Исследование почвы на наличие яиц и личинок гельминтов

Дата публикации: 30.05.2018 2018-05-30

Статья просмотрена: 307 раз

Почва играет значительную роль в природной среде обитания. Она является необходимым условием для жизни растений, животных и людей. Наряду с огромным положительным значением почвы, она может нести угрозу здоровью и жизни человека. Почва является фактором распространения различных инфекционных и инвазионных болезней. В ней постоянно находятся возбудители раневых инфекций и эпидемических заболеваний. Кроме того, в почве в течение нескольких лет могут сохраняться яйца гельминтов.

Из всех существующих зооантропонозных гельминтозов наибольшую опасность несет такая инвазия как токсокароз, который может встречаться у собак и кошек. Эти животные содержатся почти в каждой семье. Также отмечается огромное количество бездомных животных. С испражнениями домашних животных в почву попадает большое число яиц гельминтов. При контакте с почвой, а также при употреблении немытых овощей, токсокарозом может заразиться и человек. Причем характерных для заражения гельминтами симптомов у людей может не отмечаться, так как у них паразитирует только личиночная стадия токсокар. Токсокароз у человека, как правило, проявляется различными аллергическими реакциями. Диагноз на данное заболевание нельзя поставить по результатам копрологического исследования. Зараженность человека токсокарозом устанавливается только путем исследования проб сывороток крови в серологических реакциях, чаще в иммуноферментном анализе.

Осознание человеком опасности, которую может нести почва и песок, а также соблюдение мер профилактики, является важным аспектом предупреждения заражения гельминтами.

Из всех гельминтозов, встречающихся у кошек и собак, наиболее распространенным и опасным не только для животных, но и для человека, является токсокароз.

На территории Российской Федерации зарегистрировано 89 видов гельминтов, паразитирующих у собак и кошек, причем 35 видов из них могут паразитировать и у человека, среди них нематоды домашних плотоядных Тохосаrа canis и Тохосаrа mystax. Для человека токсокароз зоонозная инвазия. Она характеризуется тяжелым, длительным и рецидивирующим течением, полиморфизмом клинических проявлений, обусловленных миграцией личинок токсокар по различным органам и тканям.

Наибольшая серопозитивность и заболеваемость токсокарозом отмечена в возрастной группе детей до 4 лет, страдающих аллергическими заболеваниями, — 31–47 %. Причем для детей наиболее характерно проявление глазного токсокароза (что приводит к энуклеации), для взрослых в большинстве случаев манифестным является висцеральный токсокароз [3].

В. П. Сергиев, А. В. Успенский, В. В. Горохов и др. [8] отмечают, что механизм передачи инвазии очень надежен — яйца токсокар выживают в почве до нескольких лет.

Т. А. Гасанова [4] приводит результаты исследования пораженности личинками токсокар населения Саратовской области. Среди женщин процент зараженных составил 5,2–7,5 %, мужчин — 4,2 %.

Кашковская Л. М. [5] приводит результаты исследования почвы города Саратова на наличие яиц гельминтов: 55,03 % проб почвы содержат яйца гельминтов, в том числе 50,3 % яиц токсокар. На детских площадках загрязненность в отношении токсокар составила 15,26 %, на школьных дворах 4,2 %, в парках, вдоль улиц 19,75 %, в местах выгула собак она достигла 48,97 %.

Возбудитель токсокароза собак — нематода Тохосага canis, паразитирующая в половозрелой стадии в тонком кишечнике собак. Восприимчивы собаки всех возрастов, но паразит встречается чаще у щенков в возрасте 2–3 мес.

Toxocara mystax — это вид круглых червей, являющихся причиной развития заболеваний желудочно-кишечного тракта представителей семейства кошачьих.

Передача токсокар людям в большинстве случаев происходит через заглатывание инвазивных яиц. Собачья токсокара способна производить около 200 тыс. яиц в день, при этом у щенка в кале может находиться их около 100 тыс. на один грамм.

Основной путь заражения. Многие предметы и поверхности могут быть загрязненными инфекционными яйцами токсокар. Также мухи, питающиеся калом, способны их распространить на другие поверхности или пищевые продукты, но большинство заражений происходит без их участия. Вместе с водой, немытыми продуктами, а также при работе, связанной с почвой, яйца токсокар проникают в организм, где происходит их дальнейшее развитие.

У человека как правило встречаются 3 формы токсокароза:

Висцеральная форма — включает в себя заболевания, связанные с основными органами. Скрытая форма — представляет собой суть предыдущей, но симптоматика более мягкая либо вообще отсутствует. Глазная форма — патологическое воздействие затрагивает глаза и зрительные нервы.

Предварительный диагноз токсокароза выставляется на основании клинических симптомов заболевания (аллергическая реакция, бронхолегочной синдром и другие), общего анализа крови (выраженное увеличение эозинофилов в периферической крови, увеличение лейкоцитов, СОЭ, снижение гемоглобина), изменения биохимии (повышение билирубина, АЛТ, АСТ, ГГТП), увеличение гамма-глобулинов.

Окончательный анализ выставляется после специфического лабораторного обследования. Используется серологическая диагностика — реакция ИФА с целью выявления специфических антител — ИФА с токсокарозными антигенами.

