Диагностическая сыворотка полиомиелитная 1 типа

Сайт СТУДОПЕДИЯ проводит ОПРОС! Прими участие :) - нам важно ваше мнение.

ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ

Интерферон

Препараты для лечения дисбактериозов

Бактериофаги

Иммуно- и гаммаглобулины

Анатоксины

Сыворотки

Вакцины

ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ

ПЕРЕЧЕНЬ БАКПРЕПАРАТОВ

1. Вакцина гонококковая (лечебная)

2. Вакцина менингококковая группы А.

3. Вакцина бруцеллезная живая накожная.

4. Вакцина стафилококковая (лечебная)

5. Вакцина стафилококковая-антифагин (лечебная)

6. Вакцина антиарабическая инактивированная сухая.

7. Вакцина клещевого энцефалита культуральная инактивированная.

8. Вакцина БЦЖ сухая.

9. Вакцина коревая живая культуральная (штамм Л-16).

10. Вакцина АКДС.

11. Вакцина полиомиелитная пероральная живая типов1, 2, 3.

12. Вакцина брюшно-тифозная химическая сорбированная жидкая.

13. Вакцина туляремийная живая сухая накожная.

14. Вакцина герпетическая.

15. Вакцина лептоспирозная инактивированная жидкая.

16. Вакцина гриппозная хроматографическая.

17. Вакцина сибирязвенная живая сухая (СТИ).

18. Вакцина чумная живая сухая (EV).

19. Вакцина сыпнотифозная комбинированная живая сухая Е (ЖКСВ-Е).

1. Сыворотка противодифтерийная очищенная концентрированная жидкая.

2. Сыворотка противостолбнячная очищенная жидкая (Диаферм).

3. Сыворотка противогангренозная против перфрингенс типа А, против эдематиенс и против септикус очищенная концентрированная.

4. Сыворотка противоботулиническая лечебно-профилактическая антитоксическая типа А, В, С, Е, Г.

1. Анатоксин дифтерийный адсорбированный

2. Анатоксин дифтерийно-столбнячный адсорбированный с уменьшенным содержанием антигенов (АДС-М).

3. Анатоксин стафилококковый очищенный.

4. Анатоксин столбнячный адсорбированный (АС).

1. Иммуноглобулин противогриппозный донорский.

2. Иммуноглобулин противостолбнячный человеческий.

3. Иммуноглобулин противолептоспирозный.

4. Гаммаглобулин противогриппозный донорский.

5. Гаммаглобулин против клещевого эецефалита.

6. Гаммаглобулин противосибирязвенный.

7. Гаммаглобулин антиарабический.

1. Бактериофаг дизентерийный, поливалентный, сухой.

2. Бактериофаг дизентерийный жидкий.

3. Коли-бактериофаг жидкий.

4. Коли-протейный бактериофаг жидкий.

5. Протейный бактериофаг жидкий.

6. Бактериофаг стафилококковый жидкий.

7. Пиобактериофаг комбинированный жидкий.

2. Бифидумбактерин сухой.

3. Бификолл сухой.

4. Лактобактерин сухой.

5. Бактисубтил сухой.

1. Интерферон человеческий лейкоцитарный.

1. Сыворотка диагностическая сальмонеллезная адсорбированная сухая-09, для реакции агглютинации.

2. Сыворотка неадсорбированная к сальмонеллам паратифа А.

3. Сыворотка агглютинирующая адсорбированная к шигеллам Флекснера поливалентная.

4. Сыворотка агглютинирующая адсорбированная к шигеллам Флекснера типовая.

5. Сыворотка агглютинирующая поливалентная к шигеллам дизентерии.

6. Сыворотка агглютинирующая адсорбированная к шигеллам Зонне.

7. Сыворотка агглютинирующая эшерихиозная ОК, поливалентная.

8. Сыворотка агглютинирующая эшерихиозная ОК, 0-25, 0 - 144.

9. Сыворотка полиомиелитная тип 1, 2, 3, для реакции нейтрализации.

10. Сыворотка полиомиелитная поливалентная.

11. Сыворотка диагностическая ЕСНО (тип 17, 18, 19, 20, 24) для РН.

12. Сыворотка диагностическая ЕСНО поливалентная для РН.

13. Сыворотка агглютинирующая неадсорбированная сухая дифтерийная.

14. Сыворотка диагностическая перфрингенс типов АВДЕ для РН.

15. Сыворотка диагностическая перфрингенс типов АВСГ для РН.

16. Сыворотка паракоклюшная сухая.

17. Сыворотка диагностическая менингококовая группы А.

18. Сыворотка диагностическая лептоспирозная групповая для РМАЛ.

19. Сыворотка диагностическая туляремийная сухая.

20. Сыворотка диагностическая Коксаки А для РН.

21. Сыворотка сибирязвенная неадсорбированная сухая люминесцентная.

22. Гемолитическая сыворотка.

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

1. Противогриппозная противовирусная сыворотка А (Н₃N₂), А (Н₂N₂)получена гипериммунизацией животных вирусом гриппа соответствующего подтипа. Применяют для идентификации вируса гриппа А(Н₃N₂), А (Н₂N₂)в РТГА. Используют в вирусологическом методе диагностики гриппа.

