Лямблиоз титр 1 400

Антитела к Giardia lamblia, возбудителю лямблиоза, – это специфические белки-иммуноглобулины, вырабатываемые иммунной системой в ответ на инфицирование лямблиями и обеспечивающие иммунную защиту.

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Общая информация об исследовании

Giardia lamblia – это простейшие, паразитирующие в тонкой кишке и иногда в желчном пузыре и вызывающие лямблиоз. Они могут существовать в вегетативной форме (трофозоиты) и в форме цист. Когда цисты проникают внутрь организма, из них высвобождаются трофозоиты, способные к размножению и заселению тонкого кишечника. При определенных условиях часть трофозоитов вновь образует цисты, которые выделяются с фекалиями во внешнюю среду.

Путь передачи инфекции – фекально-оральный, через зараженную цистами лямблий воду или пищу, а также через загрязненные руки и бытовые предметы.

Источник инфекции – больной лямблиозом или бессимптомный носитель. Инкубационный период составляет 3-42 дня.

При данной инфекции преобладают симптомы диареи: боли, вздутие и урчание в животе, повышенное газообразование, частый желтоватый водянистый стул с неприятным запахом, увеличение количества непереваренных жиров в кале из-за нарушения всасывания жиров, иногда потеря аппетита и рвота. К "внекишечным" проявлениям лямблиоза относятся различные аллергодерматозы, артрит и ринит. Может лямблиоз протекать и бессимптомно с ликвидацией возбудителя через 1-3 месяца.

Наиболее подвержены заболеванию дети (особенно в возрасте от 1 года до 4 лет). У них инфекция протекает особенно тяжело, иногда с дефицитом массы тела. К группе высокого риска по заражению лямблиозом также относятся путешественники, люди с низким уровнем гигиены и социальным статусом, те, кто находится в учреждениях закрытого типа (больницах, домах престарелых, тюрьмах), сексуально активные гомосексуалисты, пациенты с иммунодефицитами и мальабсорбцией, а также представители некоторых профессий (работники зоопарков, звериных питомников и т. д.).

В ответ на лямблии иммунной системой вырабатываются специфические иммуноглобулины (A, M, G). Самыми первыми появляются IgM (на 10-14-й день после заражения), затем – IgG, которые присутствуют в крови практически на всех стадиях лямблиоза, их уровень снижается через 1-2 месяца после гибели паразита.

Для чего используется исследование?

Для выявления острых и хронических форм лямблиоза.
Для выявления паразитоносителей.
Для дифференциальной диагностики (наряду с другими тестами) при заболеваниях, протекающих со сходными симптомами, таких как бактериальная или вирусная диарея, воспалительные заболевания кишечника, нарушения всасывания, некоторые эндокринные расстройства, стресс.

Когда назначается исследование?

При диарее неустановленного происхождения.
При хронических заболеваниях желудочно-кишечного тракта.
При дисбактериозе кишечника.
При гипотрофии, отставании в физическом развитии.
При кожных заболеваниях: дерматите, крапивнице, экземе, нейродерматите.
При иммунодефицитных состояниях.
При обструктивных бронхитах и бронхиальной астме.
При аллергии неустановленной этиологии.
При обследовании лиц, контактировавших с больным лямблиозом или с паразитоносителем.

Что означают результаты?

КП (коэффициент позитивности): 0 - 0,84.

Текущий острый или хронический лямблиоз.
Недавно перенесенный лямблиоз.
Носительство G. lamblia.
Перекрестные реакции с соматическими антигенами или антигенами других возбудителей (редко).

Отсутствие инфицирования лямблиями.
Серонегативный период заражения (первые 1-2 недели после инфицирования).
Отсутствие иммунного ответа или слабый иммунный ответ к возбудителям лямблиоза из-за нарушений в иммунной системе.