Все известные способы обнаружения яиц гельминтов в почве основаны на применении различных флотационных растворов. Метод Фюллеборна — это метод обогащения, основан на всплытии яиц гельминтозов в насыщенном растворе NaCl (1,2 — плотность; 400 г NaCl на 1 литр воды; 40 % раствор NaCl). В банку помещают пробы и заливают раствором NaCl, размешивают и через 45 минут снимают образовавшуюся пленку металлической петлей, помещают каплю глицерина на предметное стекло. Исследуют под микроскопом [5].

Исследование почвы на наличие яиц гельминтов нами осуществлялось весной и осенью 2017 года. С целью установления степени зараженности почвы села Терса яйцами гельминтов, нами было отобрано 12 проб почвы из огородов жителей села. Кроме того были исследованы 3 пробы песка: проба 1 — из песочницы детского садика села Терса, проба 2 — из песочницы игровой площадки и проба 3 — из песка, находящегося у двора дома, где регулярно играют дети. Пробы отбирались с разных мест различной глубины в количестве 100 г. Исследование проводилось в лаборатории кабинета химии школы села Терса. Для обнаружения яиц гельминтов применялся метод Фюллеборна.

Нами были получены следующие результаты: из 12 проб почвы в 7 были обнаружены яйца токсокар, причем в трех пробах найдено значительное число яиц.

В пробе песка детского садика яйца токсокар обнаружены не были, песок игровой площадки содержал незначительное число яиц, в третьей пробе песка установлена высокая степень содержания яиц гельминтов. Кроме того, в пробах были обнаружены яйца других гельминтов, но целью нашей работы был учет только яиц токсокар.

Нами была подсчитана экстенсивности заражения грунта села Терса яйцами токсокар. Из 15 проб (12 почвы и 3 песка) в 9 обнаружены яйца гельминтов, следовательно, экстенсивности заражения почвы составила 60 %.

На основании проведенных нами исследований можно сделать вывод, что почва в селе Терса контаминирована яйцами токсокар в значительной степени, что является достаточно опасным для здоровья людей. С целью профилактики и предотвращения заражения населения села токсокарозом необходимо соблюдать следующие меры:

1. Ежеквартально проводить дегельминтизацию домашних кошек и собак. При визуальном обнаружении гельминтов у животных обязательна двухкратная дегельминтизация с интервалом 14 дней, что связано с устойчивостью яиц гельминтов к препаратам.
2. Ограничить контакт детей с кошками и собаками, особенно бродячими.
3. Приучить детей всегда мыть руки перед едой, после улицы.
4. Своевременно стричь ногти ребенку во избежании накопления под ними грязи.
5. Работать в огородах в перчатках или тщательно мыть руки с мылом после работы.
6. Овощи и фрукты перед употреблением обязательно мыть водой, а лучше с мылом или обдавать кипятком.
7. Необходимо изолировать детские песочницы и игровые площадки от животных (брезенты, заборы).
8. Периодически заменять песок в песочнице.

1. Акбаев М. Ш. — Паразитология и инвазионные болезни животных — 1998 г
2. Алексеева М. И. Токсокароз: клиника, диагностика, лечение / М. И. Алексеева // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. — 1984. — № 6. — С. 66–71.
3. Березина Е. С. Особенности распространения токсокароза в популяциях собак и человека // Ветеринарная патология. — 2006. — № 6. — С. 45–56.
4. Гасанова Т. А. Токсокароз: распространение и влияние на репродуктивное здоровье / Т. А. Гасанова // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. — 2003. — № 4. — С. 11– 14.
5. Кашковская Л. М. Основные кишечные гельминты собак г. Саратова (распространение, экологические особенности и меры борьбы): дис. канд. вет. наук. — Саратов, 2009. — 121 с.
6. Котельников Г. А. Гельминтологические исследования окружающей среды / Г. А. Котельников — Москва, 1991. — 144 с.
7. Романенко НА., Падченко И. К., Чебышев Н. В. Санитарная паразитология. — М.: Медицина, 2000
8. Современная ситуация по паразитарным болезням собак и кошек в мегаполисе Москвы / В. П. Сергиев [и др.] // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. — 2007. — № 1. — С. 17–19.

Бесплатная горячая линия юридической помощи

• Главная
• "МЕТОДЫ САНИТАРНО-ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУК 4.2.796-99" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 22.12.99)

6.1. Исследование почвы

Подготовка к отбору проб. Отбор проб для паразитологических анализов проводят не менее 1 раза в год для оценки качественного состояния почв естественного и нарушенного сложения.

Для аналогичных исследований почв детских, лечебно-профилактических учреждений и зон отдыха отбор проб проводят не менее 2 раз в год - весной и осенью.

При изучении динамики самоочищения от яиц гельминтов, цист кишечных простейших отбор проб проводят в течение первого месяца еженедельно, а затем ежемесячно в течение вегетационного периода до завершения активной фазы самоочищения.

