Диагностика и санация стафилококковых бактерионосителей методические рекомендации

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для санации стафилококковых бактерионосителей, в частности страдающих аллергическими заболеваниями. Способ осуществляется путем воздействия на персистентные характеристики возбудителя, отличается тем, что бактерионосителя помещают в условия микроклимата спелеошахты на 20-30 мин ежедневно в течение 14-22 дней, а о качестве санации судят по отсутствию стафилококков и (или) по снижению их персистентных характеристик не менее чем на 20%. Достигаемый при осуществлении изобретения технический результат состоит в том, что заявляемый способ санации за счет исключения проявления аллергических реакций обеспечивает возможность санирования группы стафилококковых бактерионосителей, страдающих аллергическими заболеваниями, а также укрепляет антиинфекционную резистентность организма. Предлагаемый способ позволяет повысить эффективность санации стафилококковых бактерионосителей.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для санации стафилококковых бактерионосителей, в частности страдающих аллергическими заболеваниями.

Проблема профилактики стафилококковой инфекции по-прежнему остается актуальной в современной медицине и практическом здравоохранении. Основными источниками данной инфекции являются бактерионосители, а биотопом стафилококка слизистая оболочка переднего отдела носа.

Известны способы санации бактерионосителей путем применения антибиотиотиков, различных химиопрепаратов, в том числе некоторых дезинфектантов [1] Однако известные способы не дают длительного положительного эффекта у санируемых бактерионосителей, наблюдаются рецидивы носительства, привыкание микроорганизмов к данным средствам [2] Бактерицидные препараты, уничтожая патогенных стафилококков на слизистой оболочке носа, не изменяют степени восприимчивости организма к этим возбудителям.

Известны также способы санации бактерионосителей путем применения разнообразных химиотерапевтических средств и биологически активных препаратов: гексахлорофена, фурацилина, риванола, лазоцима, хлорофиллипта, бактериофага и др. [3] Недостатком данных способов является то, что их действие направлено на уничтожение микроорганизма, находящегося вне клетки. Золотистые стафилококки при таких методах сохраняются, после проведения санации разрушают клетки, выходят из них и, не встречая конкуренции со стороны нормальной микрофлоры, погибшей под действием санирующих средств, размножаются, и вскоре их популяция достигает большой численности [4] Наиболее близким к заявляемому способу по назначению и совокупности признаков является способ санации стафилококковых бактерионосителей путем воздействия на персистентные характеристики возбудителя масляными растворами витаминов А и E, являющимися высокоактивными средствами с антиоксидантным действием, способствующим репаративным процессам носового эпителия и подавляющими персистентные свойства микроорганизмов [5] Важная роль в формировании резидентного стафилококкового бактерионосительства отводится секретируемым микробным факторам персистенции, обусловливающим внутриклеточное паразитирование возбудителя, антилизотомной, антиинтерфероновой, антикомплементарной. Подавление препаратом персистирующих свойств затрудняет его паразитирование внутри клеток и тем самым повышает эффективность лекарственного воздействия.

Однако известный способ не обеспечивает возможности санирования группы стафилококковых бактерионосителей, страдающих аллергическими заболеваниями, так как встречаются случаи повышенной чувствительности к препаратам данных витаминов у ряда пациентов. Кроме того, данные препараты оказывают лишь местное воздействие, не влияя на состояние антиинфекционной резистентности организма, которая имеет важное значение в патогенезе стафилококкового бактерионосительства.

Поскольку стафилококковые бактерионосители представляют опасность в эпидемиологическом плане как источник стафилококковой инфекции, на повестку дня ставится вопрос об эффективном способе санации и профилактики стафилококковых заболеваний.

Заявляемый способ решает задачу повышения эффективности санации стафилококковых бактерионосителей за счет исключения проявлений аллергических реакций и укрепления антиинфекционной резистентности организма.

Для решения указанной задачи в заявляемом способе санации стафилококковых бактерионосителей путем воздействия на персистентные характеристики возбудителя, бактерионосителя помещают в условия микроклимата спелеошахты на 20-30 мин ежедневно в течение 14-22 дней, а о качестве санации судят по отсутствию стафилококков и (или) по снижению персистентных характеристик не менее чем на 20% Новым в способе санации стафилококковых бактерионосителей является то, что бактерионосителя помещают в условия микроклимата спелеошахты на 20-30 мин ежедневно в течение 14-22 дней, а о качестве санации судят по отсутствию стафилококков и (или) по снижению персистентных характеристик не менее чем на 20% Это отличает заявляемое техническое решение от прототипа.

Достигаемый при осуществлении изобретения технический результат состоит в том, что новый способ санации за счет исключения проявления аллергических реакций обеспечивает возможность санирования группы стафилококковых бактерионосителей, страдающих аллергическими заболеваниями, а также укрепляет антиинфекционную резистентность организма.

Известно применение микроклимата соляных шахт для лечения заболеваний верхних дыхательных путей [6] Различают естественные (соляные копи, шахты, гроты) и искусственные спелеошахты. Искусственная спелеошахта это промышленная камера искусственного микроклимата, который аналогичен микроклимату естественных соляных пещер. В комплекс микроклимата входят аэрозоли поваренной соли (1,2-4,3 мг/м 3 ), положительные и отрицательные ионы, барометрическое давление 754-760 мм рт. ст. температура 18-30 o , низкая относительная влажность (40-60% ), нормальное содержание кислорода (20,7%), углекислоты (0,03-0,05%), отсутствие в шахте бактериальной флоры и шума.

Известно использование феномена персистенции в клинике для дифференциальной диагностики заболеваний, вызываемых патогенными и условно-патогенными микроорганизмами, а также для прогнозирования течения и рациональной терапии [7] Экспериментально установлено влияние микроклимата на персистентные свойства золотистых стафилококков (антилизомная, антиинтерфероновая, антикомплементарная активности).

Предложенные интервалы времени нахождения бактерионосителя в условиях микроклимата спелеошахты являются оптимальными, и выход за их пределы в ту или другую сторону приводит к ухудшению условий решения поставленной задачи.

Уровень снижения персистентных характеристик не менее чем на 20% необходимый для достижения антиперсистентного эффекта, обоснован экспериментально-клиническими наблюдениями [8] Для проведения исследований были отобраны 20 штаммов золотистых стафилококков, обладающих персистентными характеристиками: антилизомной, антиинтерфероновой и антикомплементарной активностями. Штаммы были идентифицированы общепринятыми методами [9] После этого стафилококки, выращенные на плотных питательных средах, помещались ежедневно в спелеошахту на 10, 20, 30, 40 мин в течение 25 дней. Контрольная группа находилась в обычных условиях за пределами шахты.

Среднее значение антилизоцимного признака в опытной группе до обработки составило 2,95 мкг/мл; антиинтерферонового 9,75; антикомплементарная активность равнялась 100 единицам.

На протяжении 12 дней АЛА не изменялась и среднее значение ее колебалось от 2,9 до 2,8 мкг/мл. На 14-й день обработки при экспозиции 20-40 мин АЛА признак снизился до 1,8 мкг/мл и оставался на этом же уровне вплоть до 25-го дня наблюдения. Среднее значение антилизомного признака в контрольной группе составляло 2,15 мкг/мл, через 25 дней 2,3 мкг/мл. Таким образом, АЛА в опытной группе снизилась на 1,1 мкг/мл (37,3%), тогда как на контроле наблюдалось повышение признака, причем стабильное изменение показателя происходило на 14-й день при экспозиции 20 мин, увеличение обработки до 30-40 мин не изменяло полученные результаты. Среднее значение антиинтерферонового признака (АИА) по 20 штаммам в контрольной и опытной группах было одинаковым и составило 9,75 усл.ед. В течение первых 10 дней наблюдалось незначительное уменьшение признака (до 8,5 ед. при 20- минутной экспозиции и 9 ед. при 10-минутной); на 12-й день обработки признак снизился до 6,5 7,0 ед. (33,4 - 28,3% ), на 14-й до 5,6 6,0 ед. (42,6 38,5%); на таком уровне сохранялся до 20-го дня, а затем с 22-го по 25-й день обработки равнялся 5 ед. В контрольной группе признак изменился до 7 усл. ед. Все исследованные штаммы обладали антикомплементарной активностью (АКА) 10 ед. до 10-го дня обработки в спелеошахте признак не изменялся, на 10-12-й составил 50-25 ед. с 14-го дня перестал определяться вообще. В группе штаммов, не обработанных в спелеошахте, АКА не изменилась.

Таким образом, экспериментальными исследованиями показано, что под действием микроклимата происходит снижение персистентных характеристик стафилококков, что приводит к санации организма и может использоваться для борьбы со стафилококковым носительством. Наиболее эффективное снижение всех трех персистентных характеристик начинается с 14-го дня, при экспозиции 20-30 мин ежедневно. В последующие дни обработки персистентные характеристики не изменяются и, следовательно, дальнейшее проведение санации нецелесообразно.

Предложенный способ санации стафилококковых бактерионосителей был испытан в спелеошахте МСЧ "Оренбурггазпром".

Распылением 20% раствора хлорида натрия через аппарат типа "Комфорт" в камере создается лечебная среда: Плотность хлористого натрия 3-8 мг/м 3
Размер частиц 3-8 мкм Не менее 70-80%
Количество кислорода 20,7%
Углекислота 0,03-0,4%
Движение воздуха 0,1-0,2 м/с
Барометрическое давление 750-775 мм рт. ст.

Число микробных тел в м 3 Не более 100
Влажность воздуха 40-60%
Температура 20-30 o C
Способ осуществляется следующим образом: пациентам, подлежащим санации (30 чел. ), но склонным к аллергическим реакциям, предварительно проводили бактериологическую диагностику на наличие золотистого стафилококка [3] и определяли его персистентные характеристики известными способами [10, 11, 12] Если возбудитель обладал данными признаками, проводили санацию бактерионосителей в условиях микроклимата спелеошахты. Бактерионосители находились в спелеошахте в течение 25 мин ежедневно.

Через 14 дней санации проводили контрольное бактериологическое исследование на наличие или отсутствие стафилококка и определяли у него персистентные характеристики. У 5 человек стафилококк не выделялся вообще, у 8 снизились все персистентные характеристики на 40% через 16 дней динамика в сторону уменьшения на 25-30% произошла у стафилококков, выделенных у 6 пациентов; через 18 дней у 5 на 25% 20 дней 3 (на 25%), 22 дня у 3 (на 20%). Кроме снижения персистентных характеристик микроорганизмов установлено повышение естественной резистентности организма у всех санированных.

Примеры конкретного выполнения.

Пример 1. При обследовании на стафилококковое бактерионосительство у хирурга С. Б. был выделен золотистый стафилококк, обладающий АЛА 2 мкг/мл, АИА 5 ед. АКА 50 ед. Одновременно определялись показатели неспецифической резистентности гуморального иммунитета. Фагоцитарный показатель составил 32% лизоцим слюны 140 мкг/мл, уровень циркулирующих иммунных комплексов 80 ед. В связи с тем что пациент склонен к аллергическим реакциям, проведен курс санации в спелеошахте по 25 мин ежедневно в течение 22 дней.

