Стафилококковый бактериофаг для собак как применять

Стафилококк у собак - симптомы, лечение

filaalfa: Диоксидин Диоксидин - отечественный синтетический АМП широкого спектра действия. Разрешен для медицинского применения в 1976 г. В связи с особенностями токсикологии с целью системного действия (в/в) используется только по жизненным показаниям для лечения тяжелых форм анаэробной или смешанной аэробно-анаэробной инфекции, вызванной полирезистентными штаммами при неэффективности или непереносимости других АМП. При тяжелых формах гнойной инфекции может применяться в полости, эндобронхиально, местно. Механизм действия Диоксидин оказывает бактерицидное действие, механизм которого до конца не изучен. Активность диоксидина усиливается в анаэробной среде за счет индукции образования активных форм кислорода. Спектр активности Эффективен в отношении стафилококков (включая некоторые MRSA), стрептококков, менингококков, грамотрицательных бактерий (Е.coli, Proteus spp., K.pneumoniae, S.marcescens, P.aeruginosa, Shigella spp., Salmonella spp., P.multocida, M.tuberculosis). К диоксидину чувствительны многие анаэробы, такие как Clostridium spp., Bacteroides spp. (включая B.fragilis), P.acnes, Lactobacterium spp., Bifidobacterium spp., Veilonella spp., Peptostreptococcus spp., P.niger, а также актиномицеты. Препарат сохраняет активность в отношении штаммов, устойчивых к другим АМП. Перекрестной резистентности между диоксидином и другими АМП не установлено. Фармакокинетика Фармакокинетика диоксидина изучена недостаточно. При в/в введении препарат хорошо проникает в различные органы и ткани организма, терапевтические концентрации в крови сохраняются в течение 4-6 ч. Хорошо всасывается при введении в полости, а также с раневой поверхности при местном применении. Практически не подвергается метаболизму, выводится почками путем клубочковой фильтрации и экстраренально, при повторных введениях не накапливается в организме. В течение 8 ч после в/в введения терапевтической дозы в моче наблюдаются высокие бактерицидные концентрации, значительно превышающие МПК для возбудителей инфекций МВП. Пациентам с почечной недостаточностью дозу препарата следует уменьшать. Нежелательные реакции ЖКТ: боль в животе, тошнота, рвота, диарея. Нервная система: головная боль, судорожные сокращения икроножных мышц. Реакции на в/в введение: озноб, лихорадка. Аллергические реакции: сыпь, крапивница, анафилактический шок. Кора надпочечников: при передозировке возможны дистрофия, деструкция, развитие острой надпочечниковой недостаточности. Показания Тяжелые формы гнойных бактериальных инфекций: инфекции НДП (гнойный плеврит, эмпиема плевры, абсцесс легкого); интраабдоминальные инфекции; инфекции кожи, мягких тканей, костей и суставов (абсцесс, флегмона, гнойные посттравматические, послеоперационные и ожоговые раны). инфекции ЦНС (абсцесс мозга, вторичный гнойный менингит). Используется с целью системного действия (в/в инфузионно) только в стационаре как препарат резерва при тяжелых формах инфекций или при неэффективности/непереносимости других АМП. Применяется местно и в полости в виде раствора или мази при различных формах гнойной инфекции в хирургической (нейрохирургической), урологической и стоматологической практике. Противопоказания Аллергическая реакция на диоксидин. Недостаточность функции коры надпочечников. Беременность. Кормление грудью. Детский возраст. Предупреждения Препарат характеризуется узкой терапевтической широтой, поэтому необходимо строго соблюдать рекомендуемые дозы, не допуская их превышения. В экспериментальных исследованиях показано, что диоксидин оказывает мутагенное, тератогенное, эмбриотоксическое и повреждающее действие на кору надпочечников. Токсикологические свойства диоксидина определяют ограничения к его применению в клинике. Беременность. Диоксидин противопоказан при беременности. Кормление грудью. Применение в период кормления грудью возможно только при переводе ребенка на искусственное вскармливание. Педиатрия. Диоксидин не разрешен для применения у детей. Гериатрия. Следует учитывать возрастное понижение функции почек у людей пожилого возраста, которое может потребовать уменьшения дозы препарата. Недостаточность коры надпочечников. Не применять при указании в анамнезе на надпочечниковую недостаточность. Если во время лечения появляются признаки развития недостаточности коры надпочечников, диоксидин необходимо немедленно отменить и назначить заместительную гормональную терапию. Правила применения. В/в диоксидин вводится путем медленной инфузии под строгим наблюдением врача. Струйное в/в введение недопустимо. Предварительно необходимо провести пробу на переносимость. При отсутствии в течение 3-6 ч НР начинают курсовое лечение, в противном случае препарат не применяют. Для профилактики реакций на введение рекомендуется использовать антигистаминные препараты. Информация для пациентов Во время лечения следует информировать врача об изменениях самочувствия, появлении новых симптомов.

Зелда: filaalfa пишет: Это с нашего мопсиного форума: "Мы вылечили стафилокок у азиатки-есть бактериофаги (человеческие) и среди них есть от стафилокока. (это полезные бактерии которые питаются стафилококом-никакого вреда организму). Его (жидкость) дают в еду и в тяжелых случаях делают клизмы. Забыла добавить-если инфицированная рана то можно обрабатывать местно с наружи." а вы не могли бы подсказать в каких количествах давать?нужно определенный курс давать?

filaalfa: Лучше у вета проконсультироваться, имхо.

Зелда: просто у меня тоже собака болеет.американский стаффорд.ей уже три года.диагноз поставили где-то год назад.испробовали буквально все,но улучшений к сожалению никаких.вот решила вам написать.потому что ветеринары ничего путного не посоветовали.были конечно улучшения,но ненадолго.

filaalfa: Многие привозные из Америки породы заражены этой гадостью, к сожалению. В каком городе Вы живете? Если в моем, то могу посоветовать изумительного ветеринара.

Зелда: у нас очень хорошая родословная,и не в одном из поколений не был зарегестрирован случай заьолевания стафилококком. для нас это был шок!мы в Челябинске живем,нам посоветовали хорошего ветеринара.мы наблюдались у него,он назначал что-то для лечения.улучшений не было,только от этих уколов у собаки постоянно отнимались задние лапы

filaalfa: Зелда пишет: только от этих уколов у собаки постоянно отнимались задние лапы ничего себе, ветеринар. Отправила Вам в личку координаты вет.врача, думаю, не откажет в консультации.

filaalfa: Да, еще информация. Она сейчас в отпуск уехала, по слухам. Будет где-то в начале сентября.

Селика: filaalfa а можно и мне координаты ветеринара? У нас трехлетний бордос, которого пытаемся лечить уже второй год. Увы, с переменным успехом.

filaalfa: Селика , скинула в личку. Только она сейчас, по разведданым, в отпуске. Появится где-то через неделю. Удачи Вашему бордосику!

Селика: filaalfa Спасибо большое-пребольшое! Здоровья Вашей девочке и её будущему потомству!

filaalfa: Селика , пожалуйста, всегда рада помочь! Удачи Вам и выздоровления!

Зелда: Вообщем мы около месяца поили и смазывали "шишки" бактериофагом стафилококковым!все постепенно начало улучшаться,а потом вообще шишечки пропали!мой радости нет границ.

Кристина: Добрый день! У нас щенок-мопс. 3 месяца. сначала поставили диагноз-отит,лечили,вроде всё прошло. но в самом начале лечения врач взял анализ из уха,теперь говрит,что стафилокок. такое возможно?

filaalfa: Добрый. Хе-хе. Как же ставить можно диагноз: 1. дистанционно 2. не видя животное и его анализов 3. неветеринару (а Вы предлагаете это сделать мне)?

vins: Прошу совета! У меня бульмастиф, ему 4 года, прошлым летом порезал лапу битым стеклом, занес инфекцию и вот до сих пор не можем избавиться от этой заразы. Кололи антибиотики, мазали лапы всякими мазюками, становится чуть лучше и на этом все. Потом проходит время и становится хуже. Прочитала про бактериофаг стафилококковый, подскажите в какой дозировке давать и,как долго, в инструкции написано от 7 до 20 дней.

filaalfa: Лучше всего обратиться с этим вопросом к хорошему вету.

Действующее вещество

Бактериофаг стафилококковый
Инструкция по медицинскому применению - РУ № Р N001973/01

Дата последнего изменения: 27.04.2017

Раствор для приема внутрь, местного и наружного применения.

В 1 мл лекарственного препарата содержится активного вещества - стерильного фильтрата фаголизатов бактерий рода Staphylococcus до 1 мл.

Консервант-8-гидроксихинолина сульфат - 0,0001 г/мл (содержание расчетное);

или 8-гидроксихинолина сульфата моногидрат - 0,0001 г/мл (в пересчете на 8-гидроксихинолина сульфат, содержание расчетное).

Препарат представляет собой прозрачную жидкость желтого цвета различной интенсивности.

Препарат вызывает специфический лизис бактерий Staphylococcus.

Лечение и профилактика гнойно-воспалительных и энтеральных заболеваний, вызванных бактериями рода Staphylococcus у взрослых и детей.

заболевания уха, горла, носа, дыхательных путей и легких (воспаления пазух носа, среднего уха, ангина, фарингит, ларингит, трахеит, бронхит, пневмония, плеврит);
хирургические инфекции (нагноения ран, ожоги, абсцесс, флегмона, фурункулы, карбункулы, гидроаденит, панариции, парапроктит, мастит, бурсит, остеомиелит);
урогенитальные инфекции (уретрит, цистит, пиелонефрит, кольпит, эндометрит, сальпингоофорит);
энтеральные инфекции (гастроэнтероколит, холецистит), дисбактериоз кишечника;
генерализованные септические заболевания;
гнойно-воспалительные заболевания новорожденных (омфалит, пиодермия, конъюнктивит, гастроэнтероколит, сепсис и др.);
другие заболевания, вызванные стафилококками.

При тяжелых проявлениях стафилококковой инфекции препарат назначается в составе комплексной терапии.

С профилактической целью препарат используют для обработки послеоперационных и свежеинфицированных ран, а также для профилактики внутрибольничных инфекций по эпидемическим показаниям.

Важным условием эффективной фаготерапии является предварительное определение чувствительности возбудителя к бактериофагу и раннее применение препарата.

Индивидуальная непереносимость или чувствительность к любому из компонентов препарата.

Целесообразно применение препарата при наличии инфекций, вызванных фагочувствительными штаммами стафилококков (по рекомендации врача).

Препарат используют для приема внутрь (через рот), ректального введения, аппликаций, орошений, введения в полости ран, вагины, матки, носа, пазух носа и дренированные полости. Перед употреблением флакон с бактериофагом необходимо взболтать и просмотреть. Препарат должен быть прозрачным и не содержать осадка.

Рекомендуемые дозировки препарата

Доза на 1 прием (мл)

от 1 года до 3 лет

от 8 лет и старше

Лечение гнойно-воспалительных заболеваний с локализованными поражениями должно проводиться одновременно как местно, так и приемом препарата внутрь 2-3 раза в день натощак за 1 ч до приема пищи с первого дня заболевания в течение 7-20 дней (по клиническим показаниям).

В случае если до применения бактериофага для лечения ран применялись химические антисептики, рана должна быть тщательно промыта стерильным натрия хлорида раствором 0,9%.

В зависимости от характера очага инфекции бактериофаг применяют:

1. В виде орошения, примочек и тампонирования в объеме до 200 мл в зависимости от размеров пораженного участка. При абсцессе после удаления гнойного содержимого с помощью пункции препарат вводят в количестве меньшем, чем объем удаленного гноя. При остеомиелите после соответствующей хирургической обработки в рану вливают бактериофаг по 10-20 мл.

2. При введении в полости (плевральную, суставную и другие ограниченные полости) до 100 мл, после чего оставляют капиллярный дренаж, через который бактериофаг вводят в течение нескольких дней.

3. При циститах, пиелонефритах, уретритах препарат принимают внутрь. В случае если полость мочевого пузыря или почечной лоханки дренированы, бактериофаг вводят через цистостому или нефростому 1-2 раза в день по 20-50 мл в мочевой пузырь и по 5-7 мл в почечную лоханку.

4. При гнойно-воспалительных гинекологических заболеваниях препарат вводят в полость вагины, матки в дозе 5-10 мл ежедневно однократно, при кольпите - по 10 мл орошением или тампонированием 2 раза в день. Тампоны закладывают на 2 часа.

5. При гнойно-воспалительных заболеваниях уха, горла, носа препарат вводят в дозе 2-10 мл 1-3 раза в день. Бактериофаг используют для полоскания, промывания, закапывания, введения смоченных турунд (оставляя их на 1 час).

6. При энтеральных инфекциях, дисбактериозе кишечника препарат принимают внутрь 3 раза в день за 1 час до приема пищи. Возможно сочетание двукратного приема внутрь с однократным ректальным введением разовой возрастной дозы бактериофага в виде клизмы после опорожнения кишечника.

Применение бактериофага у детей (до 6 месяцев). При сепсисе, энтероколите новорожденных, включая недоношенных детей, бактериофаг применяют в виде высоких клизм (через газоотводную трубку или катетер) 2-3 раза в сутки в дозе 5-10 мл. При отсутствии рвоты и срыгивания возможно применение препарата через рот. В этом случае он смешивается с грудным молоком. Возможно сочетание ректального (в виде высоких клизм) и перорального (через рот) применения препарата. Курс лечения 5-15 дней. При рецидивирующем течении заболевания возможно проведение повторных курсов лечения. С целью профилактики сепсиса и энтероколита при внутриутробном инфицировании или опасности возникновения внутрибольничной инфекции у новорожденных детей бактериофаг применяют в виде клизм 2 раза в день в течение 5-7 дней.

При лечении омфалита, пиодермии, инфицированных ран препарат применяют в виде аппликаций ежедневно двукратно (марлевую салфетку смачивают бактериофагом и накладывают на пупочную ранку или на пораженный участок кожи).

Стерильный очищенный фильтрат фаголизатов бактерий рода Staphylococcus (с активностью по Аппельману - не менее 10 -5 ) - до 1 мл.

Представляет собой прозрачную жидкость желтого цвета различной интенсивности, возможен зеленоватый оттенок.

Препарат вызывает специфический лизис бактерий Staphylococcus.

Лечение и профилактика гнойно-воспалительных и энтеральных заболеваний, вызванных бактериями рода Staphylococcus у взрослых и детей:

заболевания уха, горла, носа, дыхательных путей и легких (воспаления пазух

носа, среднего уха, ангина, фарингит, ларингит, трахеит, бронхит, пневмония, плеврит);

хирургические инфекции (нагноения ран, ожоги, абсцесс, флегмона, фурункулы, карбункулы, гидроаденит, панариции, парапроктит, мастит, бурсит, остеомиелит);

урогенитальные инфекции (уретрит, цистит, пиелонефрит, кольпит, эндометрит, сальпингоофорит);

энтеральные инфекции (гастроэнтероколит, холецистит), дисбактериоз кишечника;

генерализованные септические заболевания;

гнойно-воспалительные заболевания новорожденных (омфалит, пиодермия, конъюнктивит, гастроэнтероколит, сепсис и др.);

другие заболевания, вызванные стафилококками.

При тяжелых проявлениях стафилококковой инфекции препарат назначается в составе комплексной терапии.

Индивидуальная непереносимость или чувствительность к любому из компонентов препарата.

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Нифонтова В.В., Чугунова Е.О.

Дано описание процесса выделения бактериофагов из патологического материала, получения фаголизата и применение его для лечения гнойного отита у собаки. Известно, что в настоящее время появляются антибиотикорезистентные штаммы микроорганизмов и бактериофаги могут служить альтернативным источником антибактериальных средств терапии. В рамках данного исследования объектом служила собака породы кокер спаниель, страдающая гнойным отитом. Стандартное лечение, направленное на подавление патогенной микрофлоры, результатов не дало, микрофлора гнойного экссудата in vitro оказалась нечувствительной к антибиотикам. Асептически собрав гнойный экссудат, мы провели индикацию и идентификацию микрофлоры, а затем выделили из данного патологического материала стафилококковый и протейный бактериофаги . На следующем этапе исследований определили чувствительность и специфичность фаголизата к соответствующей микрофлоре, а также установили титр бактериофагов по методу Аппельмана и Грациа. После лабораторных испытаний полученного фаголизата перешли к фаготерапии гнойного отита, которая оказала терапевтический эффект в течение трех дней.

OBTAINING BACTERIOPHAGES AND APPLICATION IN VETERINARY

The article shows the process of extracting bacteriophages from pathological material, obtaining bacteriophages drug and using phagotherapy for therapy of purulent otitis in dogs. It is known that there are antibiotic-resistant strains of microorganisms and bacteriophages can be an alternative source of antibacterial means of therapy. A cocker spaniel having purulent otitis served as the object of our research. Standard treatment directed at suppression of pathogenic microflora didn't show any results, the microflora of purulent effluent in vitro was not sensitive to antibiotics. Purulent effluent was collected aseptically, and after indication and identification of its microflora, then we allocated Staphylococcus and Proteus bacteriophages from this pathological material. At the next stage of research we determined sensitivity and specificity of bacteriophages to the corresponding microflora, and also bacteriophages titer using Appelman and Gratsia method. After laboratory testing of phagolysate, phagotherapy was applied to purulent otitis and showed therapeutic effect within three days.

ВЕСТНИК ПЕРМСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА 2/2015

В.В. Нифонтова, Пермская государственная сельскохозяйственная академия им. акад. Д.Н. Прянишникова

Е.О. Чугунова, Пермская государственная сельскохозяйственная академия им. акад. Д.Н. Прянишникова

Дано описание процесса выделения бактериофагов из патологического материала, получения фаголизата и применение его для лечения гнойного отита у собаки. Известно, что в настоящее время появляются антибиотикорезистент-ные штаммы микроорганизмов и бактериофаги могут служить альтернативным источником антибактериальных средств терапии. В рамках данного исследования объектом служила собака породы кокер спаниель, страдающая гнойным отитом. Стандартное лечение, направленное на подавление патогенной микрофлоры, результатов не дало, микрофлора гнойного экссудата in vitro оказалась нечувствительной к антибиотикам. Асептически собрав гнойный экссудат, мы провели индикацию и идентификацию микрофлоры, а затем выделили из данного патологического материала стафилококковый и протейный бактериофаги. На следующем этапе исследований определили чувствительность и специфичность фаголизата к соответствующей микрофлоре, а также установили титр бактериофагов по методу Аппельмана и Грациа. После лабораторных испытаний полученного фаголизата перешли к фаготерапии гнойного отита, которая оказала терапевтический эффект в течение трех дней.

Ключевые слова: гноеродные микроорганизмы, бактериофаги, титр по методу Аппельмана и Грациа.

Бактериофаг - ультрамикроскопический, внутриклеточный облигатный паразит-вирус, лизирующий бактерии и акти-номицеты. Впервые явление бактериофагии наблюдал в 1898 г. Н.Ф. Гамалея, позднее - Туорт в 1915 г. и д'Эррелль в 1917 г. [4]. Бактериофагу присущи наследственность, изменчивость, приспособляемость и другие свойства вирусов. Они несут всю информацию, необходимую для процесса их репродукции в соответствующих клетках, но не имеют собственного механизма для генерации энергии и рибосом для синтеза белков. Корпускулы бактериофагов имеют форму

сперматозоидов, состоят из сферической, цилиндрической или многогранной головки и короткого или длинного, прямого или изогнутого отростка. Каждая фаговая частица (вирион) содержит геном, представленный молекулой ДНК или РНК, заключенный в белковую или липопротеи-новую оболочку (капсид), которые вместе формируют нуклеокапсид. В отростке фаговой корпускулы имеется футляр и центрально расположенный стерженек белковой природы, так хвостовой отросток напоминает иглу для шприца. На конце отросток имеет утолщение в виде пластинки, от которого отходят белковые ни-

ти диаметром не более 2 миллимикронов [2, 4]. Размер различных фагов колеблется от 0,1 мкм в диаметре до 20 мкм [1], хвост фага в 1,5 раза длиннее головы и в 4 раза тоньше [4].

Бактериофаги широко распространены в природе. Почти везде, где условия обитания благоприятны для размножения бактерий и актиномицетов, удается обнаружить паразитирующие в их клетках бактериофаги. Они поражают более 140 различных родов бактерий [2, 6]. Их можно обнаружить в организмах животных, а также в желудочно-кишечном тракте, на коже и слизистых человека, таким образом, фаги - нормальные симбионты тела человека [4]. С.В. Цыганова (2009) для выделения бактериофагов методом обогащения в качестве источников фагов использовала внутренние органы гусей и сточные воды птицехозяйства. Таким образом, выделить бактериофаг можно из различных материалов, где могли раньше или в данный момент присутствовать бактерии, на которых выделенный фаг размножается. При отсутствии подходящих хозяев многие фаги могут сохранять способность к инфицированию десятилетиями, если не будут повреждены внешними агентами [2].

В литературе имеются сообщения, свидетельствующие о положительном лечебно-профилактическом действии препаратов бактериофагов при использовании их во время эпидемии холеры, при дизентерии и других желудочно-кишечных болезнях. Фаги применяют в хирургической и акушерско-гинекологической практике.

Отдельные попытки использования различных бактериофагов при инфекционных болезнях животных были предприняты в 20-30-х годах. Д'Эрелль (1928, 1935) пытался использовать фаги при пуллорозе-тифе у кур.

И.Ф. Квеситадзе (1957) применил бактериофаг для лечения 6 000 больных сальмонеллёзом телят. Эффективность фаготерапии сальмонеллёзных телят в отдельных хозяйствах достигала 90-100 %.

К.Н. Шерстобаев (1949) использовал

бактериофаг для лечения и профилактики колибактериоза поросят. При лечении 4 964 поросят было отмечено выздоровление у 95,6 % животных.

И.Л. Бирюков и Р.К. Петренко (1958) сообщили, что дача цыплятам пуллорум-фага предохраняла их от пуллороза на 90 % в лабораторных и до 80 % в производственных условиях [3].

С открытием и развитием антибиотиков бактериофаги были незаслуженно забыты. Однако в настоящее время на фоне появления антибиотикорезистентных штаммов микроорганизмов бактериофаги могут служить альтернативным источником антибактериальных средств терапии.

Цель исследования - получить бактериофаги для лечения гнойного отита у собак.

1) произвести отбор патологического материала (экссудат из среднего и наружного уха) от больного животного;

2) определить состав микрофлоры в полученном экссудате;

3) выделить бактериофаги из патологического материала и установить их ли-тическую активность в отношении соответствующих микроорганизмов;

4) провести фаготерапию полученным фаголизатом.

Материалы и методы исследования

Объект исследования - собака породы американский кокер спаниель, страдающая отитом наружного и среднего уха.

Материалом для исследования служили: экссудат из ушей, собранный асептически стерильным инструментом в стерильную одноразовую емкость; выделенные из экссудата микроорганизмы и полученные к ним бактериофаги. Метод исследования - бактериологический.

Для выделения фага исследуемый материал высевали на мясопептонный агар (МПА) в чашки Петри и на селективные питательные среды, инкубировали при 37 °С и через 24 часа получали колонии

новым наполнителем и диаметром пор 0,22 мкм (рис. 1). Фаголизат собирали в стерильные одноразовые пробирки в условиях ламинарного бокса.

В результате инкубации посеянного на мясопептонный агар экссудата получили гладкие, выпуклые, с желтоватым пигментом колонии стафилококков; единичные мелкие серые колонии стрептококков и протей, который занимал 70-75 % площади чашки Петри. При этом отмечен характерный гнилостный запах и феномен роения протея.

Для селективного обогащения стафилококков использовали солевой бульон (МПБ с 6,5 % №С1). Через 24 часа после инкубирования при 37 °С произвели пересев на желточно-солевой агар, электив-ность которого обеспечивается высоким содержанием хлористого натрия, а добавленный яичный желток позволяет выявлять лецитовителлазную активность, которая является одним из показателей пато-генности стафилококков. После 18 часов инкубации получили рост колоний, морфологически похожих на золотистый стафилококк (рис. 2), поэтому продолжили исследование и пересеяли типичные колонии на скошенный мясопептонный агар для последующей проверки выросших культур в реакции плазмокоагуляции. На

Рис. 2. Колонии золотистого стафилококка на желточно-солевом агаре

следующий день поставили реакцию с плазмой крови кролика, которая дала положительный результат и подтвердила наличие S. aureus в исследуемом экссудате.

Учитывая результаты идентификации возбудителей, решили выделить бактериофаги к золотистому стафилококку и протею. После стандартной процедуры очистки фаголизата от бактерий и их частиц определяли чувствительность, специфичность и титр полученных бактериофагов.

+++ наличие стерильного пятна и зон лизиса.

Таким образом, видно, что полученные нами фаголизаты проявляют специфичность и чувствительность в отношении соответствующих бактерий. Наиболее выраженное и крупное стерильное пятно получено для Proteus vulgaris (рис. 3).

Далее необходимо было определить ак-

тивность полученных бактериофагов и установить их титр по Аппельману и Грациа.

Для определения титра по методу Ап-пельмана использовали 12 пробирок с 4,5 мл мясопептонного бульона в каждой. В первую пробирку внесли 0,5 мл исследуемого фага, содержимое пробирки тщательно перемешали. Из этой пробирки 0,5 мл перенесли в следующую и т.д., приготовив ряд 10-кратных разведений фага (10-1-10-10). В каждую пробирку приготовленного ряда внесли по одной капле соответствующей бульонной культуры. Пробирки №№ 11, 12 служили контролем, в одну из них внесли 0,5 мл исследуемого фага (контроль на отсутствие бактерий в исследуемом фаге), в другую пробирку - одну каплю микробной культуры (контроль культуры). Все пробирки поместили в термостат на 18 ч. Титр фага определяли по наибольшему разведению препарата, в котором была обнаружена литическая активность. В итоге получили титр 10-7 для стафилококкового бактериофага и 10-8 для протейного.

Далее определяли титр данных фаголи-затов методом агаровых слоев по Грациа, используя разведения бактериофагов, показавших титр по Аппельману от 10-6 до 10-10. В чашки Петри заливали 0,5 %-ный МПА с генцианвиолетом (0,1 мл 0,4 %-но-го генцианвиолета на 1 дм3 среды) и подсушивали в термостате до полного удаления конденсата. Затем 0,7 %-ный МПА в пробирках по 2,5 мл в каждой расплавляли на водяной бане и охлаждали до 48-50 °С, вносили 0,1 мл 1-миллиардной взвеси соответствующей суточной агаровой культуры и добавляли 1 мл соответствующего разведения исследуемого бактериофага, тщательно перемешивали вращательными движениями и содержимое пробирки вы-

Результаты определения чувствительности и специфичности фаголизатов

Вид микроорганизмов Фаголизат к St. aureus Фаголизат к протею Контроль

Рис. 3. Стерильное пятно протейного фага

ливали в чашку Петри с МПА (вторым слоем). Смесь равномерно распределяли по поверхности агара и оставляли чашку в горизонтальном положении на 40-50 мин, то есть до полного охлаждения агара. Затем чашки слегка подсушили и инкубировали в термостате при 37 °С в течение 18-20 ч. На следующий день на фоне равномерного роста микробов отмечали негативные колонии, обусловленные лизисом микробной культуры в результате действия бактериофага (рис. 4).

Таким образом, допуская, что каждый участок лизиса образовался в результате действия одной корпускулы фага, мы рассчитали количество активных корпускул фага в 1 мл препарата и получили титр протейного бактериофага по Грациа 15*108 или 1,5*109. Данный титр стафилококкового фагового препарата оказался на порядок ниже и составил 8*106.

Полученные фаголизаты объединили в стерильную одноразовую пробирку и обрабатали уши собаки созданным бакте-риофаговым препаратом. Терапевтиче-

ский эффект был отмечен уже в первые сутки после обработки, количество экссудата резко снизилось, исчез неприятный запах из ушей. Через три дня гнойные истечения из ушных раковин прекратились, т.е. был достигнут лечебный результат.

Полученные нами фаголизаты проявили специфичность и чувствительность в отношении St. aureus, Proteus vulgaris и Proteus mirabilis. Наиболее выраженное и крупное стерильное пятно получено для Proteus vulgaris. Двумя способами установлены титры бактериофагов: по Ап-пельману получили титр 10-7 для стафилококкового бактериофага и 10-8 для протейного; по Грациа - 8*106 и 1,5*109 соответственно. Фаготерапия показала высокий терапевтический эффект, который был достигнут за три дня.

Рис. 4. Результаты титрования протейного фага по методу агаровых слоев

1. Адамс М. Бактериофаги / пер. с англ. Т. С. Ильиной и др. - М.: Иностр. лит., 1961. - 527 с.

2. Бактериофаги: биологическое и практическое применение / под ред. Э. Каттер, А. Сулаквелидзе / пер. с англ.; науч. ред. А.В. Летаров. - М.: Научный мир, 2012. - 640 с.

3. Фаги листерий и их практическое применение: учебное пособие / И.А. Бакулов, Т.И. Кольпикова, Д.А. Васильев [и др.]. - Ульяновская ГСХА, 1998. - 33 с.

4. Тимаков В.Д., Гольдфарб Д.М. Основы экспериментальной медицинской бактериологии. - М.: Медгиз, 1958. - 347 с.

5. Цыганова С.В. Выделение бактериофагов против возбудителей бактериальных болезней птиц и изучение их биологических свойств: автореф. дис. . канд. вет. наук. - СПб. - 2009. - 23 с.

6. Ackerman H. W. Freguency of morphological phage descriptions // Arch. Virol. - 2001. - № 146. - P. 843-857.

OBTAINING BACTERIOPHAGES AND APPLICATION IN VETERINARY

B.B. Nifontova, E.O. Chugunova

Perm Agricultural Academy

Keywords: pyogenic microorganisms, bacteriophages, the titer of bacteriophages by Appelman's and Gratsia's method.

Читайте также:

Стафилококковый бактериофаг для собак как применять

Действующее вещество

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Нифонтова В.В., Чугунова Е.О.

Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Нифонтова В.В., Чугунова Е.О.

OBTAINING BACTERIOPHAGES AND APPLICATION IN VETERINARY