Для оценки качества по паразитологическим показателям почв сельскохозяйственных угодий, в зависимости от характера источника загрязнения, возделываемой культуры и рельефа местности на каждые 0,5 - 20,0 га территории закладывают не менее 1 пробной площадки размером 10 х 10 м; на территории расположения детских и лечебно-профилактических учреждений, игровых площадок, выгребов, мусорных ящиков и других объектов, занимающих небольшие площади, размер пробной площадки должен быть не более 5 х 5 м.

Отбор проб почвы. Точечные пробы отбирают в соответствии с МУ 2.1.7.730-99 на модельной площадке из одного или нескольких слоев или горизонтов методом конверта, по диагонали или любым другим способом с таким расчетом, чтобы каждая проба представляла собой часть почвы, типичной для генетических горизонтов или слоев данного типа.

Точечные пробы отбирают ножом, совком или шпателем из прикопок или почвенным буром Некрасова. Объединенную пробу составляют путем смешивания точечных проб, отобранных на одной пробной площадке.

Для паразитологического анализа с каждой пробной площадки берут одну объединенную пробу массой 200 г, составленную из 10 точечных проб массой 20 г каждая, отобранных послойно с поверхности и глубины 10 - 20 см. При необходимости отбор проб проводят из более глубоких (40 - 60 см) слоев почвы послойно. Пробы помещают в банки с крышками или пакеты из клеенки, пластика, этикетируют с указанием места отбора, даты, глубины, характера исследуемого участка (в тени или на солнце, состав почвы, наличие растительности и т.д.). Все объединенные пробы должны быть зарегистрированы в журнале, пронумерованы. В процессе транспортирования и хранения почвенных проб должны быть приняты меры по предупреждению возможности их загрязнения.

Паразитологический анализ проб почвы проводят в день доставки их в лабораторию. При невозможности немедленного проведения исследований пробы почвы хранят в холодильнике при температуре до 5 °С. Для исследования на цисты кишечных патогенных простейших почву без обработки хранят не более 2 суток; на яйца биогельминтов - до 7 суток, а на яйца геогельминтов - не более 1 месяца.

Для предотвращения высыхания и развития личинок в яйцах геогельминтов почву увлажняют и аэрируют один раз в неделю, для чего пробы вынимают из холодильника и оставляют на 3 часа при комнатной температуре, увлажняют водой по мере потери влаги и снова помещают для хранения в холодильник. При необходимости хранения проб почвы более месяца применяют консервирующие средства: почву пересыпают в кристаллизатор, заливают раствором формалина с массовой долей 3%, приготовленным на изотоническом растворе натрия хлористого с массовой долей 0,85% (жидкость Барбагалло), или раствором соляной кислоты с массовой долей 3%, а затем ставят в холодильник.

Подготовка проб почвы к анализу. Пробы почвы в лаборатории рассыпают на бумаге или кальке и разминают пестиком крупные комки. Затем из нее выбирают корни растений, камни, насекомых, стекло, уголь, кости животных, друзы гипса, известковые журавчики и др.

Затем почву переносят в ступку, растирают пестиком и просеивают через сито с ячейками диаметром 1 мм.

ПОПРАВОЧНЫЕ КОЭФФИЦИЕНТЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИСТИННОЙ ОБСЕМЕНЕННОСТИ ПОЧВ ЯЙЦАМИ АСКАРИД И ВЛАСОГЛАВОВ

Тип почвы	Яйца геогельминтов
	аскарид	власоглавов
Дерново-подзолистая (супесь)	1,23	1,43
Дерново-подзолистая (суглинок)	1,45	1,50
Торфяно-глоевые	1,84	2,40
Чернозем обыкновенный	1,60	1,85
Чернозем типичный	1,70	2,30
Чернозем выщелоченный	1,43	2,10
Чернозем каштановый (супесь)	1,28	1,95
Чернозем каштановый (суглинок)	1,64	2,15
Аллювиально-лугово-лесная	1,37	1,65
Сероземы	1,39	1,60
Черноземная лесная коричневая	1,49	1,71
Горная лесная бурая	1,54	1,72
Желтоземы	1,79	1,94

Для обнаружения в почве яиц гельминтов, имеющих более высокую плотность (яйца описторхисов, клонорхисов), чем яйца аскарид и власоглавов, следует использовать насыщенный раствор хлорида цинка (плотность 1,78); яйца токсокар лучше выявляются при обработке почвы насыщенным раствором сульфата цинка или сульфата магния в смеси с 5%-ным раствором йодата калия.

Примечание. При работе по данной методике необходимо строго соблюдать следующие требования:

1. Обязательность применения обезжиренных предметных стекол.

2. Обязательность контроля плотности насыщенного раствора с помощью ареометра (плотность должна быть не ниже 1,38 - 1,40).

В случае нарушения указанных требований в первом случае поверхностная пленка с яйцами гельминтов не прилипнет к стеклу, во втором случае скорость всплывания яиц гельминтов замедлится и в указанные сроки они не достигнут поверхностной пленки.

Для эффективного использования рабочего времени исследователя рекомендуется: во время первого отстаивания смеси "почва с щелочью" проводить подготовку предметных и покровных стекол, запись в журнале; во время второго - "почвы с насыщенным раствором соли" - подготовку рабочего места для микроскопирования, уборку центрифуги и другого лабораторного оборудования.

