Иммунохимический анализ на лямблии

Иммуноферментный анализ (ИФА) — метод лабораторной диагностики, позволяющий обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях.

ИФА — один из самых распространенных и точных методов для выявления инфекций, передающихся половым путем, в частности ВИЧ, ВПЧ, гепатита В.

Для того чтобы результаты анализов были максимально достоверными, необходимо правильно подготовиться к их сдаче.

Спецпредложения, скидки и акции помогут существенно сэкономить на медицинском обследовании.

Контроль качества лабораторных исследований, осуществляемый по международным стандартам, — дополнительная гарантия точности результатов анализов.

Современная диагностика в медицине немыслима без высокочувствительных лабораторных анализов. Прежде для установления причин тех или иных симптомов врачи были вынуждены ориентироваться на косвенные признаки болезни, а также проводить многоступенчатые микроскопические исследования в попытке обнаружить возбудителя инфекции. Сегодня достаточно одного-единственного теста — такого как иммуноферментный анализ — чтобы подтвердить или опровергнуть первоначальный диагноз.

Основные понятия и принцип метода иммуноферментного анализа

Существует несколько разновидностей антител, каждая из которых вступает в действие на определенном этапе иммунного ответа. Так, первыми в ответ на проникновение антигена в организм синтезируются иммуноглобулины класса М (IgM). Содержание этих антител наиболее высоко в первые дни инфекционного процесса.

Следом за ними иммунная система выбрасывает в кровь иммуноглобулины класса G (IgG), которые помогают уничтожать антигены до полной победы над инфекцией, а также продолжают циркулировать по сосудам в дальнейшем, обеспечивая иммунитет к повторному заражению. На этом явлении основана вакцинация: благодаря прививкам, содержащим ослабленные антигены микробов и вирусов, в нашей крови появляется большое количество IgG, которые при контакте с реальной угрозой быстро подавляют инфекцию — до того, как она нанесет вред здоровью.

Как узнать, какие именно антигены или антитела присутствуют в организме человека? Когда врач предполагает, что причиной заболевания является определенная инфекция, или желает измерить концентрацию определенного гормона, он назначает пациенту иммуноферментный анализ.

ИФА бывает качественным и количественным. В первом случае подразумевается однозначный ответ: искомое вещество или найдено, или не найдено в образце. В случае с количественным анализом более сложная цепь реакций дает возможность оценить концентрацию антител в крови человека, что в сравнении с результатами предыдущих тестов даст ответ на вопрос о том, как развивается инфекционный процесс.

Бесспорные преимущества ИФА — высокая чувствительность и специфичность метода. Чувствительность — это возможность распознать искомое вещество, даже если его концентрация в образце невысока. Специфичность же подразумевает безошибочность диагностики: если результат положительный, значит, найдены именно те антитело или антиген, которые предполагались, а не какие-то другие.

Высокая степень технологичности проведения иммуноферментного анализа минимизирует влияние человеческого фактора, что снижает вероятность ошибки. Большинство используемых в современных лабораториях тест-систем и реактивов для ИФА выпускаются в промышленных условиях, что гарантирует точный результат.

В случае диагностики инфекционных заболеваний иммуноферментный анализ не может найти возбудителя и определить его специфичные свойства: он лишь указывает на наличие антител в крови у больного, косвенно свидетельствующих о присутствии чужеродного микроорганизма в теле человека.

ИФА — крайне точный, но не дешевый метод, поэтому обращаться к нему нужно с умом, а интерпретацией результатов должен заниматься квалифицированный врач.

Невозможно охватить полный список показаний к проведению ИФА. Вот наиболее распространенные цели анализа:

1. Диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний:
   • IgM и IgG к вирусным гепатитам А, B, C, E, а также антигенов гепатитов В и С;
   • IgG к ВИЧ;
   • Ig M и IgG к цитомегаловирусной инфекции;
   • Ig M и IgG к вирусу Эпштейна-Барр;
   • Ig M и IgG к герпетическим инфекциям;
   • Ig M и IgG к токсоплазмозу;
   • Ig M и IgG к кори, краснухе, сальмонеллезу, дизентерии, клещевому энцефалиту и другим заболеваниям;
   • IgG к паразитарным заболеваниям;
   • Ig M и IgG к инфекциям, передающимся половым путем;
   • IgG к хеликобактерной инфекции.
2. Общая оценка показателей иммунитета человека и маркёров некоторых аутоиммунных заболеваний.
3. Выявление онкологических маркёров (фактора некроза опухоли, простатспецифического антигена, раково-эмбрионального антигена и других).
4. Определение содержания гормонов в сыворотке крови (прогестерона, пролактина, тестостерона, тиреотропного гормона и других).

Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.

Для того чтобы избежать искажений в результатах, рекомендуется сдавать кровь натощак, а за две недели до исследования (если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний) необходимо отказаться от приема антибиотиков и противовирусных препаратов.

При наличии необходимых реактивов и хорошей организации работы лаборатории результат анализа вы получите в течение 1–2 суток после забора крови. В некоторых случаях, при необходимости получения экстренного ответа, этот срок может быть сокращен до 2–3 часов.

• IgM — наличие этого класса иммуноглобулинов говорит об остром инфекционном процессе в организме. Отсутствие IgM может говорить как об отсутствии конкретного возбудителя в организме, так и о переходе инфекции в хроническую стадию.
• IgA при отрицательном результате теста на IgM чаще всего свидетельствует о хронической или скрыто протекающей инфекции.
• IgM и IgA (совместное присутствие) — два положительных результата говорят о разгаре острой фазы заболевания.
• IgG говорит либо о хронизации заболевания либо о выздоровлении и выработке иммунитета к инфекционному агенту.

В зависимости от содержания анализа в бланке могут быть представлены данные в виде таблицы с перечислением всех антител или антигенов с пометками об отрицательной или положительной реакции, либо будет указано количественное значение результата (отрицательный, слабоположительный, положительный или резко положительный). Последний вариант определяет, сколько антител содержится в анализируемом образце.

Еще один количественный показатель — индекс авидности антител, выраженный в процентах. Он указывает, сколько времени прошло от начала инфекционного процесса (чем выше индекс — тем больше).

Сегодня выпускаются тысячи видов тест-систем ИФА, позволяющих обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях. Поэтому этот анализ используется практически во всех медицинских отраслях. Диагноз, поставленный с помощью ИФА, — это гарантия назначения адекватной терапии и эффективного лечения заболевания.

Информативность ИФА делает этот анализ важным инструментом в работе многих медицинских центров. Но можно ли доверять такую диагностику государственным лабораториям или лучше самим выбрать, где провести такое исследование?

Информация об исследовании

Лямблиоз (суммарные АТ) - широко распространённое протозойно-паразитарное заболевание, обусловленное инвазией лямблий. Заражение происходит через рот при попадании в организм пищевых продуктов или воды, загрязнённых лямблиями. Воротами инфекции являются верхние отделы тонкой кишки. В настоящее время установлено, что для развития лямблиоза достаточно заглотить несколько (до 10) цист. В организме хозяина они размножаются в огромных количествах (на 1 см слизистой оболочки кишки может находиться до 1 млн. лямблий и более). Инвазированные лямблиями лица могут выделять с испражнениями до 18 млрд. цист в течение суток. Лямблии являются строгими паразитами, они не могут питаться пищевыми частицами. Вегетативные формы могут существовать только на поверхности слизистой оболочки верхнего отдела тонкой кишки, механически блокируют слизистую оболочку тонкой кишки, нарушая пристеночное пищеварение, повреждают двигательную активность тонкой кишки. Диагностика традиционными методами, основанными на обнаружении цист возбудителя в образцах кала или дуоденального содержимого, часто затруднена, особенно у детей. В связи с этим серологическая диагностика лямблиоза с определением специфических иммуноглобулинов классов А, G и М к лямблиям, появляющихся в крови у инфицированных пациентов нашла широкое применение.

Антитела к Giardia lamblia, возбудителю лямблиоза, – это специфические белки-иммуноглобулины, вырабатываемые иммунной системой в ответ на инфицирование лямблиями и обеспечивающие иммунную защиту.

Большинство эпидемических вспышек лямблиоза носит водный характер. Передача может осуществляться и через пищевые продукты, на которых цисты лямблий сохраняют жизнеспособность от 6 ч до 2 суток. Возможна и передача от человека к человеку. Этот путь инфицирования особенно широко распространен в детских дошкольных учреждениях, где инвазированность лямблиями значительно выше, чем среди взрослых. Клинические проявления лямблиоза во многом обусловлены ухудшением всасывания, особенно жиров и углеводов. Понижается активность ферментов (лактазы, энтеропептидазы и др.), снижается абсорбция витамина B12, нарушается С-витаминный обмен. Это указывает на то, что вещества, продуцируемые лямблиями, прямо или косвенно повреждают структуру микроворсинок тонкой кишки. Возникновение манифестных форм связано с массивностью инвазии, различной вирулентностью отдельных штаммов лямблий, состоянием иммунной системы инвазированных лиц. У большей части пациентов лямблиоз протекает без каких-либоклинических проявлений (латентная форма); клинически выраженные заболевания протекают в виде острой и хронической форм. Инкубационный период продолжается от 1 до 3 недели с момента инфицирования. Заболевание начинается остро, у больного появляется жидкий водянистый стул без примесей слизи и крови. Стул неприятного запаха, на поверхности всплывают примеси жира. Появляются боли в эпигастральной области. Образуется большое количество газа, отмечается отрыжка газом с сероводородным запахом. Отмечаются снижение аппетита, тошнота, может быть рвота, у некоторых больных незначительно повышается температура тела. Острая стадия лямблиоза продолжается 5-7 дней. У большей части проявления болезни исчезают самопроизвольно в течение 1-4 недель. Болезнь может переходить в хроническую форму, протекающую в виде рецидивов, периодически появляется вздутие живота, могут быть боли в эпигастральной области, иногда отмечается разжиженный стул. Хронические формы лямблиоза наблюдаются преимущественно у детей дошкольного возраста. Доказательством лямблиоза является обнаружение лямблий в виде вегетативных форм (в дуоденальном содержимом или в жидком стуле) или цист (в оформленном стуле). При острых формах выделение паразита начинается с 5-7-го дня болезни. При хронических формах лямблиоза цисты выделяются периодически, поэтому для подтверждения диагноза рекомендуется проводить исследования испражнений с интервалом в одну неделю в течение 4-5 недель.

Показания к назначению исследования

1. Диагностика острых и хронических форм лямблиоза;
2. Диагностика бессимптомного паразитоносительства;
3. Дифференциальная диагностика заболеваний со сходной клинической симптоматикой;

Подготовка к исследованию

Кровь рекомендуется сдавать утром, в период с 8 до 11 часов, натощак (между последним приемом пищи и взятием крови должно пройти не менее 8-ми часов, воду можно пить в обычном режиме), накануне исследования легкий ужин с ограничением приема жирной пищи.
За 1-2 часа до сдачи крови воздержаться от курения, не употреблять сок, чай, кофе, можно пить негазированную воду. Исключить физическое напряжение (бег, быстрый подъем по лестнице), эмоциональное возбуждение. За 15 минут до сдачи крови рекомендуется отдохнуть, успокоиться.

ДN1103 RIDA Quick Лямблии, экспресс-тест, опред. в кале (R-Biopharm AG), пипетки

N1103 RIDA Quick Лямблии, экспресс-тест, опред. в кале (R-Biopharm AG), тестовые устройства

N1103 RIDA Quick Лямблии, экспресс-тест, опред. в кале (R-Biopharm AG), буфер для экстракции

Назначение и особенности

Тест предназначен для быстрого качественного определения антигенов Giardia lamblia в образцах кала человека с целью диагностики лямблиоза.

Введение

Giardia lamblia – жгутиковое простейшее, вызывающее после проглатывания цист поражение тонкого кишечника. Из-за повсеместного распространения этот организм стал считаться одной из основных причин хронической диареи, а также диареи путешественников. Заражение происходит при заглатывании цист Giardia lamblia с водой или пищей, загрязненными фекалиями. В Соединенных Штатах Giardia lamblia – является наиболее часто выявляемым возбудителем во время вспышек диареи, обуслолвенных загрязненной водой. В развивающихся странах Giardia являются одной из наиболее частых причин заболеваемости у детей младше 10 лет, с частотой заболеваемости около 15-20 %. Обычно лямблиозы распространены в слоях населения c низким уровнем личной гигиены и передаются орально-фекальным путем. Этот путь передачи наблюдают среди детей в центрах медицинской помощи, среди сексуально активных мужчин-гомосексуалистов (до 19%), а также среди людей, живущих в учреждениях закрытого типа (больница, тюрьма). Заболевание также может передаваться от детей их родителям. У инфицированных детей более старшего возраста заболевание может протек бессимптомно, при этом они выделяют во внешнюю среду цисты и могут служить источником заражения других людей. Лямблиоз характеризуется острой или хронической диареей, также может отмечаться асимптоматическая элиминация цист. Инкубационный период составляет от 3 до 42 дней. При острой инфекции наблюдается внезапное начало водянистого кала (частая дефекация, желтоватый, пенистый с неприятным запахом кал и флатуленция), потеря аппетита, рвота, угнетение и снижение веса; кровь, гной и слизь в кале обычно отсутствуют. В прошлом для диагностики лямблиоза чаще всего проводили исследование кала на наличие трофозоитов или цист с помощью микроскопии, которая требует наличие квалифицированного персонала. Кроме того, исследование необходимо проводить длительное время из-за периодического выделения паразита. Альтернативный метод диагностики – иммунохроматографический тест для обнаружения антигенов Giardia lamblia в образцах кала. Метод обладает той же чувствительностью, что и микроскопия, не требует специального обучения персонала лаборатории проведению микробиологических исследований, прост в исполнении, не трудоемок.

Принцип метода

RIDA®Quick Giardia является одностадийным иммунохроматографическим тестом, включающим специфичные к лямблиям антитела с окрашенными латексными частицами и специфичные антитела к патогену, прикрепленные к мембране. Вначале образец кала суспендируют в буфере для экстракции, затем проводят процедуру осаждения. Аликвоту супернатанта образца вносят в окошко тестового стрипа. Если образец содержит антигены, то происходит образование комплекса антигенов с латексными частицами через специфические антитела; этот комплекс при прохождении через мембрану связывается со специфическими антителами, закрепленными в тестовой полосе.

Регистрационное удостоверение

Реклама

Тест-системы для экспресс-диагностики без использования приборов - обзорный буклет (наборы экспресс-тестов Human, R-Biopharm, Standard Diagnostics, Veda.Lab)

Инструкция

(За версией инструкции для конкретного лота диагностического набора/реагента обращайтесь в отдел продукции ЗАО " Аналитика ")

Наша клинико-диагностическая лаборатория оснащена новейшим лабораторным оборудованием:

- автоматический биохимический анализатор AU 480(Beckman Coulter, США);

- автоматический иммунохимический анализатор LIAISON, DiaSorin (Италия);

- автоматический анализатор физико-химических свойств мочи и мочевого осадка Sysmex UX2000;

- гематологический анализатор с дифференцировкой лейкоцитарной формулы по пяти параметрам Sysmex XS-500;

- автоматический анализатор глюкозы/лактата Biosen C-line.

Лабораторные исследования (общеклинические):

♦ Скорость оседания эритроцитов

♦ Подсчет лейкоцитарной формулы

♦ Определение длительности капиллярного кровотечения

♦ Определение времени свертывания капиллярной крови

♦ Определение глюкозы капиллярной крови

♦ Общий анализ мочи

♦ Общий анализ мочи, физические свойства: измерение удельного веса мочи

♦ Определение химических свойств мочи:

♦ Обнаружение белка в моче, качественная реакция

♦ Определение белка в моче, количественный метод

♦ Определение глюкозы в моче, количественный метод

♦ Определение скрытой крови в кале

♦ Обнаружение простейших в кале

♦ Количество клеточных элементов (эритроцитов, лейкоцитов) и цилиндров в моче по методу Нечипоренко

♦ Количество и удельный вес мочи, выделенной за сутки в определенные промежутки времени по методу Зимницкого

♦ Общий анализ крови

♦ Обнаружение малярийного плазмодия

♦ Экспресс-диагностика антигена лямблий в кале

Иммунологические исследования:

♦ Определение группы крови

Биохимические исследования

♦ Показатели белкового обмена:

♦ Низкомолекулярные азотистые вещества:

♦ Показатели пигментного обмена:

♦ Показатели углеводного обмена:

♦ Показатели минерального обмена:

• хлориды
• железо
• фосфор неорганический (сыворотка крови, суточная моча)
• кальций (сыворотка крови, суточная моча)
• магний
• натрий
• калий

♦ Показатели липидного обмена:

♦ Показатели обмена ферментов:

• АЛТ
• ACT
• альфа-амилаза
• щелочная фосфатаза
• гамма-глутамилтранспептидаза
• креатинкиназа
• лактатдегидрогеназа

♦ Специфические белки "острой" фазы и маркеры воспаления:

• С-реактивный белок
• ревматоидный фактор
• антистрептолизин О

♦ Белки, участвующие в обмене железа:

Иммунохимические исследования:

♦ Гормоны щитовидной железы:

• ТSН (тиреотропный гормон)
• FT4 (тироксин свободный)
• АТ-ТРО (антитела к тиреопероксидазе)

Длительность обработки анализов : анализы готовы на следующий день!

Основные требования к подготовке пациента перед процедурой сдачи анализов

• Для большинства исследований (биохимических, гормональных, гематологических) кровь берут строго натощак, т.е. когда между последним приемом пищи и взятием крови проходит не менее 8 часов (желательно не менее 12 ч). Сок, чай, кофе, тем более с сахаром, - тоже еда, это необходимо помнить. Можно пить воду.
• За 1-2 дня до обследования желательно исключить из рациона жирное, жареное и
  алкоголь. За 1 час до взятия крови нужно воздержаться от курения.
• Перед сдачей крови исключаются физическое напряжение и эмоциональное возбуждение, следует отдохнуть в течение 10-15 минут, успокоиться.
• Кровь не следует сдавать сразу после рентгенологического, ультразвукового исследований, массажа, рефлексотерапии или физиотерапевтических процедур.
• В разных лабораториях могут применяться разные методы исследования и единицы измерения показателей. Для правильной оценки и сравнения результатов лабораторных исследований рекомендуется осуществлять их в одной и той же лаборатории, в одно и то же время.
• Кровь на анализ сдают до начала приема лекарственных препаратов или не ранее чем через 10-14 дней после их отмены. Для оценки контроля эффективности лечения любыми препаратами целесообразно исследовать кровь спустя 14-21 день после последнего приема препарата. При приеме лекарств необходимо учитывать их влияние на показатели.

Общий анализ крови (гемоглобин, эритроциты, лейкоциты, тромбоциты, СОЭ, лейкоцитарная формула)

Кровь желательно брать утром натощак. Перед сдачей общего анализа крови последний прием пищи должен быть не ранее, чем за 3 часа до забора крови. Однако при необходимости анализ крови может быть произведен в любое время суток.

Биохимический анализ крови

Для определения липидного спектра (холестерин, липопротеиды, триглицериды) кровь берут после 12-14-часового голодания. Для определения уровня мочевой кислоты в предшествующие исследованию дни необходимо соблюдать диету: отказаться от употребления богатой пуринами пищи (печень, почки), максимально ограничить в рационе мясо, рыбу, кофе, чай. Противопоказаны интенсивные физические нагрузки.

Исследование гормонов щитовидной железы

Сдача крови проводится натощак (желательно в утренние часы; при отсутствии такой возможности - спустя 4-5 часов после последнего приема пищи в дневные и вечерние часы). Исключить продукты с высоким содержанием жиров.

Общий анализ мочи

До взятия мочи проводится предварительный туалет наружных половых органов.

. Нельзя собирать мочу во время менструации.

Используют всю первую утреннюю порцию мочи (нужно, чтобы предыдущее мочеиспускание было не позже, чем в 2 часа ночи). Сбор проводят в чистую, сухую посуду или в специальный контейнер. Нельзя брать мочу из горшка. Собранную мочу доставляют в лабораторию сразу! Допускается хранение мочи в холодильнике (при 2-4 ˚С), но не более 1,5 ч.

Сбор суточной мочи (микроальбумин, кальций, фосфор)

Моча собирается в течение 24 часов при обычном питьевом режиме (около 1,5 литров в сутки). В 6-8 часов утра освобождается мочевой пузырь (эта порция мочи выливается), а затем в течение суток собирается вся моча в чистый сосуд из темного стекла с крышкой емкостью не менее 2 литров. Последняя порция берется точно в то же время, когда был начат сбор (время начала и конца сбора отмечают). Емкость с мочой хранят в прохладном месте (оптимально в холодильнике на нижней полке при 4-8 С), не допуская замерзания. По окончании сбора измеряют объем мочи, мочу перемешивают и отливают 50-100 мл в контейнер. . Указать объем суточной мочи.

Исследование мочи по Нечипоренко

Сразу после сна (натощак) собирают среднюю порцию утренней мочи при свободном мочеиспускании. Сбор проводят в чистую, сухую посуду или в специальный контейнер. Собранную среднюю порцию мочи (20-25 мл) сразу доставляют в лабораторию. Допускается хранение мочи в холодильнике (при 2-4 С), но не более 1,5 ч.

Исследование мочи по Зимницкому

После опорожнения мочевого пузыря в 6 часов утра собирают 8 порций мочи через каждые 3 часа (на каждой порции указывают время сбора), при произвольном мочеиспускании и водном режиме не более 1500 мл/сутки с определением объема мочи каждой порции. При проведении пробы учитывается количество выпитой жидкости за сутки. Все собранное количество мочи в 8 сосудах доставляется в лабораторию.

Исследование кала

Для исследования на яйца гельминтов, обнаружения простейших кал собирают в стерильный контейнер и доставляют в лабораторию в течение 3 часов после сбора.

Для копрологического исследования в пластиковый контейнер объемом 30-40 мл помещают кал и доставляют в течение 5-6 часов в лабораторию.

Исследование кала на скрытую кровь

За 3 дня до сдачи анализа исключить из рациона красное мясо, печень и продукты, содержащие железо (яблоки, шпинат, огурцы, зеленый лук, белую фасоль).

Исследование соскоба на энтеробиоз

Исследование проводится утром, до проведения гигиенических процедур, мочеиспускания и дефекации.

Учреждение предлагает широкий спектр лабораторных исследований для детей и взрослых на платной основе.

Владельцы патента RU 2246115:

Изобретение относится к области медицины, а именно к паразитологии, и предназначено для диагностики лямблиоза и его течения. Проводят иммуноферментный анализ. Определяют диагностическую оптическую плотность и оптическую плотность меченого иммунного комплекса в лунке планшета с исследуемой сывороткой, измеряемых в условных единицах при длине волны 492 нанометра. Рассчитывают коэффициент концентрации антител, измеряемый в условных единицах, по формуле: ККА = (ОПиссл - ОПд) х 100, где ККА - коэффициент концентрации антител, ОПиссл - оптическая плотность лунки с исследуемой сывороткой, ОПд - диагностическое значение оптической плотности, 100 – коэффициент разведения сыворотки. По значению ККА определяют титр антител к антигенам Lamblia intestinalis и интерпретируют результаты исследования. Способ позволяет повысить точность диагностики лямблиоза и проследить динамику течения заболевания. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, в частности к паразитологии.

Лямблиоз является повсеместно распространенной инвазией. В Российской Федерации ежегодно регистрируется около 110000 случаев лямблиоза, из которых 80% составляют дети до 14 лет. В этиологической структуре диарей на долю лямблиоза приходится от 3% до 8% случаев. Доказана роль Lamblia intestinalis в аллергизации организма, развитии дуоденоеюнитов, кроме этого лямблиоз является инвазией, сопутствующей широкому спектру заболеваний желудочно-кишечного тракта: хроническому гастродуодениту в 76,5%, панкреатиту - 15,7%, энтероколиту - 4,0%, рефлюкс-эзофагиту - 3,8% случаев.

В качестве аналога авторы предлагают микроскопический способ диагностики лямблиоза (Клиническая лабораторная аналитика. Том II. Частные аналитические технологии в клинической лаборатории / Под ред. В.В.Меньшикова. - М.: Лабинформ-РАМЛД, 1999. - 352 с.). Из исследуемого материала (фекалии) готовят два нативных препарата под покровными стеклами. Один из препаратов окрашивают раствором Люголя. Микроскопию препаратов проводят с сухой системой большого увеличения. В неокрашенном препарате выявляют подвижные вегетативные стадии лямблий, в окрашенном препарате - цисты простейших.

К недостаткам микроскопического способа диагностики лямблиоза можно отнести недооценку периодичности выделения лямблий с фекалиями, зависимость наличия различных форм возбудителя от консистенции стула. В связи с этим эффективность микроскопического способа является недостаточно высокой, а сроки диагностики - продолжительными, так как для подтверждения отрицательных результатов необходимо микроскопическое исследование фекалий с интервалом в 1 неделю в течение 4-5 недель.

Прототипом заявляемого способа, по мнению авторов, является способ определения антител к антигенам лямблий методом ИФА с использованием тест-системы “Лямблия-АТ-стрип” (ЗАО “Вектор-Бест”, Новосибирская обл., п.Кольцово). Способ заключается в обнаружении в сыворотке крови антител к антигенам Lamblia intestinalis. В ходе исследования при взаимодействии исследуемых образцов сывороток крови (разведение 1:100) в лунках планшеты с иммобилизованными антигенами лямблий происходит связывание специфических антител и образование комплекса “антиген-антитело” на поверхности лунок. После удаления не связавшихся компонентов сыворотки и добавления в лунки планшета конъюгата антител против иммуноглобулинов человека с пероксидазой хрена происходит включение ферментной метки в иммунный комплекс. В результате ферментативной реакции, проведенной в лунках, отмытых от избытка конъюгата, с субстратным раствором для пероксидазы, содержащим перекись водорода и ортофенилендиамин, образуется окрашенный продукт, оптическая плотность которого пропорциональна концентрации антител в анализируемом образце сыворотки к антигенам лямблий. Оптическую плотность (ОП) меченого иммунного комплекса в лунках планшеты регистрируют с помощью анализатора колориметрического иммуноферментного при длине волны 492 нм. В планшете кроме рабочих лунок, в которые вносят исследуемые сыворотки, ставят контроли: в 2 лунки вносят положительный контрольный образец, в 2 лунки - отрицательный контрольный образец, в 2 лунки (контроль конъюгата) - раствор для разведения сывороток. Последующее проведение реакции в контрольных лунках не отличается от такового в рабочих лунках. Оценку результатов проводят только в том случае, если средние показатели ОП контроля конъюгата не превышает значения 0,2; ОП в лунках с контрольным отрицательным образцом (ОП К - ) не более значения 0,3; а ОП в лунках с контрольным положительным образцом имеет значение не ниже 0,8. Диагностическая ОП (ОП_д) вычисляется по формуле: ОП_д=1,48×ОП К - +0,04. Результат ИФА расценивается как положительный, если ОП меченого иммунного комплекса в лунке, в которой использовалась исследуемая сыворотка (ОП_иссл.) в разведении 1:100, равна или больше диагностической ОП (ОП_д). Поскольку ошибка метода ИФА составляет 10-15% при значении ОП_иссл. меньше на 15%, чем ОП_д, результат считают сомнительным и проводят повторное исследование.

К недостаткам прототипного способа диагностики лямблиоза относится определение только факта наличия антител к антигенам лямблий (в одном разведении 1:100) - то есть лишь качественный способ учета результатов ИФА, но не исследуется количество специфических антител (их титр). Очевидный в данной ситуации подход - исследование исследуемой сыворотки не в одном, а в нескольких разведениях, например от 1:100 до 1:3200 с двукратными разведениями, увеличивает стоимость анализа кратно количеству разведений. В связи с отсутствием количественных данных при прототипном способе отсутствует возможность оценки выраженности иммунного ответа на возбудитель, динамики течения заболевания. Кроме этого невозможно оценить эффективность выбранного химиопрепарата и терапии заболевания в целом.

Авторы предлагают следующий способ диагностики и течения лямблиоза. Постановка ИФА на наличие антител в сыворотке крови к антигенам лямблий с применением тест-системы “Лямблия-АТ-стрип” проводится аналогично прототипу. ОП измеряется при той же длине волны. Расчет ОП_д проводится по вышеуказанной формуле. Однако для учета результата исследования вычисляется разница между ОП_иссл. и ОП_д, которая умножается на 100, с целью получения значения показателя концентрации антител к антигенам лямблий, который авторы предлагают назвать коэффициентом концентрации антител (ККА). Значение ККА является пропорциональным концентрации специфических антител в сыворотке крови. ККА рассчитывается по формуле ККА=(ОП_иссл.-ОП_д)×100, где 100 - коэффициент разведения сыворотки.

Наряду с определением коэффициента концентрации антител (качественная реакция в одном разведении - 1:100) при исследовании сывороток крови на наличие антител к антигенам лямблий с применением тест-системы “Лямблия-АТ-стрип” авторы проводили и определение титра данных антител (количественное исследование). Указанные параллельные исследования проведены на 150 образцах сывороток крови больных с жалобами со стороны желудочно-кишечного тракта, аллергическими заболеваниями и косвенными признаками лямблиоза. Контрольную группу составили образцы крови 30 практически здоровых людей. Образцы крови у обследуемых лиц в количестве не менее 0,5 мл забирали из пальца натощак. Сыворотку крови тщательно отделяли от сгустка и примеси эритроцитов. Сыворотки хранили при температуре 6±2°С не более 48 часов до исследования. Обработка результатов исследования проводилась с использованием компьютерной программы статистического анализа Biostat 3.03 (S.A.Glantz, 1997), применялся критерий линейная регрессия и корреляция.

В 94 образцах опытных сывороток крови значение ККА - от 101 до 205 условных единиц и титры антител 1:800-1:3200, результат исследования расценен как положительный; в 24 образцах опытных сывороток крови - значение ККА от 11 до 100 условных единиц и титр антител 1:200-1:400, результат исследования расценен как положительный, так как у пациентов имелись симптомы со стороны желудочно-кишечного тракта, эозинофилия; у 14 человек при ККА от 11 до 100 условных единиц и титре антител 1:200-1:400 результаты исследования расценены как носительство, так как отсутствовали симптомы со стороны желудочно-кишечного тракта и эозинофилия; в 18 образцах опытных сывороток крови получено значение ККА от 6 до 10 условных единиц и титр 1:100, что интерпретировали как сомнительный результат. В контрольной группе во всех образцах сывороток крови значение ККА составляло от 0 до 5 условных единиц, титр антител менее 1:100.

Полученная статистически достоверная зависимость между ККА и титром антител имеет значение для интерпретации результата исследования: отрицательный результат - сомнительный - носительство - положительный результат, что необходимо для лечащего врача.

Предлагаемый способ диагностики и течения лямблиоза экономически выгоден, поскольку при тех же затратах на проведение ИФА в одном разведении сыворотки крови дает количественный результат (титр специфических антител), а не только факт наличия данных антител, что позволяет контролировать эффективность лечения, использовать для диагностики феномен нарастания титра антител в парных сыворотках.

К-ов Павел, 1995 года рождения (история болезни №2512) поступил в терапевтическое отделение областной детской клинической больницы с жалобами на боли в животе, в околопупочной области, вздутие живота, запах изо рта. В анамнезе частые ОРВИ (до двух раз в месяц) с затяжным течением, длительный субфебрилитетом (до 37°С в вечерние часы в течение трех месяцев). При обследовании обнаружено - дефицит массы тела, кожные покровы бледные, с желтушно-цианотичным оттенком, ярко выраженные периорбитальные тени, цианоз носогубного треугольника. Задние шейные лимфоузлы увеличены до 1 см в диаметре, безболезненные, неспаянные с окружающими тканями. Язык густо обложен белым налетом. Живот болезненный в околопупочной области, в правом подреберье и в точке проекции желчного пузыря. Печень выступает из под края реберной дуги на 1 см. Селезенка не пальпируется. При исследовании крови на наличие антител к антигенам лямблий с помощью ИФА с использованием предлагаемого способа получен коэффициент концентрации антител 202 условные единицы, что соответствует титру антител 1:3200 и расценивается как положительный результат. Поставлен диагноз лямблиоз, назначен курс лечения тибералом, желчегонными, ферментными препаратами, фитотерапия. При контрольном исследовании через месяц определен коэффициент концентрации антител 48 условных единиц, что соответствует титру антител 1:200 и было расценено как положительный результат, так как признаки заболевания все еще присутствовали, хотя выражены были слабее - цианоз носогубного треугольника отсутствовал, периорбитальные тени были выражены слабо, задние шейные лимфатические узлы увеличены до 0,3 см в диаметре, температура нормальная, по органам без особенностей, появился аппетит, прибавка в весе 1 килограмм, дефицит массы тела сохраняется. Продолжена терапия желчегонными, ферментными препаратами, фитотерапия. Через два месяца при контрольном исследовании определен коэффициент концентрации антител 5 условных единиц, что соответствует титру антител менее 1:100 и было расценено как отрицательный результат. Ребенок жалоб не предъявлял, кожные покровы нормальной окраски, лимфатические узлы не пальпировались, по органам без особенностей, прибавка в весе 3 килограмма. Таким образом, при предлагаемом способе диагностики и течения лямблиоза несмотря на положительный лабораторный результат исследования на наличие антител к антигенам лямблий после курса лечения тибералом была продолжена патогенетическая терапия без применения антипаразитарных химиопрепаратов, так как титр антител уменьшился в 16 раз, что говорит об эффективности антимикробной терапии. Контрольное исследование, проведенное через два месяца, подтвердило правильность выбранной врачебной тактики - продолжения патогенетической терапии без дополнительного назначения химиопрепаратов, обладающих известными побочными эффектами.

Способ диагностики лямблиоза и его течения, включающий проведение иммуноферментного анализа и определение диагностической оптической плотности и оптической плотности меченного иммунного комплекса в лунке планшета с исследуемой сывороткой, измеряемых в условных единицах при длине волны 492 нм, отличающийся тем, что рассчитывают коэффициент концентрации антител, измеряемый в условных единицах, по формуле: ККА = (ОПиссл - ОПд)×100, где ККА - коэффициент концентрации антител, ОПиссл - оптическая плотность лунки с исследуемой сывороткой, ОПд - диагностическое значение оптической плотности, 100 – коэффициент разведения сыворотки; и по значению ККА определяют титр антител к антигенам Lamblia intestinalis и интерпретируют результаты исследования: значению ККА от 0 до 5 условных единиц соответствует титр антител менее 1:100 и результат исследования расценивают как отрицательный, значению ККА от 6 до 10 условных единиц соответствует титр антител 1:100 и результат исследования считают сомнительным, значениям ККА от 11 до 50 условных единиц и от 51 до 100 условных единиц соответствуют титры антител 1:200 и 1:400 соответственно, и результат исследования расценивают как положительный с диагнозом лямблиоз при наличии симптомов со стороны желудочно-кишечного тракта и эозинофилии или как носительство лямблий при их отсутствии, значениям ККА от 101 до 135 условных единиц, от 136 до 170 условных единиц и от 171 до 205 условных единиц соответствуют титры антител 1:800, 1:1600 и 1:3200 соответственно, и результат исследования считают положительным.