инкубации посевов в течение 16 - 24 ч при температуре 41 °С учет проводят двухэтапно: вначале отмечают сорбит-отрицательные колонии (неокрашенные), затем облучают колонии ультрафиолетовым светом и отмечают нефлюоресцирующие колонии. Отобранные колонии (неокрашенные, нефлюоресцирующие) дополнительно тестируют агглютинирующими сыворотками к E.coli 0157:H7 или экспрессным иммунохроматографическим тестом Singlepath E.coli 0157 (Merck, Германия) в течение 20 минут. Питательная среда CT-SMAC Agar состоит из среды Мак-Конки, в которую добавляют сорбит и суплемент СТ (цефиксим и теллурит калия). После инкубации посевов в течение 16 - 24 ч при температуре 35 - 37 °С отмечают неокрашенные (сорбит-негативные) колонии и дополнительно тестируют их сыворотками к E.coli 0157:H7 или используют экспрессный иммунохроматографиченский тест Singlepath E.coli 0157 (Merck, Германия).

Для выделения и прямой родовой идентификации сальмонелл производится хромогенная среда Rambach Agar (Merck KGaA, Германия). В состав среды входит специфический для сальмонелл субстрат пропиленгликоль. Он ферментируется сальмонеллами до кислоты, действие которой на смесь рН-индикаторов окрашивает колонии сальмонелл в красный цвет. Колиформные бактерии образуют сине-зеленые колонии, шигеллы и протеи бесцветные, слегка желтоватые колонии. Дезоксихолат натрия ингибирует "роение" протея и грамположительную микрофлору. Исследуемый материал предварительно проходит этап подращивания на селективной среде обогащения для сальмонелл, затем высевается на ¼ чашки с Rambach-агаром. Учет результатов проводят через 24 ч инкубации при температуре 37 °С. Среда окончательно идентифицирует сальмонеллы с 99 % специфичности и 97 - 99 % чувствительности. Для ускоренного селективного выделения и обогащения сальмонелл из пищевых продуктов и объектов окружающей среды фирма Merck производит среды: DIASALM agar Salmonella, MSRV Agar Salmonella, Salmosyst Salmonella. После подращивания на этих средах идентификация сальмонелл проводится на среде RambachAgar.

Для выделения и прямой идентификации бактерий рода Salmonella в клиническом материале и пищевых продуктах фирма BioMerieux (Франция) производит хромогенную среду "SM-ID". Среда основана на комбинированном действии двух хромогенных субстратов (на β-глюкуронидазу и β-галактозидазу) в сочетании с индикатором нейтральным красным. Селективные факторы соли желчных кислот и бриллиантовый зеленый. Через 16 - 24 ч инкубации посевов колонии сальмонелл идентифицируются по розовой окраске (колонии прочих бактерий бесцветные, голубые или пурпуные). Идентификация недостаточно специфична: не определяются сальмонеллы подвида arizonae, сероваров gallinarum и pullorum; ложноположительными могут быть колонии некоторых штаммов эшерихий, шигелл, морганелл, иерсиний.

Для выделения и прямой идентификации сальмонелл в клиническом материале и пищевых продуктах фирма Merck (Германия) производит среду XLT4 Agar (ксилоза-лизин-тергитол-4 агар). Среда разработана Miller R.G., Tate C.R. в 1990 г. Селективным фактором среды является тергитол-4 (тетрадецилсульфат натрия), который добавляется на 1 л среды в количестве 4,6 мл 26 - 28 % раствора. В состав среды входят лизин, ксилоза, лактоза, сахароза, феноловый красный и другие компоненты. Индикация сальмонелл проводится по черной окраске колоний, обусловленной продукцией сероводорода, который образуется только в благоприятных щелочных условиях при ферментации лизина и отсутствии или малой интенсивности ферментации ксилозы, лактозы, сахарозы. Через 24 - 48 ч инкубации посевов при температуре 35 - 37 °С колонии микроорганизмов имеют следующий вид: сальмонелл - черные или красно-фиолетовые с черным центром; Citrobaсter freundii - желтые; протея - желтые, рост его угнетен; кишечной палочки - желтые; шигелл - бесцветные на красном фоне среды. Важно, что черную окраску колоний могут иметь бактерии Edwardsiella tarda, но они встречаются редко и легко отличимы дополнительным микрообъемным тестом на продукцию индола (3 ч).

К средам групповой идентификации относится питательная среда для выделения бактерий родов протеус, провиденция, морганелла, которая производится НПО "Питательные среды" (г. Махачкала). Среда разработана А.Ф.Мороз, Л.Д.Газимуратовой, Г.Е.Афиногеновым в 1978 г. Принцип ее действия состоит в использовании узкоселективного действия поверхностноактивного вещества амфотерного класса "амфолана" (хлоргидрат алкилэтилглицина) в концентрации 0,125 %, допускающего рост только бактерий групп: протеус, провиденция, морганелла. С использованием среды выделяются указанные бактерии одноэтапно через 24 ч. По нашей информации среда обладает неполной специфичностью (допускается рост отдельных штаммов клебсиелл и серраций) и угнетает рост 10 - 15 % штаммов Proteus mirabilis и Providencia. Поэтому необходимо дополнительное изучение колоний микрообъемным тестом на триптофандезаминазу в течение 3 ч.

Читайте также: