Мук лабораторная диагностика золотистый стафилококк

1.1. Стафилококкоз - инфекционная болезнь сельскохозяйственных животных, пушных зверей и птиц, характеризующаяся гнойно-воспалительными процессами в различных органах и тканях, артритами, маститами, эндометритами, а в некоторых случаях - сепсисом со смертельным исходом.

1.2. Возбудитель болезни - Staphylococcus aureus - крупные неподвижные грамположительные кокки, располагающиеся неправильными скоплениями, а также одиночно или попарно.

1.3. Диагноз на стафилококков устанавливают по результатам лабораторного исследования с учетом клинических данных.

1.4. Лабораторная диагностика стафилококкоза включает микроскопию мазков, выделение культур стафилококков с последующей их идентификацией и изучением патогенных свойств.

1.5. Для исследования в лабораторию посылают трупы мелких животных и птиц целиком, от трупов крупных животных направляют части паренхиматозных органов, головной мозг, кровь и сердце; от больных животных, в зависимости от клинических признаков - абортированные плоды, истечение из шейки матки, содержимое абсцессов, синовиальную жидкость на воспаленных суставах.

1.6. Патологический материал для исследования на стафилококковую инфекцию от животных, не подвергавшихся лечению антибиотиками, сульфаниламидными или нитрофурановыми препаратами в течение последних 10 дней.

2.1. Из доставленного материала готовят мазки и опрашивают их по Граму.

В мазках обнаруживают крупные грамположительные кокки, располагающиеся скоплениями в виде гроздьев, в мазках из гноя могут быть парные кокки, короткие цепочки.

3.1. Высевы из патологического материала делают в МПБ, на МПА или молочно-солевой агар (pH сред. 7,2 - 7,4). Высев можно проводить и на кровяной агар.

Посевы инкубируют при температуре 37 - 38 °С в течение 18 - 20 ч.

3.2. В МПБ отмечают интенсивное равномерное помутнение среды, на дне пробирки - рыхлый осадок. Иногда появляется пристеночное серовато-белое кольцо или пленка.

На МПА и молочно-солевом агаре стафилококки образуют круглые с ровными кроями, выпуклые колонии белого, кремового, золотистого или лимонно-желтого цвета.

3.3. У выделенных культур изучают морфологические, культуральные биохимические и патогенные свойства.

3.4. Для изучения биохимических и гемолитических свойств суточную культуру стафилококка пересевают в среды Гисса с глюкозой, лактозой, мальтозой, сахарозой, маннитом, дульцитом и на глюкозо-кровяной агар Нейсслера.

S. aureus ферментирует с образованием кислоту без газа глюкозу, маннит, мальтозу, сахарозу, не ферментирует лактозу и дульцит, на глюкозо-кровяном агаре Нейсслера образует β-гемолиз.

4.1. Определение патогенности проводят в реакции плазмокоагуляции, по дермонекротической пробе или биопробой на цыплятах.

4.2. Постановка реакции плазмокоагуляции.

В реакции используют сухую кроличью плазму, выпускаемую предприятиями Минздрава СССР. Для работы сухую плазму разводят согласно прилагаемому наставлению.

При необходимости приготовление плазмы в лаборатории у кролика берут кровь из ушной вены или сердца в пробирку с 5 %-ным раствором лимонно-кислотного натрия (2 мл раствора на 8 - 10 мл крови). Цитратную кровь центрифугируют: при 3000 об/мин в течение 10 мин, затем плазму отсасывают и переносят в стерильные пробирки, которые закрывают крышками и хранят в холодильнике до 3 нед. Перед употреблением плазму вводят стерильным физиологическим раствором 1:5.

Подготовленную для исследования плазму разливают по 0,5 мл в стерильные уленгутовские пробирки по количеству изучаемых культур. Затем в пробирку вносят 2 капли бульонной или одну петлю агаровой 18 - 24-часовой культуры. Одновременно ставят контроль плазмы без добавления культуры.

Пробирки помещают в термостат при температуре 37 - 38 °С. Учет реакции проводят через каждый час в течение 5 - 6 часов. При отсутствии коагуляции пробирки выдерживают при комнатной температуре 18 ч.

При положительной реакции плазмокоагуляции образуется сгусток, который не выпадает из пробирки при наклоне. В случае, когда коагулирована не вся плазма, сгусток плавает в ней.

4.3. Дермонекротическую пробу ставят на кроликах (лучше белой масти) массой 2 - 2,5 кг. Накануне у кролика на боку в 2 местах выстригают шерсть на площади 2×2 см. Суточную бульонную культуру вводят внутрикожно в выстриженные участки кожи в дозе 0,2 мл.

Наблюдение за кроликами ведут в течение 4 дн.

4.4. При выделении от птиц культур стафилококков, не обладающих плазмокоагулирующими свойствами, их патогенность определяют на 1 - 2-суточных цыплятах.

Суточную бульонную культуру в дозе 0,1 мл вводят 2 цыплятам интраорбитально во внешний уголь глазницы между глазным яблоком и краем орбиты.

Гибель цыплят наступает на 3 - 5 сут.

Культуру считают патогенной при выделении ее из паренхиматозных органов и костного мозга павших цыплят.

Наблюдение за цыплятами ведут в течение 5 сут.

Относятся к семейству Micrococcoceae. Род Staphylococcus включает 19 видов, из которых патогенны для человека только некоторые: S.aureus, S.epidermidis и S.saprophyticus. Заболевания вызывают золотистые, реже – эпидермальные и еще реже – сапрофитные стафилококки.

Морфология, физиология. Отдельные клетки имеют форму правильного шара, при размножении образуют скопления в виде гроздьев винограда (slaphyle – виноградная гроздь). Размер от 0,5 до 1,5 мкм. В препаратах из патологического материала (из гноя) располагаются поодиночке, парами или небольшими скоплениями. Золотистые стафилококки имеют способность образовывать нежную капсулу.

Стафилококки – факультативные анаэробы, но лучше развиваются в аэробных условиях, Гр+. На поверхности плотных питательных сред образуют круглые, выпуклые, пигментированные (золотистые, палевые, лимонно-желтые, белые) колонии с ровными краями; в жидких – равномерное помутнение. В лабораториях используют способность стафилококков размножаться в средах с большим количеством (6-10 %) NaCl (ЖСА). Такую концентрацию соли другие бактерии не переносят Þ солевые среды являются элективными для стафилококков. Штаммы золотистых стафилококков, продуцирующие гемолизины, дают на кровяном агаре колонии, окруженные зоной гемолиза.

Стафилококки имеют ряд ферментов, расщепляющих многие углеводы, белки. Дифференциально-диагностическое значение имеет тест на сбраживание глюкозы в анаэробных условиях. Из ферментов, участвующих в патогенезе стафилококковых инфекций, только плазмокоагулаза и частично ДНКаза характерны для S.aureus. Другие ферменты (гиалуронидаза, протеиназа, фосфатаза, муромидаза) непостоянны (но чаще продуцируются S.aureus). Стафилококки ситезируют бактериоцины. Устойчивы к пенициллину (пенициллиназа).

Антигены. Вещества клеточной стенки: пептидогликан, тейхоевые кислоты, белок А, типоспецифические агглютиногены, а также капсула, имеющая полисахаридную природу. Пептидогликан имеет общие АГ с пептидогликанами микрококков и стрептококков. Антигенность тейхоевых кислот связана с аминосахарами. Белок А золотистого стафилококка способен к неспецифическому соединению с Fc-фрагментом IgG, в связи с чем он агглютинируется нормальной человеческой сывороткой. У стафилококков есть 30 белковых типоспецифических антигенов. Но внутривидовая дифференциация по Аг структуре в практике не используется.

Патогенность. Повреждающее действие на клетки и ткани организма человека оказывают токсины и ферменты. Также к факторам патогенности можно отнести капсулу, препятствующую фагоцитозу и связывающую комплемент, а также белок А, инактивирующий комплемент и тормозящий опсонизацию при взаимодействии с Fc-фрагментом IgG.

S.aureus способен выделять ряд токсинов, в частности лейкоцидин, который оказывает губительное действие на фагоцитирующие клетки, главным образом на макрофаги. Гемолизины (α, β, дельта, γ) оказывают лизирующее действие на эритроциты человека и животных (кролика, лошади, барана). Основным из них является α-токсин, продуцируемый S.aureus. Помимо гемолитического, этот яд обладает кардиотоксическим действием, вызывает спазм коронарных сосудов и остановку сердца в систоле, он поражает нервные клетки и нейроны, лизирует мембраны и лизосомы клеток, что приводит к освобождению лизосомальных ферментов.

Возникновение пищевых отравлений стафилококковой природы связано с действием энтеротоксинов, продуцируемых золотистыми стафилококками. Известно 6 антигенов различных энтеротоксинов (АВСDЕF).

Эксфолиативные токсины вызывают у новорожденных пузырчатку, локальное буллезное импетиго, генерализованную скарлатиноподобную сыпь. Заболевания сопровождаются внутриэпидермальной отслойкой эпителия кожи, образованием сливающихся пузырей, жидкость в которых стерильна. Фокус стафилококковой инфекции находится чаще всего при этом в пупочной ранке.

Экзоверменты: плазмокоагулаза осуществляет свертывание плазмы (белки как бы одеваются в фиброзный чехол, защищающий их от фагоцитоза). Большие концентрации коагулазы, в организме больного, приводят к уменьшению свертываемости периферической крови, нарушению гемодинамики, прогрессирующему кислородному голоданию тканей.

Гиалуронидаза способствует распространению стафилококков в тканях. Лецитиназа разрушает лецитин, входящий в состав оболочек клеток, вызывает лейкопению. Фибринолизин растворяет фибрин, отграничивающий местный воспалительный очаг, чем способствует генерализации патологического процесса. Патогенетические свойства других экзоферментов стафилококков (ДНКаза, мурамидаза, протеиназа, фосфатаза), часто сопровождающих коагулазную активность, еще не определены.

Экология и распространение. В первые дни жизни человека стафилококки поселяются на слизистых оболочках рта, носа, в кишечнике, а также на коже, входят в состав формирующейся нормальной микрофлоры тела человека.

Стафилококки постоянно поступают в окружающую среду от человека. Они присутствуют на предметах обихода, в воздухе, в воде, в почве, на растениях. Но их болезнетворная активность различна, особое внимание уделяется золотистым стафилококкам как потенциально патогенным для человека. При контакте с источником инфекции носителями S.aureus становятся не все люди. Формированию бактерионосительства способствуют низкое содержание SIgA в носовом секрете и другие проявления функциональной недостаточности иммунной системы. У таких лиц формируется резидентное носительство, т.е. постоянным местом обитания стафилококков становится слизистая оболочка носа, на которой микроорганизмы интенсивно размножаются и выделяются в окружающую среду массивными дозами. В лечебных учреждениях их источником являются больные с открытыми гнойно-воспалительными процессами (инфекция передается контактным путем). Этому способствует длительность выживания стафилококков на окружающих предметах.

Хорошо переносят высушивание, пигмент защищает их от губительного действия солнечного света (прямые солнечные лучи убивают их только через несколько часов). При комнатной температуре они остаются жизнеспособными на предметах ухода за больным в течение 35–50 дней, на предметах твердого инвентаря – десятки дней. При кипячении гибнут мгновенно, чувствительны к дезинфектантам, к бриллиантовой зелени, что позволяет широко применять её для лечения поверхностных воспалительных заболеваний кожи.

Патогенез заболеваний человека. Способны поражать любую ткань человеческого организма. Это местные гнойно-воспалительные процессы (фурункулы, карбункулы, нагноения ран, бронхиты, пневмонии, отит, ангина, конъюнктивит, менингит, эндокардит, энтероколит, пищевые отравления, остеомиелит). Генерадизация любой формы местного процесса завершается сепсисом или септикопиемией. У лиц с иммунодефицитными состояниями стафилококковые инфекции развиваются чаще.

Иммунитет. Взрослые устойчивы, т.к. имеют естественные защитные механизмы и специфические антитела, которые приобретаются в течение жизни при контакте с больными и носителями. В процессе стафилококковой инфекции возникает сенсибилизация организма.

В формировании иммунитета имеют значение как антимикробные, так антитоксические и антиферментные антитела. Степень защиты определяется их титром и местом действия. Большую роль играют секреторные IgA, обеспечивающие местный иммунитет слизистых оболочек. Антитела к тейхоевым кислотам определяются в сыворотках крови взрослых и детей с тяжелыми стафилококковыми инфекциями: эндокардитом, остеомиелитом, сепсисом.

Лабораторная диагностика. Материал (гной) подвергают бактериоскопии и высевают на питательные среды. Кровь, мокроту, фекалии исследуют бактериологическим методом. После выделения чистой культуры по ряду признаков определяют видовую принадлежность. В случае выделения S.aureus определяют плазмокоагулазу, гемолизин, А-протеин.

Серодиагностика: РП (альфа-токсин), РНГА, ИФА.

Для установления источника и путей распространения инфекции, выделенные культуры фаготипируют. Лабораторный анализ непременно включает определение чувствительности выделенной культуры или культур к антибиотикам.

Профилактика и лечение. Профилактика направлена на выявление носителей S.aureus, главным образом среди персонала медицинских учреждений, с целью их санации. Особое внимание уделяется профилактике стафилококковых инфекций у новорожденных.

Для лечения острых стафилококковых заболеваний назначаются антибиотики, выбор которых определяется чувствительностью выделенной культуры к набору препаратов. При септических процессах вводят противостафилококковый иммуноглобулин или антистафилококковую плазму. Для лечения хронических стафилококковых инфекций (хрониосепсис, фурункулез и др.) применяют стафилококковый анатоксин, аутовакцину, которые стимулируют синтез антитоксических и антимикробных антител.

Аннотация научной статьи по клинической медицине, автор научной работы — Ильина Вера Николаевна, Субботовская Анна Игоревна, Князькова Любовь Георгиевна, Козырева Виктория Сергеевна, Скачкова Татьяна Сергеевна

В настоящее время наряду с традиционными микробиологическими и иммунологическими методами лабораторной диагностики инфекционных заболеваний используются методы, основанные на молекулярно-биологических технологиях. Они позволяют проводить прямое изучение этиологии и антибиотикорезистентности возбудителя без его предварительного культивирования. В работе представлены сравнительные данные, полученные в ходе ПЦР-анализа и микробиологического исследования инфекций области хирургического вмешательства (ИОХВ), вызванные стафилококками . Целью данной работы явилось изучение возможности использования ПЦР для прямой диагностики инфекций области хирургического вмешательства (ИОХВ) стафилококковой этиологии. В ходе проведенной работы получена высокая чувствительность (98,6%) и специфичность (95,8%) ПЦР-анализа. Показано, что ПЦР-анализ значительно ускоряет получение результатов, по сравнению с традиционным микробиологическим исследованием в случае возникновения ИОХВ, вызванной MR стафилококками .

Похожие темы научных работ по клинической медицине , автор научной работы — Ильина Вера Николаевна, Субботовская Анна Игоревна, Князькова Любовь Георгиевна, Козырева Виктория Сергеевна, Скачкова Татьяна Сергеевна

Application of molecular biological methods for the diagnosis of surgical site infections caused by bacteria of the genus Staphylococcus

At present, along with traditional microbiological and immunological methods of laboratory diagnosis of infectious diseases, use is made of methods based on molecular biological technologies. PCR methods allow studying etiology and antibiotic resistance without pre-culturing the pathogen. This study focuses on comparative data obtained during the PCR and bacteriological tests of surgical site infections (SSI) by Staphylococcal etiology. The aim of the research was to determine the possibility of using PCR for direct diagnosis of SSI Staphylococcal etiology. PCR analysis is much faster to obtain results as compared to traditional microbiological investigation in the case of SSI caused by MR Staphylococcus spp . During the progress of this work high sensitivity (98.6%) and specificity (95.8%) of PCR were obtained.

В.Н. Ильина, А.И. Субботовская, л.Г. Князькова, В.С. Козырева, т.С. Скачкова*, о.Ю. Шипулина*, д.С. Сергеевичев, А.П. Субботовский

Применение молекулярно-биологических методов исследования для диагностики инфекции области хирургического вмешательства, вызванной бактериями рода Staphylococcus

ул. Речкуновская, 15,

УДК 616-002-078:616.12-089-06 ВАК 14.01.20

Поступила в редакцию 7 сентября 2011 г.

Л.Г. Князькова, В.С. Козырева,

Т.С. Скачкова, О.Ю. Шипулина,

А.П. Субботовский, 2011

В настоящее время наряду с традиционными микробиологическими и иммунологическими методами лабораторной диагностики инфекционных заболеваний используются методы, основанные на молекулярно-биологических технологиях. Они позволяют проводить прямое изучение этиологии и антибиотикорезистентности возбудителя без его предварительного культивирования. В работе представлены сравнительные данные, полученные в ходе ПЦР-анализа и микробиологического исследования инфекций области хирургического вмешательства (ИОХВ), вызванные стафилококками. Целью данной работы явилось изучение возможности использования ПЦР для прямой диагностики инфекций области хирургического вмешательства (ИОХВ) стафилококковой этиологии. В ходе проведенной работы получена высокая чувствительность (98,6%) и специфичность (95,8%) ПЦР-анализа. Показано, что ПЦР-анализ значительно ускоряет получение результатов, по сравнению с традиционным микробиологическим исследованием в случае возникновения ИОХВ, вызванной MR стафилококками. Ключевые слова: стафилококки; полимеразная цепная реакция; резистентность к метициллину; инфекции области хирургического вмешательства.

По данным Национальной системы наблюдения за нозокомиальными инфекциями (National Nosocomial Infections Surveillance, NNIS), инфекции области хирургического вмешательства (ИОХВ) являются второй-третьей по частоте нозокомиальной инфекцией, в зависимости от профиля стационара. Согласно результатам проспективного мультицентрового исследования, частота ИОХВ после проведения кардио-хирургических операций составляет 3,0% (38 гнойных осложнений на 1 268 операций). Однако, по данным отдельных авторов, инфекции области операции у кардиохирур-гических больных регистрируются в 10,4% случаев. Наиболее часто ИОХВ возникают после операции коронарного шунтирования, реже после операций по поводу ВПС и ППС. По данным многочисленных исследований, преобладающими возбудителями ИОХВ в кардиохирургии являются бактерии рода Staphylococcus, которые выделяются в 70-80% случаев [8, 10, 12-14, 17]. По результатам Национальной системы наблюдения за нозокомиальными инфекциями (NNIS) частота выделения S. aureus и коагулазоне-гативных стафилококков (CoNS) при ИОХВ

после кардиохирургических вмешательств составляет 32,5 и 21,9% соответственно.

Современные методы молекулярной диагностики (ПЦР) позволяют проведение прямого ПЦР-анализа этиологии и анти-биотикорезистентности возбудителя без предварительного культивирования последнего. Основным преимуществом ПЦР-анализа является высокая производительность и скорость получения результатов по сравнению с культуральными методами [3, 6, 7]. Нами проведено исследование по обнаружению ДНК S. aureus и участка геномного материала, несущего ген mecA в клинических образцах. Целью данного исследования стало изучение возможности использования ПЦР-анализа для прямого установления инфекции области хирургического вмешательства, вызванной бактериями рода Staphylococcus, и выявления резистентности к метициллину, обусловленной геном mec A.

материал и методы

Всего изучено 143 образца, доставленных в микробиологическую лабораторию

Посев материала производили общепринятыми в микробиологической практике методами. Идентификацию проводили на анализаторах ATB-expression (bioMerieux, Франция) и Phoenix (Becton Dickinson, США). Для определения чувствительности использовали чистые культуры выделенных возбудителей. Метициллинорезистентность исследовали с помощью дисков, пропитанных оксациллином и цефокситином (Bio-Rad, США) на агаре Мюллер-Хинтон (bioMerieux, Франция) в соответствии с рекомендациями Национального комитета по клиническим и лабораторным стандартам США (CLSI, 2004) и Методическими указаниями по определению чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам (МУК 4.2 1890-04. 2004) и на анализаторе ATB-expression (bioMerieux, Франция) и Phoenix (Becton Dickinson, США). Сравнение результатов микробиологического исследования и ПЦР-ана-лиза проводили после окончательного результата посева.

Сравнительный анализ чувствительности и специфичности ПЦР-анализа по сравнению с классическими бактериологическими методами осуществляли с использованием программного обеспечения Ridom EpiCompare (Германия).

Из 143 исследованных образцов в 87 (60,8%) пробах получен рост бактерий рода Staphylococcus. При этом в 72 (50,3%) случаях стафилококки были идентифицированы как S. epidermidis, в 8 (5,6%) - S. aureus, в 5 (3,5%) - S. saprophytics и по 1 (0,7%) S. sciuri и S. haemolyticus. В 37 (27,6%) рост отсутствовал и в 17 (11,7%) выявлен рост бактерий, не относящихся к роду стафилококков (рис. 1 ).

Фенотипически метициллинорезистентность выявлена у 69 штаммов стафилококков, что составило 48,2% от числа изученных клинических образцов. Устойчивость к метициллину выявлена в 1,4% (2 штамма) у S. aureus и в 46,8% у CoNS (67 штаммов) (табл. 1 ).

Метициллинорезистентные коагулазонегатив-ные стафилококки были представлены следующими видами: S. epidermidis (42,6%), S. saprophyticus (2,8%), S. sciuri (0,7%) и S. haemolyticus (0,7%).

Все чистые штаммы MRS тестировались на наличие гена mec A методом ПЦР-анализа, во всех случаях был выявлен участок гена mec A. В ходе ПЦР-анализа ДНК S. aureus обнаружена в 8 (5,6%), ген mec A S. aureus в 2 и ген mec A CoNS - 73 клинических образцах (табл. 2).

При сравнении результатов ПЦР-анализа и данных микробиологического исследования получены следующие результаты: в 6 пробах, в которых обнаружены только ДНК S. aureus, получен рост MSSA, в 2 пробах, в

Результаты микробиологического исследования клинического материала (П = 143)

Результаты исследования Кол-во образцов, абс

Получен рост Рост отсутствовал % роста

S.aureus 8 135 5,6

MR CoNS 67 76 46,8

Результаты исследования клинического материала молеку-лярно-биологическим методом (п = 143)

Результаты исследования Кол-во образцов, абс

Обнаружен Не обнаружен % обнаружения

ДНК S.aureus 8 135 5,6

Ген mec A S.aureus 2 141 1,4

Ген mec A CoNS 73 70 51,0

Патология кровообращения и кардиохирургия 4. 2011

Сравнение результатов исследования клинического материала молекулярно-биологи-ческим и микробиологическим методами (П = 143)

Общее кол-во образцов n (абс.)

Данные ПЦР-анализа, n (абс.)

Данные микробиологического исследования, n (абс.)

MR MS CoNS CoNS

Нет роста n (абс.)

73 - 73 - - 66 - 3 3

62 - - - - 1 12 13 37

которых выделены ДНК S. aureus и ген mecA, рост MRSA (табл. 3). В 73 образцах, в которых обнаружены только ДНК участка несущего ген mec A: в 66 - получен рост метициллинорезистентных коагулазонегативных стафилококков (MR CoNS), в 3 - рост бактерий, не относящихся к роду Staphylococcus, и в 3 - рост отсутствовал.

Из 62 клинических образцов, в которых ДНК S. aureus и ген mecA не обнаружены, в 12 получен рост мети-циллиночувствительных коагулазонегативных стафилококков (MS CoNS), в 1 - рост метициллинорезистент-ного S. epidermidis, в 13 - рост бактерий, не относящихся к роду Staphylococcus, и в 37 - рост отсутствовал.

Таким образом, совпадение результатов ПЦР-анализа и микробиологического исследования составило 100% при обнаружении в клинических образцах ДНК S. aureus и гена mecA. В то время как при обнаружении только гена mec A совпадение отмечено в 95,5% случаев.

В целом, при сравнении результатов ПЦР-ана-лиза и результатов, полученных в ходе микробиологического исследования, совпадение наблюдалось в 137 (95,8%) случаях. При этом чувствительность ПЦР-анализа составила 98,6% и специфичность - 95,8%. Конкордантность теста 0,958.

К основным возбудителям инфекций, возникших после проведения кардиохирургических операций по данным [15] относятся коагулазонегативные стафилококки (CoNS) и S. aureus, частота которых составляет 36/91 (39,6%) и 15/91 (16,5%) соответственно. CoNS были выделены в 42-64% случаев при исследовании поверхнос-

тных и глубоких инфекций в области стернотомной раны [16]. Наиболее тяжел ым осложнен ием после ка р-диохирургических вмешательств является медиасти-нит. Большинство послеоперационных медиастинитов в кардиохирургии вызывается Staphylococcus aureus, на долю которых приходится не менее 50% случаев этого осложнения. Коагулазонегативные стафилококки чаще выделяются при нестабильности грудины [7, 9, 11].

Терапия ИОХВ включает хирургическое дренирование и использование антибиотиков и антисептиков. К основным антибиотикам, используемым для терапии стафилококковых инфекций, относятся бета-лактамы (прежде всего оксациллин, цефазолин и амоксициллин/клавула-нат), гликопептиды (ванкомицин) и оксазолидиноны (лине-золид) [7]. Ключевым моментом в выборе антибиотика служит выявление MRS. Резистентность стафилококков к метициллину может быть обусловлена тремя механизмами: продукцией дополнительного пенициллинсвязы-вающего белка (ПСБ) - ПСБ-2а, кодируемого геном mec А; инактивацией вследствие гиперпродукции бета-лакта-маз; модификацией нормальных ПСБ. При этом клиническое значение имеет mec А-обусловленная резистентность. Это связано с тем, что при инфекциях, вызванных штаммами стафилококков с mec A, терапия бета-лактам-ными антибиотиками неэффективна. Препаратом выбора при инфекциях, вызванных MRS штаммами, является ванкомицин [1, 5-7]. Таким образом, обнаружение mec А-обус-ловленной резистентности к метициллину необходимо для решения вопроса при выборе средства лечения. По результатам исследований отдельных авторов, выделение метициллинорезистентного Staphylococcus aureus при развитии послеоперационного медиастенита является фактором риска неблагоприятного исхода [1, 6, 7, 12].

Таким образом, при развитии ИОХВ предположительно стафилококковой этиологии с клинической точки зрения необходимо получить ответ о виде стафилококка (S. aureus или CoNS) и о наличии у выделенных стафилококков гена mec A.

Используемый нами набор реагентов позволяет выявить наличие ДНК золотистого стафилококка и участка геномного материала, несущего ген mecA, как у S. aureus, так и у коагулазонегативных стафилококков. При использовании набора в нашем исследовании регистрирова-

лось совпадение результатов ПЦР-анализа и результатов микробиологического исследования в 95,8% случаев. В случае выделения MRSA и MSSA совпадение отмечено в 100%. Чувствительность ПЦР-анализа составила 98,6%, специфичность - 95,8%. Конкордантность - 0,958.

Результат ПЦР-анализа был получен через 3 ч от момента поступления клинического образца в ПЦР лабораторию. На практике окончательный результат ПЦР-анализа обычно получают к концу рабочего дня, в связи с чем в клиническое отделение, направившее образец, результат поступит на следующий день, что позволит сравнить его с результатами посева и принять решение о соответствующей антимикробной терапии менее чем через сутки от момента доставки клинического образца в лабораторию.

ПЦР-анализ клинического образца, полученного у пациентов с инфекцией в области хирургической раны после кардиохирургического вмешательства, значительно ускоряет результат исследования (в сравнении с микробиологическим) в случае инфекции, обусловленной как MRSA, так и MR CoNS. ПЦР-исследование может быть использовано для контроля эффективности проводимой антимикробной терапии ИОХВ с ранее установленной MRSA и MR CoNS этиологией. Чувствительность ПЦР-анализа составила 98,6%, специфичность - 95,8%.

1. Дехнич А.В. // Клин. микробиол. антимикроб. химиотер. 1999. Т. 1. №1. С. 89-91.

2. Зузова А.П., Белькова Ю.А. // Фарматека 2007. Т. 139. № 4. С. 67-74.

3. Лопухов Л.В., Эйдельштейн М.В. // Клин. микробиол. антимикроб. химиотер. 2000. Т. 2. № 3. С. 96-106.

4. Манграм А.Дж., Хоран Т.С., Пирсон М.Л. и др. // Клин. микробиол. антимикроб. химиотер. 2003. Т. 5. № 1. C. 74-101.

5. Никулин А.А., Дехнич А.В. // Клин. микробиол. антимикроб. химиотер. 2010. Т. 12. № 1. С. 4-22.

6. Сидоренко С. В., Шляпников С. А. // Успехи биологической химии. 2004. Т. 44. С. 263-306.

7. Шляпников С.А., Сидоренко С.В. // Инфекции в хирургии. 2010. Т. 8. № 3. C. 40-46.

8. Dodds A., Carroll D., Engemann J. et al. // Clin. Infect. Dis. 2004. V. 38. P. 1555-1560.

9. Eguia J., Chambers H. // Semin Respir. Crit. Care Med. 2003. V. 24. № 1. P. 37-34.

10. Gardlund B., Bitkover C., Vaage J. // Eur. J. Cardiothorac. Surg. 2002. V. 21. № 5. P. 825-830.

11. Lin C., Hsu R., Chang S. // Clin. Infect. Dis. 2003. V. 37. P. 679-684.

12. Ridderstolpe L., Gill H., Granfeldt H. // Eur. J. Cardiothorac. Surg. 2001. V. 20. № 6. P. 1168-1175.

13. Tegnell A., Aren C., Ohman L. // Ann. Thorac. Surg. 2000. V. 69. P. 1104-1109.

14. Upton A., Roberts S.A., Milsom P., Morris AJ. // J. Surg. 2005. V. 75. P. 198-203.

Скачкова Татьяна Сергеевна - младший научный сотрудник отдела молекулярной диагностики и эпидемиологии Центрального НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора (Москва).

Шипулина Ольга Юрьевна - руководитель лаборатории молекулярных методов отдела молекулярной диагностики и эпидемиологии Центрального НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора (Москва).

Аннотация научной статьи по наукам о здоровье, автор научной работы — Пруссова Валентина Николаевна, Влахно Светлана Николаевна

В статье отражен микробиологический мониторинг исследований биологического материала из зева и носа от пациентов лечебно профилактических учреждений Уссурийского городского округа. Определена роль и высокая значимость S. аureus, как этиологического фактора в возникновении инфекционных заболеваний верхних дыхательных путей, формирования бактерионосительства, определен удельный вес S. аureus в клиническом материале (отделяемое зева и носа), установлена сезонность выделения, проанализирована антибиотикорезистентность выделенных штаммов.

Похожие темы научных работ по наукам о здоровье , автор научной работы — Пруссова Валентина Николаевна, Влахно Светлана Николаевна

MICROBIOLOGICAL STUDIES OF THE BIOLOGICAL MATERIAL ON THE IDENTIFICATION OF PATHOGENIC STAPHYLOCOCCUS IN THE TERRITORY OF THE USSURIYSK URBAN COUNTY

The article reflects the microbiological monitoring studies of the biological material from the throat and nose fromthe patient medical care facilities Ussuri city district. The role and high importance of S. aureus as an etiologicalfactor in the occurrence of infectious diseases of the upper respiratory tract, the formation of bacteria, determinedthe proportion of S. aureus in clinical samples (throat and nasal discharge), set the seasonal allocation, analyzedantibiotic resistance of the isolated strains.

Yu.V. Nesterova, L.P. Radchenko

epidemiology of skin diseases and lice in primorsky region of russia

The evaluation of the epidemiological situation on the incidence of the most relevant infectious skin diseases and lice in the Primorsky Region and administrative areas. Defined risk groups. Characteristics of foci. The analysis of the dynamics of the annual incidence of scabies, microsporia, trichophytosis and head lice.

Keywords: scabies, microsporia, trichophytosis, pediculosis, Primorsky Region, Russia.

Сведения об авторах

В.Н. Пруссова1, С.Н. Влахно2

микробиологические исследования биологического материала на выявление патогенного стафилококка на территории уссурийского городского округа

В статье отражен микробиологический мониторинг исследований биологического материала из зева и носа от пациентов лечебно профилактических учреждений Уссурийского городского округа. Определена роль и высокая значимость S. aureus, как этиологического фактора в возникновении инфекционных заболеваний верхних дыхательных путей, формирования бактерионосительства, определен удельный вес S. aureus в клиническом материале (отделяемое зева и носа), установлена сезонность выделения, проанализирована антибиотикорезистентность выделенных штаммов.

Ключевые слова: стафилококки, адгезия, колонизации, полиорганный тропизм, антибиотики, госпитальные штаммы, полирезистентные штаммы, фаготип, антибиотикорезистентность, внутрибольничные инфекции, инфекционный процесс, Уссурийск, Приморский край.

Актуальность данной темы обусловлена стабильно высокой заболеваемостью инфекциями верхних дыхательных путей, этиологическим фактором которых является золотистый стафилококк. Постоянный рост заболеваемости инфекциями, вызванными золотистым стафилококком, приводит к формированию высокого процента постоянного бактерионосительства (до 60% населения по данным разных источников) золотистого стафилококка среди всех возрастных и социальных групп населения, также формируются госпитальные штаммы и антибиотикоустойчивость [1].

Слизистая зева и носа обильно колонизирована различными микроорганизмами. Слизистая зева

и носа человека является благоприятной средой обитания, как для патогенных, так и непатогенных микроорганизмов. Слизистая верхних дыхательных путей имеет стабильную температуру, постоянную влажность, слабощелочную реакцию, что создает благоприятные условия для адгезии, колонизации и размножения микроорганизмов. Микрофлора зева и носа - это сложный динамичный биоценоз различных микробных популяций, который эволюционно складывается в результате взаимодействия множества эндогенных и экзогенных факторов. В верхние дыхательные пути попадают с вдыхаемым воздухом пылевые частицы, нагруженные различными, в том

числе, патогенными микроорганизмами. Вступая в контакт со слизистой зева и носа, данные микроорганизмы могут либо элиминироваться защитными механизмами макроорганизма, либо адгезировать-ся на эпителии с развитием острого инфекционного процесса или формированием хронического носительства. Нормальная микрофлора зева и носа представлена различными видами стрептококков и стафилококков, бактероидами, коринеформными бактериями, гемофильными палочками, лактобакте-риями, пептококками, грибами рода Кандида, непатогенными нейссериями, пневмококками [1, 3].

Среди эпидемиологов, микробиологов и клиницистов довольно распространенное убеждение, что сегодня непатогенных стафилококков не существует. Всё больше случаев выделения из крови, тканей и органов культур стафилококков без каких-либо маркеров патогенности. Однако при элиминации их из организма исчезают все симптомы заболевания. Все это необходимо учитывать при проведении лабораторной диагностики стафилококковых инфекций. К сожалению, в рутинных бактериологических лабораториях нашей страны пока возможна идентификация лишь S. aureus, S. epidermidis и S. saprophyticus. Стафилококки как возбудители инфекций были открыты одними из первых. Различают патогенные и непатогенные стафилококки. В зависимости от степени патогенности выделяют три вида стафилококков: S. aureus (золотистый стафилококк), S. epidermidis (эпидермальный стафилококк) и S. saprophyticus (сапрофитный стафилококк). Основное значение для патологии человека имеет золотистый стафилококк (S. aureus) [2, 5].

Стафилококки обладают полиорганным тропизмом, связанным с их способностью адгезировать на рецепторах клеток разных тканей и органов человека. Их политропность выражается в способности вызывать гнойно-воспалительные процессы в коже, подкожной клетчатке, лимфоузлах (фурункулы, карбункулы, маститы, абсцессы и др.), респираторном тракте (бронхиты, пневмонии, плевриты), ЛОР-органах (отиты, ангины, гаймориты, тонзиллиты и др.), органах зрения (конъюнктивиты, язвы роговицы), желчевыводящих путях (холециститы, холангиты и др.), мочеполовых органах (гломеруло-нефриты, уретриты, простатиты и др.), опорнодви-гательном аппарате (остеомиелиты, артриты, миозиты), а также пищевые отравления. Генерализация любой формы местного процесса может привести к сепсису или септикопиемии. Стафилококки вызывают острые кишечные заболевания у новорожденных. Стафилококки могут вызывать тяжелые формы ОКЗ, а также менингиты у детей младшего возраста.

Наиболее распространенные и самые опасные для человека формы бактериальных заболеваний вызывают только 3 вида стафилококков 4:

По качественному содержанию патогенных стафилококков в человеческом организме выделяют 3 группы бактерионосителей:

• лица, у которых патогенные стафилококки в большом количестве постоянно обнаруживаются на слизистой верхних дыхательных путей;

• группа людей, у которых патогенный стафилококк обнаруживается периодически;

• немногочисленная группа лиц, постоянно свободных от носительства патогенных стафилококков.

Такой большой процент выделения патогенных стафилококков медицинским персоналом свидетельствует о возможности внутрибольничной стафилококковой инфекции.

По данным большинства исследователей первичное заражение новорожденных в родильных домах чаще происходит от обслуживающего персонала, медицинских работников (т.е. бактерионосителей). Обсеменение кожи и слизистых оболочек новорожденных патогенными стафилококками происходит уже в первые часы жизни. К 2-4 дням жизни большинство новорожденных являются носителями патогенных стафилококков на тех или иных участках тела, а к 7-10 дням они обнаруживаются практически у всех детей. Замечено, что кожа новорожденных заселяется стафилококками раньше, чем дыхательные пути. Наиболее обильному обсеменению подвергается область живота в результате того, что эта часть тела детей наиболее часто соприкасается с руками персонала, в частности при обработке пуповины. Патогенные стафилококки являются одними из первых микробов, инфицирующих верхние дыхательные пути. После первичного инфицирования от медицинского персонала дальнейшее поддержание высокой концентрации патогенных стафилококков связано с обильным размножением стафилококка, которые становятся вторичными источниками обсеменения окружающей среды. От первично инфицированных детей патогенные стафилококки воздушно-капельным и контактным путем (белье, предметы ухода, руки персонала) распространяются к другим новорожденным. Чаще всего это наблюдается при вспышках стафилококковой инфекции в родовспомогательных учреждениях [2, 5].

Первичное инфицирование новорожденных от матерей встречается значительно реже (5-14%). Чаще всего не матери заражают своих детей, а, наоборот, дети, ставшие носителями, инфицируют своих матерей при кормлении, в результате чего развивается мастит [4].

Фаготип стафилококков, вызываемых мастит у родильниц, как правило, совпадает с фаготипом

Таким образом, заражение новорожденных и родильниц в родильных отделениях патогенным стафилококком можно представить в виде схемы: персонал - ребенок; персонал - ребенок - мать; персонал - ребенок - ребенок. Определение удельного веса S. аureus в клиническом материале (отделяемое зева и носа)

Общее количество обследованных с острыми инфекциями верхних дыхательных путей на S. aureus в 2012 г. составило 4850 человек, из них S. aureus выявлен у 1171 человек, что составляет 24% от общего количества обследуемых больных. В 2013 г. было обследовано 4915 человек, из них S. aureus был выявлен у 1327 человек, что составило 29% от общего количества обследуемых больных.

Определение сезонности выделения S. аureus из отделяемого зева и носа

При изучении результатов исследования отделяемого зева и носа от пациентов с острыми инфекциями верхних дыхательных путей на S. aureus с распределением по месяцам и по сезонам за период 2012-2013 гг. установлено увеличение случаев выявления S. аureus в холодное время года с октября-месяца осенью по декабрь 2012 и 2013 гг. Уровень случаев выделения S. аureus от пациентов в 2013 гг. выше по сравнению с 2012 г.

Анализ антибиотикорезистентности выделенных штаммов S. аureus из отделяемого зева и носа Производилось определение антибиотикочув-ствительности выделенных штаммов S. aureus (табл.) к следующим группам антимикробных препаратов:

1) Р-лактамы(ампициллин-сульбактам, ампициллин, амоксициллин, амоксиклав, оксациллин, цефу-роксим, цефалексин);

2) линкозамиды (линкомицин, клиндамицин);

3) макролиды (азитромицин, эритромицин). Чувствительность выделенных штаммов S.aureus

к антибиотикам группы линкозамидов оставалась довольно высокой в течение анализируемого периода, но имела тенденцию к снижению (92% в 2012 г. и 82% в 2013 г. соответственно) [5].

Устойчивость выделенных штаммов S. aureus к антибиотикам абсолютных числах за исследуемый период 2012-2013 гг.

Название антибиотиков 2012 г. 2013 г.

Количество штаммов Количество штаммов

Чувствительные Умеренно устойчивые Устойчивые Чувствительные Умеренно устойчивые Устойчивые

Оксациллин 403 9 135 912 131 194

Пенициллин 24 0 157 174 34 906

Азитромицин 93 14 23 261 163 53

Амоксициллин 62 7 372 70 29 197

Клиндамицин 198 3 6 582 16 29

Амоксиклав 39 3 41 629 20 200

Эритромицин 418 43 79 441 230 102

Цефалексин 520 8 13 254 7 4

Линкомицин 255 8 25 447 122 63

Ампициллин 32 0 166 12 4 82

Цефуроксим 72 0 0 0 0 1

Чувствительность к антибиотикам группы макро-лидов за наблюдаемый период значительно снизилась (с 76% до 56% по годам 2012-2013 гг. соответственно) - на 20%.

Чувствительность к антибиотикам группы В-лактамов в течение 2012-2013 гг. оставалась фактически на одном уровне 55% и 53% по годам соответственно.

При этом происходит преимущественное нарастание процентного числа умеренно-устойчивых штаммов к антибиотикам: группа Р-лактамы - с 1,3% до 6% (в 4,6 раз), группа линкозамиды - с 2% до 11% (в 5,5 раз), группа макролиды - с 9% до 31% (в 3,4 раза) за наблюдаемый период.

1. При анализе результатов выделения штаммов S^ureus выявлено, что среди всех возбудителей инфекций верхних дыхательных путей удельный вес S. aureus составил 24% в 2012 г. и 29% в 2013 г., практически при одинаковом количестве обследованных лиц (4850 человек в 2012 г. и 4915 человек в 2013 г. соответственно), что свидетельствует о постоянной циркуляции штаммов S. aureus среди населения на территории УГО, увеличении роли S. aureus как этиологического фактора острых и хронических заболеваний верхних дыхательных путей среди всех возрастных групп и возможном формировании большого количества хронических носителей штаммов S. aureus.

2. Анализ сезонности выделения штаммов S. aureus в зависимости от времени года не выявил каких-либо закономерностей, но отмечается подъем заболеваемости в осенний период в октябре 2013 г.

3. Чувствительность выделенных штаммов S. aureus к антибиотикам группы линкозамидов оставалась довольно высокой в течение анализируемого периода, но имела тенденцию к снижению

(92% в 2012 г. и 82% в 2013 г. соответственно). Чувствительность к антибиотикам группы макроли-дов за наблюдаемый период значительно снизилась (с 76% до 56% по годам 2012-2013 гг. соответственно) - на 20%. Чувствительность к антибиотикам группы Р-лактамов в течение 2012-2013 гг. оставалась фактически на одном уровне 55% и 53% по годам соответственно. При этом происходит преимущественное нарастание процентного числа умеренно-устойчивых штаммов к антибиотикам за наблюдаемый период: группа Р-лактамы - с 1,3% до 6% (в 4,6 раз), группа линкозамиды - с 2% до 11% (в 5,5 раз), группа макролиды - с 9% до 31% (в 3,4 раза).

4. Полученные данные свидетельствуют о формировании полирезистентных штаммов вследствие неправильного и бесконтрольного применения больными антибиотиков.

1. Белобородов В.Б., Митрохин С.Д. Стафилококковые инфекции // Инфекции и антимикробная терапия, 2003. С. 17-20.

2. Дерябин Д.Г. Стафилококки: экология и пато-генность. Екатеринбург. УрО РАН 2000.

3. Жилина С.В., Миронов А.Ю., Поликарпова С.В. и др. Мониторинг штаммов Staphylococcus aureus. // Человек и его здоровье. 2009. №1. С.51-62.

5. Методические указания. МУК 4.2.1890-04 // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия, 2004. Т.6. №4. С.306-59.

6. Чистович Г.Н. Эпидемиология и профилактика стафилококковых инфекций. Л., 1969.

V.N. Prussova1, S.N. Vlahno2

microbiological studies of the biological material on the identification of pathogenic staphylococcus in the territory of the ussuriysk urban county

The article reflects the microbiological monitoring studies of the biological material from the throat and nose from the patient medical care facilities Ussuri city district. The role and high importance of S. aureus as an etiological factor in the occurrence of infectious diseases of the upper respiratory tract, the formation of bacteria, determined the proportion of S. aureus in clinical samples (throat and nasal discharge), set the seasonal allocation, analyzed antibiotic resistance of the isolated strains.

Keywords: staphylococci, adhesion, colonization, organ tropism, antibiotics, hospital strains, multiresistant strains, phage type, antimicrobial resistance, nosocomial infections, infectious process, Primorsky region, Russia.

Сведения об авторах

УДК 579.63 (Уссурийск, Приморский край)

В.Н. Пруссова, М.С. Кива

микробиологический мониторинг за пищевыми продуктами

В статье отражены данные микробиологического мониторинга пищевых продуктов за период 2012-2014 гг. Отмечено ежегодный рост положительных результатов, при которых не выдержаны требования программы испытаний, дана отрицательная оценка. Проанализирована структура исследованных проб пищевых продуктов с определением ранговых мест. По микробиологическим показателям первое ранговое место в структуре выделенной микрофлоры из пищевых продуктов и продовольственного сырья занимают бактерии группы кишечной палочки (БГКП) - 60,0%. Второе ранговое место - колонии мезофильных анаэробных факультативно-анаэробных и мезофильных микроорганизмов (КМАФА и М) -23,9%. На третьем ранговом месте - кишечная палочка (E.coli) - 8,9%.

Ключевые слова: пищевые продукты, сроки годности, санитарно-эпидемиологическая оценка, пролонгация, контаминация микроорганизмами, экспресс-методы исследования, импедансный метод исследования, метод фермент-связанного флуоресцентного анализа, Уссурийск, Приморский край.

Одним из важнейших показателей, характеризующих качество и безопасность продовольственного сырья и продуктов питания, является контаминация их микроорганизмами. Учитывая особую значимость продуктов питания в возникновении острых кишечных инфекционных заболеваний и бактериальных

пищевых отравлений, уделяется пристальное внимание мониторингу за микробиологической чистотой продовольственного сырья и пищевых продуктов [1].

Питание является одним из важнейших факторов, определяющих здоровье населения. Правильное питание способствует профилактике заболеваний, по-