На чем основана диагностика трихинеллеза

Трихинеллез: особенности клиники и диагностики

Трихинеллез — зоонозный биогельминтоз, вызываемый личинками Trichinella spiralis и характеризующийся острым течением, лихорадкой, выраженными аллергическими проявлениями и поражением поперечно-полосатой мускулатуры. При тяжелом течении болезнь осложняется миокардитом, очаговым или диффузным поражением легких, центральной нервной системы, системными сосудистыми поражениями.

Первые сведения о трихинеллезе человека в Беларуси относятся к 1888–1892 гг. (144 больных). В 20–30-х годах XX века зарегистрированы тяжелые вспышки с летальными исходами. За 1888–1996 гг. трихинеллезом переболели (при частичном учете военных лет) 14 283 человека, из них 800 — до 1941 г., 6310 — за 1948–1958 гг. и 7214 — за 1958–1996 гг. В 2006 г. в Республике Беларусь зарегистрировано 37 пациентов с трихинеллезом, в 2007 г. — 36.

Этиология

Возбудитель трихинеллеза — круглый червь Trichinella spiralis (реже заболевание вызывают Trichinella nativa, Trichinella pseudospiralis). Половозрелые трихинеллы (самки длиной до 2–4 мм, самцы — 1–2 мм) располагаются в слизистой оболочке тонкой кишки, частично свободно свисая в ее просвет. После оплодотворения самок самцы погибают. Самки живородящие, находятся в тонкой кишке в течение 3–4 недель, при массивных инвазиях — до 5–6 недель. За это время одна самка отрождает от 200 до 2000 личинок размером около 0,1 мм. Миграция личинок начинается на шестой день после заражения. Личинки через лимфо- и кровоток разносятся по всему организму и оседают в поперечно-полосатых мышцах. Там они увеличиваются в размерах до 0,8–1 мм, начинают свертываться в спираль. К 3–4 неделям вокруг личинок формируется фиброзная капсула, которая постепенно импрегнируется солями кальция. Однако и в кальцинированных капсулах личинки могут оставаться жизнеспособными в течение многих лет. Если мясо с инвазионными личинками будет съедено одним из многочисленных хозяев трихинелл (человек, свинья, крыса и др.), личинки трихинелл освобождаются от капсулы и затем проникают в наружный слой слизистой оболочки тонкой кишки. В течение двух суток происходит их созревание и оплодотворение.

Таким образом, один и тот же организм теплокровного животного служит для трихинелл сначала окончательным (дефинитивным), а затем промежуточным хозяином.

Эпидемиология

Трихинеллез — природно-очаговое заболевание. Различают природные, синантропные и смешанные очаги трихинеллеза. В природных очагах отмечается поражение диких животных: крыс, мышей и других мелких грызунов, ежей, барсуков, енотовидных собак, лисиц, волков, медведей (бурых, белых), кабанов. В синантропных очагах в окружении человека циркуляция возбудителя происходит в основном между свиньями и крысами. Смешанные очаги возникают в окружении человека, куда возбудитель разными путями (например, при безнадзорном содержании свиней) заносится из природных очагов.

Патогенез

Интенсивность заражения, как правило, связана со степенью инвазированности животного, послужившего источником инвазии, реже — с количеством съеденного мяса. В зависимости от интенсивности инвазии процесс отрождения, миграции и инкапсуляции личинок продолжается до 3–6 недель. После образования фиброзной капсулы поступление метаболитов (антигенов) личинок в организм и проявления общей аллергической реакции прекращаются.

Трихинеллы чаще всего поражают наиболее активно работающие мышцы, обильно снабжаемые кровью, насыщенной кислородом: ножки диафрагмы; межреберные, жевательные, глазодвигательные, шейные мышцы; мышцы гортани и языка. При интенсивной инвазии в 1 г этих мышц может находиться от 50 до 100 и более личинок трихинелл. Вследствие продуктивного воспалительного процесса вокруг личинки образуется интенсивная клеточная инфильтрация, а затем формируется капсула, состоящая из сарколеммы мышечного волокна, соединительнотканного и гиалинового слоев.

При умеренно интенсивном заражении отрождение, миграция и расселение личинок в мышцах происходит во время инкубационного периода. Клинические проявления возникают только при развитии общей аллергической реакции. Вследствие тяжелых нарушений микроциркуляции быстро развиваются общие отеки, сопровождающиеся выраженной гипопротеинемией. Очаговые инфильтраты вокруг личинок трихинелл в мозге, миокарде, легких наряду с общими сосудистыми расстройствами способствуют нарушению метаболизма в паренхиме этих органов. При интенсивной инвазии развиваются диффузно-очаговый миокардит, менингоэнцефалит, очаговая пневмония.

Патологическая анатомия

Патоморфологически трихинеллез характеризуется катаральным воспалением и отеком слизистой оболочки тонкого кишечника. Иногда здесь можно обнаружить поверхностные некрозы, мелкоточечные кровоизлияния. В печени часто можно найти жировую инфильтрацию, в селезенке — гиперемию, гиперплазию красной пульпы, инфаркты. В скелетной мышечной ткани наблюдают восковидную жировую дистрофию, простую атрофию мышечных волокон и другие признаки воспалительной реакции; в миокарде — потерю поперечной полосатости, мутное набухание, фрагментацию волокон, воспалительные инфильтраты; в легких — геморрагии и иногда признаки пневмонии.

В центральной нервной системе могут наблюдаться проявления менингоэнцефалита и тромбозы мозговых сосудов.

Клиническая картина

Инкубационный период при трихинеллезе колеблется от 5 до 30 дней, составляя обычно 10–25 дней. При тяжелом течении заболевания он может укорачиваться, а при легком — удлиняться.

Опорными диагностическими критериями трихинеллеза являются лихорадка, отеки, мышечные боли и эозинофилия.

Иногда заболевание может начинаться с предвестников, когда в течение 2–3, а иногда и 15–20 дней пациенты жалуются на слабость, чувство разбитости, головную боль, желудочно-кишечные расстройства.

Чаще же заболевание начинается остро с подъема температуры тела до 38–39 °С. Следует отметить, что температура тела может достигнуть высоких цифр как внезапно, так и после нескольких дней субфебрильной. Лихорадка носит постоянный или послабляющий характер.

Хотя в литературе и описаны случаи трихинеллеза без болей в мышцах, этот признак является одним из характерных для заболевания. Боли в мышцах, сопровождающиеся мышечной слабостью, возникают через 1–3 дня после появления отеков, как правило, вместе с лихорадкой. Пациенты жалуются на боль в мышцах голеней, бедер, языка, глазных яблок; в жевательных, икроножных, межреберных и шейных мышцах. Боль усиливается при движении. При осмотре и пальпации мышц обнаруживают их припухлость и уплотнение. Часты контрактуры коленных и локтевых суставов, тризм жевательной мускулатуры. Боль в мышцах, как правило, исчезает за 1–2 дня до падения температуры тела.

Эозинофилия — один из важнейших признаков трихинеллеза, появляющийся с первых дней болезни. Сочетаясь с умеренным лейкоцитозом, максимального значения (20–45 %) она достигает на 3–4-й неделе. Уменьшаться эозинофилия начинает через 2–3 месяца и полностью исчезает только через 6 месяцев. Необходимо подчеркнуть, что при тяжелом течении заболевания эозинофилия иногда может отсутствовать и появляется только в период выздоровления.

Около 20 % больных имеют экзантему. Высыпания на коже могут быть весьма разнообразными: розеолезными, петехиальными, эритематозными, коре- и скарлатиноподобными. Сыпь держится от нескольких часов до нескольких суток. Нередко наблюдаются кровоизлияния под ногтями.

У половины больных наблюдаются желудочно-кишечные расстройства. Обычно это тошнота, рвота, диарея. Могут быть приступы резких болей в животе. При пальпации живот несколько напряжен и болезненный. Язык, как правило, отечный и покрыт белым налетом. Гепатоспленомегалию отмечают редко.

Со стороны сердечно-сосудистой системы отмечают боль в области сердца, тахикардию. Тоны сердца часто приглушены. Артериальное давление имеет тенденцию к снижению. На электрокардиограмме (ЭКГ) фиксируют снижение вольтажа комплекса QRS, уплощенный или отрицательный зубец Т. При тяжелом течении заболевания развивается прогрессирующая сердечно-сосудистая недостаточность.

У пациентов рано появляется и долго сохраняется головная боль. Часто наблюдается бессонница, а у отдельных больных, наоборот, сонливость. Нарушение сознания встречается редко. Могут быть парестезии кожи, ослабление или вообще исчезновение сухожильных и брюшных рефлексов.

Со стороны органа зрения кроме описанного ранее конъюнктивита могут быть парезы и параличи наружных мышц глаза, кровоизлияния в конъюнктиву, экзофтальм, возникающий вследствие отека клетчатки орбиты.

Следует подчеркнуть, что кроме типичных случаев трихинеллеза, протекающих при наличии четырех основных симптомов (отек лица, лихорадка, боль в мышцах, эозинофилия в крови), в литературе описано атипичное течение заболевания, при котором отдельные из этих проявлений отсутствуют или выражены слабо. Описано начало заболевания с менингита, энцефалита, гемиплегии. Часто встречаются субклинические и стертые формы. Общая продолжительность болезни варьирует от одной до 5–8 недель и более.

Выделяют стертое, легкое, среднетяжелое и тяжелое течение трихинеллеза. При стертом течении заболевания инкубационный период трудноопределим. В целом заболевание длится не более недели и сопровождается субфебрильной температурой тела, легкой миалгией, пастозностью лица, умеренной эозинофилией (7–10 %) при нормальном количестве лейкоцитов.

При легкой форме трихинеллеза инкубационный период составляет 25–35 дней. Для этой формы характерна высокая лихорадка, которая сохраняется в течение недели. Достаточно выражены отеки, миалгии. Эозинофилия достигает 10–20 %.

При среднетяжелом течении инкубационный период укорачивается до 15–20 суток. Заболевание начинается с перемежающейся лихорадки. Температура тела быстро достигает 38–40 °С с последующим постепенным снижением в течение 2 недель до субфебрильных значений. В этот период максимально выражены мышечный и отечный синдромы. Может развиваться конъюнктивит. Во время лихорадки могут быть боли в животе, учащение стула до 2–3 раз в сутки, тошнота, рвота. На коже можно наблюдать высыпания по типу крапивницы. Развивается легочной синдром по типу катара верхних дыхательных путей, иногда с летучими эозинофильными инфильтратами в легких с вовлечением плевры. Со стороны сердечно-сосудистой системы наблюдается снижение артериального давления, тоны сердца приглушены. На ЭКГ фиксируются умеренные дистрофические изменения. У детей часто возникают боли при глотании, увеличиваются миндалины, чаще шейные, но могут вовлекаться и другие группы лимфатических узлов. Возможна спленомегалия. Может развиться эозинофильно-лейкемоидная реакция.

Тяжелое течение заболевания отличается нетипичностью клиники и наличием органных поражений. Инкубационный период значительно укорочен и, как правило, не превышает 1 недели. Температура тела повышается постепенно в течение 2–4 недель, достигая 39–40 °С. На этом фоне нарастают боли и мышечные отеки. Отек рыхлой соединительной ткани приводит к хелиозу, диплопии, экзофтальму; нарастающий отек оболочек и паренхимы головного мозга — к возбуждению, бессоннице, галлюцинациям. Характерным является наличие эритематозно-папулезной, геморрагической сыпи на туловище, внутренней поверхности конечностей. С первых дней заболевания развивается абдоминальный синдром с разлитыми болями в животе. Наблюдаются тошнота, рвота, диарея (стул со слизью, кровью). Может развиться доброкачественный аллергический гепатит. Тяжелое течение трихинеллеза может осложниться язвенно-некротическим поражением желудка и тонкой кишки, миокардитом, пневмонией, легочно-сердечной недостаточностью, которые могут быть причиной смерти.

Иммунитет

После перенесенной инфекции остается приобретенный пожизненный нестерильный иммунитет, который обеспечивается находящимися в организме человека личинками паразита. Напряженность иммунитета индивидуальна. Она зависит от кратности заражения, интенсивности инвазии, конституциональных особенностей организма.

