Циклоферон от золотистого стафилококка

Проблема профилактики стафилококковых инфекций, вызываемых Staphylococcus aureus, по-прежнему остается актуальной в современной медицине и практическом здравоохранении. Коагулазоположительные стафилококки являются обитателями кожи и слизистых оболочек. С одной стороны, они встречаются у здоровых лиц - бактерионосителей, с другой - являются опасными микроорганизмами, способными вызывать тяжелейшие инфекции [6]. Известно, что при бактерионосительстве имеет место перестройка механизмов защиты макроорганизма, т.е. создаются условия для выживания (персистирования) возбудителя и дальнейшего развития резидентного типа бактерионосительства.

Санация организма от бактерионосительства - одна из труднейших проблем современной медицины. В качестве показаний для проведения санационных мероприятий на первый план выдвигается не столько этиологические особенности данного состояния, связанного с переживанием на слизистой оболочке верхних дыхательных путей Staphylococcus aureus, сколько более принципиальные критерии, определяющие опасность данного состояния для самого носителя или его окружения [5].

В связи с этим важное практическое значение приобретает разработка эффективных и безопасных методов санации стафилококкового бактерионосительства и, соответственно, профилактики стафилококковых инфекций, при этом важно, чтобы способ санации был не только эффективен, но и обладал длительным пролонгированным действием.

Материалы и методы исследования

В рамках настоящего исследования первичное обследование (бактериологический посев) проводили не ранее, чем за одну неделю до начала санации, второе обследование в течение одной недели после окончания санации, третье - через месяц, а четвертое обследование (катамнестическое) в срок шесть месяцев после санации. В качестве носителей патогенных стафилококков определены лица, у которых из носовой полости выделяли штаммы Staphylococcus aureus резидентного типа. Диагностику типа носительства стафилококков проводили с помощью разработанных диагностических моделей, построенных на информативных тестах, дифференцирующих резидентную и транзиторную стафилококковую микрофлору [7].

Результаты исследования и обсуждение

В ходе первичного бактериологического обследования 59 человек на назальное носительство Staphylococcus aureus было выявлено 16 (27,1 %) бактерионосителей резидентного типа. Все обследуемые лица являлись бессимптомными носителями золотистого стафилококка. Для исключения развития дисбиотических состояний санировать необходимо лишь резидентных бактерионосителей, т.е. лиц, длительно и упорно выделяющих патогенные стафилококки в окружающую среду, тогда как микрофлора транзиторного типа элиминирует из организма в результате гибели или бактериовыделения, и проведение в отношении нее санирующих мероприятий не требуется [5]. В ходе первичного бактериологического обследования от постоянных бактерионосителей были изолированы резидентные варианты S. aureus, обладающие показателем микробной обсемененности, в диапазоне от 4,5 до 5,6 lg КОЕ.

Первое обследование, проведенное через неделю после санации, показало, что S. аureus был изолирован только у шести из 16 санируемых лиц (в 37,5 % случаев), при этом у 4-х обследуемых выделяли смешанную культуру золотистого и коагулазонегативных стафилококков (S.epidermidis, S.hominis), причем штаммы S. аureus обладали достаточно низкими показателем микробной обсемененности (1,0-1,5 lg КОЕ), и тип носительства золотистых стафилококков, согласно использованной методике определения характера носительства, изменился с резидентного на транзиторный, а у 10 человек произошла полная элиминация S. аureus и замена патогенного стафилококка на Staphylococcus epidermidis - представителя нормофлоры данного биотопа. Эффективность проведенной санации резидентного носительства S. aureus составила 62,5 %.

При изучении пролонгированного действия препарата оказалось, что санирующий эффект у лиц свободных от носительства патогенных стафилококков через месяц сохранился, а процент обнаружения S. аureus в исследуемой популяции снизился до 25,0 % (4 человека, из которых у 2 был диагностирован транзиторный тип носительства). Микробиологический пейзаж слизистых оболочек лиц свободных от носительства S. аureus был представлен коагулазонегативными стафилококками (S.epidermidis, S.capitis, S.hominis, S.warneri) и другими представителями нормофлоры.

Рецензенты:

В условиях постоянно усиливающейся антропогенной нагрузки актуально проведение мероприятий, направленных на профилактику экологически обусловленных заболеваний органов дыхания, к которым относятся аллергический ринит и бронхиальная астма. Проведенный нами анализ заболеваемости детей болезнями органов дыхания позволил выявить преобладание аллергической патологии в ряде городов Оренбургской области, в которых зарегистрирован наибольший уровень загрязнения воздушной среды.

Ранее, рядом авторов было установлено, что среди детей с астматическим бронхитом и бронхиальной астмой высок уровень резидентных стафилококковых бактерионосителей [5].

Таким образом, актуальной является санация резидентных стафилококковых бактерионосителей как превентивная мера в возникновении экологически обусловленных заболеваний верхних дыхательных путей. Для санации целесообразно использование лекарственного препарата, который, с одной стороны, стимулировал бы местный иммунитет и естественную колонизационную резистентность слизистых оболочек макроорганизма, а с другой - снижал персистентные свойства патогена, в частности, его антикарнозиновую активность (АКрА), являющуюся маркером персистенции [6], поскольку подавление персистирующих свойств возбудителя затрудняет его паразитирование внутри клеток и тем самым повышает эффективность лекарственных воздействий [2]. В качестве такого препарата нами был выбран иммуномодулятор циклоферон, который, как было показано ранее, снижает АКрА микроорганизмов [4].

Кроме того, известно, что микроорганизмы образуют в организме хозяина высокоорганизованные сообщества, которые позволяют им выживать в любых неблагоприятных условиях, - биопленки [5], поэтому представляло интерес определить влияние циклоферона на способность стафилококков к биопленкобразованию.

Цель работы

Определение длительности эффективной санации резидентных стафилококковых бактерионосителей с помощью циклоферона по его способности модулировать антикарнозиновую активность и биопленкообразование золотистых стафилококков.

Материалы и методы

Результаты и обсуждение

Популяционная структура исходной культуры S. aureus по АКрА была представлена клонами с разной выраженностью признака: 67 % обладали высокой АКрА (2,0-3,0 мг/мл), по 16,5 % - средней активностью (1,0-2,0 мг/мл) и нулевой. Среднепопуляционный уровень АКрА составлял 2,03±0,26 мг/мл (рис. 1).

Изменение популяционной структуры S. aureus по АКрА под влиянием циклоферона

Под действием циклоферона после первого соинкубирования доля клонов S.aureus с высокой АКрА составила 100 %, после второго - 50 % с высокой и 50 % со средней АКрА. Среднепопуляционный уровень признака был равен 2,62±0,16 мг/мл и 2,05±0,94 мг/мл соответственно. На третий день выделялось 50 % клонов с высокой АКрА, появились клоны с низкой (1,1-1,8 мг/мл) и нулевой активностью (8 % и 42 % соответственно), а средний уровень продукции ингибиторов карнозина снизился до 1,44±0,26 мг/мл. Далее возросло число клонов с высокой (67 %) и низкой (17 %) АКрА, а также до 8 % уменьшилось количество клонов с нулевой активностью и появилось 8 % со средней, что сопровождалось повышением среднепопуляционного значения антикарнозивой активности до 2,2±0,26 мг/мл. После пятого соинкубирования, наряду с клонами, обладающими высокой АКрА (59 %), появилась доля клонов со средней способностью к инактивации карнозина (8 %), а уровень клонов, не обладающих признаком, увеличился до 33 %; далее было зарегистрировано такое же количество клонов с высокой АКрА (58 %) и 42 % клонов без признака. Средний уровень АКрА в популяции составил 1,75±0,26 мг/мл и 1,7±0,26 мг/мл соответственно. На седьмой день эксперимента отмечено нарастание доли клонов без АКрА (76 %), 8 % составляли клоны со средним и 16 % с низким уровнем активности, а среднее значение антикарнозиновой активности в популяции снизилось до 0,195±0,12 мг/мл.

Таким образом, установлено, что в течение семи дней эксперимента наблюдалась перестройка популяционной структуры в сторону клонов, не обладающих антикарнозиновой активностью. Кроме того, наименьшая среднепопуляционная способность золотистых стафилококков к инактивации карнозина была отмечена также на седьмой день соинкубирования с циклофероном.

Одновременно нами проведено изучение влияния циклоферона на способность золотистых стафилококков образовывать биопленки (рис. 2). Исходную популяцию штамма стафилококка составляли 80 % клонов со средней способностью биопленкообразования (от 1,9 до 2,5) и 20 % - с высокой (2,6 и более), среднее значение способности популяции образовывать биопленки было равно 2,44±0,04.

Изменение популяционной структуры S. aureus по способности формировать биопленки под влиянием циклоферона

Соинкубация стафилококков с циклофероном приводила как к снижению доли клонов со средним показателем до 40 % и появлению 60 % клонов с низкой способностью (1,1-1,8) формировать биопленки, так и к снижению среднепопуляционного показателя биопленкообразования (1,69±0,07). При дальнейшей соинкубации доля клонов со средними значениями увеличилась до 53 % и появились клоны с высокими значениями (47 %), средняя способность популяции формировать биопленки составила 2,26±0,12. После третьего дня выделялись клоны с низким (73 %) и нулевым (7 %) биопленкообразованием, до 20 % уменьшилось число клонов со средними значениями, и до 1,5±0,09 снизился средний уровень биопленкообразования. После четвертого дня 93 % клонов характеризовались низкими значениями признака, 7 % - средними (средняя способность биопленкообразования популяции - 1,4±0,05), затем вновь появились клоны с нулевой способностью (7 %), наряду с клонами со средними (7 %) и низкими (86 %) значениями (средняя способность - 1,48±0,06).

На шестой и седьмой дни эксперимента соотношение клонов было примерно одинаковым - около 80 % клонов обладали низкой способностью биопленкообразования и около 20 % клонов - нулевой, а средний уровень биопленкообразования в популяции составил 1,31±0,07 и 1,26±0,05 соответственно.

Полученные результаты показали, что в течение семи дней эксперимента наблюдалась перестройка популяционной структуры в сторону клонов с низкой и нулевой способностью к биопленкообразованию. Кроме того, на шестой и седьмой дни соинкубации стафилококков с циклофероном были отмечены наименьшие среднепопуляционные значения биопленкообразования.

Таким образом, при изучении влияния циклоферона на биологические свойства клонов золотистого стафилококка установлена перестройка популяционной структуры носительского штамма по биопленкообразованию и способности к инактивации карнозина. В ходе эксперимента изменялось соотношение клонов с низкими, средними и высокими значениями и появлялись клоны с нулевыми. Наибольшее число клонов, не обладающих способностью к инактивации карнозина, отмечено на седьмой день соинкубирования, а наименьший уровень биопленкообразования (80 % клонов с низкой способностью и 20 % - с нулевой) зарегистрирован на шестой и седьмой дни эксперимента. Аналогичная тенденция наблюдалась при сравнении средних показателей в популяции. Таким образом, полученные результаты позволили установить оптимальную продолжительность санации стафилококковых бактерионосителей циклофероном, которая составляет семь дней.

На следующем этапе работы нами по трехкратному бактериологическому обследованию была сформирована группа из 40 резидентных стафилококковых бактерионосителей в возрасте 9-12 лет. Они были просанированы циклофероном в течение 7 дней. После первой санации были получены следующие результаты: S.aureus выделялся в 80 % случаев, КОС - в 20 % случаев. После второй отмечено появление у бактерионосителей золотистых стафилококков, наряду с S.aureus, коагулазоотрицательных штаммов в 9,5 % случаев, золотистый стафилококк продолжал высеваться в 76,2 % случаев, только КОС высевали у 14,3 % детей. Третья санация способствовала снижению выделения золотистых стафилококков, стафилококковые бактерионосители составили 66,6 %, коагулазоотрицательные стафилококки высевали в 14,3 % случаев, совместное выделение золотистых и коагулазоотрицательных стафилококков отмечено в 23,8 % случаев. Четвертая, пятая и шестая санации способствовали уменьшению числа бактерионосителей золотистых стафилококков до 47,1 %, 43,5 %, 40,1 % соответственно и одновременно увеличению числа коагулазоотрицательных стафилококков до 23,5 %, 26,1 %, 27,3 %. Увеличилось также число бактерионосителей, у которых, наряду с золотистыми, стали выделяться и коагулазоотрицательные стафилококки (29,4 %, 30,4 %, 31,8 %). Далее мы изучили динамику антикарнозиновой активности золотистых стафилококков в процессе санации циклофероном. Было установлено, что после первой санации циклоферон оказывал разнонаправленное действие на S.aureus: повышал признак у 50 % выделенных штаммов, снижал - у 33,3 % и не оказывал влияния на 16,6 % выделенных от бактерионосителей микроорганизмов. После второй санации способность к инактивации карнозина также повышалась у 50 % выделенных штаммов, снижалась у 43,8 %, не изменялась у 6,3 % выделенных стафилококков; после третьей - у 42,8 %, 50 % и 7,1 % соответственно. После четвертой санации уменьшилось число штаммов, повышающих АКрА, до 14,3 % и до 71,4 % увеличилось число золотистых стафилококков, не способных инактивировать карнозин, АКрА не изменялась у 14,3 % выделенных культур. После пятой и шестой санаций снижение признака зарегистрировано у 80,0 % и 77,7 % штаммов; повышение и индифферентное действие у - 10 % и 11,1 % штаммов золотистых стафилококков соответственно. После седьмой и восьмой санаций выявлены штаммы, в основном ингибирующие АКрА (в 90,9 % случаев) и в 9,1 % повышающие данный признак. Далее мы провели изучение видового состава и антикарнозиновой активности у выделенных штаммов микроорганизмов через месяц после санации. Были получены следующие данные: в 38,1 % случаев выделялся золотистый стафилококк, в 38,1 % - эпидермальный и в 23,1 % - одновременно золотистый и эпидермальный стафилококк или микрококк. Вместе с тем отмечено снижение антикарнозиновой активности у 80 % выделенных штаммов S.aureus по сравнению с исходным уровнем признака (до санации) и у 20 % культур способность к инактивации карнозина не изменилась. Среднее значение признака составило 0,4 мг/мл.

Таким образом, проведенные in vitro и in vivo исследования показали возможность санации резидентных бактерионосителей циклофероном. Установленные режимы санации способствуют не только элиминации золотистых стафилококков со слизистой оболочки переднего отдела носа, но и ингибируют его способность к инактивации карнозина. Циклоферон в качестве препарата для санации стафилококковых бактерионосителей может применяться для профилактики экологически обусловленных заболеваний, в частности, аллергических ринитов и бронхиальной астмы.

Рецензенты:

Гриценко Виктор Александрович, д.м.н., профессор, зав. лабораторией клеточного симбиоза Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения Российской Академии наук (ИКВС УрО РАН), г. Оренбург.

Уменьшение количества устойчивых к антибиотикам штаммов на фоне приема циклоферона, несомненно, представляется весьма интересным и важным эффектом ввиду всеобщей тенденции к развитию резистентности к используемым в повседневной практике антибактериальным препаратам.

В группу часто болеющих детей (ЧБД) входят на том или ином возрастном этапе от 15 до 75 % детской популяции, в связи с чем,частые респираторные заболевания является актуальной проблемой педиатрии. К категории ЧБД относят детей, страдающих повторными острыми респираторными заболеваниями (ОРЗ) свыше 4–6 раз в год, имеющих инфекционный индекс от 1,1 до 3,5. Среди всей популяции ЧБД выделяют категорию ложно болеющих с индексом резистентности от 0,3 до 0,49, а к категории истинно часто болеющих детей, относят часто болеющих детей при индексе резистентности 0,5 и выше 2.

Система иммунитета в детском возрасте характеризуется относительно пониженным уровнем нейтрофилов основных эффекторных клеток естественного (врожденного) звена иммунного ответа и низкой продукцией иммуноглобулинов на фоне повышенного числа Т- и В-лимфоцитов, что свидетельствует о неполноценности адаптивного (приобретенного) звена, а в совокупности с анатомо-физиологическими особенностями органов дыхания, недостаточными гигиеническими навыками и значительным контактом с окружающим миром делает детей дошкольного возраста особенно уязвимыми для инфекций [5, 6].

После перенесенного эпизода ОРЗ дисбиотические изменения микрофлоры зева сохраняются до 1,5 месяцев. Вирусы являются этиологическими агентами более чем в 80 % случаев ОРЗ для их лечения даже при неосложнённом течении, используются антибактериальные (АБ) препараты, что способствует усугублению дисбиоза. 35 % детей, относящихся к группе ЧБД, имеют хроническую ЛОР патологию. Не менее, чем в 30 % случаев, ЧБД являются носителями β-гемолитического стрептококка группы А, а 50 % детей являются носителями золотистого стафилококка [11, 12].

Введение интерферона 1 типа в экспериментальных исследованиях сокращало сроки персистенции золотистого стафилококка и количество персистирующих бактерий, способствуя нормализации показателей иммунного статуса, повышая выживаемость животных при стафилококковой инфекции. Иммуномодулирующий эффект интерферона II типа ещё более выражен,γ-интерферон активно стимулирует макрофаги, усиливает экспрессию молекул МНС I и II, стимулирует дифференцировку Т-хелперов нулевого типа в Т-хелперы первого типа.

В связи с этим, нами выбран метилглюкаминакридоноацетат- ранний индуктор смешанного (Th1/Th2) типа иммунного ответа, увеличивающий функциональную активность фагоцитирующих клеток и обеспечивающий их бактерицидность[2, 4, 5].

Напомним механизм действия препарата, описанный нами ранее[1].

Циклоферон как индуктор интерферонов. Продукция эндогенного интерферона под воздействием циклоферона обусловлена наличием чувствительных клеточных систем, способных синтезировать интерферон в ответ на индуктор.Иммунокомпетентные клетки (моноциты, лимфоциты, макрофаги, купферовские клетки печени) способны индуцировать интерферон. Циклоферон индуцирует ранний интерферон.

Одним из важных направлений формирования полноценного иммунного ответа является регуляция синтеза ИФН-g. Продукция ИФН-γTh1 осуществляется благодаря стимуляции ИЛ-12, ИЛ-2 и ФНО-a, а ИЛ-18, являясь потенциальным индуктором синтеза ИФН-g, выступает в роли синергиста ИЛ-12 и оба этих цитокина лидируют в быстрой активации моноцит/макрофагальной системы посредством стимуляции выработки ИФН-g, который также стимулируется при действии циклоферона.

Иммунотропная активность циклоферона. В основе развития иммунного дисбаланса лежат функциональная клеточная блокада (блокада рецепторов и механизмов передачи сигналов); дисбаланс клеточных субпопуляций – хелперов Th1/Th2, супрессоров/цитотоксических лимфоцитов, хелперов/эффекторов и другие. В экспериментальных исследованиях циклоферон индуцировал в линии клеток К562 иммунного происхождения синтез мРНКинтерферона-гамма и IL-2, а также IL-1 и IL-6 (представители гуморального Th-2 типа иммунитета). При этом, циклоферон не индуцирует мРНК цитокинов в линиях клеток неиммунного происхождения (MG-63), что свидетельствует о высокой тропности циклоферона к клеткам иммунной системы.Введение циклоферона приводит к существенным изменениям в составе субпопуляций лимфоцитов (повышается относительное и абсолютное число исходно сниженных общих Т-лимфоцитов (СD3 +), Т-хелперов (СD4 +), иммунорегуляторного индекса и естественных киллеров (СD16 +); снижение СD8 + и СD72 + – лимфоцитов). Повышается уровень иммуноглобулина А (IgA) при одновременном снижении концентрации иммуноглобулина Е (IgE). Циклоферон увеличивает провоспалительный потенциал нейтрофилов периферической крови, а также функциональную активность фагоцитирующих клеток за счет генерации активных форм кислорода, обеспечивая бактерицидность клеток.

Циклоферон как стимулятор образования дефект-интерферирующих вирусных частиц. В ряде случаев размножение вирусов подавляется дефектными частицами, которые известны как дефект-интерферирующие частицы (ДИ-частицы). ДИ-частицы препятствуют нормальной репродукции вируса, что ведет к подавлению его цитоцидного действия. Накопление достаточного количества ДИ-частиц в инфицированном организме приводит к самоограничению инфекции, при этом, дефектные частицы сохраняют цитокин- и интерферон (ИФН)-индуцирующие свойства, стимулируя неспецифический иммунитет.

Противовирусная активность циклоферона. Циклоферон оказывает непосредственное противовирусное действие, восстанавливает способность лейкоцитов крови к синтезу интерферона, подавляет проникновение вирусной частицы в клетку путем ингибирования синтеза мРНК и трансляции вирусных белков, а также через блокирование процессов сборки вирусной частицы и ее выхода из инфицированной клетки. В результате связывания молекулы интерферона с интерфероновыми рецепторами на поверхности клеток происходит активация генов, локализованных в 21 хромосоме у человека. Этот процесс сопровождается формированием более 20 новых внутриклеточных белков, способствующих возникновению резистентности к вирусам. Данные белки отсутствуют в клетках, не подвергшихся воздействию интерферона. К этим белкам относят фермент А-синтетазу, осуществляет расщепление мРНК путем подавления удлинения полипептидных цепей. Также под действием данного фермента продуцируются олигомеры адениловой кислоты, которые блокируют синтез вирусных белков, что приводит к нарушению трансляции с вирусной РНК.

Вышесказанное, определило цель исследования – установить способность меглюминакридонацетата (циклоферона) индуктора раннего эндогенного интерферона смешанного типа влиять на микробиологический пейзаж поверхности миндалин часто болеющих детей.

Материалы и методы исследования

Под наблюдением находилось 16151 детей дошкольного и школьного возраста, которым в период повышенного сезонного подъема респираторной заболеваемости была проведена экстренная неспецифическая профилактика повторных ОРЗ (эпидемиологическое исследование).Препарат назначался детям в соответствии с указаниями инструкции по медицинскому применению.

Также в сезон 2010/11 года наблюдали 68 детей (32 девочки и 36 мальчиков) в возрасте от 4 до 7 лет, медиана (Ме) – 5,1 лет, нижняя квартиль (Q25) – 4,5 года, верхняя квартиль (Q75) – 5,8 лет, посещающих специализированные детские сады (№ 94 и № 95) для часто болеющих детей.

При получении информированного согласия от законных представителей ребенка, отсутствии острых инфекционных заболеваний, наличии в анамнезе 6-и и более эпизодов ОРЗ за последний год, ребенок включался в протокол врачебного наблюдения.

Препарат циклоферон (таблетки по 150 мг) назначали двумя курсами (с перерывом в 1 месяц) 10 мг/кг массы тела, согласно инструкции по медицинскому применению препарата. Двукратно, до начала приема препарата и через 2 недели после окончания приема, выполнили посев микрофлоры с поверхности миндалин. Материал – слизь с поверхности миндалин – брали стерильными ватными тампонами натощак и помещали в универсальную гелевую транспортную среду Стюарта фирмы Copan (Италия). В течение 2 часов полученный материал доставлялся в лабораторию. Для идентификации микрофлоры и определения её чувствительности к антибактериальным препаратам была использована автоматизированная система VITEC-2 фирмы Bio Merieux (Франция).Тестирование чувствительности к антибактериальным препаратам осуществлялось методом минимальных ингибирующих концентраций [8, 9].

Статистический анализ проводился с использованием стандартного пакета прикладных программ Statistica версия 6.0. При сравнении двух независимых групп изучаемой переменной использовали тест Манна-Уитни (U), в случае зависимости групп – тест Вилкоксона (Z). При сравнении долей (процентов) использовался метод Фишера. Нулевая гипотеза об отсутствии различий между переменными отвергалась на уровне значимости α = 0,05 (p £ 0,05) для каждого из использованных тестов. Для представления результатов статистической обработки использовали величины медианы (Me), верхней (Q75) и нижней квартилей (Q25) в формате Me (Q25-Q75).

Результаты исследования и их обсуждение

В раннее проведенных исследованиях[2] нами показано, что циклоферон используется как средство неспецифической профилактики ОРЗ/ОРВИ и гриппа у детей во время эпидемического подъема заболеваемости. Под наблюдением находилось 16151 человек, из них 9299 получали препарат, а 6852 – плацебо (дети в возрасте от 10 до 16 лет). Кроме этого выборка в 1255 детей включала возраст от 7 до 10 лет. Препарат получали 524 ребенка, а 731 человек получали активное плацебо. 114 детей в возрасте от 4 до 7 лет получали циклоферон, в сравнении с ревитом. Индекс эффективности составил 2,9 (колебания от 2,4 до 3,4), показатель защиты 62,8 % (колебания от 58,5 до 67,1 %), снижение заболеваемости более чем в 2,9 раза. Установлена профилактическая эффективность препарата (снижение заболеваемости ОРЗ и гриппом наблюдалось в 2,9–7,2 раза для микст-инфекций респираторного тракта). Отмечена минимизация симптомов интоксикации, выраженности и продолжительности катаральных явлений, отсутствие нежелательных реакций на препарат. Цитопротекторное действие, проявлялось снижением степени деструкции клеток эпителия, усилением в 4,5 раза активности факторов (лизоцим, секреторный иммуноглобулин А) местной неспецифической резистентности. Показано снижение кратности (в 4,1 раза) и длительности острых (в 1,7 раза) эпизодов ОРЗ/ОРВИ, частоты развития аллергии в 4,6 раза, уменьшение проявлений синдрома лимфоаденопатии, астенического синдрома, осложненного течения заболевания, восстановление нормальной флоры слизистых оболочек носа и зева. Выявлено снижение заболеваемости ОРЗ и гриппом (в 2,4–4,4 раза) во вновь организованных коллективах, как у детей, так и у подростков. При проведении курса циклоферона наблюдалась смена структуры ОРЗ среди заболевших. Увеличивались легкие (в 4,3 и более раза), уменьшались тяжелые и осложненные формы заболеваний, число заболевших, получавших циклоферон составило 6 %. Наблюдалось легкое течение ОРЗ, число пропущенных дней по болезни (в пересчете на 1 ребенка) составило 4,8 дня. Среди детей, не получавших средств неспецифической профилактики, уровень заболеваемости составил 58 %, при заболеваемости в 19 % у детей, получавших гриппол. Наблюдая 116 детей в возрасте до 14 лет с неосложненным и осложненным (со стороны ЛОР-органов) течением ОРВИ, установлено, что в 95,7 % случаев заболевание начиналось с лихорадки, симптомов интоксикации, проявляющихся вялостью, адинамичностью, бледностью кожных покровов, головной болью, судорожным синдромом, рвотой. У 17 детей выявлен бронхит, а при отоларингологическом осмотре выделены наблюдавшиеся группы детей: 1-я – ОРВИ с превалированием клиники ринофарингита; 2-я – с наличием острого катарального среднего отита (ОКСО); 3-я – острого гнойного среднего отита (ОГСО); 4-я – острого катарального синусита (ОКС) и 5-я – острого гнойного синусита (ОГС). Вирусная этиология ОРВИ из 116 обследованных детей, была подтверждена в 74,1 % случаев.

Оценка неспецифической резистентности слизистой оболочки, изучена по показателям фагоцитарной активности, фагоцитарного числа, степени завершенности фагоцитоза (на слизистой ротоглотки и в крови), также оценивался уровень SigА. Выявлено снижение фагоцитарной активности нейтрофилов (ФА) и фагоцитарного числа (ФЧ) относительно нормы в начале заболевания, но степень снижения была различна. В группе больных гриппом А показатели достоверно ниже, чем в группе сравнения. Активность фагоцитов падает более чем в 2 раза от нормы как в крови, так и на слизистых оболочках. При выявлении катарального отита или синусита на фоне гриппа А, ФА и ФЧ на слизистых выше, чем в крови. При парагриппозной инфекции эти процессы активированы в крови. ОГСО сопровождается теми же изменениями, но в меньшей степени выраженности. ОГС при парагриппе протекает с высокой активностью фагоцитоза в крови.

Основная функция моноцитов-макрофагов киллинг микроба, оценивалась в НСТ-тесте. Выявлено, что у детей с гриппом А как при осложненном, так и при неосложненном течении, резервы для киллинга бактерий (НСТин./НСТсп.) снижены и составляют 1,4 ± 0,1, а при парагриппе – резервы выше (1,7 ± 0,1, р

Среди наиболее интенсивно разрабатываемых в последние годы лекарственных средств антивирусные препараты занимают одно из первых мест, при этом особую значимость приобретают препараты, влияющие на механизмы естественного (врожденного) иммунитета (интерфероны и их индукторы). Главной особенностью препаратов является широкий спектр биологической активности, выявленный в процессе многолетнего клинического применения, но если механизм действия на макроорганизм подробно описан [6, 7], то характер их влияния на биологические свойства бактериальных патогенов изучен недостаточно.

Имеются лишь единичные сведения о влиянии препаратов-иммуномодуляторов, в том числе индукторов интерферона на биологические свойства патогенных и условно-патогенных микроорганизмов [4, 8].

Staphylococcus aureus обладает высокой этиологической значимостью в патологии человека и является причиной дисбиотических изменений в микробиоценозах верхних дыхательных путей [3]. Известно, что S. aureus благодаря наличию набора биологических, в частности персистентных свойств, способен колонизировать слизистые оболочки носовой полости, что может способствовать развитию ряда гнойно-воспалительных заболеваний различной локализации [5].

В связи с вышесказанным, нами была предпринята попытка оценить способность препаратов индукторов эндогенного интерферона оказывать влияние на факторы персистенции Staphylococcus aureus.

Материалы и методы исследования

Антилизоцимную и антикарнозиновую активности изучали фотометрическим методом [2].

Для оценки влияния лекарственных веществ на антилизоцимную и антикарнозиновую активности бактерий ежедневно в течение 12 дней проводили соинкубирование взвеси S. aureus с препаратами в условиях шейкер-инкубатора при 37 °С – 60 минут. Затем смесь центрифугировали при 3000 оборотов в минуту, после чего двукратно отмывали клетки физиологическим раствором и рассеивали на 1,5 % мясо-пептонный агар. Чашки инкубировали при температуре 37 °С в течение 16–18 ч с последующим определением у 20 изолятов персистентных свойств. В качестве контроля вместо препаратов использовали изотонический раствор хлорида натрия.

Все эксперименты проводили в двух сериях при трехкратном воспроизведении. Полученные результаты обрабатывали с использованием t-критерия Фишера-Стьюдента и представляли в виде средней арифметической и ее ошибки (M± m).

Результаты исследования
и их обсуждение

При изучении антимикробной активности препаратов в используемых концентрациях установлено, что они не обладали бактерицидным и бактериостатическим действием, о чем свидетельствовало отсутствие разницы в росте стафилококка вокруг контрольных и опытных лунок.

Тестирование воздействия лекарственных веществ на распространенность антилизоцимной и антикарнозиновой активности у изолятов S.aureus показало, что препарат полудан in vitro оказывал ингибирующее влияние на антилизоцимную и антикарнозиновую активности у 15,0 ± 4,3 % изолятов золотистого стафилококка. Циклоферон подавлял персистентные свойства: антилизоцимную активность у 15,0 ± 4,3 %, а антикарнозиновую – у 30,0 ± 8,6 % штаммов. Препарат экзогенного интерферона гриппферон не оказывал ингибирующего влияния на изученные персистентные свойства бактерий.

При изучении действия лекарственных веществ на уровень экспрессии факторов персистенции золотистого стафилококка оказалось, что наиболее эффективное ингибирование экспрессии персистентных свойств регистрировалось под влиянием препаратов индукторов эндогенного интерферона. Так, при оценке влияния полудана на персистентный потенциал исследованных изолятов S. aureus установлено, что у бактерий, инкубированных с препаратом, по сравнению с контролем, наблюдалось снижение уровня антилизоцимной активности на 57,9 ± 9,0 % (средний показатель –
1,04 ± 0,06 мкг/мл×ОП) и антикарнозинового признака на 67,4 ± 8,6 % (средняя величина – 0,91 ± 0,08 мг/мл).

Соинкубирование золотистого стафилококка с циклофероном приводило к снижению уровня антилизоцимной активности среди всех исследованных изолятов до среднего значения 0,89 ± 0,07 мкг/мл×ОП, что составляло 63,8 ± 8,8 % от исходного уровня признака. Сходные данные были получены при анализе влияния циклоферона на антикарнозиновую активность изолятов S. aureus: под действием препарата средняя величина данного признака среди всех исследуемых опытных изолятов, по сравнению с контролем, снизилась на 74,6 ± 7,9 % и составила 0,71 ± 0,09 мг/мл.

При изучении характера влияния на изоляты S.aureus препарата экзогенного интерферона было установлено, что стафилококки к нему менее чувствительны. Так, снижение уровня антилизоцимной активности среди штаммов S.aureus под действием гриппферона составило 13,8 ± 0,02 % от начальных значений (средний показа-
тель – 2,13 ± 0,02 мкг/мл×ОП), а антикарнозиновой активности на 10,4 ± 5,6 %
(в среднем – 2,5 ± 0,01 мг/мл).

Таким образом, экспериментальные данные демонстрируют модифицирующую способность препаратов индукторов эндогенного интерферона на персистентный потенциал S. aureus, причем более выраженную, по сравнению с препаратом рекомбинантного интерферона.

Полученные результаты по влиянию индукторов интерферона на персистентный потенциал S. aureus показывают, что биологически активные вещества в применяемых концентрациях могут оказывать угнетающее действие на распространенность и выраженность факторов персистенции.

Характерной особенностью современной инфекционной патологии является рост числа хронических инфекционно-воспалительных заболеваний разнообразной этиологии и локализации, вызываемых слабопатогенными оппортунистическими микроорганизмами, обладающими множественной антибиотикорезистентностью [1]. Изучение клинической эффективности индукторов интерферона выявило их способность нормализовать микробиоценоз слизистых оболочек носа и зева и восстанавливать уровень нормальной микрофлоры кишечника [10].

Двойная направленность действия препаратов с иммуномодулирующим действием, проявляющаяся, с одной стороны, активацией механизмов естественной иммунологической защиты организма [6], а с другой стороны, влиянием на биологические свойства микроорганизмов [4], может потенциировать результат терапевтического воздействия, что позволит использовать их для более эффективной борьбы с возбудителями бактериальных инфекций и разработки новых подходов к коррекции дисбиотических нарушений в микробиоценозах тела человека.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют, что область применения индукторов интерферона может быть значительно расширена путем использования их в качестве весьма перспективных лекарственных веществ, подавляющих персистентный потенциал патогенов, что может иметь существенное значение в лечении и профилактике бактериальных инфекций, а также коррекции дисбиотических нарушений в микробиоценозах тела человека.

Рецензенты: