Анализ на антитела к дизентерии

Стоимость услуги:

530 руб.* Заказать

Срок исполнения: 2 - 4 к.д. Заказать Указанный срок не включает день взятия биоматериала

Не менее 3 часов после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа.

Метод исследования: РПГА

Антитела к возбудителям шигеллеза – косвенный маркер инфицирования шигеллами. Шигеллез (бактериальная дизентерия) – антропонозное заболевание, возбудителями которого являются микроорганизмы рода шигелл (S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii, S. sonnei). Путь передачи инфекции– фекально-оральный. Клинической особенностью шигеллеза является наличие у части заболевших классических форм поражения толстого кишечника в виде гемоколита со скудным стулом с примесью крови и слизи и ложными позывами на дефекацию.

Серологические методы используются для диагностики шигеллеза при отрицательных результатах бактериологического исследования, обнаружения ДНК и для эпидобследований. Не используются для ранней диагностики.

ПОКАЗАНИЯ К ИССЛЕДОВАНИЮ:

Обследование пациентов с симптомами острой кишечной инфекции при позднем обращении, когда применение других методов (ПЦР и бактериологического исследования) неинформативно;
Эпидемиологические обследования.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ:

Референсные значения (вариант нормы):

Параметр	Референсные значения	Единицы измерения
Anti-Shigella flexneri I-V, VI и Anti-Shigella sonnei	≥ 1:400 - при острой дизентерии; ≥ 1:100 - при затяжном течении	титр

Результаты считаются положительными при исследовании парных сывороток крови, взятых с интервалом 10 дней, при нарастании титра антител не менее чем в 4 раза.

Результаты необходимо оценивать с учетом эпидемиологической обстановки, формы заболевания, сроков взятия сыворотки от начала заболевания.

Не обнаружено	Обнаружено
Отсутствие инфекции Ранний период инфекции	Текущая инфекция Перенесенная инфекция в прошлом

" ["serv_cost"]=> string(3) "530" ["cito_price"]=> NULL ["parent"]=> string(2) "25" [10]=> string(1) "1" ["limit"]=> NULL ["bmats"]=> array(1) < [0]=>array(3) < ["cito"]=>string(1) "N" ["own_bmat"]=> string(2) "12" ["name"]=> string(31) "Кровь (сыворотка)" > > >

Биоматериал и доступные способы взятия:

Тип	В офисе
Кровь (сыворотка)

Подготовка к исследованию:

Не менее 3 часов после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа.

Метод исследования: РПГА

ПОКАЗАНИЯ К ИССЛЕДОВАНИЮ:

Обследование пациентов с симптомами острой кишечной инфекции при позднем обращении, когда применение других методов (ПЦР и бактериологического исследования) неинформативно;
Эпидемиологические обследования.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ:

Референсные значения (вариант нормы):

Параметр	Референсные значения	Единицы измерения
Anti-Shigella flexneri I-V, VI и Anti-Shigella sonnei	≥ 1:400 - при острой дизентерии; ≥ 1:100 - при затяжном течении	титр

Не обнаружено	Обнаружено
Отсутствие инфекции Ранний период инфекции	Текущая инфекция Перенесенная инфекция в прошлом

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Различают 4 вида шигелл: Флекснера, Зонне, Бойда, дизентерии.

Важная особенность шигелл в том, что они способны менять чувствительность к лекарственным препаратам. Если какое-либо антибактериальное средство достаточно часто используется в отдельном регионе (например, при выращивании птицы), то возбудитель может оказаться нечувствительны к данному препарату. Это значительно затрудняет терапию.

Лекарственная устойчивость возбудителей, их способность выживать во внешней среде с некоторых пор снова приводят к массовым вспышкам дизентерии и даже крупным эпидемиям, во время которых летальный исход составляет до 5 % от заболевших.

Главный фактор в патогенезе дизентерии — это выделение токсинов, обуславливающих основные клинические проявления. Дизентерийные токсины действуют местно в просвете кишечника, всасываясь в кровь, воздействуют на стенки сосудов, центральную нервную систему, печень, органы кровообращения.

Выделяют несколько форм и вариантов заболевания:

• Острая дизентерия в колитическом, гастроэнтеритическом, гастроэнтероколитическом вариантах с легким, средне-тяжелым и тяжелым течением;

• Возможно стертое и затяжное течение заболевания;

• Хроническая дизентерия в рецидивирующей или непрерывной форме;

Инкубационный период длится обычно 3 дня, но, в зависимости от возбудителя, состояния организма и инфицирующей дозы (количество проникших клеток) может затягиваться до 7 дней или сокращаться до суток.