Диагностика

Диагностика трихинеллеза основана на клинической картине (острое начало заболевания с внезапного подъема температуры, отек лица, миалгии, лейкоцитоз, эозинофилия, а при тяжелых формах — поражение сердца, легких, центральной нервной системы), данных эпидемиологического анамнеза (употребление в пищу свинины, мяса диких животных, и прежде всего кабана). Важным косвенным подтверждением диагноза является обнаружение личинок трихинелл в сохранившемся мясе методами компрессорной трихинеллоскопии или искусственного переваривания.

Широко используется в лабораторной практике метод иммуноферментного анализа с трихинеллезным антигеном. Исследуют парные сыворотки, взятые с интервалом в 2–3 недели. Специфические антитела появляются через 14–15 дней после заражения. Максимального значения их уровень достигает на 4–12-й неделе. У переболевших трихинеллезом антитела сохраняются иногда до 2 лет.

В исключительных случаях для подтверждения диагноза не ранее 9–10-го дня болезни проводится биопсия мышечной ткани (дельтовидная, икроножная мышцы) для обнаружения личинок трихинелл.

Для ретроспективной диагностики трихинеллеза (с третьего года после начала заболевания) применяется рентгенографический метод. На рентгенограммах обызвествленные инкапсулированные личинки трихинелл выявляются в виде мелких светлых образований.

Лечение

Лечение больных трихинеллезом проводят в стационаре. В остром периоде заболевания необходим постельный режим. Этиотропная терапия показана всем больным трихинеллезом, она имеет наибольшую эффективность в первые две недели после заражения, пока самки гельминтов не начали отрождать личинки, и после инкапсуляции трихинелл значительно снижается. Препаратом выбора является альбендазол. Можно использовать мебендазол.

Симптоматическая терапия включает назначение антигистаминных препаратов, нестероидных противовоспалительных средств и др. При тяжелой инвазии с неврологическими расстройствами, миокардитом, легочной недостаточностью применяют глюкокортикостероиды: преднизолон внутрь в суточной дозе 20–80 мг в течение 5–7 дней с последующим уменьшением дозы и отменой препарата через 1–1,5 недели. В связи с тем, что глюкокортикостероиды могут удлинять как период продукции, так и количество личинок в кишечнике, рекомендуется применять антигельминтные препараты в течение всего периода применения глюкокортикостероидов и нескольких дней после их отмены.

Диспансерное наблюдение

Наблюдение за переболевшими трихинеллезом осуществляет врач-инфекционист в течение 6 месяцев. Реконвалесцентов рекомендуется осмотреть через 2 недели, 1–2 и 5–6 месяцев после выписки из стационара с обязательным исследованием общего анализа крови и ЭКГ.

Современные аспекты трихинеллеза

У всех пациентов диагноз был подтвержден эпидемиологически, клинически и серологически (методом иммуноферментного анализа).

В стационар больные поступали в разные сроки от начала заболевания. На вторые сутки поступили 2 человека, на третьи — 2, на четвертые — 4, на пятые — 4, на шестые — 3, на седьмые — 1, на восьмые — 1, на девятые — 2, на четырнадцатые — 1.

У одного пациента в анамнезе употребление в пищу шашлыков из свинины, остальные же четко указывали на факт употребления мяса дикого кабана.

Заболевание имело легкое (15 человек) или среднетяжелое (3 человека) течение. Тяжелых случаев заболевания и осложнений не наблюдали.

При легком течении заболевания инкубационный период составил от 17 до 35 суток, при среднетяжелом — 17–18.

При поступлении у всех пациентов имела место лихорадка. На мышечные боли жаловались 14 (78 %) человек, на отеки — 12 (67 %), на слабость — 9 (50 %), на головную боль — 5 (28 %), боль в области сердца — 2 (11 %), конъюнктивит — 1 (6 %). Сыпь имела место у 7 (39 %) человек, желудочно-кишечные расстройства — у 2 (11 %).

Лихорадка у 12 пациентов достигала фебрильных цифр, у 6 — субфебрильных. При легком течении инфекции температура тела сохранялась в течение 2–6 суток, при среднетяжелом — до 7–9.

Мышечные боли отмечались в типичных местах: в икроножных, бедренных, височных, затылочных мышцах, при глотании, в мышцах глазного яблока. У всех пациентов имел место отек век и лица.

Пятнисто-папулезную сыпь наблюдали у 7 человек (6 — легкое течение заболевания, 1 — среднетяжелое). Высыпания локализовались на груди, конечностях, коже живота.

Желудочно-кишечные расстройства проявлялись тошнотой, частым жидким стулом, болевым синдромом (режущие боли перед дефекацией).

При поступлении в стационар у 17 (95 %) из 18 пациентов наблюдали эозинофилию от 8 до 36 %, лейкоцитоз от 10 х 10 9 /л до 15,7 х 10 9 /л — у 16 человек (89 %). В биохимическом анализе крови у 4 (22 %) пациентов отмечали повышение уровня билирубина до 37,5 мкмоль/л.

Изменения лабораторных показателей в зависимости от тяжести течения заболевания представлены в табл. 1.

На ЭКГ у 8 пациентов в ходе заболевания регистрировали синусовую тахикардию, у 3 человек — дистрофические изменения, у 1 — нарушение проводимости.

Средняя продолжительность пребывания пациентов в стационаре составила 15 суток.

В качестве этиотропного препарата больные получали мебендазол. На фоне лечения мебендазолом у всех больных в первые два дня приема отмечалось повышение температуры тела.

Осложнений в ходе заболевания не наблюдали. Все пациенты выписаны домой с нормализацией клинико-лабораторных показателей.

Таким образом, в настоящее время трихинеллез чаще протекает в легкой форме и имеет типичную клинико-лабораторную картину. Основным источником инфицирования являются дикие животные, и прежде всего кабаны. Однако, несмотря на типичную клиническую картину, заболевание не всегда диагностируется в раннем периоде.

1. Бойко Ю.Г., Прокопчик Н.К., Копач Е.И. Поздно диагностированный трихинеллез с летальный исходом // Здравоохранение. — 2000. — № 3.

2. Клейн Ю.С. Трихинеллез человека // Медицинские знания. — 2003. — № 5.

3. Паразитарные болезни человека: Учебное пособие / Жаворонок С.В., Мицура В.М., Козлов С.С.

4. Поляков В.Е., Лысенко А.Я., Константинова Т.Н., Авдюхина Т.И. Трихинеллез у детей и подростков // Медицинская помощь. — 2005. — № 2.

5. Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии / Под ред. Л.С. Страчунского, Ю.Б. Белоусова, С.Н. Козлова. — Смоленск: МАКМАХ, 2007. — 464 с.

6. Цинзерлинг А.В. Современные инфекции. Патологическая анатомия и вопросы патогенеза. — СПб.: Сотис, 1993. — 365 с.

Трихинеллез

– антропозоонозная остро и хронически протекающая болезнь многих видов млекопитающих ярко выраженного аллергического характера, вызываемая личинками и половозрелыми нематодами рода Trichinella.

К настоящему времени описано четыре вида возбудителя: Tr. spiralis, Tr. native, Tr. nelsoni, Tr. pseudospiralis. Все перечисленные виды паразитируют у человека. Это очень мелкие нематоды волосовидной формы. Самки живородящие. Они проникают в кишечные ворсинки хозяина и рождают живых личинок, которые лимфогенным током разносятся в мышцы. Излюбленные места паразитирования личинок – мышцы ножек диафрагмы, языка, пищевода, межреберные, жевательные и др. Спустя некоторое время личинки достигают инвазионной стадии, приобретают спиралевидную форму. Вокруг личинки через 3-4 недели формируется капсула, которая затем обызвествляется. Жизнеспособность мышечных трихинелл сохраняется у животных многие годы, а у человека – до 25 лет.

Устойчивость мышечных трихинелл к различным внешним воздействиям довольно высокая. Для разрушения трихинелл в мясе, особенно в толстых кусках, необходима длительная тепловая обработка: температура в толще кусков должна быть не ниже 80 °С. В мясе, хранящемся при температуре -17…-27 °С, трихинеллы остаются жизнеспособными в течение 6 недель. Посол и копчение мясопродуктов не обезвреживают трихинелл. Мышечные трихинеллы способны выделять токсические вещества, обладающие высокой устойчивостью.

Трихинеллезом болеют свиньи, дикие кабаны, медведи, барсуки, собаки, кошки, волки, лисы, грызуны, нутрии, морские млекопитающие крайнего севера, а также человек.

Заражение животных и человека трихинеллезом происходит через мясо, содержащее инвазионные личинки трихинелл. Мясо переваривается, а освободившиеся мышечные трихинеллы превращаются в кишечные.

Характерных клинических признаков при трихинеллезе не наблюдают. Прижизненная диагностика трихинеллеза животных на свиноводческих фермах заключается в проведении иммуноферментного анализа (ИФА).

Надежный метод выявления трихинеллеза – трихинеллоскопия мяса свиней, диких кабанов, медведей и других животных. Из проб мяса изогнутыми ножницами вдоль мышечных волокон нарезают по 12 кусочков величиной с овсяное зерно. Срезы помещают на компрессорий и раздавливают до такой степени, чтобы сквозь них можно было читать газетный шрифт. Приготовленные срезы тщательно исследуют под трихинеллоскопом, с малым увеличением микроскопа (в 40-100 раз) и проекционной камерой или экранным трихинелоскопом.

При выполнении дифференциальной диагностики более точен метод переваривания мясного фарша в искусственном желудочном соке с последующей микроскопией осадка.

На мясокомбинатах применяется метод группового исследования свинины на трихинеллез. Он основан на переваривании в специальной жидкости образцов мышечной ткани, взятых из ножек диафрагмы нескольких свиных туш, и обнаружении в осадке (переваренной массе) личинок трихинелл. Исследование выполняется с помощью аппарата для выделения личинок трихинелл (АВТ).

Трихинелл дифференцируют от пузырьков воздуха, цистицерков, саркоцист и конкрементов.

Исследованию на трихинеллез подлежат: туши, полутуши, четвертины и куски туш свиней (кроме поросят до 3-недельного возраста), кабанов, барсуков, медведей, других всеядных и плотоядных, а также нутрий.

При обнаружении хотя бы одной личинки трихинелл (независимо от ее жизнеспособности), тушу и субпродукты, имеющие мышечную ткань, пищевод, прямую кишку, а также обезличенные мясные продукты направляют на утилизацию.

Наружный жир (шпик) снимают и перетапливают. Внутренний жир выпускают без ограничения.

Кишки (кроме прямой) после обычной обработки выпускают без ограничения.

Шкуры выпускают после удаления с них мышечной ткани. Последнюю направляют на утилизацию.

В целях профилактики заболевания животных трихинеллезом в свиноводческих хозяйствах необходимо своевременно проводить дератизацию и дезинфекцию, уничтожать бродячих животных, трупы животных утилизировать с соблюдением ветеринарно-санитарных правил.

На хозяйство, где у свиней обнаружен трихинеллез, накладывают ограничительные мероприятия (карантин), проводят комплекс ликвидационных и профилактических мероприятий.

Хозяйство объявляют благополучным по трихинеллезу в том случае, если при повторном серологическом обследовании через 1 год всего поголовья не будут обнаружены положительно реагирующие животные, а при убое на мясо и трихинеллоскопическом обследовании туш в них не будут выявлены личинки трихинелл.

1.1. Трихинеллез - опасный антропозоогельминтоз, вызываемый трихинеллами двух видов: Trichinella spiralis и Trichinella pseudospiralis, протекает остро и хронически. Весь цикл развития обоих видов проходит в организме одного хозяина - половозрелая стадия локализуется в кишечнике, личиночная - в мышечной ткани.

1.2. Трихинеллезом болеют свиньи, кабаны, медведи, другие всеядные и плотоядные (собаки, волки, лисы), морские млекопитающие (киты, тюлени, моржи), насекомоядные, грызуны и другие животные.

1.3. Обязательному исследованию на трихинеллез подлежат: туши, полутуши, четвертины свиней (кроме поросят до 3-недельного возраста), кабанов, барсуков, медведей, всеядных и плотоядных животных, а также нутрий.

1.4. При послеубойной диагностике трихинеллеза используют два метода исследования: микроскопический (компрессорный) и биохимический (метод переваривания), прижизненную диагностику осуществляют методом иммуноферментного анализа (ИФА).

Мясо и субпродукты животных (имеющие мышечную ткань) исследуют микроскопическим или биохимическим методами.

Шпиг (с наличием мышечных прослоек) исследуют только микроскопическим методом.

Исследование копченостей, импортной свинины в блоках (при выборочном контроле) и других видов продукции проводят только биохимическим методом.

Диагноз на трихинеллез ставят на основании результатов лабораторных исследований.

2.1. Для исследования отбираются пробы из ножек диафрагмы (на границе перехода мышечной ткани в сухожилие), при их отсутствии - части межреберных, шейных, жевательных, поясничных, икроножных мышц, сгибателей и разгибателей пясти, а также мышцы языка, пищевода и гортани; от туш морских млекопитающих - мышцы кончика языка и глаза.

Масса пробы от каждой группы мышц должна быть не менее 5 г, а общая масса пробы от одного животного должна составлять не менее 25 г.

2.2. Пробы шпига соленого, копченого (при наличии прирези или прослоек мышечной ткани) отбирают от каждого куска, масса пробы должна быть не менее 25 г.

2.3. Пробы копченостей отбирают от 3 % упаковочных единиц, делая по 10 - 15 выемок из каждой упаковочной единицы, из которых составляют объединенную пробу.

2.4. Субпродукты свиные (языки, головы, ножки, хвосты) при отсутствии ветеринарного подтверждения об их происхождении от туш, подвергнутых трихинеллоскопии, исследуют следующим образом: от 3 % упаковочных единиц берут по 10 - 15 выемок из каждой и делают объединенную пробу массой не менее 25 г.

2.5. Импортную свинину (в тушах, полутушах) исследуют не менее 10 % от партии мяса, пробы берут из остатков ножек диафрагмы или межреберных мышц. Масса пробы мышц от туши, полутуши должна составлять не менее 1 г, общая масса пробы для исследования - не менее 25 г.

2.6. Импортную свинину в блоках исследуют не менее 1 % от партии мясных блоков, пробы отбирают по 25 выемок (1 г каждая) от блока общей массой не менее 25 г.

2.7. Пробы упаковывают во влагонепроницаемую тару и доставляют в лабораторию в день отбора.

3.2. Из кусочков мышц изогнутыми ножницами по ходу мышечных волокон делают 24 среза величиной с овсяное зерно, которые помещают в середину клеточки компрессориума, накрывают вторым стеклом и завинчивают винты, раздавливая срезы так, чтобы они стали прозрачными и удобными для их качественного просмотра.

3.3. Срезы исследуют под малым увеличением (8×10) с помощью соответствующих приборов для трихинеллоскопии (Приложение 1).

3.4. При исследовании шпига из прослоек мышечной ткани (каждого куска) делают 24 среза, помещают в чашку Петри с 0,5 см 3 раствора (1 %-ный раствор фуксина в 5 %-ном растворе едкого натра) на 5 - 8 мин. Затем срезы размещают в компрессориум и просматривают согласно пп. 3.3.

3.5. При просмотре срезов обнаруживают капсулы с личинками трихинелл, которые могут иметь лимоновидную или округлую формы, внутри капсул расположены одна или несколько спирально свернутых личинок.

Личинки бескапсульных трихинелл имеют специфическую конфигурацию расположения в мышечных волокнах, и их легче обнаружить по краям срезов мышц и в тканевой жидкости, окружающей среды.

Могут встречаться обызвествленные капсулы. Для их просветления срезы мышц помещают в чашку Петри с 5 - 10 %-ным раствором соляной кислоты. Чашку ставят в термостат при температуре 37 ± 1 °С на 20 - 30 мин. Затем срезы переносят на компрессориум и просматривают согласно пп. 3.3.

4.1. При проведении исследования используют искусственный желудочный сок (ИЖС), который готовят по следующей прописи: вода водопроводная температуры 41 - 42 °С - 1000 см 3 ; кислота соляная концентрированная (уд. масса 1,2) - 10 см 3 ; пепсин пищевой свиной (ТУ 10.02.01.111-89) при исследовании свежего мяса и мясопродуктов - 2,0 г, при исследовании соленого, копченого мяса и мясопродуктов, шпига - 10,0 г.

При использовании пепсина медицинского (Временная фармакопейная статья 42-1000-80) дозу увеличивают до 20,0 г.

Искусственный желудочный сок годен для применения в течение 8 ч с момента приготовления.

4.2. При исследовании мяса в тушах, полутушах, четвертинах, блоках, а также копченостей (при выборочном контроле) и других видов продукции количество срезов (массу навески) определяют согласно пп. 3.1.

4.3. Навеску измельчают в мясорубке с диаметром решетки 3 - 4 мм, переносят в коническую колбу соответствующей вместимости и заливают ИЖС в соотношении 1:15. Колбу помещают в термостат при температуре 41 - 42 °С и выдерживают 5 - 7 ч, периодически перемешивая. За 10 мин. до окончания переваривания перемешивание прекращают. После окончания переваривания в осадке остаются хлопья коричневого или темно-коричневого цвета.

4.4. Из колбы сливают (осторожно) 2/3 надосадочной жидкости, осадок выливают на капроновое сито (полусферической формы с диаметром ячеек 400 мкм), установленное в стеклянной воронке диаметром 90 - 120 мм, соединенной резиновой трубкой с пробиркой вместимостью 5 см 3 .

Залитый осадок отстаивают 15 - 20 мин., затем резиновую трубку перекрывают зажимом и пробирку отсоединяют. Содержимое пробирки (осадок) переносят по частям на часовое стекло и исследуют под малым (8×10) увеличением микроскопа или трихинеллоскопа на наличие личинок трихинелл.

4.5. Для выделения личинок трихинелл может быть использован метод группового переваривания в аппаратах типа АВТ (Приложение 1) согласно действующей инструкции.

5.1. Результаты считают положительными, если в образцах исследованной продукции обнаружена хотя бы одна личинка капсульных или бескапсульных трихинелл.

6.1. Капсулообразующих трихинелл необходимо дифференцировать от наиболее часто встречаемых в мясе и мясопродуктах саркоцист (мишеровы мешочки) и микрофинн (приложение 2 - не приводится). Дифференциация основана на морфологии возбудителя и строении капсулы:

6.1.1. Трихинеллы имеют капсулу лимоновидной, округлой формы, внутри спирально свернутая личинка (или несколько личинок).

6.1.2. Саркоцисты имеют собственную оболочку цилиндрической или неправильной формы; циста заключена в собственную тонкую оболочку и состоит из камер, внутри которых находятся мерозоиты.

6.1.3. Микрофинны располагаются в отличие от трихинелл между мышечными волокнами, имеют овальную форму и окружены слоистой соединительнотканной оболочкой.

С утверждением настоящих Методических указаний на территории Российской Федерации утрачивают силу "Методические указания по лабораторной диагностике трихинеллеза животных", одобренные Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 29.12.85, и "Методика лабораторной диагностики трихинеллеза", утвержденная Главветупром Госагропрома СССР 16.10.86.

Методические указания по лабораторной диагностике трихинеллеза животных разработаны Всероссийским НИИ гельминтологии имени К.И. Скрябина (А.С. Бессонов, А.В. Успенский, Н.В. Шеховцов), Центральной научно-методической ветеринарной лабораторией (В.А. Седов, В.Д. Певнева), Краснодарской научно-исследовательской ветеринарной станцией (А.Я. Сапунов, О.А. Митникова), Кубанским агроуниверситетом (Б.Л. Гаркави), Управлением ветеринарии г. Краснодара (А.А. Иващенко).

1. Компрессорная трихинеллоскопия

- стационарные и лабораторные проекционные устройства типа ТМП, "Стейк", микроскопы, бинокулярные лупы, устройства для полевой трихинеллоскопии и соответствующее импортное оборудование, прошедшее испытания во Всероссийском НИИ гельминтологии им. К.И. Скрябина;

2. Метод переваривания мышечной ткани

2.1. Автоматизированная диагностика

- аппараты для выделения личинок трихинелл методом переваривания мышечной ткани в искусственном желудочном соке АВТ-Л2, АВТ-Л3 и др.