После окончания проведения анализов использованную посуду (центрифужные пробирки, предметные и покровные стекла, стеклянные палочки) замачивают в стиральном порошке и кипятят 15 - 20 минут, затем моют в чистой воде.

Пробирки хранят в штативах, предметные и покровные стекла в широкогорлых банках с пробками, заполненных смесью Никифорова или нашатырным спиртом. Перед использованием предметные и покровные стекла не вытирают, а подсушивают.

Ход исследования. Из объединенной пробы берут 20 г почвы и помещают на металлическую сетку (или ситечко для молока), которую устанавливают в аппарат Бермана. Последний представляет собой стеклянную воронку (диаметром 10 - 15 см), соединенную при помощи резиновой трубки с узкой пробиркой. Систему устанавливают в штатив, наполняют теплой (температура 45 - 50 °С) водой, а затем металлическую сетку с почвой помещают в воронку так, чтобы нижняя часть ее соприкасалась с водой.

Воронку с почвой ставят в термостат при температуре 37 °С. Личинки гельминтов, обладая термотропностью, мигрируют из почвы через сито в теплую воду и оседают на дно пробирки. Через 3 - 4 часа осторожно отсоединяют пробирку от воронки, сливают верхний слой жидкости, а осадок переносят на предметное стекло и микроскопируют. Но лучше содержимое пробирки центрифугировать, а после этого исследовать осадок.

В химический стаканчик помещают 10 г почвы, заливают теплым (40 °С) физраствором так, чтобы он полностью покрывал пробу. Через 20 минут жидкость сливают в чашку Петри и исследуют под бинокулярным микроскопом МБС. По эффективности метод Супряги не уступает методу Бермана.

Для отличия личинок свободноживущих нематод от паразитических применяют метод Корта. Принцип его заключается в воздействии на личинок нематод формалином. При этом личинки свободноживущих нематод погибают быстрее, чем паразитические. Личинки помещают в воду в чашку Петри или на часовое стекло. При добавлении 40%-ного раствора формалина к жидкости с личинками нематод в соотношении 1:5 личинки свободноживущих нематод гибнут через 5 - 8 минут, а паразитические - остаются живыми в течение 15 - 20 минут, но подвижность их замедляется; при добавлении формалина в соотношении 1:25 первые гибнут через 12 минут, тогда как вторые в 95% случаев остаются нормально подвижны.

Ход исследования. Из объединенной пробы берут 25 г почвы, помещают в фаянсовую ступку, постепенно добавляют к ней водопроводную воду, тщательно растирают пестиком до гомогенной кашицы и выливают ее в цилиндр емкостью 1 л, предварительно наполненный на 3/4 объема чистой водой. Смесь размешивают стеклянной палочкой и отстаивают в течение 15 минут. Образовавшуюся на поверхности смеси пленку удаляют петлей, а жидкую часть ее отсасывают сифоном в чистый цилиндр. Осадок повторно промывают (не менее 3 раз), собирая промывные воды в одном цилиндре. Промывные воды отстаивают, через 24 часа надосадочную жидкость удаляют сифоном, а осадок исследуют в нативных мазках и окрашенных раствором Люголя препаратах. С этой целью осадок тщательно встряхивают и одну каплю полученной взвеси наносят пастеровской пипеткой на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют под световым микроскопом. Микроскопируют не менее 1 мл осадка с последующим пересчетом на его общий объем. Анализ осадка проводят в течение первых 2 - 3 суток после его получения.

Для того, чтобы осадок длительное время оставался пригодным к исследованию (до 2 месяцев), к нему добавляют консервант, содержащий мертиолят, 40%-ный раствор формалина, спирт этиловый 96° и физиологический раствор (соотношение компонентов в %: мертиолят - 0,0016 - 0,0018, 40%-ный формалин - 4,1 - 4,4; спирт этиловый 96° - 10,4 - 10,9; физиологический раствор - остальное). Консервант добавляют к осадку в соотношении 1:2 и хранят в холодильнике.

Для приготовления мазков каплю исследованной смеси осадка с консервантом после встряхивания наносят пипеткой на предметное стекло, смешивают ее с каплей акридинового оранжевого, разведенного 1:500, накрывают покровным стеклом и исследуют под световым или люминесцентным микроскопом, подсчитывают число неокрашенных (живых) и окрашенных (мертвых и дегенерирующих) цист кишечных простейших каждого вида. При изучении исследуемого материала под световым микроскопом жизнеспособные цисты кишечных простейших остаются неокрашенными, а дегенерирующие и мертвые цисты окрашиваются в желтый цвет. Погибшие цисты под люминесцентным микроскопом красные.

Исследование проб почвы. С целью определения загрязненности яйцами и личинками гельминтов почвы ее берут около помещений, на пастбищах, прогонах и в других местах на глубине до 15—20 см. С каждого участка через каждые 10 м берут около 50 г почвы, перемешивают ее и со средней пробы отбирают 100 г почвы.

А. И. Корчагин (1984) с целью выявления в почве или в соскобах с твердых покрытий животноводческих помещений яиц аскаридат или стронгилят предлагает из отобранных образцов брать по 15—25 г почвы, а в качестве флотационной жидкости применять раствор нитрата аммония плотностью 1,3 или нитрата натрия плотностью 1,38. Пробу почвы помещают в центрифужную пробирку емкостью 250 мл, добавляют 100 мл 3%-ного раствора едкого натрия, перемешивают стеклянной палочкой и центрифугируют 3—5 минут со скоростью 1000 об/мин. После этого надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют 150 мл воды, опять хорошо перемешивают и повторно центрифугируют. Надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют 150 мл раствора нитрата аммония, перемешивают и фильтруют через капроновое или металлическое ситечко с размерами ячеек 0,5х0,5 мм в другую пробирку и опять центрифугируют. После этого пробирки со смесью ставят в штатив и в каждую из них доливают раствор нитрата аммония до уровня ниже края пробирки на 2—4 мм. После этого берут предметные стекла размером 6х6 см, покрывают ими пробирки, в которые пипеткой добавляют раствор нитрата аммония до соприкосновения его с нижней поверхностью стекла. Через полчаса стекла снимают и подсчитывают количество яиц гельминтов в пробе.

При исследовании соскобов пробу берут в количестве 15—25 г с разных мест пола, нижних участков стен, перегородок через каждые 5 м. Для исследования соскобов применяют те же флотационные растворы и аналогичные подходы, что и при исследовании почвы.

Для выявления в почве личинок нематод применяют метод Бермана. С этой целью 30—40 г почвы помещают на молочные фильтры в воронки аппарата Бермана, заполняют теплой водой (40 °С). Через 3—4 ч содержимое переливают в пробирки, центрифугируют 1—2 минуты со скоростью 1000 об/мин, верхний слой жидкости в пробирках сливают, а осадок микроскопируют.

Исследование проб навоза на наличие яиц и личинок гельминтов проводят теми же методами, что и исследование почвы, но при исследовании навоза на наличие яиц гельминтов пробы фильтруют через металлические ситечки, чтобы крупные частицы не мешали при микроскопировании поверхностной пленки.

Жидкие и плотные фракции навоза на наличие яиц гельминтов исследуют по модифицированному методу А. А. Черепанова (1972). Из плотной фракции отбирают 100 г навоза, из жидкой фракции — 0,5 кг. Пробу плотной фракции навоза смешивают с небольшим количеством воды, растирают в ступке и фильтруют через марлю под напором струи воды из водопровода. Фильтрат помещают в пробирки и центрифугируют 3 мин со скоростью 1500 об/мин. Надосадочную жидкость в пробирке сливают, а к осадку добавляют раствор нитрата натрия или аммиачной селитры и повторно центрифугируют. После этого в пробирки наливают доверху флотационный раствор, покрывают предметными стеклами и через 20-25 минут их микроскопируют. После фильтрации жидкую фракцию навоза исследуют аналогичным образом.

Методика Н. А. Акулина для исследования травы на выявление личинок стронгилят. Перед началом исследований готовят оборудование: тазы диаметром 36 см и высотой 15 см; стеклянные воронки диаметром 20 см, к которым прикрепляются пробирки с помощью резиновых трубок; штатив для воронок; микроскопы; сита диаметром 31 см с высотой боковой стенки 12 см, размер ячеек сетки сита 1 мм; глазные пипетки, предметные стекла, раствор Люголя.

Отбирают пробы травы по 100—120 г и помещают их в сито. Его ставят в таз с теплой водой (22—24 °С). Между сеткой сита и дном таза должно оставаться расстояние в 5—7 см. Через 24 ч сито с травой вынимают из таза, а через полчаса воду из таза осторожно сливают, оставляя осадок в количестве примерно 1,5 л. После этого в штатив вставляют воронки с прикрепленными к ним пробирками и в воронки выливают осадок из таза, перед этим хорошо перемешав его. Через 2 ч пробирки от воронок отделяют и осадок в них исследуют с помощью микроскопа. При необходимости обездвиживания личинок применяют раствор Люголя, добавляя одну каплю его к капле исследуемой на предметном стекле жидкости. В пастбищный сезон для выявления личинок диктиокаул траву рекомендуется исследовать один раз в неделю, а для обнаружения стронгилят желудка и кишечника жвачных — через каждые две недели.

Исследование воды для обнаружения яиц и личинок гельминтов. При исследовании воды крупных водоемов в различных местах берут пробы в объемах от 0,5 до 10 л. С поверхности воды пробы берут малыми емкостями — 0,5-1 л через каждые 3-5 минут, чтобы через час средняя проба составила 10 л. Из колодцев, водопровода проба воды должна быть не менее 25 л. Целесообразно пробы воды брать в различные сроки дня и в различные периоды года для установления динамики загрязненности ее личинками и яйцами гельминтов.

Метод исследования воды по 3. Г. Васильковой (1955). Отбирают пробу воды и фильтруют ее через крупнопористые фильтры (диаметр пор 3—5 мкм). При этом задерживаются яйца и личинки гельминтов. В ветеринарной лаборатории воду можно фильтровать через воронку Гольдмана с применением насоса Комовского. В полевых условиях применяют ручной насос, при этом за 1 ч фильтруют 10 л воды, используя 10—20 фильтров. После этого фильтры помещают на большие предметные стекла и микроскопируют.