Повторное изучение на 14-й дней санации персистентных характеристик выделенного стафилококка выявило их снижение только на 15% В связи с этим санация была продолжена. По окончании курса санации (22 дня) при контрольном высеве АЛА составила 0 мкг/мл, АИА 1 ед. АКА 0, фагоцитарный показатель повысился до 42% увеличилось содержание лизоцима в слюне (164 ед.). Посев, сделанный через 3 мес, подтвердил положительный результат.

Пример 2. У бактерионосителя Ф.В. был выделен золотистый стафилококк, со следующими характеристиками: АЛА 5 мкг/мл, АИА 5 ед. АКА 50 ед. при иммунологическом исследовании установлено снижение IgG в сыворотке крови; фагоцитарного показателя, лизоцима слюны, повышение циркулирующих иммунных комплексов. Санацию проводили аналогично примеру 1. На 14-й день контрольный посев не выявил микроорганизмов рода стафилококкус. Нормализовалось содержание иммуноглобулинов G до 1263 мг/л в сыворотке крови; фагоцитарный показатель увеличился до 40% количество лизоцима в слюне составило 15 мкг/мл; ЦИК снизилось до 46 ед. Положительный результат подтверждает посев, сделанный через 3 мес.

Пример 3. У больного С.М. выделен золотистый стафилококк: АЛА 5 мкг/мл, АИА 5 ед. АКА 100 ед. При иммунологическом исследовании установлено снижение IgG (860 мг/л); фагоцитарного индекса, секреторных IgA в слюне. Проведена санация аналогично примеру 1. Выделен и идентифицирован эпидермальный стафилококк, обнаружено увеличение секреторных IgA в слюне; фагоцитарного индекса; Ig G в сыворотке крови (1260 мг/л). Контрольный посев исследуемого материала через 3 мес подтвердил наличие эпидермального стафилококка.

Пример 4. При санации 70 бактерионосителей стафилококка в соответствии с предлагаемым способом у 11 пациентов (15,7%) стафилококк не обнаруживался, у 11 (15,7%) произошло замещение золотистого стафилококка на эпидермальный, у штаммов, выделенных от 42 (60%) человек, персистентные характеристики снизились на 40% Аллергические проявления отсутствовали. Двукратное повторное обследование данных пациентов через 3 мес и 6 мес подтвердили полученные положительные результаты санации.

Эффективность санации стафилококковых бактерионосителей, проведенные в соответствии с заявляемым способом, составила 91,4%
Пример 5. При санации 100 бактерионосителей масляным раствором витамина А, в соответствии с известным способом-прототипом, положительный эффект был достигнут у 74 человек (74%), а у 26 (26%) на третий день санации отмечались аллергические реакции и курс санации не был завершен. При санации масляным раствором витамина E 68 человек положительный результат наблюдался у 47 человек (69,1%), 21 (30,9%) пациент не прошел полный курс санации ввиду проявления аллергических реакций.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить эффективность санации стафилококковых бактерионосителей за счет исключения аллергических реакций и укрепления антиинфекционной резистенции организма, а вследствие этого также позволяет расширить круг лиц, подвергаемых санации.

В настоящее время заявляемый способ санации стафилококковых бактерионосителей проходит клинические испытания в МСЧ "Оренбурггазпром"
Источники информации
1. Беляков В.Д. Колесов А.П. и др. Госпитальная инфекция. Л. Медицина. 1976. с. 189-190.

2. Акатов А.К. Беляков В.Д. Воропаева С.Д. и др. Стафилококки и стафилококковые инфекции. Саратов. 1980. с.190.

3. Методические рекомендации по микробиологической диагностике и профилактике стафилококковых инфекций. Киев. 1979. с. 22-24.

4. Терновская Л.Н. Стафилококковое носительство. Методические рекомендации МЗ РСФСР. Свердловск. 1983. 15 с.

5. Бухарин О. В. Усвяцов Б.Я. Чернова О.Л. "Антилизомный" признак стафилококков в диагностике и санации бактерионосительства. // Ж. микробиол. эпидемиол. и иммунобиол. 1993. N 6 с. 32-33; Парфенов О.Г. Гриценко В.А. Опыт санации стафилококковых бактерионосителей на базе санатория-профилактория УБР ТО "Оренбургнефть"/ Персистенция бактерий. Сб. науч. трудов. //Куйбышев. 1990. с. 121-125 (прототип).

6. Недопрядко Д.М. Торохтин М.Д. Клеточные и гуморальные факторы аутосенсибилизации и иммунологическая реактивность у больных бронхиальной астмой под влиянием лечения микроклиматом соляных шахт.//Журнал вопр. курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. 1975. N 1. с. 19-22.

7. Бухарин О.В. Персистенция бактерий. Актовая речь. Оренбург. - 1992. с. 29-30.

8. Авторское свидетельство N 1097678, кл. C 12 Q 1/04, 1984.

9. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования./Под ред. М.О.Биргера. М. 1982. с. 73-77.

10. Бухарин О.В. Усвяцов Б.Я. и др. Метод определения антилизомной активности микроорганизмов//Ж. микробиология. 1984. N 2. с. 27-28.

11. Авторское свидетельство N 1564191, кл. 12 Q 1/02, 1990.

12. Патент N 2010860, кл. C 12 Q 1/02, 1994.

Способ санации стафилококковых бактерионосителей путем воздействия на персистентные характеристики возбудителя, отличающийся тем, что бактерионосителя помещают в условия микроклимата спелеошахты на 20 30 мин ежедневно в течение 14 22 дней и по отсутствию стафилококков и (или) по снижению их персистентных характеристик не менее чем на 20% считают санацию положительной.

