Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная слабоположительная для рск

Торговое название: Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная, слабоположительная для РСК

Международное название: Диагностикум сифилиса&

Фармакологическая группа: МИБП-диагностикум

Фармакологическая группа по АТХ: V04CX. Другие диагностические средства

Фармакологическое действие: диагностикум сифилиса, ИФС для выявления антител к Treponema pallidum

Сыворотки для диагностики сифилиса контрольные, положительная и слабоположительная получены из крови кроликов, зараженных патогенной бледной трепонемой (штамм Никольса).

Сыворотки представляют собой пористую аморфную массу в виде таблетки светло-розового цвета.

Показания к применению:

В качестве контроля при диагностике сифилиса в РСК.

Методы применения и принцип действия:

Содержимое ампулы непосредственно перед постановкой РСК растворить в 1 мл раствора натрия хлорида изотонического 0,9 % (рН 7,3+/-0,1). После полного растворения сыворотка представляют собой прозрачную жидкость светло-розового цвета. Контрольные сыворотки инактивировать на водяной бане при 56 град.С в течение 30 мин и использовать в качестве контролей параллельно с исследованием испытуемых сывороток больных сифилисом в РСК.

Для постановки реакции связывания комплемента контрольную сыворотку (отрицательную, положительную, слабоположительную), разведенную 1:5 раствором натрия хлорида изотоническим 0,9 %, разливают в 3 пробирки (по 0,25 мл в каждую), в первую пробирку добавляют 0,25 мл разведенного по титру антигена трепонемного ультраозвученного, во вторую - 0,25 мл разведенного по титру антигена кардиолипинового, в третью (контрольную) - 0,25 мл 0,9 % раствора натрия хлорида изотонического. Затем во все пробирки вносят по 0,25 мл комплемента (для проведения постановки с контрольными сыворотками приготовить раствор комплемента с 30 - 50 % надбавкой к титру).

Через 45 мин инкубации в термостате при температуре 37град.С во все пробирки вносят по 0,5 мл гемолитической системы. Пробирки вновь помещают в термостат на 45 - 60 мин до наступления гемолиза в контрольных пробирках.

Для оценки результатов связывания комплемента используют систему четырех плюсов:

4 + - (резко положительная реакция) полная задержка гемолиза.

3 + - (положительная реакция) значительная задержка гемолиза.

2 + - (слабоположительная реакция) частичная задержка гемолиза.

1 + - (сомнительная реакция) незначительная задержка гемолиза.

Отрицательный результат - полный гемолиз эритроцитов.

Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная слабоположительная в РСК с кардиолипиновым и трепонемным антигенами должна давать задержку гемолиза на 2 плюса.

При наличии задержки гемолиза в контроле сыворотки крови (третья пробирка, не содержащая антигена) исследование всей аналитической серии необходимо полностью повторить.

Срок годности - 2 года. Препарат с истекшим сроком годности использованию не подлежит..

Препарат хранят в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 в недоступном для детей месте при температуре от 2 до 8град.С.

Транспортируют в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 9 до 25град.С не более 48 час.

Дата актуализации инструкции 13.11.2013

Владелец регистрационного удостоверения: Микроген НПО ФГУП Минздрава России, Россия

Формы выпуска: лиофилизат [для диагностических целей], ампулы

Состав: сыворотка крови кроликов зараженных патогенной бледной трепонемой [задержка гемолиза в РСК в разведении не менее 1:5]

Условия отпуска: для лечебно-профилактических учреждений

Данные гос. регистрации: ЛС-002086 от 13.10.2006

Состояние регистрационного удостоверения: окончание срока действия 13.10.2011

Номер фармстатьи: ФСП 42-0504-7317-05

Вы можете открыть актуальную версию документа прямо сейчас.

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.

Описание

Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная отрицательная кроличья

Наборы реагентов Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная, положительная для РСК, Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная, слабоположительная для РСК, Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная отрицательная для РСК предназначены для контроля правильности результатов при постановке реакции связывания комплемента (РСК) с сыворотками больных сифилисом.

ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
1. Принцип действия.

Контрольные сыворотки дают заведомо известные результаты в реакции связывания комплемента (РСК) в присутствии кардиолипинового и трепонемного ультраозвученного антигенов.

Представляют собой сухие кроличьи сыворотки, имеющие заведомо известный титр противотрепонемных антител, отрицательная сыворотка не содержит противотрепонемных антител.

2. Состав набора.

Каждый набор содержит сыворотку для диагностики сифилиса контрольную положительную, или слабоположительную, или отрицательную.

Сыворотки лиофилизированы в ампулах из объема 1 мл, имеют вид пористой аморфной массы в виде таблетки белого или светло-розового цвета.