Для фильтрации можно применять также бумажные фильтры для исследования речной и сточной воды. При этом за 1 ч удается исследовать 2—3 л воды с применением около 50 фильтров.

Если нет фильтров, воронок Гольдмана и другого оборудования, в полевых условиях воду просто отстаивают в 10-литровой посуде, осадок сливают в пробирки, центрифугируют и исследуют.

Все описанные выше методы исследований почвы, навоза, воды и травы могут быть применены при гельминтологической оценке пастбищ при многих геогельминтозах.

Об актуальных изменениях в КС узнаете, став участником программы, разработанной совместно с ЗАО "Сбербанк-АСТ". Слушателям, успешно освоившим программу выдаются удостоверения установленного образца.

Программа разработана совместно с ЗАО "Сбербанк-АСТ". Слушателям, успешно освоившим программу, выдаются удостоверения установленного образца.

Обзор документа

Методические указания МУ 2.1.7.2657-10 “Энтомологические методы исследования почвы населенных мест на наличие преимагинальных стадий синантропных мух” (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 9 июля 2010 г.)

Дата введения 9 июля 2010 г.

1.1. Методические указания устанавливают санитарно-энтомологические методы контроля качества почвы в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями к качеству почвы и гигиенической оценке качества почвы населенных мест.

1.2. Настоящие методические указания предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы для проведения сертификационных испытаний аккредитованными лабораториями, выполняющими исследования почвы на энтомологические показатели.

Синантропные мухи* (комнатные, домовые, мясные и др.) имеют важное эпидемиологическое значение, как механические переносчики возбудителей инфекционных и паразитарных болезней (возбудителей кишечных инфекций, полиомиелита, цист простейших, яиц гельминтов, эпидемического конъюнктивита и др.).

Наличие личинок и куколок мух в почве населенных мест является прямым показателем (биоиндикатором) загрязнения почвы, плохой санитарной очистки территории, показателем неправильного сбора отходов, несвоевременного их удаления и обезвреживания.

Местами выплода синантропных мух являются скопления разлагающихся отходов в мусоросборниках, помойных ямах, на свалках, на иловых площадках. Мухи выплаживаются в навозе домашних животных, на ассенизационных полях, в выгребах не канализованных уборных, в почве, окружающей скопления отходов, в оставленных на земле фекалиях. Мясные мухи откладывают яйца на трупы животных, птиц, гниющую и малосольную рыбу. Плодовые мухи развиваются в гниющих овощах, фруктах, пивном сусле, в посуде с остатками пищи, в кормах животных. Сырные мухи откладывают яйца на соленую и копченую рыбу, сыр, ветчину, сало, икру.

В своем развитии мухи проходят 4 стадии: яйцо, личинка, куколка (преимагинальные стадии), окрыленная муха (имаго) (рисунок 1).

Рисунок 1. Стадии развития комнатной мухи Musca domestica. 1 - яйца; 2 - личинка 3-го возраста; 3 - куколка; 4 - новорожденная муха; 5 - взрослая муха (самец); 6 - лобный пузырь; 7 - не расправившиеся крылья; 8 и 9 - ротовые крючки и передние дыхальца личинки; 10 - задние дыхальца.

Развитие эмбриона в яйце, в зависимости от температуры субстрата, происходит в течение 8-25 часов. После вылупления из яиц личинки быстро проникают в толщу субстрата и концентрируются в наиболее благоприятных для них участках. По мере развития личинки растут и линяют 3 раза. При температуре субстрата 30-40°С развитие личинок заканчивается в течение 4-5 суток, при 20-25°С - 7-9 суток, при 16-18°С - 12-18 суток. Перед окукливанием личинка перестает питаться и уползает в прохладные и сухие слои субстрата или в рыхлую почву, окружающую отходы на расстояние до 2 м. Если площадка, на которой находятся мусоросборники (отходы) асфальтирована или плотно утрамбована, то личинки могут уползти на расстояние 3-5 м и более и зарываться в рыхлую землю на глубину 10-20 см. В почву, окружающую холодный субстрат, мигрирует около 20% личинок, в почву вокруг отходов с высокой температурой (навоз) и из жидких отходов - более 95% личинок. Чаще куколки встречаются в почве при температуре 18-25°С и влажности последней 20-40%. Развитие куколок комнатных мух при температуре субстрата 20-25°С продолжается 8-9 суток, при 16-18°С - 13-19 суток, мясных мух при температуре субстрата 20-25°С - 7-8 суток. При благоприятных условиях температуры и влажности субстрата развитие куколок может закончиться в течение 3-4 суток. В среднем, общая продолжительность развития всех преимагинальных стадий (от яйца до имаго), в зависимости от температуры, влажности субстрата и вида мух, составляет при 30°С - 10-13 суток, при 16-18°С - более 30 суток.

Внутри куколки происходит процесс превращения (метаморфоза) личинки в окрыленную муху. Выход новорожденных мух через слой почвы зависит от плотности грунта: через сухой песок проходит до 90% мух, через влажный (10% влажности) - не более 10% мух. Новорожденные мухи преодолевают слой сухого песка толщиной до 150 см. Садовая земля труднее проходима для мух, чем песок. Слой земли в 30 см преодолевают 80% новорожденных мух, слой земли в 50 см - единицы. Утрамбовка почвы может сократить количество выплаживающихся мух. Вылетевшие мухи уже через 1-1,5 часа способны к полету, у них подсыхают покровы тела и расправляются крылья. Они либо остаются вблизи скоплений отходов, либо улетают в места питания и могут преодолевать расстояния до 10 км и более. Продолжительность жизни мух в летний период - 1-1,5 мес. В течение этого срока самки мух могут отложить яйца 6 и более раз.

В умеренном климате синантропные виды мух зимуют в стадии имаго в прохладных помещениях, впадая в окоченение. Активными они вновь становятся при повышении температуры воздуха до +6-10°С. Основная часть популяции мух зимует в стадии куколки, личинки 3-го возраста - в перегнивших слоях отходов, навозе, в почве около скоплений отходов, часто на глубине 25-50 см. Вылет мух из перезимовавших куколок происходит в марте-мае, в период, когда среднесуточная температура почвы (отходов) в течение 7-10 суток поднимается до 11-14°С. В южных регионах выплод мух в теплые годы возможен и в зимнее время.

3.1. Программа обследования определяется целями и задачами исследования с учетом санитарно-эпидемиологического состояния района.

3.2. В первую очередь обследуют территории лечебно-профилактических, образовательных, детских учреждений, пищевых предприятий, жилых комплексов, зон отдыха, поля орошения и ассенизации. Санитарно-энтомологические обследования должны сопровождать санитарные обследования населенных пунктов, проводимые в порядке текущего санитарного надзора и обязательны при контроле в местах обезвреживания и утилизации отходов. Места отбора проб отмечают на карте-схеме, отражающей структуру размещения объектов в районе. В условиях города можно ограничится списком адресов объектов.

3.3. Энтомологическую оценку санитарного состояния почвы населенного пункта проводят путем систематического обследования и взятия проб из скоплений отходов и почвы вокруг них. В средней полосе России обследование потенциальных мест выплода мух следует проводить раз в 10-15 суток, начиная со II декады мая до III декады сентября, когда температура наружного воздуха устойчиво превышает 8-10°С. В южных регионах обследования мест выплода мух проводят регулярно, начиная с III декады апреля до I-II декады октября (в зависимости от погодных условий года).

3.4. Отбор проб проводят выборочно по 3-5 проб на площади * *, не менее 10 проб в целом на площади проектируемого строительства (масса объединенной пробы 1 кг). Пробы почвы отбирают лопатой (шпателем) с площади 20 х 20 см на глубину 10 см непосредственно на самих площадках сбора отходов и на расстоянии до 1-1,5 м по периметру. Ранней весной и поздней осенью для обнаружения зимующих куколок мух пробы следует брать на глубине не менее 20 см.

3.5. Учет численности личинок и куколок следует также проводить в штабелях отходов (компоста) откуда личинки мигрируют в почву. В 5-6 точках по периметру объекта отбрасывают верхний слой отходов (навоза, почвы) и визуально определяют наличие личинок и куколок мух. Точным является метод взятия проб в кювету и подсчет личинок (куколок) в среднем на 1 кювету (20 х 15 см), либо на 1 пол-литровую банку. Поскольку личинки (куколки) в субстрате (почве) распределяются неравномерно, пробы, взятые из 5-6 точек в одном объекте, представляют среднее количество преимагинальных стадий мух, заселяющих субстрат. Можно пересчет личинок проводить на 1 кг взятого субстрата. Необходимо во всех обследуемых объектах пользоваться единым методом взятия проб, подсчетом личинок и куколок.

3.6. Субстрат, вместе с находящимися в нем личинками (куколками), помещают в сосуды (пластмассовые стаканы, банки), закрывают бязевыми салфетками и закрепляют резинками. Пробы маркируются и регистрируются в журнале отбора проб. Пробы переносят в лабораторию и оставляют до выплода мух. В последующем определяют видовой состав выплодившихся мух. Эти данные необходимы для характеристики санитарно-энтомологического состояния почвы (отходов) в разных участках и объектах населенного пункта. При взятии проб необходимо регистрировать температуру тех слоев отбросов, откуда берут пробы и температуру наружного воздуха.

3.7. Два раза в сезон активности мух проводят массовое обследование потенциальных мест выплода мух. В этих целях количество обследуемых объектов увеличивают в 3-5 раз, что позволяет более точно определить степень зараженности почвы различных объектов личинками (куколками) мух и оценить санитарно-энтомологическое состояние в целом населенного пункта и отдельных его участков (микрорайонов).

4.1. Количество личинок и куколок в пробе визуально регистрируют по следующей шкале:

личинки и куколки отсутствуют	-	0;
единичные (до 10 экз. в пробе)	-	+;
встречаются десятками	-	++;
встречаются сотнями	-	+++.

При учете заселенности почвы, используя весовые показатели, считают на 1 кг субстрата:

Чистая	-	личинки, куколки - 0
Умеренно опасная	-	личинки до 10, куколки - 0
Опасная	-	личинки до 100, куколки до 10
Чрезвычайно опасная	-	личинки > 100, куколки > 10

Эти показатели являются критерием оценки санитарно-энтомологического состояния почвы (отходов) в населенном пункте (объектах).