1 Министерство здравоохранения Российской Федерации Департамент государственного санитарно-эпидемиооюгического надзора М 3 РФ Д и агн ости к а и сан ац и я ст аф и л ок ок к ов ы х бак тер и он оси тел ей Методические рекомендации Москва 2001 сертификация услуг

2 Д иагностика и санация стафилококковы х бактерионосителей Методические рекомендации

3 ББК51.9 Д44 Д44 Диагностика и санация стафилококковых бактерионосителей: Методические рекомендации. М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, с. ISBN X В методических рекомендациях представлена принципиально новая схема лабораторной диагностики стафилококковых бактерионосителей: цитоскопический метод выявления бактерионосителей стафилококков; питательная среда, позволяющая выделять стафилококки с персистеными свойствами; способ дифференциации стафилококковой микрофлоры, основанный на определении у штаммов, выделенных от бактерионосителей, факторов персистенции; предложены новые средства санации: масляный раствор витамина А, микроклимат спелеошахты, препарат электролизного водного раствора гипохлорита натрия. Методические рекомендации предназначены для бактериологов, эпидемиологов, инфекционистов и врачей других специальностей. Рекомендации разработаны сотрудниками Оренбургской государственной медицинской академии и Оренбургского института клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН (член-корреспондент РАН и РАМН, профессор О. В. Бухарин; профессор Б. Я. Усвяцов, доктор биологических наук О. Л. Карташова, кандидат биологических наук С. Б. Киргизова, кандидат медицинских наук Л. И. Паршута). ББК 51.9 ISBN X Федеральный центр госсанэпиднадзора М инздрава России, 2001

4 УТВЕРЖДАЮ Главный государственный санитарный врач Российской Федерации - Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации Г. Г. Онищенко 6 апреля 2001 г. В ведение Настоящие методические рекомендации посвящены проблеме профилактике стафилококкового бактерионосительства. В этиологической структуре внутрибольничных инфекций, возникающих в акушерских и хирургических стационарах, большая роль принадлежит стафилококкам. Основным источником гнойной стафилококковой инфекции являются бактерионосители. Работами сотрудников Оренбургской медицинской академии и Института клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН ( ) установлено, что факторы персистенции стафилококков (антилизоцимная, антиинтерфероновая, антикомплементарная активности), направленные на инактивацию защитных механизмов хозяина, обеспечивают длительное переживание бактерий и создают основу резидентного бактерионосительства. В представленных методических рекомендациях предлагаются новые подходы к профилактике стафилококковых инфекций, включающие: цитоскопический метод выявления бактерионосителей; питательную среду, позволяющую избирательно выделять стафилококки с персистентными свойствами; способ дифференциации резидентной и транзиторной стафилококковой микрофлоры, основанный на определении факторов персистенции у штаммов, выделенных от бактерионосителей. Учитывая то обстоятельство, что подавление персистирующих свойств возбудителя затрудняет его паразитирование и, тем самым, повышает эффективность лекарственных воздействий, разработаны эффективные способы санации через снижение персистентных характеристик стафилококка. Апробация предлагаемых методик в лечебно-профилактических учреждениях города показала их преимущество по сравнению с классическими методами профилактики. 3

10 ние концентрации интерферона в среде, при которой еще наблюдается рост индикаторного штамма Аитикомплементарная активность (АКА) В чашки Петри разливают 1,5 % агар по 5мл. Чашки подсушивают в термостате при 37 С в течение минут. Готовят 1 млрд, взвесь исследуемых культур в физиологическом растворе и наносят в виде бляшек на поверхность приготовленных сред Чашки помещают в термостат при 37 С на часа Выросшие макроколонии обрабатывают парами хлороформа, наливая его в крышку чашки Петри (в течение 10 минут) и заливают чашки вторым слоем, содержащим 1,5 мл 1,5 %-ного агара и 1 мл комплемента (смесь пула сывороток доноров, оттитрованная в гемолитической системе до активности 50 ед., 25 ед., 12,5ед/мл), конечная концентрация комплемента будет составлять соответственно 20; 10 и 5 гем. ед/мл Чашки инкубируют при 37 С в течение 1 часа Готовят 1млрд. взвесь суточной агаровой культуры Е. coli 212 в физиологическом растворе, разливают по 0,1 м в пробирки и заливают каждую чашку вторым слоем, добавляя к индикаторной культуре эшерихии 3 мл 0,7 %-ного питательного агара Чашки инкубируют в термостате при 37 С в течение часов Об антикомплементарной активности судят по наличию роста индикаторного штамма вокруг исследуемых культур тех штаммов стафилококков, где произошла инактивация комплемента. Учитывают уровень выраженности признака по принятой градации: 0 уел. ед., 5 уел. ед., 10 уел. ед. и 20 уел. ед. 3. Оценка штаммов стафилококков (вид, экотоп) Для приведения значений всех изученных признаков к единому измерению полученные показатели переводят в баллы (табл. 1) и оценивают штамм стафилококка с помощью диагностической модели по формуле: Д = х,а, + х2а2 + хпа п + С, где Д - дискриминантная функция, характеризующая резидентный или транзиторный тип стафилококковой микрофлоры; х - значение признака в баллах; а - коэффициент признака; 9

11 С - поправочная константа* Признаки Микробная обсемененность* Чувствительность к фузидину Баллы 104 КОЕ/мл Устойчивые Умеренночувствительные Чувствительные - Антиинтерфероновая активность 1уел. ед. 2 уел. ед. 5 уел. ед. 10 уел. ед. Антилизоцимная активность I мкг/мл 2 мкг/мл 3 мкг/мл 4 мкг/мл Антикомплементарная активность от 2,5 до 5,0 уел. ед. от 5,0 до 10,0 уел. ед. >10,0 уел. ед. - * Учет проводят в соответствии с методическими рекомендациями по выделению и идентификации бактерий рода Staphylococcus (Москва, 1990) В данную формулу подставляют полученные значения, коэффициенты для каждого признака и поправочные константы, представленные в табл. 2. Т а б л и ц а 2 Коэффициенты признаков и Поправочные константы для дифференциации резидентной и транзиторной стафилококковой микрофлоры при бактерионосительстве Тип штамма Коэффициенты признаков ОБС АЛА АИА ФУЗ АКА С S. aureus резидентный 1639,88 782,2 249, , , ,79 S. aureus транзиторный 577,38-83,43 82, ,36 76, ,07 S. epidermidis резидентный 1666, ,1 54, , , ,03 S. epidermidis транзиторный 656,61 665,73-6, ,4 22, ,33 Условные обозначения: ОБС-микробная обсемененностъ слизистой оболочки переднего отдела носа, АЛА - антилизоцимная активность, АН А - антиинтерфероновая активность, ФУЗ - чувствительность к фузидину, АКА - антикомплементарная активность, С - поправочная константа 10

12 Расчет проводится по всем строкам соответствующей таблицы. Наибольшая величина из всех полученных будет в 95 % случаев соответствовать обозначенному на данной строке типу штамма. Примеры установления принадлежности штамма к виду (S. aureus или S. epidermidis) и к определенному типу (резидентному или транзиторному): Пример 1. Исследуемый штамм стафилококка характеризуется следующими показателями: микробная обсемененность Ю4КОЕ/мл (4 балла), антилизоцимная активность - 1 мкг/мл (1 балл), антиинтерфероновая активность - 5 уел. ед. (5 баллов), антиком плементарная активность - 2,5 уел. ед. (1 балл), умеренно устойчив к фузидину (2 балла). Расчет математической модели дифференциации штамма по строкам таблицы следующий: Д = 1639,88 х ,2 х ,57 х ,04 х ,56 х ,79 = 11583,42 Д2= 577,38 х ,43 х 1+ 82,20 х ,36 х ,99 х I ,07 = = 7769,73 Дз = 1666,79 х ,1 х 1+ 54,27 х ,55 х ,29 х ,03 = 8190,97 Д4 = 656,61 х ,73 х ,9 х ,4 х ,13 х ,33 = = 7897,27 В результате проведенного расчета максимальная величина установлена на первой строке (ДО, что позволяет отнести исследуемый штамм к виду S. aureus и к резидентному типу. Пример 2. Исследуемый штамм стафилококка характеризуется следующими показателями: микробная обсемененность 102 КОЕ/мл (2 балла), антилизоцимная активность 2 мкг/мл (2 балла), антиинтерфероновая активность - 2 уел. ед. (2 балла), антикомплементарная активность 2,5 уел. ед. (1 балл), чувствителен к фузидину 3 балла. Расчет математической модели дифференциации штамма по строкам таблицы следующий: Д = 1639,88x ,2x ,57x ,04x ,56 х ,79= 15372,19 Д2 = 577,38 х ,43 х ,20 х ,36 х ,99 х ,07 = 17609,30 Дз = 1666,79 х ,1 х ,27 х ,55 х ,29 х ,03= 14000,23 Д4 = 656,61 х ,73 х ,9х ,4х ,13 х ,33 = = 18572,88 11

14 существующих тем, что снижают персистентный потенциал возбудителя. Подавление персистентных свойств стафилококка затрудняет его паразитирование внутри клеток и, тем самым, повышает эффективность санации. Санация раствором витамина А Масляный раствор витамина А, являющийся активным антиоксидантом, наряду со снижением персистентных свойств стафилококков, оказывает репаративный и стабилизирующий эффекты на слизистую оболочку переднего отдела носа бактерионосителей. Противопоказаний к применению метода нет. Экспериментально установлена эффективная одноразовая доза масляного раствора витамина А для санации: 6 10 тысяч единиц. 1. Реактивы, приборы, стекчо 1.1. Ватный тампон, укрепленный на проволоке Витамин А - ретинола ацетат 3,44% раствор в масле (Уманский витаминный завод), 1.3. Растительные масла или вазелиновое масло 1.4. Масляный ингалятор 1.5. Пипетки 2. Санация осуществляется следующим образом: 2.1. Для приготовления раствора нужной концентрации витамин А разводят оливковым, персиковым, вазелиновым или растительным маслом в соотношении 1:1. Формы проведения санации следующие: а) Стерильным ватным тампоном, смоченным в 0,5 мл масляного раствора витамина А, протирают передние отделы носа. б) Закапывают по 2 капли раствора в каждый носовой ход, используя глазные пипетки, после чего производят легкий массаж передних отделов носа. в) Ингалируют теплый масляный раствор при помощи масляного ингалятора. Время ингаляции устанавливают экспериментально, учитывая, что за одну ингаляцию в носовые ходы должно поступать не более 0,5 мл масла с содержанием витамина А 6 10 тысяч единиц. (Приготовление раствора для ингалятора ПАИ-2: к 10 мл витамина А добавляют 40 мл оливкового масла, ингаляцию проводят в течение 4 минут) Санацию проводят в течение 6 дней. Эффективность санации оценивают на следующий день и через 7 дней после ее окончания при помощи цитоскопического метода. 13

17 Диагностика и санация стафилококковых бактерионосителей Методические рекомендации Редакторы Кожока Н. В., Максакова Е. И. Технический редактор Смирнов В. В. Подписано в печать Формат 60x88/16 Печ. л. 1,0 Тираж 3000 экз. Заказ 17 ЛР от г. Министерство здравоохранения Российской Федерации , Москва, Рахмановский пер., д.з Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован Издательским отделом Федерального центра госсанэпиднадзора Минздрава РФ , Москва, проезд Аэропорта, И. Отделение реализации, тел Методические рекомендации

Владельцы патента RU 2441656:

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для санации стафилококковых бактерионосителей, с целью профилактики возникновения у них болезней органов дыхания и распространения стафилококковой инфекции.

Проблема профилактики стафилококковой инфекции по-прежнему остается актуальной в современной медицине и практическом здравоохранении. Основными источниками данной инфекции являются бактерионосители, а биотопом стафилококка - слизистая оболочка переднего отдела носа [Акатов А.К. и др. Стафилококки и стафилококковые инфекции. Саратов, 1980. - С.189, 230].

По данным ряда авторов [Дерябин Д.Г. Стафилококки. Экология и патогенность. - Екатеринбург, 2000. - С.148-149; Пискунов С.З., Пискунов З.Г., Ельков И.В. Проблема общего и местного консервативного лечения острого и хронического гайморита. // Российская ринология. - 1994. - №1. - С.7] очень часто микробным агентом, способствующим развитию гнойно-воспалительного процесса в полости носа и околоносовых пазух являются именно микроорганизмы, составляющие микрофлору тела человека.

Выявлена видовая идентичность стафилококков - возбудителей гнойного гайморита и стафилококков, вегетирующих на слизистой оболочке переднего отдела носа больных, что подтверждается анализом фагоантибиотикотипов изученных культур и свидетельствует об их этиологической роли в данной патологии [Бухарин О.В., Чернова О.Л., Матюшина С.Б. и др. Связь биологических свойств стафилококков с течением гнойных синуситов. // Вестник оториноларингологии. - 1998. - №5. - С.35].

Известно, что при бактерионосительстве имеет место перестройка механизмов защиты макроорганизма, т.е. создаются условия для выживания (персистирования) возбудителя и дальнейшего развития бактерионосительства [Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий. М.: Медицина, Екатеринбург, Изд. УрО РАН, 1999. - С.122].

Таким образом, санация организма от бактерионосительства - одна из труднейших проблем современной медицины [Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я. Бактерионосительство (медико-экологический аспект). Екатеринбург, УрО РАН, 1996. - С.122]. В связи с этим важное практическое значение приобретает разработка эффективных и безопасных методов санации стафилококкового бактерионосительства и соответственно профилактики стафилококковых инфекций, в том числе посредством снижения персистентных свойств патогенов. Важно, чтобы способ санации сочетал высокую эффективность с отсутствием побочных явлений.

Недостатком указанных способов является то, что их действие направлено на уничтожение микроорганизмов, находящихся вне клетки. Золотистые стафилококки способны при длительном персистировании на эпителиальных клетках проникать в них и становиться внутриклеточными паразитами. При вышеуказанных способах санации, стафилококки внутри клетки сохраняются, разрушают клетки, выходят из них и, не встречая конкуренции со стороны нормальной микрофлоры, погибшей под действием санирующих средств, размножаются, и вскоре популяция достигает еще большей численности [Терновская Л.Н. Стафилококковое носительство. Методические рекомендации МЗ РСФСР. - Свердловск, 1983. - С.5-7].

Известны способы санации стафилококковых бактерионосителей путем снижения персистентных характеристик стафилококка [Диагностика и санация стафилококковых бактерионосителей. Методические рекомендации. - М., 2001. - С.12-15].

Наиболее близким из аналогов к заявляемому способу является способ санации стафилококкового бактерионосительства путем обработки передних отделов слизистой носа гексахлорановой или трибасковой мазью [Инструкция по бактериологическому обследованию на выявление носителей патогенного стафилококка и проведению санации. Приложение №3 к приказу Минздрава РСФСР №215 от 14.04.79].

Недостатком данного способа является то, что в ряде случаев использование антибиотиков и гексахлорофена может сопровождаться аллергическими и токсическими реакциями, селекцией антибиотикорезистентных штаммов.

Технический результат, на достижение которого направлено изобретение, заключается в создании эффективного способа санации стафилококковых бактерионосителей за счет снижения антикарнозиновой активности (АКрА) S.aureus и вследствие этого элиминации патогенной микрофлоры со слизистой оболочки носовой полости.

Достигаемый при осуществлении изобретения технический результат заключается в том, что заявляемый способ позволяет проводить эффективную санацию стафилококковых бактерионосителей за счет уточнения характера бактерионосительства (резидентного или транзиторного) и снижения антикарнозиновой активности S.aureus, что приводит к элиминации патогенной микрофлоры со слизистой оболочки носовой полости, позволяет снизить уровень заболеваемости органов дыхания и предотвратить экзогенное распространение стафилококковой инфекции.

Известно, что природный дипептид карнозин (карнозин) обладает антимикробным [Antibacterial actions of carnosine and homocarnosine. French Patent №71.07856 of march 1, 1971] и противоаллергическим действием [Шарпань Ю.В. Влияние карнозина на иммуносупрессивный эффект гистамина / Бюлл. экспер. биологии и медицины. - 1984. - №11. - С.603].

Наибольшее количество карнозина содержится в обонятельном эпителии слизистой оболочки передних отделов носовых ходов [Margolis F.L. Carnosine in the primary of olfactory pathway. // Science. - 1974. - V.184. - P.909-911]. Известно, что микроорганизмы, длительно удерживающиеся в эпителиальных клетках слизистой оболочки носа, могут инактивировать карнозин [Бухарин О.В., Стадников А.А., Чернова О.Л. и др. Биологическое значение антикарнозиновой активности бактерий. // ЖМЭИ. - 2000. - №4. - С.57-58].

Установлено, что ведущим свойством стафилококков, определяющим формирование бактерионосительства, является их антикарнозиновая активность. Это связано с высоким содержанием карнозина в биотопе, инактивация которого позволяет бактериям адаптироваться и длительно находиться на слизистой оболочке переднего отдела носа [Бухарин О.В., Карташова О.Л., Киргизова С.Б., Потехина Л.П. Диагностическое значение персистентных характеристик стафилококков при бактерионосительстве // ЖМЭИ. - 2007. - №5. - С.13-16].

Известен способ определения антикарнозиновой активности микроорганизмов [патент РФ №2132879, МПК 6 C12Q 1/04, 1999].

Известно определение способности микроорганизмов к инактивации карнозина (антикарнозиновой активности) в клинике при лечении отграниченных гнойно-воспалительных заболеваний легких и плевры стафилококковой этиологии [патент РФ №2192880, МПК 7 A61K 38/11, А61Р 31/04, 2002] и для дифференциации стафилококковой микрофлоры слизистой оболочки носа человека на нормальную стафилококковую микрофлору и стафилококковую микрофлору, способную вызвать развитие местных гнойно-воспалительных заболеваний [патент РФ №2318021, МПК 8 C12Q 1/04, 2008].

Авторами экспериментально установлена информативность определения наличия и уровня выраженности антикарнозиновой активности S.aureus, выделенных со слизистой оболочки носа человека, для определения характера стафилококкового бактерионосительства (резидентный или транзиторный).

У всех выделенных стафилококков определяли антикарнозиновую активность известным способом [патент РФ №2132879, МПК 6 C12Q 1/04, 1999].

Результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1
Информативность уровня выраженности антикарнозиновой активности S.aureus в определении типа стафилококкового бактерионосительства
Штаммы	Кол. штаммов	Уровень АКрА (мг/мл)	Среднее значение АКрА (мг/мл)
Резидентный тип бактерионосительства S.aureus n=97 штаммов	10	от 1,8 до 2,0	1,85±0,02
	30	от 2,0 до 2,5	2,34±0,06
	32	от 2,5 до 3,0	2,81±0,02
25	от 3,0 до 4,0	3,6±0,04
Транзиторный тип бактерионосительства S.aureus n=75 штаммов	7	от 0,01 до 0,1	0,07±0,01
	15	от 0,1 до 1,0	0,47±0,06
	20	от 1,0 до 1,5	1,31±0,03
	8	от 1,5 до 1,7	1,65±0,02
25	0 (нет АКрА)	0 (нет АКрА)

Как видно из таблицы 1, у штаммов S.aureus резидентного типа уровень выраженности АКрА колеблется от 1,8 до 4,0 мг/мл, а у транзиторного типа - от 0,01 до 1,7 мг/мл.

Таким образом, была обнаружена следующая закономерность в способности к инактивации карнозина S.aureus: штаммы, выделенные от бактерионосителей резидентного типа, имеют уровень выраженности АКрА равным или более 1,8 мг/мл, тогда как штаммы S.aureus, выделенные от бактерионосителей транзиторного типа, имеют уровень выраженности АКрА менее 1,8 мг/мл либо не обладают антикарнозиновой активностью.

Проведенные авторами исследования показали информативность определения наличия и уровня выраженности АКрА у S.aureus, выделенных со слизистой оболочки носа человека, для определения типа стафилококкового бактерионосительства - резидентный или транзиторный.

Основная часть микрофлоры транзиторного типа элиминирует из организма в результате гибели или бактериовыделения, и проведение в отношении нее санирующих мероприятий не требуется [Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я. Бактерионосительство (медико-экологический аспект). Екатеринбург, УрО РАН, 1996. - С.66].

Чтобы исключить развитие дисбиотических состояний, санировать необходимо лишь резидентных бактерионосителей, т.е. лиц, длительно и упорно выделяющих микроорганизмы с персистентным потенциалом [Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Карташова О.Л. Биология патогенных кокков. М.: Медицина, Екатеринбург, Изд. УрО РАН, 2002. - С.67].

Известно, что подавление персистентных свойств стафилококков затрудняет их паразитирование и, тем самым, повышает эффективность лекарственных воздействий [Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я. Бактерионосительство (медико-экологический аспект). Екатеринбург, УрО РАН, 1996. - С.149].

Препарат в виде линимента как лекарственная форма отличается следующими преимуществами по сравнению с другими формами выпуска препарата [Линимент циклоферона (меглумина акридонацетат) в клинической практике. Клинические рекомендации для врачей. - СПб., 2007. - С.14]:

- местное использование - непосредственное воздействие на локализованный патологический очаг;

- высокая биодоступность активных веществ;

- отсутствие аллергических реакций и побочных явлений системного характера.

У выделенных штаммов S.aureus определяли антикарнозиновую активность известным способом [патент РФ №2132879, МПК 6 C12Q 1/04, 1999].

Среднее значение антикарнозиновой активности в опытной и контрольной группе штаммов в первый день эксперимента составило 2,94±0,04 мг/мл.

Результаты эксперимента представлены в таблице 2.

Как видно из таблицы 2, на протяжении 7 дней происходило снижение среднего значения антикарнозиновой активности S.aureus в опытной группе штаммов с 2,95±0,04 мг/мл до 0,67±0,01 мг/мл.

Предложенный способ санации стафилококковых бактерионосителей был успешно апробирован на базе Центральной районной больницы с.Шарлык, Шарлыкского района, Оренбургской области.

По уровню выраженности АКрА определяли характер бактерионосительства - резидентный или транзиторный. К резидентному типу бактерионосительства относили детей, у которых выделялся S.aureus, с уровнем выраженности антикарнозиновой активности, равным или более 1,8 мг/мл, а к транзиторному типу бактерионосительства относили детей, у которых выделялся S.aureus с уровнем выраженности антикарнозиновой активности менее 1,8 мг/мл.

После каждого дня санации проводили контрольное бактериологическое исследование на наличие S.aureus и определение у него уровня АКрА.

Результаты исследований представлены в таблице 3.

Как видно из таблицы, через 4 дня у 2 детей S.aureus не выделялся вообще, у 4 санируемых выделялись штаммы с уровнем выраженности АКрА менее 1,8 мг/мл. После 5 дней санации S.aureus не высеялся еще у двух детей, а динамика в сторону снижения уровня выраженности АКрА (ниже 1,8 мг/мл) произошла у стафилококков, выделенных еще от 6 человек; после 6 дней рост S.aureus не отмечен еще у 7 обследуемых, а ниже порогового значения (1,8 мг/мл) уровень АКрА опустился еще у 5 штаммов стафилококка.

Бактериологическое обследование санированных детей через 30 дней показало, что свободными от носительства S.aureus были 17 детей, а у троих детей выделялся S.aureus со средним уровнем выраженности антикарнозиновой активности 0,9 мг/мл.

С целью определения эффективности проведенной санации стафилококковых бактерионосителей через 6 месяцев провели еще одно бактериологическое обследование, которое подтвердило положительные результаты проведенного санирования - в группе из 20 санируемых детей не были обнаружены бактерионосители S.aureus резидентного типа.

Способ осуществляется следующим образом.

1. Исследуемый материал (мазок со слизистой оболочки носовой полости) засевают на чашки Петри с желточно-солевым агаром.

2. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37°С в течение 24-48 часов.

3. Выросшие колонии пересевают на скошенный агар и изучают морфологию при окраске мазков по Граму.

5. У выделенных штаммов S.aureus определяют антикарнозиновую активность известным способом [патент РФ №2132879, МПК 6 C12Q 1/04, 1999].

6. По уровню выраженности антикарнозиновой активности определяют характер бактерионосительства - резидентный или транзиторный. К резидентному типу бактерионосительства относят лиц, у которых выделяются S.aureus, с уровнем выраженности антикарнозиновой активности, равным или более 1,8 мг/мл, а к транзиторному типу бактерионосительства относят лиц, у которых выделяются S.aureus с уровнем выраженности антикарнозиновой активности менее 1,8 мг/мл.

8. Через 6 дней проводят контрольное бактериологическое обследование санируемых на наличие или отсутствие S.aureus, при наличии S.aureus определяют у них уровень выраженности антикарнозиновой активности.

9. При отсутствии S.aureus или уровне выраженности у них антикарнозиновой активности менее 1,8 мг/мл санацию считают положительной.

Примеры конкретного выполнения

При бактериологическом обследовании на стафилококковое бактерионосительство пациента К., часто и длительно болеющего респираторными инфекциями, обнаружен S.aureus, обладающий АКрА, равной 3,2 мг/мл. Так как S.aureus имеет уровень выраженности антикарнозиновой активности АКрА более 1,8 мг/мл, тип носительства определен как резидентный.

Через 6 дней проводили контрольное бактериологическое обследование санируемого на наличие или отсутствие S.aureus. Обследование пациента показало, что S.aureus отсутствует. Обследование, сделанное через 3 месяца, подтвердило положительный результат санации.

При проведении бактериологического обследования группы студентов на стафилококковое бактерионосительство, у 12 студентов были выделены штаммы S.aureus, обладающие уровнем антикарнозиновой активности выше 1,8 мг/мл, что позволило определить тип носительства как резидентный.

С целью профилактики развития у них болезней органов дыхания всем студентам ежедневно в течение 6 дней проводили обработку передних отделов носа аналогично примеру 1.

Через 6 дней при повторном бактериологическом обследовании у 10 человек патогенный стафилококк не обнаруживался, а у штаммов S.aureus, выделенных от 2 человек, антикарнозиновая активность снизилась, и ее уровень выраженности стал менее 1,8 мг/мл, что свидетельствовало об изменении типа носительства с резидентного на транзиторный и позволяло считать санацию положительной.

Повторное обследование данных лиц через 1 месяц, а затем и через 3 месяца подтвердило полученные положительные результаты санации.

При обследовании на стафилококковое бактерионосительство медицинского персонала хирургического отделения ЛПУ были выявлены 5 человек, являющиеся носителями S.aureus резидентного типа. С целью профилактики экзогенного распространения стафилококковых инфекций среди пациентов хирургического отделения, резидентным бактерионосителям ежедневно в течение 6 дней проводили обработку передних отделов носа аналогично примеру 1.

После проведенного курса санации при контрольном бактериологическом обследовании санированных сотрудников хирургического отделения оказалось, что у 3 человек произошла элиминация S.aureus и замена патогенного стафилококка на S.epidermidis, являющийся представителем нормальной микрофлоры. У двух бактерионосителей выделялся S.aureus с уровнем АКрА - 0,9 мг/мл и 1,3 мг/мл соответственно, что позволило считать санацию положительной.

Проведенное через 3 месяца повторное бактериологическое обследование 5 сотрудников хирургического отделения подтвердило эффективность санации, ни у одного из обследуемых не выделили S.aureus резидентного типа.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет проводить эффективную санацию стафилококковых бактерионосителей за счет уточнения характера бактерионосительства (резидентного или транзиторного) и снижения антикарнозиновой активности стафилококков, а вследствие этого элиминации патогенной микрофлоры со слизистой оболочки носовой полости, что способствует снижению заболеваемости органов дыхания и предотвращению экзогенного распространения стафилококковой инфекции.