При колитическом варианте болезнь развивается остро с повышением температуры, снижением аппетита, тошнотой, интенсивной режущей болью в животе. Сначала боль разливается по всему животу, потом концентрируется внизу и в правой подвздошной области. Течение болезни сопровождается диареей — 10 и более раз за сутки. При этом кал быстро теряет нормальную консистенцию, в нём появляются примеси в виде крови, слизи, гноя, а позывам к дефекации сопутствует мучительная боль. Столь острые клинические симптомы постепенно исчезают через неделю-полторы, а язвенные поражения слизистой — примерно через месяц.

Гастроэнтеритический вариант характеризуется тошнотой, рвотой, диареей с обильным жидким стулом. Боль в этом случае локализуется в области пупка, эпигастральной области.

Гастроэнтероколитический вариант характеризуется сочетанием колитического и гастрокэнтеритического синдромов

Частым явлением стала стёртая дизентерия. При такой форме больной испытывает легкое недомогание, умеренную болезненность в животе без определённой локализации, у него жидкий или кашицеобразный стул с обычным интервалом — 1—2 раза за сутки. Дизентерия, продолжающаяся более трех месяцев, диагностируется как хроническая. Чтобы избежать более тяжёлых последствий и перерастания болезни в хроническую форму, необходимо при подозрительных симптомах обязательно сдать анализы.

Осложнения при дизентерии:

• выпадение прямой кишки.

Осложнения возникают при запоздалом обращении к врачам, тяжёлых случаях, неправильно выбранной терапии, как следствие низкого качества диагностики или квалификации врача. Чтобы тяжёлых последствий избежать, нужно обращаться к врачу при первых симптомах и проходить лабораторные исследования в надёжных, и современных лабораториях.

Источники инфекции, механизмы передачи

Источник инфекции — человек, больной различными формами дизентерии, в том числе и бессимптомными. Заражение реализуется контактно-бытовым, водным и пищевым путями. Болеют люди всех возрастных групп, наиболее подвержены лица с ослабленным иммунитетом и дети дошкольного возраста. Заболевшие дизентерией опасны для окружающих почти сразу после заражения и в течение всего периода реконвалесценции (выздоровления). Если же болезнь приобретает хроническую форму, то выделение возбудителя происходит месяцами. Нужно отметить, что у людей восприимчивость к болезни разная.

Исследуемый материал для диагностики дизентерии

Возбудитель при дизентерии выделяют из испражнений.

Возможно исследование крови для определения антител к шигеллам (ответная реакция организма на встречу с возбудителем заболевания).

Методы лабораторной диагностики дизентерии

Копрограмма — это анализ кала: его состава, свойств, примесей. При шигеллезе в кале обнаруживаются включения слизи, скопления лейкоцитов более 20-30 в поле зрения, эритроциты и эпителиальные клетки.

Общий анализ крови

При тяжёлой форме шигеллеза отмечают следующие изменения:

• лейкоцитоз с нейтрофильным сдвигом формулы влево;

• токсическую зернистость нейтрофилов;

Это ведущий специфический метод диагностики дизентерии, который заключается в проведении посева кала на специальные питательные среды для выделения патогенных бактерий. Бактериальный посев используют как подтверждающий анализ, потому что его результаты известны только через 2-5 дней. Однако он чрезвычайно важен для точной постановки диагноза и определения чувствительности к антибактериальным препаратам. По результатам исследования врач корректирует проводимое лечение

Задачей серологической диагностики является определить специфические антитела в крови к основным видам шигелл. Для анализа используют реакцию непрямой гемагглютинации — РНГА. В разведённую сыворотку крови в лаборатории добавляют эритроциты с антигенами шигелл разных видов. Через сутки результат готов: если в пробах есть специфические иммунные антитела к шигеллам, то образуются агглютинины. Антитела при дизентерии появляются в конце первой недели болезни и достигают максимума на 21-25 день, затем титр антител уменьшается. Поэтому целесообразно использовать метод парных сывороток, то есть исследовать две пробы крови, взятые с интервалом 10-14 дней. Диагностическое значение имеет нарастание титра антител в четыре и более раз.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – заключается в определении фрагментов ДНК шигелл в кале. Это быстрый и надежный метод исследования.

Это инструментальный метод диагностики, который проводят с помощью ректоскопа, вводимого в анальный проход больного. С помощью окуляра врач оценивает состояние слизистой, определяет изменения, характерные для дизентерии.

Профилактика и лечение дизентерии

Лечение дизентерии может проводиться дома, либо в стационаре (в случае средней или тяжелой форма болезни). Госпитализация также необходима и людям с тяжёлыми сопутствующими, хроническими патологиями.

Лечение заключается в приёме антибиотиков, специфических дизентерийных бактериофагов, строгом постельном режиме и специальной диете (стол № 4) с нежирными бульонами, куриным мясом, нежирной рыбой, киселями, кашами, зелёным чаем, отваром шиповника.

Профилактикой заболевания является строгое соблюдение личной гигиены, медицинский осмотр людей, работающих в местах общественного питания, постоянный контроль водных источников, общественных водоёмов, бассейнов, предприятий питания и т. д.

Как сдать анализ на дизентерию в АО "СЗЦДМ"

Только раннее выявление заражения шигеллами гарантирует минимальный риск здоровью и скорое выздоровление. Потому при первых признаках недомогания и в качестве профилактики необходимо пройти лабораторные исследования на предмет заражения возбудителем шигеллёза.

Сделать это легко в подразделениях АО "СЗЦДМ". По интерактивной карте вы сможете определить ближайший к вам пункт исследований и выбрать удобное время. На сайте или через колл-центр можно записаться на приём к врачу.

Во всех наших лабораториях работают квалифицированные сотрудники, используются современные методики исследований и гарантирована полная безопасность вашему здоровью и сохранность — личным данным.

Будьте здоровы!

Лаборатория АО "СЗЦДМ" предлагает услуги, обеспечивающие комплексное и преемственное лабораторное обследование пациента

Диагностика В медицинских центрах АО "СЗЦДМ" проводят качественные диагностические исследования всего организма

Лечение Наши медицинские центры ориентированы на обслуживание пациентов в амбулаторном режиме и объединены единым подходом к обследованию и лечению пациентов.

Реабилитация Реабилитация - это действия, направленные на всестороннюю помощь больному человеку или инвалиду для достижения им максимально возможной полноценности, в том числе и социальной или экономической.

Выезд на дом Внимание! Действует акция "Выезд на дом - 0 рублей"

Профосмотры АО "СЗЦДМ" проводит профилактические осмотры работников, которые включают в себя - комплексы лечебных и профилактических мероприятий, проводимых для выявления отклонений в состоянии здоровья, профилактики развития и распространения заболеваний.

Описание

Антитела к шигеллам, Shigella flexneri количественный — позволяет определить наличие антител, которые вырабатываются иммунной системой в ответ на инфицирование Shigella flexneri.

Дизентерия (шигеллёз) — инфекционное заболевание, вызываемое бактериями рода шигелл, которое проходит с поражением слизистой оболочки толстого кишечника и с общей инфекционной интоксикацией организма.

Дизентерия — это болезнь грязных рук. Источником распространения инфекции является больной человек с острой или хронической формой дизентерии, а также носитель. Больные острой формой, в наибольшей степени, заразны в первые 3–4 дня заболевания, а при хронической дизентерии — во время обострений. Самым опасным источником инфекции являются бактерионосители, и легкие, стертые формы болезни, которые могут не проявляться.

Инфицирование происходит при несоблюдении правил личной гигиены. Путь передачи — алиментарный, то есть посредством заражённой пищи.

Разновидности бактерий рода Shigella
Возбудителем дизентерии является группа микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae рода Shigella, среди которой выделены 4 основных вида:

группа А — Sh. dysenteriae, в которую входят бактерии Sh.dysenteriae 1 — Григорьева-Шиги, Sh. dysenteriae 2 — Штутцера-Шмитца и Sh. dysenteriae 3–7 Лардж-Сакса (серовары 1–12, из которых доминируют 2 и 3);
группа B — Sh. Flexneri c подвидом Sh. Flexneri 6 — Ньюкастл (серовары 1–5, каждый из которых подразделяется на подсеровары а и в, а также серовары 6, X и Y, из них доминируют 2а, 1в и 6);
группа Sh.Boydi (серовары 1–18, из которых доминируют 4 и 2);
группа D — Sh. Sonnei. Самыми распространёнными являются виды шигелл Зонне (60–80%) и Флекснера. Наибольшее эпидемическое значение имеет S.flexneri.

Наибольшее эпидемическое значение для большинства стран имеют S.flexneri и S.sonnei.

Клиническая картина при дизентерии
Дизентерия, вызванная S.sonnei, протекает в целом легче и реже даёт осложнения, чем S. dysenteriae и S.flexneri.

Длительность латентного периода от нескольких часов до 7 дней (в среднем 2–3 суток).

Для дизентерии характерно острое начало. Основные клинические проявления заболевания: общая интоксикация, повышение температуры, озноб, появляются ложные и болезненные позывы на дефекацию (тенезмы), снижение аппетита, головная болью, снижение артериального давления. Фекалии — обильные, жидкой консистенции, затем количество фекалий каждый раз уменьшается, а частота стула увеличивается, обычно с примесью крови и слизи.

Клинической особенностью шигеллёза является наличие у части заболевших классических форм поражения толстого кишечника в виде гемоколита со скудным стулом с примесью крови и слизи и ложными позывами на дефекацию.

Антитела при дизентерии
При инфицировании лимфоциты вырабатывают иммуноглобулины — специальные белки, нейтрализующие бактерии. Антитела к шигеллам начинают вырабатываться в крови через несколько дней от начала инфицирования, достигая своего максимума, через несколько недель, после наблюдается снижение их титра. АТ циркулируют в крови на протяжении 2–3 лет, после чего исчезают. Поэтому исследование дизентерии целесообразно проводить в динамике, используя метод парных сывороток в первые дни заболевания (при поступлении в стационар), и через 7–10 дней после первичного исследования. Достоверным считают более чем четырехкратное увеличение (или падение) титров специфических иммуноглобулинов в динамике.

Диагностическим титром в РПГА считают 1:100 — для дизентерии S.sonnei. Установление этиологического диагноза (диагноз, указывающий на то, что причина заболевания установлена) на основании меньшего изменения титров или высокого результата однократной постановки РПГА в первые дни заболевания может привести к значительному проценту диагностических ошибок. Такие результаты необходимо оценивать, учитывая эпидемиологическую обстановку, формы заболевания, сроки взятия сыворотки и пр. Важно помнить, что результат исследования иммуноглобулинов может быть положительным после ранее перенесённой инфекции; возможны перекрёстные реакции, связанные с кросс-реагирующими антителами к другим патогенам, прежде всего S.flexneri 6.

Показания:

в качестве вспомогательных тестов при диагностике острых кишечных инфекций;
для подтверждения клинического диагноза при получении отрицательного результата бактериологического обследования;
в целях ретроспективного подтверждения диагноза;
при позднем обращении больного, назначении антибактериальной терапии;
затяжное течение заболевания;
профилактическое обследование декретированной группы лиц сферы обслуживания.

Подготовка
Кровь рекомендуется сдавать утром, в период с 8 до 11 часов. Взятие крови производится натощак, спустя 4–6 часов голодания. Допускается употребление воды без газа и сахара. Накануне сдачи исследования следует избегать пищевых перегрузок.

Референсные значения: отрицательно.

Условно-диагностический титр — 1:200 и более.

При наблюдении в динамике, диагностически достоверный признак — более чем 4-кратное повышение (или падение) титров за 7–10 дней.

Положительно:

текущая или перенесённая в прошлом инфекция. В динамическом исследовании через 7–10 дней, диагностически достоверным признаком свежей инфекции считают повышение или более чем 4-кратное падение титра. Результаты следует рассматривать в комплексе с клинической картиной, эпидемиологической обстановкой, временем взятия пробы от начала заболевания и пр.;
в некоторых случаях — ложноположительный результат, связанный с перекрёстными реакциями с антителами к другим патогенам.

Отрицательно:

отсутствие текущей или недавней инфекции;
низкая концентрация и отсутствие антител в первые дни от начала заболевания (следует повторить исследование в динамике через 7–10 дней);
поздний период инфекции;
недостаточная чувствительность теста (70–80% при острой дизентерии, 30–40% при затяжном течении).

Методические рекомендации составлены в Ленинградском ордена Трудового Красного Знамени институте эпидемиологии и микробиологии им. Пастера МЗ РСФСР.

В Методических рекомендациях описан способ иммунологической диагностики и эпидемиологического анализа дизентерии, в основу которого положено определение наличия и классового состава противошигеллезных антител в слюне больных, переболевших дизентерией, и контактных лиц в реакции непрямой гемагглютинации, модифицированной по типу антиглобулиновой пробы Кумбса с применением моноспецифических антисывороток к иммуноглобулинам человека. Эффективность иммунологического исследования слюны и сыворотки крови практически одинакова. Описанный метод позволяет исключить взятие крови, что связано с нарушением целости кожного покрова и опасностью парентерального инфицирования.

Метод может быть использован в научно-исследовательских институтах, а также в практических лабораториях больниц и санитарно-эпидемиологических станций, занимающихся иммунологической диагностикой дизентерии и ее эпидемиологическим анализом.

Дизентерия часто протекает в виде легких, стертых, атипичных и бессимптомных форм. Это затрудняет ее выявление и дифференцировку от других острых кишечных заболеваний (ОКИ). Лабораторная диагностика данной инфекции основывается прежде всего на бактериологическом исследовании. Однако оно в ряде случаев, особенно на поздних сроках заболевания, мало результативно.

Это побуждает к разработке других методов диагностики, в частности, к определению специфических антител в биологических жидкостях обследуемых лиц. Чаще всего с этой целью используют реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА). Как правило, испытанию подвергают сыворотку крови (1, 5, 6). В то же время наличие противошигеллезных антител документировано в экстрактах фекалий, смывах со стенок толстой кишки и слюны (2, 3, 4, 7). Из перечисленных биологических жидкостей наиболее удобна для иммунологического анализа слюна. Это тем более оправдано, что по специфичности и частоте регистрации антительного сдвига слюна не уступает сыворотке крови (3). Установлено, что титры противошигеллезных антител в слюне достоверно отличаются от уровня здоровых с 4 - 5-го дней болезни. Пик обычно регистрируют на 2-й неделе, затем титры постепенно снижаются, но в ряде случаев сохраняются у переболевших в течение нескольких месяцев. Максимального уровня в слюне достигают антитела класса IgA. Уровень и частота выявления IgG-антител ниже, а IgM-антитела встречаются очень редко.

Простота взятия и обработки слюны, совпадающие результаты ее иммунологического исследования на противошигеллезные антитела с испытанием в обычной и модифицированной РНГА сыворотке крови делает упомянутый внешний секрет удобным материалом для диагностики и расшифровки ОКИ неустановленной природы. Иммунологическое исследование слюны на антитела к шигеллам целесообразно проводить у больных острой клинической дизентерией и больных прочими ОКИ, а также у контактных из очагов дизентерии в динамике с интервалом 6 - 7 дней.

1. Микротитратор Такачи.

2. Рефрижераторная центрифуга ЦЛР-1.

3. Центрифуга ЦЛС-2.

4. Подвески к центрифуге ЦЛС-2.

5. Насос водоструйный или электроотсасыватель хирургический переносной.

7. Замораживающий холодильник на -20 °С или бытовой холодильник с морозильной камерой.

8. Пробирки стеклянные емкостью 20 мл и центрифужные емкостью 10 мл.

9. Пробирки из синтетических материалов емкостью 5 и 10 мл к ротору углового типа скоростной насадки центрифуги ЦЛР-1.

10. Пипетки пастеровские.

11. Пипетки мерные емкостью 1 мл, 2 мл и 10 мл.

12. Забуференный изотонический раствор хлорида натрия pH 7,2 - 7,4.

13. Человеческие эритроциты 0 группы или бараньи эритроциты.

14. Раствор Олсевера или 2,5-процентный раствор лимоннокислого натрия.

15. Антигены шигеллезные лиофилизированные.

16. Моноспецифические антисыворотки к иммуноглобулинам A и G человека.

17. Стандартные пластины полистироловые с лунками.

Взятие и обработка слюны. Слюну собирают без стимуляции из ротовой полости в стерильные стеклянные пробирки в количестве 3 - 5 мл (натощак или спустя 1,5 - 2 ч после еды). Пробы после взятия центрифугируют 1 ч при 4 °С и 5000 об./мин. (При центрифугировании слюны следует соблюдать указанный температурный режим, так как обработка в обычных условиях приводит к потере антительной активности слюны. Описанную процедуру можно заменить замораживанием слюны после взятия; перед анализом пробу размораживают при комнатной температуре - при этом осадок отделяется спонтанно, а надосадочную жидкость испытывают на антитела.) Надосадочную жидкость отделяют и хранят при -20 °С либо в морозильной камере бытового холодильника. Перед опытом пробы размораживают при комнатной температуре и прогревают 30 мин. при 56 °С.

При транспортировке пробирки со слюной помещают в термос со льдом.

Сенсибилизация эритроцитов. В качестве антигенов используют свежеприготовленные эритроцитарные диагностикумы. Можно использовать также коммерческие эритроцитарные диагностикумы производства Московского и Ленинградского НИИВС. Для сенсибилизации эритроцитов применяют неочищенные или химические (очищенные) антигены. В качестве неочищенных антигенов используют надосадочную жидкость кипяченых в течение 2 ч взвесей (40 - 50 млрд. бактерий в 1 мл) соответствующих шигелл в изотоническом растворе (для сенсибилизации эритроцитов надосадочную жидкость разводят 1:5). Химические антигены получают по методу Вестфаля водно-феноловым способом. Для получения рабочего разведения антигена 100 - 200 мкг препарата разводят в 10 мл изотонического раствора, полученную смесь кипятят 2 ч на водяной бане.

Для сенсибилизации используют бараньи или человеческие эритроциты 0 группы. Кровь берут в стерильную пробирку, содержащую равный объем раствора Олсевера или 2,5-процентный раствор цитрата натрия. В этой смеси эритроциты сохраняют жизнеспособность при 4 °С в течение 2 - 3 нед. Эритроциты перед сенсибилизацией трижды отмывают десятикратным объемом изотонического раствора, центрифугирование 5 мин. при 1000 - 1500 об./мин. Из отмытых эритроцитов готовят 10-процентную взвесь, смешивают с антигенами в рабочем разведении в соотношении 1:1, инкубируют 45 мин. при 37 °С, после чего сенсибилизированные эритроциты трижды отмывают изотоническим раствором от избытка антигена. Затем готовят 10-процентную взвесь, которая может храниться 2 нед. при 4 °С.

Если диагностикум готовят из бараньих эритроцитов, то слюну необходимо ими предварительно адсорбировать. Для этого прогревают слюну на водяной бане 20 мин. при 56 °С, добавляют осадок трижды отмытых изотоническим раствором нативных бараньих эритроцитов (0,1 мл осадка эритроцитов на 1 мл слюны), тщательно перемешивают и инкубируют 30 мин. при 37 °С. После этого смесь центрифугируют, надосадочную жидкость отделяют и испытывают на антитела.

Обычно слюну исследуют по крайней мере с тремя антигенами, полученными из шигелл Зонне, Флекснера и ЭПКП 0111.

Постановка обычной РНГА. Эритроциты, сенсибилизированные тем или иным антигеном, агглютинируются в солевой среде, если в испытуемой биологической жидкости содержатся гомологичные антитела. Образующийся комплекс антиген - антитело выпадает в осадок. Испытуемые пробы слюны разводят с коэффициентом 2 в изотоническом растворе в U-образных лунках пластин прибора Такачи в объеме 0,025 мл. В первую лунку помещают цельную слюну. Для постановки опыта с каждым антигеном необходимо приготовить не менее двух одинаковых рядов разведений слюны, так как после учета результатов обычной РНГА в обоих рядах один из них обрабатывают антисывороткой к IgA, второй - к IgG (антисыворотку к IgM при испытании слюны использовать нецелесообразно из-за крайне редкого обнаружения IgM-антител). При постановке опыта с двумя и более антигенами для экономии времени и получения воспроизводимых результатов испытуемую слюну разводят с коэффициентом 2 в лунках больших полистироловых пластин в объеме 0,2 - 0,4 мл. Отсюда капельной пипеткой из прибора Такачи переносят жидкость в микропластины в объеме 0,025 мл (начиная с максимального разведения). Затем в каждую лунку добавляют равный объем 1,5-процентной суспензии эритроцитарных диагностикумов. Полученную смесь инкубируют 45 мин. при 37 °С, после чего учитывают результаты.