Тест на антитела к лямблиям является косвенным методом диагностики лямблиоза. Кроме того, антигены лямблий могут перекрестно реагировать с антигенами других паразитов или антигенами человека, что нередко приводит к ложноположительным результатам. Поэтому данный анализ целесообразно использовать как дополнительное исследование, в комплексе с другими. Большей диагностической значимостью обладает выявление антигенов лямблий в фекалиях.

Abstract

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, в частности к паразитологии.

Лямблиоз является повсеместно распространенной инвазией. В Российской Федерации ежегодно регистрируется около 110000 случаев лямблиоза, из которых 80% составляют дети до 14 лет. В этиологической структуре диарей на долю лямблиоза приходится от 3% до 8% случаев. Доказана роль Lamblia intestinalis в аллергизации организма, развитии дуоденоеюнитов, кроме этого лямблиоз является инвазией, сопутствующей широкому спектру заболеваний желудочно-кишечного тракта: хроническому гастродуодениту в 76,5%, панкреатиту - 15,7%, энтероколиту - 4,0%, рефлюкс-эзофагиту - 3,8% случаев.

В качестве аналога авторы предлагают микроскопический способ диагностики лямблиоза (Клиническая лабораторная аналитика. Том II. Частные аналитические технологии в клинической лаборатории / Под ред. В.В.Меньшикова. - М.: Лабинформ-РАМЛД, 1999. - 352 с.). Из исследуемого материала (фекалии) готовят два нативных препарата под покровными стеклами. Один из препаратов окрашивают раствором Люголя. Микроскопию препаратов проводят с сухой системой большого увеличения. В неокрашенном препарате выявляют подвижные вегетативные стадии лямблий, в окрашенном препарате - цисты простейших.

К недостаткам микроскопического способа диагностики лямблиоза можно отнести недооценку периодичности выделения лямблий с фекалиями, зависимость наличия различных форм возбудителя от консистенции стула. В связи с этим эффективность микроскопического способа является недостаточно высокой, а сроки диагностики - продолжительными, так как для подтверждения отрицательных результатов необходимо микроскопическое исследование фекалий с интервалом в 1 неделю в течение 4-5 недель.

Прототипом заявляемого способа, по мнению авторов, является способ определения антител к антигенам лямблий методом ИФА с использованием тест-системы “Лямблия-АТ-стрип” (ЗАО “Вектор-Бест”, Новосибирская обл., п.Кольцово). Способ заключается в обнаружении в сыворотке крови антител к антигенам Lamblia intestinalis. В ходе исследования при взаимодействии исследуемых образцов сывороток крови (разведение 1:100) в лунках планшеты с иммобилизованными антигенами лямблий происходит связывание специфических антител и образование комплекса “антиген-антитело” на поверхности лунок. После удаления не связавшихся компонентов сыворотки и добавления в лунки планшета конъюгата антител против иммуноглобулинов человека с пероксидазой хрена происходит включение ферментной метки в иммунный комплекс. В результате ферментативной реакции, проведенной в лунках, отмытых от избытка конъюгата, с субстратным раствором для пероксидазы, содержащим перекись водорода и ортофенилендиамин, образуется окрашенный продукт, оптическая плотность которого пропорциональна концентрации антител в анализируемом образце сыворотки к антигенам лямблий. Оптическую плотность (ОП) меченого иммунного комплекса в лунках планшеты регистрируют с помощью анализатора колориметрического иммуноферментного при длине волны 492 нм. В планшете кроме рабочих лунок, в которые вносят исследуемые сыворотки, ставят контроли: в 2 лунки вносят положительный контрольный образец, в 2 лунки - отрицательный контрольный образец, в 2 лунки (контроль конъюгата) - раствор для разведения сывороток. Последующее проведение реакции в контрольных лунках не отличается от такового в рабочих лунках. Оценку результатов проводят только в том случае, если средние показатели ОП контроля конъюгата не превышает значения 0,2; ОП в лунках с контрольным отрицательным образцом (ОП К - ) не более значения 0,3; а ОП в лунках с контрольным положительным образцом имеет значение не ниже 0,8. Диагностическая ОП (ОП_д) вычисляется по формуле: ОП_д=1,48×ОП К - +0,04. Результат ИФА расценивается как положительный, если ОП меченого иммунного комплекса в лунке, в которой использовалась исследуемая сыворотка (ОП_иссл.) в разведении 1:100, равна или больше диагностической ОП (ОП_д). Поскольку ошибка метода ИФА составляет 10-15% при значении ОП_иссл. меньше на 15%, чем ОП_д, результат считают сомнительным и проводят повторное исследование.

К недостаткам прототипного способа диагностики лямблиоза относится определение только факта наличия антител к антигенам лямблий (в одном разведении 1:100) - то есть лишь качественный способ учета результатов ИФА, но не исследуется количество специфических антител (их титр). Очевидный в данной ситуации подход - исследование исследуемой сыворотки не в одном, а в нескольких разведениях, например от 1:100 до 1:3200 с двукратными разведениями, увеличивает стоимость анализа кратно количеству разведений. В связи с отсутствием количественных данных при прототипном способе отсутствует возможность оценки выраженности иммунного ответа на возбудитель, динамики течения заболевания. Кроме этого невозможно оценить эффективность выбранного химиопрепарата и терапии заболевания в целом.

Авторы предлагают следующий способ диагностики и течения лямблиоза. Постановка ИФА на наличие антител в сыворотке крови к антигенам лямблий с применением тест-системы “Лямблия-АТ-стрип” проводится аналогично прототипу. ОП измеряется при той же длине волны. Расчет ОП_д проводится по вышеуказанной формуле. Однако для учета результата исследования вычисляется разница между ОП_иссл. и ОП_д, которая умножается на 100, с целью получения значения показателя концентрации антител к антигенам лямблий, который авторы предлагают назвать коэффициентом концентрации антител (ККА). Значение ККА является пропорциональным концентрации специфических антител в сыворотке крови. ККА рассчитывается по формуле ККА=(ОП_иссл.-ОП_д)×100, где 100 - коэффициент разведения сыворотки.

Наряду с определением коэффициента концентрации антител (качественная реакция в одном разведении - 1:100) при исследовании сывороток крови на наличие антител к антигенам лямблий с применением тест-системы “Лямблия-АТ-стрип” авторы проводили и определение титра данных антител (количественное исследование). Указанные параллельные исследования проведены на 150 образцах сывороток крови больных с жалобами со стороны желудочно-кишечного тракта, аллергическими заболеваниями и косвенными признаками лямблиоза. Контрольную группу составили образцы крови 30 практически здоровых людей. Образцы крови у обследуемых лиц в количестве не менее 0,5 мл забирали из пальца натощак. Сыворотку крови тщательно отделяли от сгустка и примеси эритроцитов. Сыворотки хранили при температуре 6±2°С не более 48 часов до исследования. Обработка результатов исследования проводилась с использованием компьютерной программы статистического анализа Biostat 3.03 (S.A.Glantz, 1997), применялся критерий линейная регрессия и корреляция.

В 94 образцах опытных сывороток крови значение ККА - от 101 до 205 условных единиц и титры антител 1:800-1:3200, результат исследования расценен как положительный; в 24 образцах опытных сывороток крови - значение ККА от 11 до 100 условных единиц и титр антител 1:200-1:400, результат исследования расценен как положительный, так как у пациентов имелись симптомы со стороны желудочно-кишечного тракта, эозинофилия; у 14 человек при ККА от 11 до 100 условных единиц и титре антител 1:200-1:400 результаты исследования расценены как носительство, так как отсутствовали симптомы со стороны желудочно-кишечного тракта и эозинофилия; в 18 образцах опытных сывороток крови получено значение ККА от 6 до 10 условных единиц и титр 1:100, что интерпретировали как сомнительный результат. В контрольной группе во всех образцах сывороток крови значение ККА составляло от 0 до 5 условных единиц, титр антител менее 1:100.

Полученная статистически достоверная зависимость между ККА и титром антител имеет значение для интерпретации результата исследования: отрицательный результат - сомнительный - носительство - положительный результат, что необходимо для лечащего врача.

Предлагаемый способ диагностики и течения лямблиоза экономически выгоден, поскольку при тех же затратах на проведение ИФА в одном разведении сыворотки крови дает количественный результат (титр специфических антител), а не только факт наличия данных антител, что позволяет контролировать эффективность лечения, использовать для диагностики феномен нарастания титра антител в парных сыворотках.

К-ов Павел, 1995 года рождения (история болезни №2512) поступил в терапевтическое отделение областной детской клинической больницы с жалобами на боли в животе, в околопупочной области, вздутие живота, запах изо рта. В анамнезе частые ОРВИ (до двух раз в месяц) с затяжным течением, длительный субфебрилитетом (до 37°С в вечерние часы в течение трех месяцев). При обследовании обнаружено - дефицит массы тела, кожные покровы бледные, с желтушно-цианотичным оттенком, ярко выраженные периорбитальные тени, цианоз носогубного треугольника. Задние шейные лимфоузлы увеличены до 1 см в диаметре, безболезненные, неспаянные с окружающими тканями. Язык густо обложен белым налетом. Живот болезненный в околопупочной области, в правом подреберье и в точке проекции желчного пузыря. Печень выступает из под края реберной дуги на 1 см. Селезенка не пальпируется. При исследовании крови на наличие антител к антигенам лямблий с помощью ИФА с использованием предлагаемого способа получен коэффициент концентрации антител 202 условные единицы, что соответствует титру антител 1:3200 и расценивается как положительный результат. Поставлен диагноз лямблиоз, назначен курс лечения тибералом, желчегонными, ферментными препаратами, фитотерапия. При контрольном исследовании через месяц определен коэффициент концентрации антител 48 условных единиц, что соответствует титру антител 1:200 и было расценено как положительный результат, так как признаки заболевания все еще присутствовали, хотя выражены были слабее - цианоз носогубного треугольника отсутствовал, периорбитальные тени были выражены слабо, задние шейные лимфатические узлы увеличены до 0,3 см в диаметре, температура нормальная, по органам без особенностей, появился аппетит, прибавка в весе 1 килограмм, дефицит массы тела сохраняется. Продолжена терапия желчегонными, ферментными препаратами, фитотерапия. Через два месяца при контрольном исследовании определен коэффициент концентрации антител 5 условных единиц, что соответствует титру антител менее 1:100 и было расценено как отрицательный результат. Ребенок жалоб не предъявлял, кожные покровы нормальной окраски, лимфатические узлы не пальпировались, по органам без особенностей, прибавка в весе 3 килограмма. Таким образом, при предлагаемом способе диагностики и течения лямблиоза несмотря на положительный лабораторный результат исследования на наличие антител к антигенам лямблий после курса лечения тибералом была продолжена патогенетическая терапия без применения антипаразитарных химиопрепаратов, так как титр антител уменьшился в 16 раз, что говорит об эффективности антимикробной терапии. Контрольное исследование, проведенное через два месяца, подтвердило правильность выбранной врачебной тактики - продолжения патогенетической терапии без дополнительного назначения химиопрепаратов, обладающих известными побочными эффектами.

Владельцы патента RU 2246115:

Изобретение относится к области медицины, а именно к паразитологии, и предназначено для диагностики лямблиоза и его течения. Проводят иммуноферментный анализ. Определяют диагностическую оптическую плотность и оптическую плотность меченого иммунного комплекса в лунке планшета с исследуемой сывороткой, измеряемых в условных единицах при длине волны 492 нанометра. Рассчитывают коэффициент концентрации антител, измеряемый в условных единицах, по формуле: ККА = (ОПиссл - ОПд) х 100, где ККА - коэффициент концентрации антител, ОПиссл - оптическая плотность лунки с исследуемой сывороткой, ОПд - диагностическое значение оптической плотности, 100 – коэффициент разведения сыворотки. По значению ККА определяют титр антител к антигенам Lamblia intestinalis и интерпретируют результаты исследования. Способ позволяет повысить точность диагностики лямблиоза и проследить динамику течения заболевания. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, в частности к паразитологии.

Способ диагностики лямблиоза и его течения, включающий проведение иммуноферментного анализа и определение диагностической оптической плотности и оптической плотности меченного иммунного комплекса в лунке планшета с исследуемой сывороткой, измеряемых в условных единицах при длине волны 492 нм, отличающийся тем, что рассчитывают коэффициент концентрации антител, измеряемый в условных единицах, по формуле: ККА = (ОПиссл - ОПд)×100, где ККА - коэффициент концентрации антител, ОПиссл - оптическая плотность лунки с исследуемой сывороткой, ОПд - диагностическое значение оптической плотности, 100 – коэффициент разведения сыворотки; и по значению ККА определяют титр антител к антигенам Lamblia intestinalis и интерпретируют результаты исследования: значению ККА от 0 до 5 условных единиц соответствует титр антител менее 1:100 и результат исследования расценивают как отрицательный, значению ККА от 6 до 10 условных единиц соответствует титр антител 1:100 и результат исследования считают сомнительным, значениям ККА от 11 до 50 условных единиц и от 51 до 100 условных единиц соответствуют титры антител 1:200 и 1:400 соответственно, и результат исследования расценивают как положительный с диагнозом лямблиоз при наличии симптомов со стороны желудочно-кишечного тракта и эозинофилии или как носительство лямблий при их отсутствии, значениям ККА от 101 до 135 условных единиц, от 136 до 170 условных единиц и от 171 до 205 условных единиц соответствуют титры антител 1:800, 1:1600 и 1:3200 соответственно, и результат исследования считают положительным.

Токсокароз - паразитарное заболевание, вызываемое личинками аскарид. Характеризуется длительным течением и поражениями нескольких внутренних органов.
Половозрелые формы токсокар - крупные раздельнополые черви длиной 4-18 см локализуются в желудке и тонком кишечнике животных (собак). Интенсивность заражения у собак может быть очень высокой, особенно у молодых животных. Средняя продолжительность жизни половозрелых особей составляет 4 месяца, максимальная - 6 месяцев. Самка паразита за сутки откладывает более 200 тыс. яиц. В 1 г фекалий может содержаться 10000-15000 яиц, так что в почву попадают миллионы яиц, обусловливая тем самым высокий риск заражения токсокарозом.

Цикл развития возбудителя следующий: выделившиеся яйца токсокар попадают в почву, где, в зависимости от влажности и температуры почвы, созревают за 5-36 суток, становясь заразными. Заразность яиц сохраняется в почве длительное время, в компосте - несколько лет.
Жизненный цикл токсокары сложный. Выделяют основной цикл и два варианта вспомогательных. Основной цикл происходит по схеме: окончательный хозяин (собаки) - почва - окончательный хозяин (собаки). Вспомогательный цикл (вариант 1) идет трансплацентарно, в этом случае паразит в личиночной стадии переходит от беременной самки к плоду. Зараженный щенок становится функционально полноценным окончательным хозяином, источником заражения.
Вспомогательный цикл (вариант 2) осуществляется по цепи: окончательный хозяин (собаки) - почва - резервуарный хозяин. Резервуарным хозяином могут быть грызуны, свиньи, овцы, птицы, земляные черви. Человек также выступает в роли резервуарного хозяина, но не включается в цикл передачи заражения, являясь для паразита биологическим тупиком. Дальнейшее развитие возбудителя происходит при условии, что резервуарный хозяин будет съеден собакой или другим окончательным хозяином.
У человека цикл развития возбудителя, его миграция осуществляется следующим образом. Из яиц токсокар, попавших в рот, затем в желудок и тонкий кишечник выходят личинки, которые через слизистую оболочку проникают в кровеносные сосуды и через систему воротной вены мигрируют в печень, где часть из них оседает, окружается воспалительной оболочкой. Часть личинок по системе печеночных вен проходит фильтр печени, попадает в правое сердце и через легочную артерию - в легкие. В легких часть личинок также задерживается, а часть, пройдя фильтр легких, по большому кругу кровообращения заносится в различные органы, оседая в них. Личинки токсокар могут локализоваться в различных органах и тканях - почках, мышцах, щитовидной железе, головном мозге и др. В тканях личинки сохраняют жизнеспособность многие годы и периодически, под влиянием различных факторов, возобновляют миграцию, обусловливая рецидивы заболевания.
Токсокароз - широко распространенная болезнь, она регистрируется во многих странах.
Основным источником заражения для человека являются собаки, особенно щенки. Заражение происходит при непосредственном контакте с зараженным животным, шерсть которого загрязнена яйцами, или при попадании в рот земли, в которой были яйца токсокар. Особенно подвержены заражению дети во время игры в песке или с собакой. Взрослые заражаются при бытовом контакте с заразными животными или в процессе профессиональной деятельности (ветеринары, собаководы, работники коммунальной службы, шоферы, землекопы и др.). У человека возможно заражение также при поедании сырого или плохо обработанного термически мяса. Описаны случаи заражения токсокарозом при употреблении в пищу печени ягненка.
Симптомы токсокароза определяются интенсивностью заражения, распределением личинок в органах и тканях, особенностями иммунного ответа человека. Проявления токсокароза малоспецифичны и имеют сходство с другими гельминтами.
Токсокароз обычно развивается внезапно или после короткой предболезни проявляется в виде легкого недомогания. Появляется температура - невысокая в легких случаях и высокая до 39°С и выше, иногда с ознобом. Могут наблюдаться кожные высыпания в виде крапивницы, иногда отеки типа Квинке. В остром периоде наблюдается легочный синдром различной степени тяжести: от легких явлений до острого бронхита, пневмонии, тяжелых приступов удушья. Особенно тяжело легочный синдром протекает у детей раннего возраста. Иногда имеет место приступы болей в животе. Известны случаи поражения щитовидной железы, проявляющиеся симптомами опухоли. При миграции личинок в головной мозг: упорные головные боли, судороги, параличи. У детей заболевание сопровождается слабостью, легкой возбудимостью, нарушением сна.
Наиболее характерным лабораторным показателем токсокароза является повышенное содержание эозинофилов в периферической крови. Относительный уровень эозинофилии может колебаться в широких пределах, достигая в ряде случаев 70-80% и более. Повышается содержание лейкоцитов. В хронической стадии болезни острые клинические и лабораторные признаки затухают. Наиболее стабильным лабораторным показателем остается повышение эозинофилов.
Паразитологический диагноз устанавливается редко и только по наличию в тканях характерных образований - гранулем и личинок и их идентификации при исследовании биопсийного и секционного материала. Это возможно при пункционной биопсии печени, легких, оперативном вмешательстве. Используют также иммунологические реакции, позволяющие выявлять антитела к антигенам токсокар. Обычно применяют ИФА с секреторно-экскреторным антигеном личинок токсокар второго возраста.
Диагностическим титром считают титр антител 1:400 и выше (в ИФА). Титр антител 1:400 свидетельствует о заражении, но не болезни. Титр антител 1:800 и выше свидетельствует о заболевании токсокарозом. Практика показывает, что прямая зависимость между уровнем антител и тяжестью клинических проявлений токсокароза существует не всегда.

Читайте также:

Лямблиоз титр 1 400

Links

Abstract

Description