2. Полиомиелитная противовирусная сыворотка поливалентная содержит антитела к вирусам полиомиелита Ι, ΙΙ, ΙΙΙ типов и представляет собой смесь типовых сывороток полиомиелитных Ι, ΙΙ, ΙΙΙ типов. Применяется для идентификации вируса полиомиелита в реакции нейтрализации в культуре клеток. Используют в вирусологическом методе диагностики полиомиелита с целью определения вида вируса.

3. Полиомиелитные противовирусные сыворотки типовые ( Ι, ΙΙ, ΙΙΙ типов)получают гипериммунизацией животных вирусом полиомиелита соответствующего типа. Применяют для идентификации вируса полиомиелита в реакции нейтрализации в культуре клеток. Используют в вирусологическом методе диагностики полиомиелита с целью определения типа вируса.

4. Противовирусная сыворотка Коксаки А поливалентная(например, к типам 9-16)содержит антитела к вирусам Коксаки А 9-16 типов. Представляет собой смесь типовых сывороток Коксаки А 9-16 типов. Применяется для идентификации вирусов Коксаки А в реакции нейтрализации в культуре клеток. Используют в вирусологическом методе диагностики Коксаки А инфекции с целью определения вида вируса Коксаки А.

5. Противовирусная сыворотка Коксаки В поливалентная (например, к типам 1-6) содержит антитела к вирусам Коксаки В 1-6 типов. Представляет собой смесь типовых сывороток Коксаки В 1-6 типов. Применяется для идентификации вирусов Коксаки В в реакции нейтрализации в культуре клеток. Используют в вирусологическом методе диагностики Коксаки В инфекции с целью определения вида вируса Коксаки В.

6. Противовирусные сыворотки Коксаки А (В) типовыеполучают гипериммунизацией животных вирусом Коксаки А(В) соответствующего типа. Применяют для идентификации вируса Коксаки А(В) в реакции нейтрализации в культуре клеток. Используют в вирусологическом методе диагностики Коксаки инфекции с целью определения типа вируса.

7. Противовирусная сыворотка ЕСНО поливалентная(например, к типам 7-13)содержит антитела к вирусамЕСНО 7-13 типов и представляет собой смесь типовых сывороток ЕСНО 7-13 типов. Применяется для идентификации вирусов ЕСНО в реакции нейтрализации в культуре клеток. Используют в вирусологическом методе диагностики ЕСНО инфекции с целью определения вида вируса ЕСНО.

8. Противовирусные сыворотки ЕСНО типовыеполучают гипериммунизацией животных вирусом ЕСНО соответствующего типа. Применяют для идентификации вируса ЕСНО в реакции нейтрализации в культуре клеток. Используют в вирусологическом методе диагностики ЕСНО инфекции с целью определения типа вируса ЕСНО.

VΙ. Люминесцирующие сыворотки

1. Люминесцирующая сыворотка брюшнотифознаяполучена гипериммунизацией животных взвесью возбудителей брюшного тифа с последующей меткой антител флюорохромом. Применяют для быстрого обнаружения возбудителя брюшного тифа в исследуемом материале в прямой РИФ (экспресс-метод диагностики).

2. Люминесцирующая антииммуноглобулиновая сыворотка против глобулинов кроликаполучена гипериммунизацией барана иммуноглобулинами кролика с последующей меткой антител флюорохромом. Применяют в непрямой РИФ с целью быстрого обнаружения антигенов любой специфичности.

3. Люминесцирующая антииммуноглобулиновая сыворотка против глобулинов человека получена гипериммунизацией кролика иммуноглобулинами человека с последующей меткой антител флюорохромом. Применяют в непрямой РИФ с целью быстрого обнаружения антител в исследуемой сыворотке с целью серодиагностики различных заболеваний.

III. ДИАГНОСТИКУМЫ

В настоящее время в лабораториях используются следу­ющие диагностикумы.

1 .Бактериальный диагностикум сальмонелл брюшного тифа(или сальмонелл паратифа А и В, шигелл Флекснера, Зонне и др. бактерий семейства Enterobacteriaceae) является взвесью убитых бактерий соответствующего вида и приме­няется в реакции агглютинации для обнаружения антител в сыворотке больных, т.е для серодиагностики.

2. Сальмонеллезные 0-диагностикумысодержат О-антигены различных групп сальмонелл. Получают из взвеси убитых нагреванием сальмонелл. Применяются для выявления О-антител при сальмонеллезных инфекциях в реакции агглю­тинации с сывороткой больных (серодиагностика).

3. Сальмонеллезные Н-диагностикумыпредставляют собой жгутиковые антигены формалинизированных буль­онных культур сальмонелл соответствующих видов и исполь­зуются в реакции агглютинации для серодиагностики заболевания, т.е. для определения Н- антител в сываротке.

4. Vi — брюшнотифозный диагностикум —препарат, полу­ченный из S. typhi, содержащей Vi-антиген, воздействием формалина Применяется в реакции агглютинации для обнаружения Vi-антител в сыворотке для серодиагностики брюшноти­фозного бактерионосительства.

5. Диагностикум бруцеллезный единый – взвесь убитых бруцелл, подкрашенная метиленовым синим. Единый бруцеллезный диагностикум применяется для определения антител в сыворотках крови больных бруцеллезом людей и животных в реакциях агглютинации Хеддльсона и Райта (серодиагностика бруцеллеза).

6.Диагностикум риккетсиозный Провачека -взвесь убитых риккетсий Провачека. Применяется для определения антител в сыворотке больных эпидемическим сыпным тифом в реакции агглютинации риккетсий (РАР) – серодиагностика эпидемического сыпного тифа.

7. Кардиолипиновый антигенготовят из мышечной ткани сердца быка в виде спиртового экстракта с добавлением холестерина. Применяют в качестве неспецифического антигена для постановки реакции Вассермана с целью серодиагностики сифилиса.

8. Антиген Вассермана – специфический антиген из тканевых трепонем, обработанных ультразвуком. Применяется для постановки реакции Вассермана с целью серодиагностики сифилиса.

9. Эритроцитарный сальмонеллезный 0-диагностикум –взвесь эритроцитов с адсорбированными на них О-антигенами различных групп сальмонелл. Используется для постановки РПГА с сывороткой больного для серодиагностики сальмонеллезной инфекции.

10. Эритроцитарный брюшнотифозный Vi-диагностикум -эритроциты, сенси­билизированные очищенным Vi-антигеном S. typhi. Применяет­ся в РПГА для определения Vi-антител в сыворотке для серодиагностики брюшноти­фозного бактерионосительства.

11. Эритроцитарный дифтерийный диагностикум –эритроциты, сенсибилизированные дифтерийным анатоксином. Применяется в РПГА для определения антитоксических противодифтерийных антител в исследуемой сыворотке с целью оценки напряженности антитоксического иммунитета для выявления контингента лиц, подлежащих ревакцинации против дифтерии.

12. Эритроцитарный микоплазменный диагностикум -эритроциты, сенсибилизированные микоплазменным антигеном. Применяется для определения нарастания титра антимикоплазменных антител в парных сыворотках больного в РПГА с целью серодиагностики микоплазменных инфекций.

13. Эритроцитарный сыпнотифозный (риккетсиозный Провачека) диагностикум – эритроциты, сенсибилизированные риккетсиозным Провачека антигеном. Применяется в РПГА для определения антириккетсиозных Провачека антител в сыворотке больного (серодиагностика эпидемического сыпного тифа).

14. Эритроцитарный риккетсиозный Музера диагностикум - эритроциты, сенсибилизированные риккетсиозным Музера антигеном. Применяется в РПГА для определения антириккетсиозных Музера антител в сыворотке больного (серодиагностика эндемического сыпного тифа).

15. Эритроцитарный риккетсиозный Бернета диагностикум - эритроциты, сенсибилизированные риккетсиозным Бернета антигеном. Применяется в РПГА для определения антириккетсиозных Бернета антител в сыворотке больного (серодиагностика Ку-лихорадки).

16. Эритроцитарный антительный ботулинический диагностикум – эритроциты с адсорбированными на них антитоксическими антибутулиническими антителами. Используется для постановки РПГА с целью быстрого выявления экзотоксина в сыворотке больного (экспресс-метод диагностики ботулизма).

17.Эритроцитарный антительный противостолбнячный диагностикум – эритроциты с адсорбированными на них антитоксическими антистолбнячными антителами. Используется для постановки РПГА с целью быстрого выявления экзотоксина в сыворотке больного (экспресс- метод диагностики столбняка).

18. Эритроцитарный антительный противогангренозный диагностикум – эритроциты с адсорбированными на них антитоксическими противогангренозными антителами. Используется для постановки РПГА с целью быстрого выявления противогангренозного экзотоксина в сыворотке больного (экспресс-метод диагностики газовой гангрены).

19. Эритроцитарный антительный менингококковый диагностикум– эритроциты с адсорбированными на них антименингококковыми антителами. Применяется в РПГА для выявления менингококкового антигена в ликворе больного.

20. Гриппозный диагностикумпредставляет собой аллантоисную жидкость инфицированных вирусом гриппа (типов А, В) куриных эмбрионов и инактивированную. Диагностикум применяется при постановке РТГА или РСК с парными сыворотками больных для определения нарастания титра антител (серодиагностика гриппа)

21. Диагностикум вируса клещевого энцефалитаполучают из суспензии мозга белых мышей, зараженных вирусом кле­щевого энцефалита с последующей инактивацией вируса.

Диагностикум используется в РТГА или РСК для определения нарастания титра антител в парных сыворотках больного (серодиагностика клещевого энцефалита).

IV. АЛЛЕРГЕНЫ И ТОКСИНЫ ДЛЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ КОЖНЫХ ПРОБ

Некоторые аллергены, применяемые с диагностической целью.

1. Туберкулин.В настоящее время чаще применяется для проведения аллергических туберкулиновых проб сухой очищенный туберкулин (РРД).

Сухой очищенный туберкулин (РРД) - (Derivatum proteinos purificatum tuberculin) представляет собой белковый препарат, полученный из фильтрата культуры микобактерий туберкулеза осаждением химическими веществами с последующей очисткой. Препарат применяется для внутрикожной пробы Манту с целью обнаружения инфицированности населения микобактериями туберкулеза, при отборе людей, подлежащих привив­кам против туберкулеза; для определения эффективности вакци­нации.

2. Тулярин содержит убитые нагреванием мик­роорганизмы – возбудители туляремии. Применяется для постановки кожно-аллергической пробы с целью выявления ПЧЗТ для диагностики туляремии, а также для определения поствакцинального иммунитета.

3. Бруцеллинпредставляет собой фильтрат 3-недельной бульонной культуры, убитой нагреванием, трех видов бруцелл. Препарат применяется с целью выявления ПЧЗТ для диагностики бруцеллеза (кожно-аллергическая проба Бюрне).

4 Антраксин – препарат, содержащий белковые фракции сибиреязвенных бацилл. Используется с целью определения ПЧЗТ для диагно­стики сибирской язвы путем постановки кожно-аллергической пробы.

5. Дизентерииявляется белковой фракцией шигелл Флекснера и Зонне и использует­ся для выявления ПЧЗТ при подозрении на дизентерию в кожно-аллергической пробе.

6. Бактериальные аллергены протейный, стафилококковый, стрептококковый, синегнойный, из коринебактерий, эшерихий и др. –это белковые фракции бульонных культур соответствующих микроорганизмов. Препараты предназначены для выявления повышенной чувст­вительности организма к микроорганизмам, из которых они получены, т.е. для кожно-аллергических проб при диагностике заболеваний, вызванных данными микроорганизмами.

7. Токсоплазмин – антигенный комплекс, выделенный из Toxoplasma gondii. Токсоплазмин применяется для выявления ПЧЗТ в кожно-аллергической пробе с целью диагностики токсоплазмоза.

Бактериальные экзотоксины (дифтерийный и скарлатиноз­ный)применяются для определения антитоксического имму­нитета к дифтерии в реакции Шика и к скарлатине в реакции Дика.

Дифтерийный токсинготовят из очищенного экзотоксина. Токсин вводят внутрикожно с целью определения наличия антитоксического иммунитета (реакция Шика). Положительная реакция на токсин (инфильтрат, гиперемия) свидетельствует об отсутствии антитоксического иммунитета у обследуемого и требует проведения ревакцинации против дифтерии. При наличии антитоксического иммунитета реакция Шика отрицательная, т.е отсутствует местная реакция на месте введения токсина, так как происходит нейтрализация токсина антитоксином.

V. БАКТЕРИОФАГИ

Препараты бактериофагов применяют для лечения и про­филактики инфекционных болезней, а также для определе­ния фагочувствительности и фаготипирования при индика­ции микроорганизмов. Действие фагов основано на их стро­гой специфичности. Препарат фага представляет собой фильтрат бульонной культуры бактерий, зараженной соответствующим фа­гом.

В настоящее время выпускаются сле­дующие препараты фагов, используемые для лечения и профилак­тики.

1. Поливалентный брюшнотифозный бактериофагпредставляет собой фильтрат фаголизата брюшнотифозных бактерий. Препарат применяется для массовой профи­лактики брюшного тифа, а также при противоэпидемических мероприятиях в очагах брюшного тифа.

2. Поливалентный сальмонеллезный бактериофаг групп А, В, С, Д, Еполучен из смеси фаголизатов несколь­ких типов наиболее распространенных сальмонелл (из серо­логических групп А, В, С, Д, Е). Бактериофаг применяют для лечения больных сальмонеллезами, для санации реконвалесцентов и носителей сальмонелл и с целью профилактики сальмонеллезной инфекции.

3. Поливалентный дизентерийный бактериофагявляется смесью фильтратов фаголизатов шигелл Зоне и Флекснера. Бактериофаг применяют с профилактиче­ской целью в сезон подъема заболеваемости дизентерией (в детских уч­реждениях и среди работников пищевой промышленности) и в очагах заболевания по эпидемическим показаниям, а также для лечения дизентерии.

4. Бактериофаг колипредставляет собой фильтрат фаголизатов наиболее часто выделяющихся энтеропатогенных сероваров эшерихий. Коли-бактериофаг рекомендуется для лечения больных с заболеваниями, вызванными энтеропатогенными сероварами эшерихий.

5. Бактериофаг протейный состоит из смеси фильтратов фаголизатов основных видов протеев. Фаг применяют с лечебной целью местно.

6. Коли-протейный фаг представляет собой смесь фильтратов фаголизатов энтеропатогенных эшерихий и проте­ев. Фаг применяется per os при лечении детей с кишечной инфекцией, вызванной энтеропатогенными эшерихиями и про­теем.

7. Стафилококковый фаг является фильтратом фаголизата патогенных стафилококков. Применяется с лечеб­ной целью при стафилококковых поражениях кожи и подкож­ной клетчатки. Стафилококковый фаг используют и с профилактической целью для орошения ран.

8. Стрептококковый фаг получен из фаголизата патогенных для человека стрептококков. Фаг применяют для лечения и профилактики заболеваний, вызванных стрептококками.

Диагностические бактериофаги широко применяются для идентификации бактерий, выделенных от больного или из ин­фицированных объектов внешней среды. С помощью бакте­риофагов можно опреде­лить виды бактерий и их фаговары.

В настоящее время наиболее разработана фагодиагностика и фаготипирование в отношении бактерий рода Salmonella, Vibrio и патогенных стафилококков. Фаготипирование имеет эпидемиологическое значение, т.е. помо­гает устанавливать источник инфекции, пути распространения, изучать эпидемические связи.

В основе фагодиагностики и фаготипирования лежит прин­цип совместного культивирования выделенного микроорганиз­ма с соответствующими видовыми или типовыми фагами. По­ложительным результатом считается наличие хорошо выра­женного лизиса исследуемой культуры с видовым или типовым фагом.

Стафилококковые типовые фаги (29, 52, 52А, 79, 80 и др.) являются фильтратом фаголизата патогенных стафилококков соответствующего типа. Применяются для фаготипирования стафилококков с целью установления источника инфекции при внутрибольничных инфекциях.

Брюшнотифозный Vi I бактериофагпредставляет собой фильтрат фаголизата брюшнотифозных бактерий, содержащихVi-антиген. Препарат применяется для определения наличия Vi-антигенау сальмонелл брюшного тифа с целью последующего Vi-фаготипирования.

Брюшнотифозные типовые Vi –II бактериофаги(А, В1, В2, В3,C1, C2, 28, 40, 41 и др.) представляют собой фильтраты фаголизатов брюшнотифозных бактерий, содержащихVi- антиген соответствующего типа. Применяются для определения фаготипа сальмонелл брюшного тифа.

VI. ПРОЧИЕ ПРЕПАРАТЫ

Бактерийные препараты из живых бактерий симбиотической микрофлоры кишечника человека (бифидобактерии, кишечная палочка, лактобактерии) получили широ­кое применение для восстановления нормального биоценоза после длительного лечения антибиотиками, при кишечных дисфункциях (особенно у детей), при аллергических состоя­ниях и т. д. Наряду с антагонистической активностью в от­ношении патогенных и условно-патогенных бактерий кишеч­ника существенной является роль этих препаратов в витаминообразовании, а также их ферментативные и иммунизирующие свойства.

В настоящее время выпускаются следующие препараты:

1. Бифидумбактерин – препарат, который содержит живые бифидобактерии. Применение бифидумбактерина необходимо при дефиците бактерий бифидум, который наблюдается при хронических формах дизен­терии, колитах, при дисбактериозах, развивающихся как ре­зультат длительной антибиотикотерапии. Препарат рекомен­дуется также для санации реконвалесцентов после перенесенной дизентерии.

2. Колибактерин содержит живые кишечные палочки штам­ма М-17, антагонистически активные в отношении условно-патогенных и патогенных микроорганизмов. Колибактерин применяют при хро­нических колитах, дисбактериозах, санации реконвалесцентов, для профилактики дизентерии и других кишечных заболеваний инфекционной природы.

3. Бификол– это смесь бифидумбактерина и колибактерина. Показания к применению препарата те же, что и бифидумбактерина и колибактерина.

4. Лактобактерин представляет собой живую культуру молочнокислых бактерий. Эти микроорганизмы об­ладают антагонистическими свойствами в отношении энтеропа-тогенных эшерихий, шигелл, протеев, патогенных стафило­кокков и некоторых других микроорганизмов. Отличительным признаком лактобактерий является их устойчивость к антибиотикам широ­кого спектра действия, что дает возможность применять лактобактерин параллельно с антибиотикотерапией.

Интерферон

По способу получения различают человеческий лейкоцитарный интерферон и рекомбинантный генно-инженерный интерферон.

Человеческий лейкоцитарный интерферон – видоспецифический белок, продуцируемый клетками культуры тканей из лейкоцитов донорской крови под воздействием интерфероногена (липополисахариды, полианионы, двунитчатые РНК и др.).

Препарат интерферон человеческий рекомбинантный представляет собой белок, синтезированный бактериями, в генетический аппарат которых встроен ген человеческого интерферона.

Интерферон обладает широким антивирусным спектром, то есть практически действует на все вирусы. Ему присуща вы­сокая видовая специфичность: интерферон, полученный на клетках культуры ткани человека, способен оказывать дейст­вие только в организме человека. Интерферон предназначен для профилактики и лечения гриппа и других вирусных респираторных заболеваний.

Учебное издание

ЗубареваИрина Валерьевна, БеренштейнТатьяна Феликсовна,

ДанющенковаНина Михайловна

Links

• Espacenet
• Global Dossier
• Discuss

• 210000002966 Serum Anatomy 0 title abstract 4
• 230000000694 effects Effects 0 abstract 1
• 239000000126 substances Substances 0 abstract 1
• -1 tetramethylbenzidine Chemical compound 0 abstract 1

Classifications

• • G — PHYSICS
  • G01 — MEASURING; TESTING
  • G01N — INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
  • G01N33/00 — Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
  • G01N33/48 — Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
  • G01N33/50 — Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
  • G01N33/52 — Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements

Abstract

Description

Изобретение относится к новой медицинской биотехнологии и может быть использовано в инфекционных стационарах, как экспресс-метод определения антител к вирусам полиомиелита 1 и 3 типов в сыворотке крови у детей.

Полиомиелит представляет собой острое инфекционное заболевание, которое поражает нервную систему и за считанные часы может привести к общему параличу, остановке дыхания и летальному исходу. Возбудитель полиомиелита (Poliovirus hominis) относится к семейству Picornaviridae, роду Enterovirus и представлен тремя серотипами: I тип - штамм Брунгильд, II тип - штамм Лансинг и III тип - штамм Леон. Наиболее эпидемически значимым считается I тип, который чаще всего способен вызывать развитие параличей. II тип имеет несколько штаммов и также является довольно распространенным. Реже всего обнаруживается III тип. Вирус полиомиелита передается при попадании в желудочно-кишечный тракт веществ, загрязненных инфицированным калом, например воды. Вероятность инфицирования полиомиелитом из таких источников особенно высока у детей младше 5 лет. После инфицирования вирус распространяется из кишечника по всему организму, но наиболее сильно поражается головной и спинной мозг. Вакцинация против полиомиелита включена в перечень обязательных детских прививок. Вакцин от полиомиелита на сегодняшний день две. Обе они вполне эффективны против имеющихся штаммов. Одна из них представляет собой инактивированные вирусные частицы, другая - просто ослабленные. Попав в организм, вирусные частицы вызывают иммунный ответ. В системе приобретенного иммунитета основную роль играют В-лимфоциты, которые продуцируют антитела. Антитела взаимодействуют с поверхностью вируса и могут с ним связываться.

Несмотря на заверения ВОЗ, полиомиелит еще нельзя считать побежденным. И одним из фактов, подтверждающим данное заключение, является то, что многие погибшие от вируса полиомиелита, вызвавшего вспышку в Конго, были привиты от полиомиелита, но вакцинация им не помогла. Вирус стал неуязвимым, и ученые Европы нашли у него необычную мутацию, которая привела к замене аминокислоты в вирусном белке VP1, и поэтому новый вирус не нейтрализовался сывороткой здорового человека, то есть мог вызвать заболевание.

Одним из путей решения актуальнейшей проблемы, поставленной ВОЗ по ликвидации полиомиелита в мире, является разработка вирусологических подходов к экспрессной диагностике определения уровня антител в крови к вирусу полиомиелита 1, 2 и 3 типов у детей, прошедших вакцинацию или в спорных случаях.

Известен способ определения антител к полиомиелиту в крови (Анджапаридзе О.Г. Культура ткани в вирусологических исследованиях - Москва, 1962). В данном источнике предлагают выявлять малоавидные и высокоавидные антитела к полиомиелиту в реакции цветной пробы. Принцип данного теста заключается в том, что в результате жизнедеятельности клеток в питательной среде накапливаются кислые продукты. В результате цвет входящего в состав среды индикатора (фенолового красного) становится оранжевым. При заражении культуры клеток цитопатогенными вирусами, метаболизм клеток подавляется, рН среды и ее цвет не изменяются (она остается красной). При положительном результате противовирусные антитела блокируют размножение вируса в культуре клеток, и под действием кислых метаболитов последних в среде меняется цвет индикатора. Однако данный метод требует ведения клеточной культуры, что удорожает проведение исследования, отсутствие специального оборудования и специалистов делает невозможным его проведение, а также не является экспрессным методом и не обеспечивает точности определения.

В настоящее время известен способ определения антител к полиомиелиту иммуноферментным анализом (ИФА) (Письмо Федеральой службы по надзору в сфере прав потребителей и благополучия человека от 17 июня 2013 года N 01/6790-13-32). Тест-система позволяет качественно и количественно определять IgG антитела к вирусу полиомиелита в человеческой сыворотке или плазме. Предлагается давать "качественную" (на основании значений оптической плотности - отрицательный, положительный, пограничный) и количественную (ед/мл - отрицательный, положительный, двоякий) оценку исследования образца сыворотки. Недостатками данного способа являются указания о том, что данная тест-система может быть использована только для научных целей, а полученные результаты не могут быть основанием для терапевтического заключения и должны коррелировать с другими клиническими наблюдениями и диагностическими тестами. Данная тест-система не позволяет определять антитела к каждому из серотипов полиовируса, что не отвечает задачам изучения коллективного (или индивидуального) иммунитета. Эти результаты не могут быть сопоставлены с результатами, получаемыми в других лабораториях, другим, стандартным методом и не могут свидетельствовать о реальной защищенности организма от вируса полиомиелита.

Также существенным недостатком является стоимость набора и его производство за рубежом.

Близким к предлагаемому способу является способ определения антител к полиомиелиту, основанный на реакции нейтрализации цитопатического действия вируса в культуре клеток ткани (п.3.3 МУ 3.1.2943-11 "Организация и проведение серологического мониторинга состояния коллективного иммунитета к инфекциям, управляемым средствами специфической профилактики (дифтерия, столбняк, коклюш, корь, краснуха, эпидемический паротит, полиомиелит, гепатит В)"). Способ позволяет выявлять присутствие функциональных нейтрализующих антител к серотипам вируса полиомиелита и определять уровень защиты, количественно выраженный в виде титра антител, что отвечает задачам серомониторинга.

Принцип ее состоит в том, что при взаимодействии антигена (вируса) с гомологичными антителами образуется комплекс антиген + антитело, в результате нейтрализуется инфекционность вируса. Этой смесью заражают чувствительную к вирусу культуру клеток. Результат нейтрализации вируса учитывают по отсутствию цитопатического действия (ЦПД) в культуре клеток. Недостатками данного способа является большая трудоемкость; необходимость строгого соблюдения стерильности материалов, посуды и инструментов; высокая стоимость живых биологических систем; длительность проведения исследования. Определение антител данным методом сопряжено с ведением клеточных культур, что не обеспечивает экпрессность метода.

С целью устранения вышеуказанных недостатков авторы предлагают принципиально новый способ определения антител к вирусам полиомиелита 1, 3 типов в сыворотке крови, технический результат которого заключается в повышении точности и экспрессивности определения антител у детей к вирусам полиомиелита 1 и 3 типов в сыворотке крови. Это достигается тем, что в сыворотку крови в модифицированной реакции связывания комплемента вносят убитый антиген вируса полиомиелита, содержащийся в инактивированной полиомиелитной вакцине, и гемолитическую сыворотку, исследуемые образцы выдерживают 3-4 часа при t°+4°C, а затем проводят количественное определение оксидазных ферментов, вышедших из гемолизированных эритроцитов, используя 0.05% тетраметилбензидин, и по степени лизиса эритроцитов спектрофотометрически по цветовому показателю определяют наличие антител к вирусам полиомиелита 1 и 3 типов. Авторами впервые предложен эффективный лабораторный экспресс-способ определения антител у детей к вирусам полиомиелита 1 и 3 типов в сыворотке крови у детей. Метод имеет ряд отличий и преимуществ. Обнаружение антител у детей к вирусам полиомиелита 1 и 3 типов в сыворотке крови по одной пробе позволяет провести раннюю оценку проводимой вакцинации у детей с определением серотипов полиовируса.

Способ обеспечивает его проведение в любом стационаре, оснащенном лабораторией ИФА, что позволяет судить о проводимой вакцинации, а также получать сведения о проведенной иммунизации у мигрантов и кочующих групп населения. Проведенные исследования могут предотвратить развитие вспышек полиомиелита в РФ. Авторы решили эту задачу, заявляя способ экспрессного определения антител к вирусам полиомиелита 1 и 3 типов в сыворотке крови у детей с помощью модифицированной реакции связывания комплемента с последующим цифровым учетом антител к вирусам полиомиелита 1 и 3 типов.

Предложенный способ базируется на оригинальной модификации, заключающейся в том, что за его основу была принята не стандартная реакция связи вируса с антителами, закрепленными на твердой матрице, а высокочувствительная разновидность реакции сорбции комплемента на иммунный комплекс, образующийся в жидкой фазе реакции. Данный комплекс образовывался между убитыми антигенами вируса полиомиелита 1 и 3 типа, содержащимся в инактивированной полиомиелитной вакцине и соответствующими антителами, присутствующими в сыворотке крови у детей. Остаток не сорбированного на комплекс комплемента учитывался при помощи спектрофотометрической аппаратуры. Цифровой учет остаточного комплемента стал возможным благодаря тому, что при лизисе эритроцитов, которые являются основой визуального тестирования результатов РСК, в жидкостную фазу реакции выходит группа оксидазных ферментов, таких как пероксидаза мембран, различные оксидазы и гемоглобин, находящиеся во внутренней структуре эритроцитов. Эти ферменты достаточно легко определяются с помощью оптического тестирования после контакта их с 0.05% тетраметилбензидина. Учет результатов проводится спектрофотометрически.

Авторами установлено, что внесение в лизат эритроцитов раствора стандартного 0.05% препарата тетраметилбензидина резко увеличивает показатель оптической плотности, что создает условия для точного учета минимальных концентраций антител и калибровки проводимой реакции. Точный подбор концентрации эритроцитов в гемолитической системе, состоящей из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, показал, что для создания оптической плотности в пределах 0,300-0,500 оптических единиц (длина волны 495 нм) необходимо использовать 0,1% взвесь эритроцитов барана.

Таким образом, основной принцип экспрессного теста по обнаружению антител к вирусам полиомиелита 1 и 3 типов заключался в следующем.

Авторы обнаружили, что при добавлении к сыворотке антигенов вируса полиомиелита, содержащихся в инактивированной полиомиелитной вакцине и, затем, комплемента, образуется комплекс антиген + антитело + белки системы комплемента. После добавления гемолитической системы лизис эритроцитов барана, а следовательно, выход в раствор оксидазных ферментов, замедлялся и при добавлении 0.05% тетраметилбензидина и перекиси водорода цифровой показатель экстинции был минимален. Если сыворотка крови не содержала антитела к вирусу полиомиелита 1 и 3 типа, то при аналогичном проведении исследования комплекса не образовывалось. После добавления гемолитической системы происходил лизис эритроцитов барана, под действием не связавшихся белков комплемента, сопровождавшийся массивным выходом оксидазных ферментов, и после добавления 0.05% тетраметилбензидина величина экстинции увеличивалась.

Основным преимуществом данного способа является постановка контроля для исследуемых биологических проб. Проводилось исследование без добавления убитых антигенов вируса полиомиелита 1 и 3 типа, содержащихся в инактивированной полиомиелитной вакцине. Если в испытуемом материале присутствовали антитела к вирусам полиомиелита 1 и 3 типов и в опытной пробе происходило образование комплекса, который и ограничивал выход оксидазных ферментов, то в контрольной группе, из-за отсутствия антител, находящихся в диагностикумах, такой комплекс не образовывался и препятствий для массового выхода оксидазных ферментов не наблюдалось, а соответственно величина экстинции всегда была больше.

При отсутствии в обоих случаях антител к вирусам полиомиелита 1 и 3 типов не происходило образование комплексов и величины экстинции практически не отличались друг от друга.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.

Полученная в лаборатории сыворотка крови разводилась физиологическим раствором в разведении 1:5, затем вносились в 96-луночные полистироловые панели, выпускаемые производством "Биополимер" (Россия) в объеме 0,05 мл. Количество лунок, занимаемых для проведения опыта, соответствовало числу испытуемых сывороток крови. Далее к ним добавлялась разведенная в концентрации 1:100 инактивированная полиомиелитная вакцина в объеме 0,05 мл. В каждую из этих лунок вносилось дополнительно по 4 дозы комплемента, находящихся в объеме 0,05 мл. При такой постановке исследования для каждого материала дополнительно ставились следующие контроли:

- контроль физ. р-ра, внесенный в объеме 0,4 мл;

- контроль комплемента, включающий в себя 0,1 мл физ. р-ра и 0,1 мл комплемента;

- контроль для системы выявления не сорбированного комплемента, куда вносились 0,2 мл физ. р-ра и 0,2 мл гемолитической системы;

- контроль сыворотки крови, который вносился в объеме 0,05 мл с добавлением 0,05 мл физ. р-ра;

- контроли убитых антигенов вируса полиомиелита 1 и 3 типа, содержащихся в инактивированной полиомиелитной, куда вносилось по 0,05 мл физ. р-ра и 0,05 мл данной вакцины.

После контакта данной смеси ингредиентов, проходившей в течение 60 минут при 37°С, для осуществления дальнейшего хода реакции во все лунки, где проходит опыт по определению наличия или отсутствия антител к полиомиелиту 1 и 3 типа и контролям к нему, вносилась система для выявления свободного комплемента. Такая система приготавливалась ex terpore и состояла из оттитрованных эритроцитов барана, так как каждая партия сильно разнилась от предыдущей, и процентное соотношение выбиралось, исходя из 300-500 единиц оптической плотности и гемолитической сыворотки в разведении 1:300. Реакция экпозировалась при +4°С в течение 2 часов для осуществления лизиса и осаждения не гемолизированных эритроцитов. По истечении 2 часов из надосадочной жидкости, образовавшейся после оседания эритроцитов, во всех опытных и контрольных лунках отбиралось по 50 мкл для проведения заключительного этапа - цифровой дифференцировки наличия антител к полиомиелиту 1 и 3 типа. Отобранная жидкость помещалась в отдельные полистироловые панели, куда добавлялось по 50 мкл 0.05% тетраметилбензидина для учета не сорбированного на эритроциты барана комплемента. Через 10 минут реакция останавливалась путем добавления 0,1 мл 1 нормальной H₂SO₄.

Учет реакции проводился сразу после добавления кислоты, так как не исключалась возможность дальнейшего продолжения гемолиза в контрольных и опытных образцах, влекущего за собой изменение цветности реакции, а следовательно, и изменения достоверности полученных результатов. Опыт учитывался на любом иммуноферментном анализаторе. Полученные результаты расшифровывались в сопоставлении всех контролей с исследуемым материалом. Наименьшее цифровое значение, выявляемое в одной из лунок, где находился обследуемый материал и определенная сыворотка, констатировал присутствие у больного антител вирусу полиомиелита соответствующего типа.

Таким образом, в течение одних суток, без использования тканевых культур, оказалось возможным обнаруживать антитела к вирусу полиомиелита в сыворотке крови с определением его серопринадлежности.

В примере 1 приведены результаты обследования сыворотки крови больного С.А., находящегося в клинике института и прошедшего иммунизацию в декретированные сроки (11 лет) направленного на определение антител к вирусу полиомиелита 1 и 3 типа в связи с отъездом в эндемичный район.

20.02.2017. Анализ №2 Планшет №1

В примере 2 приведены результаты обследования сыворотки крови больного С.А. (3 мес) для определение антител к вирусу полиомиелита 1 и 3 типа.

20.02.2017. Анализ №3 Планшет №1

Заключение: У обследуемого пациента отсутствуют как материнские, так и собственные антитела к вирусам полиомиелита I и II типа. В декретированные сроки необходимо проведение иммунизации.

Способ имеет большую медико-социальную значимость, отличается простотой и доступностью не требует дорогостоящих тест-систем и оборудования. Основным значением данного способа является возможность точного обнаружения наличия антител вирусов полиомиелита, что позволяет провести раннюю оценку проводимой вакцинации у детей с определением серотипов полиовируса. Способ обеспечивает его проведение в любом стационаре, оснащенном лабораторией ИФА, что позволяет судить о проводимой вакцинации, а также получать сведения о проведенной иммунизации у мигрантов и кочующих групп населения. Проведенные исследования могут предотвратить развитие вспышек полиомиелита в РФ. Предлагаемый авторами способ определения антител к вирусам полиомиелита 1 и 3 типов в сыворотке крови может стать не только общедоступным, но и экспрессным, поскольку его проведение занимает 4-5 часов.