4.2. На основании всех взятых проб в одном объекте вычисляют среднее количество (обилие) личинок и отдельно куколок на пробу в объекте. При определении общего санитарно-энтомологического состояния населенного пункта (микрорайона) устанавливают критерий встречаемости, т.е. процент мест (участков, дворов, объектов и т.д.), в почве которых обнаружены личинки и/или куколки мух.

4.3. Результаты обследования фиксируют в специальном журнале, в котором указывают дату обследования, характеристику объекта, в котором проводили обследование, место взятия пробы (мусоросборник, компост, свалка и т.д.), тип субстрата, температуру воздуха (субстрата), количество личинок и куколок в пробе. При выплоде мух в лаборатории - их видовой состав (приложение 1).

4.4. Полученные материалы обобщают, анализируют и составляют ретроспективный прогноз энтомологической ситуации по синантропным мухам в населенном пункте. Эти материалы являются основанием для планирования санитарных и истребительных мероприятий.

5.1. Работники, проводящие учет численности преимагинальных стадий мух, и отбирающие пробы субстрата, должны быть обеспечены спецодеждой: халат или комбинезон, косынка (кепи), резиновые перчатки. Для защиты органов дыхания используют марлевые повязки или респираторы.

5.2. Персонал должен быть обеспечен моющими средствами, полотенцами.

5.3. Во время обследования мест выплода мух не разрешается курить, пить, принимать пищу.

5.4. После обследования спецодежду снимают и проветривают. Стирают по мере загрязнения в мыльно-содовом растворе. Лицо и руки после проведения обследования тщательно моют с мылом. Кюветы, пинцеты и другое оборудование, перчатки после работы тщательно моют горячей водой с мылом (содой).

5.5. Для содержания взятых проб необходимо выделить отдельное помещение или стол.

1. Спецодежда, перчатки, марлевые повязки, респираторы - по числу работающих

2. Кювета эмалированная (пластмассовая) - 2

3. Пинцеты разные - 3

4. Термометры воздушные - 3

6. Вата стерильная и нестерильная - 150 г

7. Бинты стерильные и нестерильные - 3

9. Мыло (содержащее дезинфектант) - 2

10. Сода кальцинированная - 200 г

11. Пластмассовые сосуды (стаканы) - 50 шт.

12. Тетради (журналы) - 2

13. Целлофановые пакеты - 10

14. Сумки хозяйственные для переноса проб - 2

16. Настойка йода - 50 мл

17. Марганцовокислый калий - 10 г.

18. Лопата (шпатель)

Главный государственный санитарный врач РФ

Г.Г. Онищенко

* Синантропные мухи - виды мух, обитающие в населенных пунктах, связанные с жилищем человека, продуктами питания, различного происхождения отходами людей и домашних животных (syn - вместе, anthropos - человек, греч.).

Дата	Объект	Место взятия проб	Субстрат	Температура в °С		Количество в пробе		Критерий оценки состояния почвы (отходов)	Вид мух
				субстрата	наружного воздуха	личинок	куколок

2. Методические указания по борьбе с мухами № 28-6/3. МЗ СССР утвержденные 27.01.84, М., 1985 п. 1-4, 6, приложение. 6 п. 2.

3. Санитарные правила СанПиН 2.1.7.1287-03 М. 2003. Санитарно-эпидемиологические требования к качеству почвы.

4. Санитарные правила СанПиН 3.5.2.1375-03 М. 2003. Санитарно-эпидемиологические требования к организации и проведению дезинсекционных мероприятий против синантропных членистоногих.

5. Методические указания МУ 2.1.7 730-99 Гигиеническая оценка качества почвы населенных мест.

Методические указания МУ 2.1.7.2657-10 “Энтомологические методы исследования почвы населенных мест на наличие преимагинальных стадий синантропных мух” (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 9 июля 2010 г.)

Текст методических указаний официально опубликован не был

Обзор документа

Разработаны санитарно-энтомологические методы исследования почвы населенных мест на наличие преимагинальных стадий синантропных мух (комнатных, домовых, мясных и др.).

Такие мухи переносят возбудителей инфекционных и паразитарных болезней. Наличие их личинок и куколок в почве прямо указывает на загрязнение почвы, плохую санитарную очистку территории, неправильный сбор отходов, а также их несвоевременное удаление и обезвреживание. В своем развитии мухи проходят 4 стадии: яйцо, личинка, куколка (преимагинальные стадии), окрыленная муха (имаго).

Санитарное состояние почвы систематически обследуется. Из скоплений отходов и поверхности вокруг них отбираются пробы. В средней полосе России потенциальные места выплода мух осматриваются раз в 10-15 суток (с мая по сентябрь), в южных регионах - регулярно (с апреля по октябрь). Пробы отбираются выборочно лопатой (шпателем).

Точным является метод взятия проб в кювету и подсчет личинок (куколок) в среднем на сосуд объемом 20х15 см либо на поллитровую банку. Дважды в сезон активности мух массово обследуют потенциальные места их выплода. При этом количество объектов увеличивается в 3-5 раз.

Методические указания вводятся в действие с 9 июля 2010 г.