Каждый опыт сопровождали следующими контролями:

1) контроль несенсибилизированных эритроцитов - 0,025 мл 1,5-процентной суспензии несенсибилизированных эритроцитов + 0,025 мл изотонического раствора;

2) контроль сенсибилизированных эритроцитов - 0,025 мл 1,5-процентной суспензии сенсибилизированных эритроцитов + 0,025 мл изотонического раствора;

3) контроль на отсутствие спонтанной агглютинации несенсибилизированных эритроцитов исследуемым материалом: 0,025 мл исходного разведения слюны + 0,025 мл 1,5-процентной суспензии несенсибилизированных эритроцитов. При наличии гемагглютинации в одном из контролей результаты опыта не учитывались.

Постановка модифицированной РНГА. Модифицированная РНГА ставится на основе теста Кумбса. При этом комплекс антиген (эритроцитарный диагностикум) - антитело, не выявленный визуально в обычной РНГА, обрабатывают сывороткой против антительного компонента комплекса. Для этого используют антисыворотки к тяжелым цепям отдельных иммуноглобулинов (M, G, A). В случае если на эритроцитарном диагностикуме адсорбировались малые количества гомологичных антител, не давших видимой агглютинации, обработка указанными антисыворотками способствует выявлению этих антител (укрупление комплекса антиген - антитело и выпадение его в осадок). В результате чувствительность РНГА повышается. Одновременно определяют иммунологический класс антител, для чего учитывают наличие гемагглютинации после добавления антисывороток в разведениях, где обычная РНГА дала отрицательные результаты. Увеличение титров в 4 раза и более после добавления антисывороток к иммуноглобулинам G, M и A дает требуемую информацию.

Из лунок, где не отмечено агглютинации эритроцитарного диагностикума, удаляют надосадочную жидкость и к осадку эритроцитов приливают десятикратный объем изотонического раствора (до объема 3/4 лунки). Для этого используют пастеровские пипетки, концы которых тонко оттянуты в виде капилляра и загнуты под углом 90°. Струю изотонического раствора направляют под давлением в середину осадка эритроцитов, чем достигается их промывка. Затем пластины прибора Такачи помещают в подвеску, которую прикрепляют к ротору центрифуги ЦЛС-2 (8); центрифугируют 3 - 4 мин. при 1000 - 1500 об./мин. (при отсутствии подвесок осаждение эритроцитов можно проводить, оставляя пластины на столе при комнатной температуре на 35 - 45 минут; после спонтанного оседания эритроцитов надосадочную жидкость удаляют и отмывание повторяют еще раз). Надосадочную жидкость удаляют и отмывание осадка эритроцитов повторяют дважды. К отмытым осадкам пастеровской пипеткой с оттянутым и загнутым концом добавляют по 0,05 мл антисывороток к IgA и IgG в рабочем разведении (антисыворотки к IgA и IgG выпускают Горьковский НИИЭМ и Московский НИИВС им. И.И. Мечникова, ИЭМ им. Гамалеи). Результат учитывают после 45-минутной экспозиции при 37 °С. Класс антител определяют по наличию достоверного 4-кратного и более выраженного по сравнению с результатом обычной РНГА прироста антител к исследуемому антигену после добавления антиглобулиновых сывороток.

Все контроли, которыми сопровождалась постановка обычной РНГА, дважды отмывали изотоническим раствором и заливали 0,05 мл антисывороток к IgA и IgG в рабочем разведении. При наличии гемагглютинации в контроле опыт не учитывают. Наличие гемагглютинации в контроле (изотонический раствор + эритроцитарный диагностикум + антисыворотка к IgA или IgG) показывает, что антисыворотка в рабочем разведении содержит антитела к исследуемому антигену и ее необходимо истощить соответствующим диагностикумом.

Учет результатов РНГА. Реакция положительная (+) - эритроциты покрывают дно лунки ровным слоем ("зонтик"); реакция отрицательная (-) - эритроциты скапливаются в центре лунки, образуя компактную "пуговицу" с четко очерченными краями; реакция сомнительная (+/-) - "пуговицу" окружает узкая область агглютинированных эритроцитов. Учитывают только положительные результаты.

Сопоставляют титры антител, обнаруженных в обычной и модифицированной РНГА в парных пробах слюны. Достоверным считают изменение титра антител к одному из антигенов в 4 раза и более по сравнению с исходным. Нарастание титра противошигеллезных антител отмечается, главным образом, в течение первых двух недель болезни, на более поздних сроках регистрируется снижение титра.

Примеры постановки диагноза на основе иммунологического анализа слюны у больных ОКИ.

Читайте также: