Титр антител в крови к коронавирусу

Срок исполнения

Исследуемый материал

Метод определения

ОПИСАНИЕ

Инфекционный перитонит кошек (ИПК, Feline infectious peritonitis, FIP) — чрезвычайно тяжелая форма течения коронавирусной инфекции, получившая свое название наиболее часто встречающегося клинического проявления: воспаления брюшной полости (перитонита). Возбудитель данной инфекции — вирус порядка Nidovirales семейства Coronaviridae рода Coronavirus вида Felinae Coronavirus (FCoV). В эту группу входят также таксономически близкие коронавирусы: вирус трансмиссивного гастроэнтерита свиней (ВТГС, TGEV) и коронавирус собак (CCV).
Болеют кошки всех возрастов, но наиболее чувствительны к заболеванию молодые животные в возрасте до 2 лет, а также взрослые старше 10 лет. Количество зарегистрированных случаев ИПК не зависит от времени года (не наблюдается сезонности заболевания), соотношение по полу больных животных существенно не отличается (болеют как коты, так и кошки), особой чувствительностью к инфекции обладают кошки британской породы голубого и серого окраса. Не отмечено устойчивости к инфекции у беспородных животных.
Клинически болезнь проявляется в двух формах: влажной (инфузионной), сопровождающейся скоплением экссудата в брюшной и/или плевральной полостях, и сухой (неинфузионной), проявляющейся в гранулематозном поражении внутренних, преимущественно паренхиматозных органов и не сопровождающейся накоплением экссудата в полостях тела. Инфузионный ИПК считается классической формой проявления и составляет приблизительно 75% клинических случаев. ИПК может иметь длительный инкубационный период (от одной недели до полугода), во время которого клинические признаки не наблюдаются. Кроме того, существует скрытая форма заболевания, при которой возможно выделение вируса во внешнюю среду.
Передача вируса от больных животных происходит вертикально (трансплацентарно), либо горизонтально (контактно от животного к животному или через предметы ухода).
Первоначально коронавирус попадает в ротовую или носовую полость, где в фарингеальных эпителиальных клетках происходит первичная репликация вируса. Затем вирус проникает в клетки столбчатого эпителия кишечника — основное место его размножения и персистенции. При таком варианте заражения инфекция может протекать бессимптомно или проявляться в виде энтерита, легкого недомогания, диареи, снижения аппетита и не представляет опасности для жизни животного. Кошки с персистирующей коронавирусной инфекцией являются основным источником вируса, выделение которого может происходить со слюной, мочой, но основное количество выделяется с калом.
Однако в некоторых случаях коронавирус приобретает способность поражать моноциты и макрофаги, и тогда инфекционный процесс формируется совершенно по другому пути, приводящему к развитию ИПК. После попадания в макрофаги, вирус разносится по всему организму. Пораженные макрофаги скапливаются под серозной оболочкой стенок кровеносных сосудов, вызывая системный васкулит, что приводит к повышению проницаемости сосудов и скоплению выступающей жидкости (выпота) в полостях тела (инфузионная форма ИПК). В случае незначительного поражения кровеносных сосудов паренхиматозных органов (печени, селезенки, легких, брыжеечных лимфатических узлов, стенок кишечника, поджелудочной железы, увеального глазного тракта) происходит образование отдельных пиогранулем (гранулематозная, сухая форма ИПК). Обе формы заболевания могут привести к смерти животного.
Изменение тропности коронавируса и поражение макрофагов — ключевого компонента в системе иммунной защиты организма — является основной причиной, обуславливающей тяжесть заболевания ИПК. Заражение макрофагов приводит к так называемому антителозависимому усилению инфекции. Поскольку макрофаги, содержащие вирус, не экспрессируют вирусные антигены на поверхности, то специфические антикоронавирусные антитела (АТ) не узнают инфицированные вирусом клетки. В то же время, сывороточные иммунные комплексы АТ с вирусом продолжают распространять вирус в организме и инфицировать макрофаги. Таким образом, наличие АТ не только не защищает, но и, напротив, способствует развитию ИПК.
Сложность серологической диагностики ИПК связана с тем, что большой процент здоровых кошек имеют АТ против коронавирусов: 20–60% среди домашних животных и до 100% у животных из приютов или питомников.
Установлено, что тяжесть клинических проявлений при ИПК имеет прямую корреляцию с величиной титра АТ к возбудителю заболевания. Другими словами, важен не сам факт наличия в сыворотке крови АТ к коронавирусу, а высокий уровень титров с тенденцией к быстрому нарастанию. Однако, необходимо помнить, что некоторые кошки, которые будут иметь клиническое проявление ИПК и не будут иметь АТ к возбудителю.
Широкое применение находит иммуноферментный анализ (ИФА) для определения точной величины титра АТ к вирусу ИПК.
Метод основан на взаимодействии иммобилизованного в лунках планшета антигена коронавируса со специфическими антителами из исследуемой пробы сыворотки и последующем выявлении полученного комплекса конъюгатом (меченными пероксидазой хрена специфическими антителами к IgG кошки). Связанная пероксидаза вызывает разложение находящейся в растворе перекиси водорода и окисление хромогена. В лунках развивается окраска, интенсивность которой прямо пропорциональна количеству антител в определяемой пробе.
Для уточнения диагноза проводят повторные исследования клинического материала с интервалом 2–4 недели. Снижение или увеличение титра АТ напрямую связано с течением инфекционного процесса.
Диагностика инфекционного перитонита должна осуществляться комплексно, с учетом клинических признаков и результатов серологических и других видов исследований.

ПРЕАНАЛИТИКА

Для исследования методом тИФА (твердофазный иммуноферментный анализ) основным биоматериалом является сыворотка крови кошек. Образец стабилен 5 дней при температуре +2С…+8С. Гемолиз и хилез сыворотки (++++) может стать препятствием для проведения исследования.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ (РАСШИФРОВКА АНАЛИЗОВ)

Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

РЕЗУЛЬТАТ ИССЛЕДОВАНИЯ

Многие здоровые кошки и кошки с другими болезнями имеют антитела к коронавирусу. Обнаружение только антител к коронавирусу НЕ является диагностическим критерием ИПК. Диагноз Инфекционный перитонит кошек ставится комплексно.

Антитела в исследуемом образце (сыворотка крови) не обнаружены.
Диагноз ИПК (инфекционный перитонит кошек) ставится комплексно. На основании только данного исследования подтвердить или опровергнуть ИПК невозможно, так как в редких случаях антитела могут не обнаруживаться .

Титры коронавируса у кошек

Результат свидетельствует об обнаружении антител в исследуемом. Данный титр следует считать фоновым, свидетельствующем о контакте кошки с энтеральным штаммом коронавируса.
Диагноз ИПК (инфекционный перитонит кошек) ставится комплексно. На основании только данного исследования подтвердить или опровергнуть ИПК невозможно.

Международный коллектив авторов опубликовал на сервере препринтов medRxiv работу, в которой описал метод детекции антител к SARS-CoV-2 с помощью иммуноферментного анализа.

Полученные белки параллельно продуцировали в клетках млекопитающих и насекомых и изучали их способность связываться с вирус-специфическими антителами, полученными из сывороток трех пациентов с различной (от 2 до 20 дней) продолжительностью клинической инфекции. Все пациенты продуцировали антитела классов IgM, IgA и IgG, демонстрируя классический иммунный ответ к белковым антигенам, включающим иммунитет на слизистых оболочках. Вместе с тем, характер распределения подклассов IgG отличался от спектра IgG при гриппозной инфекции: при SARS-CoV2 доминировали IgG3, тогда как при гриппе наибольшие титры характерны для IgG1. Полноразмерные антигены закономерно обуславливали более высокий уровень сигнала благодаря наличию большего числа эпитопов.

Для валидации метода авторы исследовали иммунореактивность своих антигенов на образцах сыворотки, собранных в США до начала эпидемии COVID-19 и как содержавших, так и не содержавших антитела к другим вирусам. Во всех случаях, включая сыворотки, полученные от инфицированного достаточно близкородственным коронавирусом NL63, результат был отрицательным, что говорит о высокой специфичности тестирования.

Для чего нужно серологическое исследование образцов при COVID-19? Методы быстрой диагностики инфекционных агентов в настоящее время практически целиком базируются на ПЦР. Это высокоскоростной (2-5 часов) и высокочувствительный метод: в хорошо отработанном диагностическом наборе чувствительность может достигать нескольких молекул на образец, а новые методики, например, капельная цифровая ПЦР, позволяют обнаруживать и одну молекулу. Большинство тест-систем для детекции нового коронавируса — а их создано уже немало, списки см., например, здесь и здесь — основаны на ПЦР (как вариант, на изотермической амплификации нуклеиновых кислот).

Методом ПЦР можно идентифицировать, однако, только патоген в активной фазе инфекции. У переболевших вирусные нуклеиновые кислоты обнаружить невозможно: иммунная система уже очистила организм от вируса. Вместе с тем диагностика ранее инфицированных имеет огромное значение: у части заразившихся инфекции протекают в стертой или бессимптомной форме. Насколько велика доля таких людей среди всех инфицированных, остается неизвестным до тех пор, пока не становится доступен ретроградный анализ. При этом бессимптомные инфицированные могут быть столь же заразными, сколь и пациенты с выраженной симптоматикой. Отсутствие данных о бессимптомных случаях осложняет эпидемическую ситуацию, искажает картину распространения вируса и данные о смертности от инфекции.

Наиболее эффективный инструмент ретроанализа инфекции — определение антител в крови пациента. Вирус-специфические антитела циркулируют в организме спустя месяцы после элиминации патогена. (Процесс индукции значительных титров антител к патогену принято называть сероконверсией.)

Таким образом, серологические тесты на SARS-CoV-2 (как, например, разработка британской компании Biopanda) дополняют тест-системы на основе ПЦР. Изучение антител к SARS-CoV-2 не только позволит выявить переболевших в скрытой форме или ответить на вопрос, насколько эффективен иммунный ответ к вирусу. Не исключено использование теста для выявления гипериммунных выздоровевших с целью использования антител из донорской крови, нейтрализующих вирус.Авторы напоминают об успешном использовании в Китае для лечения инфицированных SARS-CoV-2 сыворотки выздоровевших пациентов (см. об этом на PCR.news). При этом высоки риски побочных эффектов и инфекции другими вирусами, такими как ВИЧ, гепатит С, вирус Эпштейна - Барр и цитомегаловирус, однако при критическом сосстоянии пациентов и в отсутствии альтернативы метод все еще применяется.

Кроме того, при испытаниях прототипа вакцины детекция антител позволяет оценить его эффективность. Фрагмент белка оболочки вируса, связывающий ACE2, может быть использован в качестве аффинной ловушки для получения B-лимфоцитов, потенциально вырабатывающих моноклональные антитела против вируса; это путь к созданию препаратов, блокирующих инфекцию SARS-CoV2.

Они реагируют на все коронавирусные инфекции, не узнавая COVID-19

17.04.2020 в 17:32, просмотров: 15348

Сегодня многие с нетерпением ждут появления тестов на антитела к COVID-19 и начала массовых исследований, которые позволят понять истинные масштабы распространения эпидемии коронавируса и количество иммунной прослойки. В некоторых странах мира такие исследования уже начались.

Однако известный немецкий вирусолог, профессор Кирстен Дростен, который руководит отделением вирусологии берлинской университетской клиники Charite, заявил, что надежды могут оказаться призрачными: есть вероятность, что тестирование будет выявлять всех, кто переносил любые коронавирусные инфекции, не связанные с COVID-19. Чтобы результаты были точными, требуются дополнительные контрольные тесты.

Сегодня профессора Кирстена Дростена, который руководит отделением вирусологии берлинской университетской клиники Charite, считают одним из самых популярных в Германии экспертов по коронавирусу. Группа ученых под его руководством занимается разработкой различных тест-систем. В одной из своих последних лекций профессор Дростен выразил серьезные сомнения по поводу эффективности тестирования на антитела к COVID-19 – по его данным, тестирование может выявлять всех, кто болел другими коронавирусными инфекциями.

Небольшой ликбез: после перенесенной вирусной инфекции в крови сначала появляются ранние антитела IgM, а через какое-то время – поздние антитела к вирусу IgG. Антитела класса IgM сохраняются от шести недель до двух месяцев (в редких случаях - до полугода), в зависимости от инфекции.

Антитела класса IgG остаются надолго, а при многих инфекционных заболеваниях всю жизнь, и их наличие к какому-то возбудителю в крови указывает на то, что человек встречался с ним. Например, при коронавирусах SARS и MERS известно, что они сохраняются в течение трех-пяти лет.

"У тех, кто болел одним из четырех обычных коронавирусов, есть не только антитела IgG, но и IGM, которые связывают родственные вирусы. Такие антитела сохраняются у человека 6-8 недель после болезни. Это может привести к ложноположительному тесту на антитела к новому коронавирусу.

Мы сделали уже 2000 тестов, и на данный момент, по моему опыту, количество ложноположительных составляет 3-4%. В холодное время года и сезон гриппа процент ложноположительных тестов будет выше. Ложные реакции могут быть вызваны антителами класса IgM или высоким титром антител класса IgG к одному из распространенных простудных коронавирусов", - заявил профессор Дростен.

В Германии, например, было проведено исследование по тестированию на антитела в общине Гангельт, где заболеваемость одна из самых высоких в стране.

Однако после получения положительных результатов там проводили дополнительное исследование - под названием "тест нейтрализации". "Вирус вместе с сывороткой пациента помещают в клеточную культуру и смотрят, продолжает ли он инфицировать клетки. Если у пациента есть антитела против вируса, то они помешают вирусу атаковать клетки. Сегодня наличие антител может быть диагностически доказано лишь в случае, если к тесту на антитела проводят дополнительный тест нейтрализации, который дает положительный результат", - отмечает немецкий вирусолог.

Эксперт лабораторной диагностики, к которому обратился "МК", на условиях анонимности подтвердил, что немецкий профессор абсолютно прав. "Если говорить о конкретной тест-системе, то очень важны ее аналитические характеристики. Например, одна из них – чувствительность.

Если она высокая, это означает, что тест определяет минимальное количество искомого вещества, чтобы дать положительный ответ. Это характеристика крайне важна для тестирования на наличие вируса в крови у инфицированных в данный момент людей, то есть, для ПЦР-диагностики, которую сейчас проводят людям с симптомами коронавируса.

Увы, изначально разработанные у нас тесты обладают невысокой чувствительностью: ученые разрабатывали их, не имея живой культуры вируса, а имея только ее ДНК. Потом нашу систему повезли в Китай, на подтверждение эффективности, китайцы сказали – все ок. Другого варианта проверить ее чувствительность не было.

Но для тестов на антитела большее значение имеет не чувствительность, а специфичность, то есть, способность выявления именно того агента, который мы ищем. Опасения немецкого вирусолога по поводу возможной низкой специфичности тех или иных тест-систем вполне обоснованы.

Существуют четыре коронавируса, которые являются сезонными и которыми мы постоянно инфицируемся в сезон ОРВИ и гриппа. По разным данным, около 20% ОРВИ связаны с коронавирусами, и они совершенно безвредны. Наличие таких коронавирусов и наличие нового коронавируса - это и проблема, и задача для разработчиков тест-систем.

Да, все эти вирусы могут давать перекрестные реакции. Поэтому системы должны быть настолько специфичными, что будут давать ответ только на антитела к ковид. Это сделать очень трудно, но в принципе реально. Проблема специфичности присутствует во многих других инфекциях, но она решается".

Открытым остается и вопрос – означает ли присутствие антител гарантию иммунитета к коронавирусу в будущем. "Являются ли эти антитела защитными, то есть, формируют ли иммунитет, еще не факт, - продолжает эксперт. – Но многое говорит в пользу того, что скорее формируют, чем нет.

Важно еще понимать, какое количество или титр антител является гарантией, что человек больше не заболеет. Ответ на этот вопрос ученые получат уже в ближайшем будущем.

10 апреля в России зарегистрирована своя тест-система на антитела. За ее аналитические характеристики отвечают разработчики, но раз она прошла регистрацию, вероятно, все хорошо. Ибо если тесты будут определять антитела ко всем коронавирусам одновременно, смысла в них и вправду нет".

Тем временем, профессор Дростен развенчал и миф о случаях якобы повторного инфицирования COVID-19, основанный на том, что у выздоровевших пациентов находят наличие вируса.

"Действительно, иногда у выписавшегося из больницы пациента с подтверждённым негативным тестом через несколько дней повторный тест показывает наличие вируса. Свидетельствует ли это о повторном заражении? Нет.

К сожалению, пока недостаточно исследовано поведение вируса в различных выделениях человеческого организма – мазке из гортани, анализе мокроты из лёгких, стуле. Представьте себе бассейн с золотыми рыбками. Вы с завязанными глазами зачерпываете ведром воду из бассейна. Если в бассейне много рыбок, то, скорее всего, они окажутся и в вашем ведре. Но если их мало, то вполне возможно в ведре будет только вода.

То же самое с вирусом. Чем меньше вирусов в организме человека, тем больше шансов, что мы их не обнаружим с помощью теста. Именно так можно объяснить этот феномен. Речь не идёт о повторном инфицировании", - пояснил немецкий вирусолог.

Сразу несколько групп ученых в России и во всем мире ведут разработку максимально точного теста на антитела к новому коронавирусу. Где-то эти тесты уже применяются, в других странах идет процесс их официальной регистрации. Результат такого теста может стать для человека пропуском для выхода из карантина: если вы, сами того не зная, переболели COVID-19, то сможете какое-то время жить и работать без опасений снова подхватить инфекцию.

Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (Food and Drug Administration, FDA) 1 апреля одобрило для применения первый тест такого типа, получение результатов которого занимает всего 15–20 минут. У теста на антитела (можно также встретить название "серологический тест", происходящее от названия науки о свойствах сыворотки крови) может быть несколько применений: он может использоваться в сочетании с "классическими" ПЦР-тестами на коронавирус для более полного анализа, но главное – при достаточной точности его можно использовать в качестве "пропуска" для выхода человека из карантина в условиях продолжающейся пандемии. Наличие антител к 2019-nCoV означает, что на определенный срок их носитель защищен от нового коронавируса собственным иммунитетом.

Так, немецкий Центр по исследованию инфекционных заболеваний уже сообщил, что после тестирования как минимум 100 тысяч человек будет готов выдавать подобные "паспорта" обладателям иммунитета от нового коронавируса. Израиль, как пишут журналисты из этой страны, уже попросил Россию продать наборы для серологических тестов. Здесь обсуждается возможность тотального тестирования жителей религиозного квартала Бней-Брак в Тель-Авиве, оцепленного полицией из-за вспышки коронавируса. Бывший министр здравоохранения России, а ныне глава Федерального медико-биологического агентства Вероника Скворцова утверждает, что российские тесты на антитела к коронавирусу будут готовы уже в ближайшие дни.

Чтобы приблизить создание российского теста на антитела к 2019-nCoV, нужно собрать максимально возможное количество образцов крови людей, переболевших COVID-19. С призывом к таким людям сдать образцы своей крови обратился у себя в фейсбуке Григорий Ефимов, глава лаборатории трансплантационной иммунологии в Национальном медицинском исследовательском центре гематологии Минздрава России. В интервью Радио Свобода Ефимов рассказывает, зачем еще может понадобиться серологический тест на коронавирус; как долго человек может обладать иммунитетом к болезни, которая унесла жизни уже более 100 тысяч человек во всем мире; а также объясняет, почему ему пришлось бросать клич о помощи со сбором крови переболевших в социальных сетях.

– Что такое серологический тест, в частности серологический тест на коронавирус? И чем он отличается от тестов, которые сейчас массово производятся практически во всех странах мира? Как он работает?

– Серологический тест – это тест не на сам вирус, а тест, который выявляет антитела, специфичные к вирусу. Антитела развиваются у тех людей, которые переболели, или через некоторое время после того, как они встречаются с вирусом. Серологический тест обладает тем преимуществом, что хотя он чуть-чуть и запаздывает по времени, зато у него гораздо более высокая специфичность, потому что у подавляющего большинства людей, практически у всех, развивается антительный ответ к вирусу и мы можем достаточно точно сказать, что человек болел именно этой инфекцией. В частности, по данным китайских исследователей, которые наиболее продвинулись в этой области, после 10-го дня показатель антител даже более достоверен, чем выявление самого вируса, потому что у вируса короткое "окно" активной репликации, в которое можно "не попасть" и просто не поймать живого возбудителя в ту пробу, которая отбирается при ПЦР-тесте.

– В некоторых странах уже делают тесты на антитела к коронавирусу: например, в Чехии предлагают на выбор два: подешевле, когда кровь берут из пальца, а результат готов уже через 15 минут, и подороже, когда кровь берут из вены, а результат сообщают через несколько дней. Зачем вы занимаетесь разработкой нового теста на антитела к коронавирусу, если такие тесты уже есть?

– Безусловно, такие тесты в каких-то странах уже появились, в других странах они активно разрабатываются сразу многими группами, в России их разрабатывают несколько групп. Я знаю, что один из тестов, как было заявлено в СМИ, уже вот-вот будет зарегистрирован. Зачем разрабатывать свой, если есть импортные аналоги? Во-первых, рынок сейчас огромен, потому что происходит эпидемия невиданных масштабов, и производителям, конечно, приходится очень быстро перестраиваться, быстро производить эти тесты. Естественно, каждый производитель думает о том, чтобы обеспечить нужды жителей той страны, в которой он работает. Во-вторых, для того чтобы тест применялся в клинической практике, он должен быть зарегистрирован, и подаваться на регистрацию он должен в каждой стране отдельно. То есть производители зарубежных тестов должны иметь достаточные мощности, чтобы поставлять их и в Россию тоже, а во-вторых, они должны иметь достаточную заинтересованность, чтобы подать здесь документы на регистрацию. Думаю, что в ситуации такой остроты и такого уровня эпидемии это не очень вероятный сценарий. Если какие-то западные тесты появятся в доступности в России, это будет очень хорошо, потому что, чем больше тестов, тем больше суммарной информации о том, как устроен иммунный ответ на вирус, и как исследователю, мне, конечно, будет интересно сравнить результаты, потому что разные тесты используют разные вирусные фрагменты в качестве "приманки" для антител из крови пациентов. Любопытно, если окажется, что у каких-то пациентов возникает иммунный ответ на одни вирусные фрагменты, а на другие возникает в меньшей степени или не возникает вообще.

– О том, что у человека, перенесшего коронавирус, появляется иммунитет, сейчас уже можно говорить без всяких сомнений?

– Да, это так. И очевидно, что иммунитет появляется как минимум на какое-то время, как минимум несколько месяцев человек, перенесший коронавирусную инфекцию, может не беспокоиться о том, что он заболеет тем же самым штаммом возбудителя.

– Несколько месяцев – звучит не очень оптимистично. То есть каждые несколько месяцев надо будет проверять, остался ли иммунитет или уже исчез?

– Мы не знаем, как поведет себя конкретно этот вирус и как иммунная система с ним взаимодействует. Есть примеры вирусов, к которым развивается стойкий пожизненный иммунитет, он обеспечивает полную защиту от повторной инфекции, а есть примеры противоположные – как вирусы, которые вызывают простудные заболевания, иммунитет к которым по той или иной причине очень нестойкий, и мы снова и снова заражаемся теми же самыми вирусами. Такие примеры есть и среди коронавирусов. Другое дело, что коронавирусы, которые вызывают частые респираторные инфекции, – это вирусы, которые в эволюционном масштабе уже очень долго живут с людьми, и они научились приспосабливаться к уходу от мести иммунной системы. Если судить по вирусу, который вызывает атипичную пневмонию, SARS, то антитела к нему определялись в течение одного-двух лет после инфекции.

– Какова точность уже существующих на рынке тестов на антитела к коронавирусу и какой точности вы бы хотели добиться?

– Я, к сожалению, не могу судить, у меня нет информации по точности уже существующих тестов. Про точность, которой мы хотим добиться, вопрос тоже достаточно сложный. Мы сейчас используем в качестве положительного контроля сыворотки, которые мы собираем от людей, которые переболели, выздоровели и выписались из больницы, которые имеют высокий титр антител. С их помощью мы оцениваем процент выявляемости, поскольку мы используем только пациентов, у которых был заведомо детектирован РНК нового коронавируса в носоглотке. В качестве отрицательного контроля – поскольку мы не можем знать, что люди, которые не лежали в больнице и которым не был поставлен диагноз, не перенесли инфекцию в какой-то легкой форме – мы используем панель сывороток, которые были заморожены давно, до эпидемии. Люди, ставшие в свое время донорами крови для этих сывороток, тоже могли иметь ранее контакты с коронавирусами, вызывающими частую респираторную инфекцию, но не могли встречать этого конкретного возбудителя. Когда будут результаты по точности и специфичности, мы их, конечно, сделаем публичными.

– Какие антитела появляются в крови и костном мозге человека после заражения коронавирусом? Как быстро это происходит и какой у них срок жизни, сколько есть времени, чтобы успеть их "поймать" и выяснить, болел ли человек, перенес ли он инфекцию?

– Антитела появляются начиная с четвертого дня, и растягивается этот процесс у некоторых больных до 45-го дня, но наиболее часто они появляются в районе 14-го дня. После 28-го дня 95 процентов больных уже серопозитивны, то есть имеют высокий титр антител. Что касается того, как долго они сохраняются, это зависит от конкретного возбудителя, и мы пока не можем ответить на этот вопрос, поскольку пандемия длится не так долго. Как минимум они должны существовать в высоких продуктивных титрах три месяца, что для наших целей выявления является вполне достаточным окном.

– Можно ли положительный результат теста на антитела к коронавирусу использовать как своего рода пропуск в жизнь во время тотального карантина? Ведь если у человека есть иммунитет, он уже не рискует заразиться.

– Я оговорюсь, что отвечу вам как иммунолог, а не как официальное лицо, которое занимается здравоохранением. С моей точки зрения как иммунолога, да: мы предполагаем, что человек, который имеет напряженный иммунитет, высокий титр антител против коронавируса, у которого есть какая-то концентрация Т-лимфоцитов, специфичных к вирусам, не заразится повторно и может более смело контактировать с окружающим миром, чем непереболевшие люди.

– Может ли при этом человек, уже переболевший COVID-19, быть опасным для окружающих в качестве переносчика вируса?

– Из того, что мы сейчас знаем, нет. Недавно было проведено исследование на приматах, обезьян целенаправленно заражали коронавирусом, потом давали им выздороветь, а после выздоровления заражали повторно. Это было, конечно, ограниченное исследование, там было всего несколько животных, но самый тщательный анализ, с аутопсией, не выявил в этих животных никаких следов вируса. То есть пока про какое-то хроническое вирусоносительство и выделение вируса в такой ситуации речь не идет.

– Каким будет тест, над которым вы работаете? Сколько времени займет получение результата? Нужна ли будет для этого лаборатория или результат можно будет получить дома или в обычной клинике?

– Принципиальный подход, который мы используем, может быть в дальнейшем внедрен как в качестве количественного теста, который делается в формате иммуноферментного анализа, так и в качестве быстрого теста, про который вы говорили: это тест-полоска, где достаточно капли крови, чтобы дать ответ – "да" или "нет". Это уже зависит от конкретного производителя. Мы не производители, мы разработчики, мы занимаемся более ранней стадией разработки. Эту разработку можно реализовать и так, и так. Сколько времени занимает анализ? Он будет занимать, наверное, столько же, сколько анализ на антитела к любому другому вирусу, поскольку принцип его действия абсолютно такой же.

– О каком сроке примерно идет речь?

– В коммерческой лаборатории предлагают ответ по антителам к вирусу гепатита в течение срока от 1 до 3 рабочих дней. И это связано, скорее, с логистикой. Сам анализ и получение результата занимают несколько часов.

– Какую еще информацию, кроме того, переболел ли человек коронавирусом, позволяет узнать тест на антитела? Чем эта информация может быть полезна ученым или медикам?

– Во-первых, это позволяет отбирать переболевших пациентов, которые выздоровели, у которых высокая концентрация антител в крови, чтобы они могли быть донорами плазмы, которая может быть использована для лечения тяжелых больных. Такой метод лечения сейчас вроде бы уже начинает применяться и в России, он применялся в Китае и в других странах тоже. Для этого нужно определить, сколько антител есть в крови, и отобрать самых лучших доноров. Второй аспект – изменение динамики прироста антител может быть показателем, прогнозом того, насколько тяжело будет протекать инфекция у того или иного человека. Это важно и для дополнительной диагностики: как я сказал, можно "пропустить" вирус при обычном ПЦР-тесте, но увидеть антитела и понять, что это коронавирусная инфекция, а динамика прироста антител может быть диагностическим фактором.

– Насколько важна массовость такого тестирования во время пандемии? Всемирная организация здравоохранения говорит, что важно тестировать как можно больше людей на сам вирус. Насколько важна массовость серологических тестов во время эпидемии или пандемии?

– Если мы предполагаем, что многие люди уже могли перенести коронавирус без симптомов или в мягкой форме, а основания полагать так у нас есть, то это важно. Во-первых, для прогнозирования того, сколько осталось незараженных и с какой скоростью будет дальше развиваться инфекция. Во-вторых, это важно для того, чтобы можно было выпускать людей из изоляции, чтобы они могли как-то заниматься хозяйственной деятельностью и приносить пользу себе и окружающим.

– Вы обратились в фейсбуке к своим читателям, у которых был выявлен коронавирус и которые переболели COVID-19, с просьбой поделиться кровью для разработки теста на антитела. Почему вам приходится бросать клич в социальной сети? Неужели российский Минздрав, в структуру которого входит ваша лаборатория, не отбирает у переболевших кровь централизованно для будущих научных исследований?

– Автоматически кровь для исследований ни у кого отбирать нельзя. Существуют этические нормы, человек должен добровольно сдать кровь. Это одно соображение. Второе соображение: мы, конечно, взаимодействуем с различными клиниками, сейчас все больше и больше налаживаются цепочки, и они будут перенаправлять пациентов к нам, говорить им, что проходит такое исследование, предлагать им в нем участвовать. Зачем я это сделал через социальные сети? Во-первых, в такое время все люди очень активно помогают друг другу, и это тоже неплохой способ.

Во-вторых, нам было важно получить кровь от людей, которые уже вышли из больницы, уже прошли необходимый карантин после госпитализации. Эти люди уже находятся дома, они уже не в ведении врачей, и таких людей, на самом деле, не так много, потому что это самая первая волна тех, кто прошел все стадии болезни. Так их просто удобнее находить, и этот призыв уже можно считать успешным: мы нашли большое количество людей, которые откликнулись, целыми семьями, они приезжают и сдают кровь. На первом этапе нам было важно отобрать людей, которые уже не представляют никакой опасности с точки зрения выделения вируса, чтобы мы могли у них взять кровь.

– Вы пишете, что вам и еще одной группе российских ученых уже удалось разработать прототип теста на антитела к новому коронавирусу. Чем прототип отличается от работающего теста? И сколько времени может занять путь от прототипа к готовому продукту?

– Я думаю, что тест другой группы, о которой заявил Роспотребнадзор, будет зарегистрирован в течение ближайшей недели, она продвинулась гораздо дальше. Я знаю еще несколько групп, которые тоже делают свои тесты. Чем отличается прототип от работающего теста? Тем, что, во-первых, прототип произведен в лабораторных условиях, а работающий тест, который будет зарегистрирован, будет произведен на производственной площадке, которая для этого предназначена. Мы сейчас ведем переговоры с разными площадками. Надеемся, что кто-то возьмется производить наш тест. После этого тот тест, который произведен в профессиональных условиях, должен быть валидирован на контрольных образцах, и на последнем этапе должны быть получены расчетные показатели его специфичности, – говорит Григорий Ефимов.

Точность серологических тестов остается одним из основных препятствий на пути к их массовому применению. В Великобритании, сообщает Guardian, правительство заказало 3,5 миллиона таких тестов, однако, как выяснилось, они слишком часто дают ложноположительный результат, реагируя на антитела к "обычным", ранее известным коронавирусам. Человек с таким результатом теста может ошибочно полагать, что он неуязвим для 2019-nCoV. Премьер-министр Великобритании Борис Джонсон, заболевший COVID-19, говорил, что такие тесты могут стать переломным моментом в борьбе с распространением новой инфекции. Теперь депутат от его партии, возглавляющий комитет парламента по науке и технологиям, требует от Национальной службы здравоохранения раскрыть информацию о том, у каких компаний были куплены недостаточно точные тесты на антитела к коронавирусу и почему условием перечисления денег за них не была поставлена фактическая точность тестирования.