По 10 ампул в пачке из картона с инструкцией по применению.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Набор реагентов Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная, положительная для РСК в реакции связывания комплемента должен давать задержку гемолиза на 3-4 плюса с кардиолипиновым и трепонемным ультраозвученным антигенами.

Набор реагентов Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная, слабоположительная для РСК в реакции связывания комплемента должен давать задержку гемолиза на 2 плюса с кардиолипиновым и трепонемным ультраозвученным антигенами.

Набор реагентов Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная, отрицательная для РСК в реакции связывания комплемента должен давать полный гемолиз в опытных пробирках с кардиолипиновым и трепонемным ультраозвученным антигенами.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ

— пипетки стеклянные градуированные (1,2,5 мл);

— пробирки стеклянные вместимостью 5 мл, 10 мл;

— стаканы стеклянные химические, объем 100 мл;

— водяная баня (температура (56 ±0,2) °С);

— центрифуга лабораторная (2500-3000 об/мин);

— термостат (температура (37 ±2) °С);

— раствор натрия хлорида 0,9 % изотонический.

АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Исследуемые сыворотки на сифилис в клинической серологии.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

7.1 Приготовление рабочего раствора реагента.

Содержание ампулы непосредственно перед постановкой РСК растворить в 1 мл раствора натрия хлорида 0,9 % (рН 7,3±0,1). После полного растворения, сыворотки инактивировать на водяной бане при (56±0,1) °С в течение 30 минут и использовать в качестве контрольных, параллельно с исследованием испытуемых сывороток больных сифилисом в РСК.

7.2. Проведение анализа.

Для постановки реакции связывания комплемента сыворотку (отрицательную, слабоположительную, положительную), разведенную 1:5 раствором натрия хлорида 0,9 %, разливают в 3 пробирки (по 0,25 мл в каждую), в первую пробирку добавляют 0,25 мл разведенного по титру антигена трепонемного ультраозвученного, во вторую – 0,25 мл разведенного по титру антигена кардиолипинового, а в третью (контрольную) – 0,25 мл раствора натрия хлорида 0,9 % изотонического. Затем во все пробирки вносят 0,25 мл комплемента (для проведения постановки РСК с контрольными сыворотками приготовить раствор комплемента с 30-50 % надбавкой к титру). Через 45 минут инкубации в термостате при температуре (37±1) °С во все пробирки вносят по 0,5 мл гемолитической системы. Пробирки вновь помещают в термостат на 45-60 минут до наступления гемолиза в контрольных пробирках.

РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

Для оценки результатов РСК используют систему четырех плюсов:

4+ — (резко положительная реакция) полная задержка гемолиза.

3+ -(положительная реакция) значительная задержка гемолиза.

2+ — (слабоположительная реакция) частичная задержка гемолиза.

1+ -(сомнительная реакция) незначительная задержка гемолиза.

Отрицательный результат – полный гемолиз эритроцитов.

Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная отрицательная кроличья

Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная отрицательная

Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная, положительная для РСК;

Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная, слабоположительная для РСК;

Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная, отрицательная для РСК;

Наборы реагентов Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная, положительная для РСК, Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная, слабоположительная для РСК, Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная, отрицательная для РСК предназначены для контроля правильности результатов при постановке реакции связывания комплемента (РСК) с сыворотками больных сифилисом.

ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
1. Принцип действия.

2. Состав набора.

По 10 ампул в пачке из картона с инструкцией по применению.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ

— пипетки стеклянные градуированные (1,2,5 мл);

— пробирки стеклянные вместимостью 5 мл, 10 мл;

— стаканы стеклянные химические, объем 100 мл;

— водяная баня (температура (56 ±0,2) °С);

— центрифуга лабораторная (2500-3000 об/мин);

— термостат (температура (37 ±2) °С);

— раствор натрия хлорида 0,9 % изотонический.

АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Исследуемые сыворотки на сифилис в клинической серологии.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

7.1 Приготовление рабочего раствора реагента.

РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

Для оценки результатов РСК используют систему четырех плюсов:

4+ — (резко положительная реакция) полная задержка гемолиза.

3+ -(положительная реакция) значительная задержка гемолиза.

2+ — (слабоположительная реакция) частичная задержка гемолиза.

1+ -(сомнительная реакция) незначительная задержка гемолиза.

Отрицательный результат – полный гемолиз эритроцитов.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА

Наборы реагентов Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная, положительная для РСК, Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная, слабоположительная для РСК, Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная, отрицательная для РСК хранят и транспортируют в соответствии с санитарными правилами при температуре от 2 до 8 °С. Допустимо транспортирование сывороток при температуре от 9 до 25 °С не более 48 часов.

Срок годности 2 года со дня изготовлении. Набор с истекшим сроком годности использованию не подлежит.

Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению.

Проведение исследований на сифилис – неотъемлемая часть предоперационной подготовки, отбора доноров, ведения беременных.

Также обследованию подвергаются лица определенной профессиональной занятости (врачи, сотрудники МВД, лица, занятые в пищевой промышленности). Подозрение на инфицированность бледной трепонемой (указание на половые или бытовые контакты с больными, наличие симптомов) – также повод для начала диагностического поиска.

Наиболее часто диагностика включает в себя модифицированную реакцию Вассермана, анализ ПЦР и исследование суммарных антител.

Проба Вассермана представляет собой реакцию связывания комплемента, которая выполняется для венозной крови обследуемого. В ходе анализа ведется поиск антител к возбудителю (бледной трепонеме). Ищутся иммуноглобулины М и G, которые высвобождаются из поврежденных трепонемой клеток.

Для того, чтобы поставить этот тест (рекомендованный Минздравом РФ в качестве скренингового для выявления болезни и контроля за терапией больного сифилисом) пользуются наборами сывороток.

В стандартный набор включают положительную, слабоположительную и отрицательную сыворотку. Они готовятся из высушенной сыворотки кролика, поэтому выглядят аналогично пористой розоватой или коричневатой массе. Выпускаются в ампулах и имеют стандартный известный титр, то есть разведение антитрепонемных антител. Отрицательный сывороточный контроль от антител свободен.

Сыворотки контрольные для диагностики сифилиса – это контрольные жидкости, с которыми сравнивают те реакции, которые протекают с кровью обследуемого.

Когда выполняется РСК, из кардиолипинового антигена и антител сыворотки пациента формируется иммунный комплекс. Когда он связывается с комплементом морских свинок, при добавлении эритроцитов барана, тормозится разрушение последних. Процесс развала эритроцитов носит название гемолиза.

Его отсутствие воспринимается как положительная реакция. То есть считается, что в сыворотке пациента имеются антитела против бледной трепонемы, образовавшиеся в результате инфицирования возбудителем сифилиса. Если же эритроциты барана разваливаются (проходит гемолиз), то комплемент свободен и не связался с комплексом антиген-антитело.

Это происходит в силу того, что антител в сыворотке пациента просто нет в силу того, что организм исследуемого не сталкивался с бледной трепонемой и не инфицирован.

Степень позитивности пробы Вассермана обозначается в крестах.

Максимальная степень выраженности – четыре креста (гемолиза не происходит совсем). Такая реакция – резко положительная.
Тремя крестами обозначается положительный вариант при значительной задержке распада бараньих эритроцитов
Когда неизмененными остается лишь часть эритроцитов, пишут два креста и считают анализ слабо положительным.
Один крест соответствует сомнительному результату (гемолитические изменения незначительны).
Когда разваливаются все эритроциты, это идентично отрицательному результату.

Кроме качественного теста возможен и количественный вариант реакции связывания комплемента.

Контрольные сыворотки на сифилис используют в реакциях, выполняемых параллельно с исследованием сыворотки пациента.

Сыворотка контрольная положительная для диагностики сифилиса должна тормозить гемолиз на три-четыре плюса.
Слабоположительная сыворотка вызывает реакцию, характерную для двух плюсового гемолиза.
Отрицательная же сыворотка гемолиз не тормозит вовсе.

При необходимости диагностики сифилиса, обращайтесь к грамотным венерологам.

Если Вы являетесь поставщиком этого товара, Вы также можете разместить его на нашем Торговом портале. Зарегистрируйтесь и разместите свой прайс-лист.

Заказ доступен только для юридических лиц в рамках проведения малых закупок организаций.

Поставки для Группы компаний Газпром

Торги по реализации непрофильных активов организаций (автотранспортная техника, квартиры, помещения, заводы, земельные участки)

У нас действует специальная клиентская программа, по которой вы можете принять участие в торгах сейчас

Безопасность платежей обеспечивается с помощью Банка-эквайера (ГАЗПРОМБАНК (Акционерное Общество)), функционирующего на основе современных протоколов и технологий, разработанных платежными системами МИР, Visa International и Mastercard Worldwide (3D-Secure: Verified by VISA, Mastercard SecureCode, MirAccept). Обработка полученных конфиденциальных данных Держателя карты производится в процессинговом центре Банка, сертифицированного по стандарту PCI DSS. Безопасность передаваемой информации обеспечивается с помощью современных протоколов обеспечения безопасности в сети Интернет.

Перед оплатой Владелец карты должен быть уверен, что Банк-эмитент карты разрешает отплаты через интернет и активировал для карты функционал 3DS. При отсутствии в Банке-эмитенте правильной активации 3DS и связки с номером телефона к Вам просто не придет смс для подтверждение операции.

При оплате данные Вашей пластиковой карты вводятся на платежной странице Банка с использованием защищенного канала. Информация передаётся в зашифрованном виде и обрабатывается только на специализированном сервере банка.

В случае успешной авторизации Вы получите от сайта уведомление о том, что оплата проведена и/или описание порядка получения товара/услуги.

При ошибочном перечислении денежных средств необходимо заполнить Заявление о возврате денежных средств. В заявлении необходимо указать паспортные данные заявителя и номер ключа, полученного на адрес электронной почты после оплаты тарифа. В соответствии с п. 4.18 Лицензионного соглашения, возврат денежных средств возможен только до момента активации тарифа при помощи полученного ключа активации. Возврат денежных средств будет произведен на банковскую карту с которой производилась оплата тарифа.

Портал отображает информацию о закупках, публикуемых в сети интернет
и находящихся в открытом доступе, и предназначен для юрлиц и индивидуальных предпринимателей,
являющихся участниками размещения государственного и коммерческого заказа. Сайт использует Cookie, которые нужны для авторизации пользователя.
На сайте стоят счетчики Яндекс.Метрика, Google Analytics и LiveInternet,
которые нужны для статистики посещения ресурса.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению диагностических препаратов, и может быть использовано в производстве диагностических сывороток для контроля РСК на сифилис.

Изобретением решается задача организации промышленного производства недорогой диагностической сыворотки для контроля результатов РСК на сифилис.

При сифилисе иммунитет существенно отличается по своему характеру от иммунитета при других заболеваниях. Перенесение болезни сопровождается выработкой двух видов антител: неспецифических (реагинов) и специфических (противотрепонемных). Реагины продуцируются всеми больными сифилисом, но не обладают защитным действием, они вступают в реакцию in vitro с кардиолипиновым антигеном, экстрагированным из мышц бычьего сердца. Специфические противотрепонемные антитела (JgG и JgM) вырабатываются под влиянием протеиновых антигенов, возбудителей сифилиса. Выздоровевшие могут вторично заразиться и заболеть. Иммунитет при сифилисе является инфекционным и характеризуется клеточными и гуморальными защитными реакциями, обуславливающими образование первичного шанкра, генерализацию инфекции с выработкой антител в крови больного. (К. Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин, Микобиология, М.: Медицина, 1980, с. 362).

В настоящее время сифилис приобрел эпидемическое распространение как в развитых, так и в развивающихся странах. Поэтому очень важна своевременная диагностика. Однако промышленный выпуск недорогих и эффективных диагностических препаратов налажен недостаточно.

Известен способ получения противосифилисной диагностической сыворотки, который включает интратестикулярное заражение кроликов патогенным штаммом Никольса, получение взвеси трепонем из больного яичка кролика через 7 суток после заражения с последующей перевивкой кроликам для производства сыворотки. (Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, под ред. М.О. Биргера. М.: Медицина, 1973, с. 303).

Этот способ дорогостоящий при промышленном производстве сывороток, так как требует большого количества животных для достаточного выхода продукции.

Известен способ получения диагностической сыворотки преимущественно против зоонозов, использование которого предлагается в биотехнологии. (Пат. РФ 2010577, А 61 К 39/40, 15.04.94, Бюл. 7). По этому способу животным - продуцентам предварительно внутримышечно вводят раствор адьюванта, в качестве которого используют феракрил. На 5-7 день в лимфатические узлы вводят антиген в смеси с адьювантом, через 3 дня такую же смесь вводят внутримышечно трехкратно с интервалом 4 дня. На 30-й день от животных берут пробы крови, получают иммунную сыворотку, добавляют в нее раствор антигена и полученный комплекс вводят четырехкратно с промежутками 3-4 дня внутривенно тому же животному, от которого получена сыворотка. На 7-8 день после инъекций животных обескровливают.

Использование этого способа позволяет получить высокоактивные иммунные сыворотки с достаточно высоким выходом продукции, однако процесс иммунизации животных длителен (2-3 - месяца) и сложен.

Наиболее близким к заявляемому изобретению является способ получения контрольной сыворотки для диагностики сифилиса. (Фармакологическая статья "Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная, положительная, сухая, для РСК", ФС 42-12ВС-91, утв. Фармакопейным комитетом Минздрава СССР 04.07.91 г. ).

Способ включает интратестикулярное заражение кроликов весом 3-3,5 кг патогенным штаммом Никольса, обескровливание животных, получение сыворотки, определение титров антител к кардиолипиновому и ультраозвученному трепонемному антигенам, стандартизацию, разливку, сушку препарата.

Этот способ по сравнению с известными обеспечивает получение сывороток для контроля результатов РСК на сифилис, однако он не эффективен для организации экономически целесообразного промышленного выпуска сывороток. Это обусловлено тем, что титры полученных антител к антигенам не превышают 1/10-1/15, и серийное производство сывороток требует большого количества животных-продуцентов.

Целью изобретения является возможность организации промышленного выпуска и снижение затрат на производство контрольных сывороток для диагностики сифилиса за счет увеличения титров антител иммунизированных животных к антигенам и соответственно уменьшения количества используемых животных-продуцентов.

Поставленная цель достигается тем, что кроликов весом 3-3,5 кг интратестикулярно заражают патогенным штаммом Никольса, через 7-8 суток после заражения животных дополнительно дважды с интервалом 7-8 суток иммунизируют внутривенно 0,0358-0,0360 г клеточных стенок трепонем ( КСТ-антиген), при этом доза 1-й инъекции составляет 0,01293-0,01295 г, 2-й - 0,02303-0,02305 г, затем после 30 суток после заражения животных обескровливают, получают сыворотку, определяют титры антител к кардиолипиновому и ультраозвученному трепонемному антигенам, стандартизируют, разливают и сушат готовый препарат.

КСТ-антиген - клеточные стенки трепонем штаммов 5, 7, 8, 9, Рейтера, выделенные из ультраозвученного дезинтеграта центрифугированием при 1, 10 3 по известной методике.

(В. О. Пожарская. Получение некоторых клеточных структур культуральных бледных трепонем и изучение их антигенных свойств в РСК). Вестник дерматологии и венерологии, 9, 1985, с. 16-18.

В. О. Пожарская. Влияние способов дезинтеграции на антигенные свойства клеточных структур бледных трепонем. Вестник дерматологии и венерологии, 3, 1995, с. 14-15).

По отношению к прототипу заявляемый способ имеет следующие отличительные признаки.

Дополнительная иммунизация через 7-8 суток после заражения кроликов КСТ-антигеном, которая осуществляется дважды с интервалом 7-8 суток при дозах инъекции 0,01293-0,01295 г и 0,02303-0,02305 г, что приводит к активизации сифилисной инфекции кроликов и резкому повышению уровня сывороточных антител соответственно к специфическому трепонемному и неспецифическому кардиолипиновому антигенам, что и обеспечивает использование полученных сывороток как контрольных. Таким образом, КСТ-антиген является иммуностимулятором.

Если по прототипу титры антител к кардиолипиновому и ультраозвученному трепонемному антигенам составляют не более 1/19-1/15, по предлагаемому способу - 1/30-1/40.

По требованиям фармацевтических норм выпускаемые производственные сыворотки должны иметь титр 1/10. Таким образом, разбавление полученной по предлагаемому способу сыворотки до титра 1/10 обеспечивает увеличение объема готовой продукции с одного и того же количества животных-продуцентов в 2-4 раза, что значительно снижает производственные затраты.

Возможность практического использования предлагаемого способа подтверждается примерами конкретного выполнения.

Пример 1. Кроликов-продуцентов весом 3-3,5 кг в количестве 80 животных интратестикулярно заражают патогенной бледной трепонемой штамма Никольса. 40 животных оставляют зараженными в качестве контрольных на 30 суток. Остальным 40 животным через 8 суток после заражения внутривенно вводят 0,01293 г КСТ-антигена, затем через 15 суток после заражения внутривенно вводят 0,02305 г КСТ-антигена. Через 30 суток после заражения контрольных и иммунизированных животных обескровливают, приготавливают сыворотку по известной методике и определяют титры антител к кардиолипиновому и ультраозвученному трепонемному антигенам в РСК.

Средние титры антител контрольных животных составили 1/15, дополнительно иммунизированных КСТ-антигеном - 1/40.

Затем сыворотку стандартизируют до титров 1/10, разливают и сушат.

Пример 2. Выполняют аналогично примеру 1, за исключением того, что 1-ю дополнительную иммунизацию подопытных животных проводят через 7 суток после заражения с дозой 0,01294 г, 2-ю - через 15 суток с дозой 0,02303 г.

Средние титры антител контрольных животных составили 1/15, дополнительно иммунизированных - 1/33.

Пример 3. Выполняют аналогично примеру 1, за исключением того, что 1-ю дополнительную иммунизацию подопытных животных проводят через 7 суток после заражения с дозой 0,01295 г, 2-ю - через 14 суток с дозой 0,02304 г.

Средние титры антител контрольных животных составили 1/15, дополнительно иммунизированных - 1/40.

Как показали эксперименты, проведение дополнительной иммунизации животных ранее, чем через 7 и 14 дней после заражения и позднее, чем через 8 и 16 дней после заражения не обеспечивает выраженной активизации сифилитического процесса, что не обеспечивает повышения титров антител.

Снижение дозы инъекций КСТ-антигена ниже заявленных пределов нежелательно, так как не происходит достаточная иммунизация и не обеспечиваются максимальные титры антител, увеличение же дозы инъекций выше заявленных пределов нецелесообразно, так как не происходит дальнейшее повышение титров антител.

Таким образом, изобретение реально осуществимо, его использование в биотехнологии обеспечит промышленное производство недорогих высокоспецифических контрольных сывороток для РСК, что позволит повысить эффективность контроля диагностики сифилиса.

Российский национально исследовательский медицинский университет им. Н.И.Пирогова

Кафедра дерматовенерологии педиатрического факультета

Доклад на тему: Лабораторные методы диагностики сифилиса

Выполнил: Студент 440 в группы

Серанов Игорь Анатольевич

Комплекс проведения серологических реакций

Реакция имунного прилипания

Реакция иммобилизации бледных трепонем

Реакция иммунофлюоресценцией адсорбцией бледных трепонем

Полимеразная цепная реакция

Все серологические методы исследования, которые применяются на сегодня, условно разделяются на два вида: нетрепонемные, отборочные (НТТ)- и трепонемные, которые подтверждают наличие возбудителя (ТТ).Сифилис протекает очень сложно, клиника очень смазана и не всегда проявляется, поэтому для постановления правильного диагноза используют сразу несколько серологических тестов. При визуалированном подтверждении присутствия во взятом материале бледной трепонемы (при помощи микроскопа) диагноз ставится сразу же, и остальные тесты проводятся редко.

Нетрепонемные исследования (тесты) - НТТ - это так называемые отборочные исследования, они не очень дорого стоят и при их помощи можно обследовать достаточно большое число пациентов, к тому же результаты при многих тестах готовы очень быстро. Но при ложном течении заболевания, при низкой чувствительности проведение таких тестов нецелесообразно, 100%-ный результат получить не удастся.

При проведении нетрепонемных тестов в материале, который исследуется, обнаруживаются антитела, которые реагируют с кардиолипин - лецитиновым антигеном. Одним из первых тестов был метод, основанный на иммунологической реакции Борде - Жангу, где в качестве антигена выступал экстракт печени новорожденного ребёнка, который умер от сифилиса. На сегодня при проведении таких тестов антигеном выступают лецитин, холестерин и кардиолипин.

За границей, в частности в США используют 4 нетрепонемных метода, которые делятся на два вида: методы, которые позволяют визуально определить результаты реакции (RPR и TRUST) и методы микроскопического считывания результатов(USR и VDRL).

К нетрепонемным методам диагностики относится непрямой иммуноферментный анализ с использованием кардиолипина в качестве антигена. У нас в стране и в странах СНГ в качестве нетрепонемных тестов выступают реакция плазмы с инактивированной сывороткой (МР) и реакция, при которой происходит связывание комплимента с кардиолипином (РСК).

Все методы нетрепонемной диагностики очень похожи друг с другом. У них у всех невысокая стоимость, их просто и быстро провести. Эти виды тестов не подходят при выявлении заболевания на первичной стадии и при сифилисе, который протекает скрытно (латентная форма сифилиса). Антитела, которые определяются нетрепонемным тестом появляются, где то через месяц после инфицирования трепонемой. В большинстве случаев у больных, которые лечили первичную стадию сифилиса, примерно около года нетрепонемные тесты имеют отрицательный результат.

Трепонемные исследования (тесты) - ТТ стоят намного дороже, техника проведения их очень сложная и они используются для подтверждения положительных результатов, которые были получены при нетрепонемных исследованиях.

Как мы говорили выше трепонемные методы применяют для того, чтобы подтвердить наличие бледной трепонемы в организме, которое было выявлено при помощи нетрепонемных тестов. Так же их проводят, если проводимые анализы так и не дали положительного результата, но клиника предполагает наличие заболевания. После полного излечения сифилиса более чем у 80% вылечившихся наблюдается положительная реакция при проведении трепонемных тестов ещё несколько лет, а у некоторых - всю жизнь. Исходя из этого трепонемные тесты не используют для профилактических осмотров у людей, которые прошли полный курс лечения.

Научные исследования в области иммунологии и молекулярной биологии продолжаются постоянно и при помощи новейших технологий появляются всё новые тесты для диагностики сифилиса, которые прочно занимают лидирующие позиции. Один из таких тестов, который прочно вошёл в практику - иммуноферментный анализ (ИФА), а многие исследовательские методы находятся на стадиях разработки.

Тот комплекс проведения серологических исследований, который проводят в России включает в себя комплексное проведение серологических реакций:

стандартных серологических реакций –

реакцию связывания комплемента(реакция Вассермана),

реакцию с трепонемным антигеном и реакцию с кардиолипином;

груповых трепонемных реакций-

реакцию иммунофлюоресценции (РИФ)

реакцию иммунного прилипания(РИП);

видоспецифических протеиновых трепонемных реакций –

реакцию иммобилизации трепонем(РИТ),

РИФ - абс и её варианты (IgM-FTA-ABS, 19S-IgM-FTA-ABS),

реакцию пассивной гемаглюцинации трепонем(РПГА).

Если серологические реакции использовать в комплексе, это даст возможность выявить заболевание на ранних этапах заболевания.

Реакция Вассермана - это метод связывания комплемента. Для проведения реакции в качестве антигена используют экстракты, которые изготавливаются из бледных трепонем (специфические антигены) и кардиолипин - это экстракт приготовленный из сердечной мышцы быка(неспецифические антигены). Чем больше в исследуемом материале наблюдается бледных трепонем, тем больше степень заболевания и оценивают степень плюсами:

1) - отрицательная; 2) + сомнительная; 3) ++ слабоположительная; 4) +++ положительная; 5) ++++ резкоположительная.

Реакцию Вассермана (Реакция связывания комплемента) в обязательном порядке проводят вместе с осадочными реакциями – Закс - Витебского и Кана. Иммунологическая природа реакций, в общем- то такая же, как и у реакции Вассермана, но для этих реакций требуются более насыщенные антигены, которые при вступлении в реакцию с реагинами сыворотки дают больший осадок. Серонегативный первичный сифилис ставят, если стандартные серологические реакции дали отрицательный результат. Выявление сифилиса реакцией Вассермана эффективно при серопозитивном вторичном сифилисе, здесь результаты теста на 100% верны. На третичной стадии активного сифилиса результаты верны у более половины больных, а на последних стадиях сифилиса, при поражении внутренних органов и систем, результаты верны у половины больных. У больных ранним врождённым сифилисом серологические реакции дают положительный результат почти всегда, а у больных с поздним врождённым сифилисом - почти в 80% случаев.

Принцип РСК заключается в том, что реагины, находящиеся в сыворотке крови больных сифилисом, обладают свойством вступать в соединения с различными антигенами. Образовавшиеся комплексы сортируют введенный в реакцию комплемент. Для индикации комплекса реагины–антиген–комплемент используется гемолитическая система (смесь эритроцитов барана с гемолитической сывороткой). При наличии комплекса эритроциты выпадают в осадок. Что заметно не вооруженынм глазом. Выраженность гемолиза обозначается врачом ключами: резко положительная 4+, положительная 3+, слабоположительная 2+ ли 1+ и отрицательная. Кроме качественной оценки этих реакций имеется и количественная, имеющая значение в диагностике некоторых стадий сифилиса и при контроле за эффективностью терапии

Реакция иммунофлуоресценции (РИФ) основана на выявлении антител, которые метят специальным флуоресцентным раствором, для того, чтобы в фиолетовых лучах кварцевой лампы выявить соединённые с антигеном антитела. Эта реакция имеет высокую чувствительность и помогает выявить заболевание на первичной стадии серонегативного сифилиса. Так же именно этот тест помогает выявить заболевание у пациентов, у которых заболевание протекает латентно или на поздних стадиях. Существует несколько типов таких реакций и наиболее высоко ценится РИФ-200, при помощи, которой можно выявлять скрытый сифилис и распознать неспецифические результаты КСР. Но, несмотря на высокие показатели РИФа-200, постановка диагноза происходит после проведения всех клинических анализов. РИФ не подходит для наблюдения за пациентами после проведения полного лечения, так как достаточно медленно негативируется на этапе проведения лечения.

Реакция иммуного прилипания (РИП). В основе этой реакции лежит прилипание трепонем, которые сенсибилизированны сывороткой, к эритроцитам и выпадение их в осадок. Результаты оцениваются по следующей таблице:

По всем показателям РИП очень похожа на РИФ и РИТ. Эта реакция проводится в нескольких случаях, если на основании клинических проявлений, анамнеза, лабораторных исследований сифилис не подтверждается, для контроля за заболеванием после получения необходимого лечения и для подтверждения результатов КСР.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ).Попав в среду, где есть иммобилизины испытуемой сыворотки и активный комплемент, бледные трепонемы теряют подвижность. На этом и основывается эта реакция. РИТ очень специфична и применяется для распознания скрытого сифилиса, для диагностики беременных , у которых подозревают сифилис и многих других случаев, при которых стандартные серологические тесты мало специфичны. Большой недостаток этой реакции то, что она стоит очень дорого и её проведение - очень сложный процесс. Результаты считываются по процентным данным иммобилизации бледных трепонем:

-отрицательная - до 20%; -сомнительная -21-30%; -слабоположительная -31-50%; -положительная -51-100%.

В связи с тем, что иммобилизины появляются в крови позже других антител, реакция становится положительной немного позже, чем при проведении других реакций. На первичном этапе инфицирования, как правило, наблюдается отрицательная или слабоположительная реакция. На вторичном этапе сифилиса, хотя появление иммобилизинов в сыворотке крови у больного наблюдается до 60%, реакция положительна почти у половины исследуемых. При рецидиве вторичной стадии сифилиса РИТ положительна почти у 90% больных. На третичной стадии развития сифилиса, при поражении внутренних органов, в том числе и нервной системы, когда реакция Вассермана даёт отрицательные результаты, реакция иммобилизации бледных трепонем положительна почти у 100% больных. На раннем этапе врождённого сифилиса реакция имеет положительный результат почти у всех больных, а на позднем этапе врождённого сифилиса - почти у 100% больных. Серопозитивный латентный сифилис подтверждается только после проведения РИТ, которую проводят после получения положительных результатов при проведении других серологических реакций. РИТ не применяют для контроля за заболеванием у больных, которые получили необходимое лечение.

Реакция иммунофлуоресценции абсорбции с бледной трепонемой (FTA-ABS).Если реакцию проводят для больного, который болен сифилисом и не лечился, то тогда эта реакция даёт положительный результат всегда. Так же высока вероятность выявить инфекцию при помощи FTA-ABS в самом начале заболевания. Реакция обладает большой чувствительностью и специфичностью. Для диагностики латентного сифилиса и в тех случаях, когда уже было проведено несколько тестов и они показали отрицательный результат, но клиника говорит о инфицировании бледной трепонемой, в таких случаях диагноз ставят часто опираясь на результаты FTA-ABS. Буквально через неделю после того, как бледная трепонема попала в организм, начинают вырабатываться специфические антитела IgM, которые со временем перестают появляться и через 2 года уже не определяются. Для того, чтобы понять даёт ли предложенное лечение эффект, проводят специальные тесты, которые определяют специфичность этих антител. Таких тестов на сегодня есть несколько, но проведение их слишком дорого, поэтому для большинства больных эти тесты не проводят.

Гемагглютинационная реакция, которая определяет специфические антитела к бледной трепонеме (микро-РПГА). Для этой реакции в качестве антигена служат трепонемы, поэтому эта реакция очень специфична и даёт правдивые результаты в большинстве случаев.

Иммуноферментный анализ (ИФА) один из наиболее специфичных для диагностики сифилиса. На сегодня чаще всего используют непрямой вариант ИФА. Преимущества этого метода исследования очевидны: не слишком большая стоимость, лёгкость проведения, достаточна высокая точность результата, при помощи этого анализа можно выявить сифилис на ранней стадии, быстрое получение результатов.

В основе метода иммуноблотинга лежит иммуноферментный анализ, который сочетается с электрофорезом. Является одним из самых специфичных анализов и при его помощи происходит подтверждение инфицирования сифилисом.

Полимеразную цепную реакцию (специфический метод исследования) проводят для установления диагноза при скрытых течениях сифилисной инфекции. При проведении ПЦР в испытуемом материале находят возбудителя, даже на первичном этапе заболевания. Обнаруживаемый генетический материал при помощи ДНК делится и таким образом обнаружить возбудителя становится очень просто. При нейросифилисе, когда выявить инфекцию бывает очень затруднительно при проведении других анализов из-за очень низкой чувствительности, при врождённом сифилисе, при первичной стадии серонегативного сифилиса и для постановки диагноза у ВИЧ-инфицированных проведение ПЦР незаменимо. Исследование спинномозговой жидкости при сифилисе проводят, если есть клинические поражения нервной системы на ранней стадии заболевания, при скрытой форме и обязательно ещё до начала лечения. Так же этот анализ назначается для больных нейросифилисом на поздних стадиях сифилиса и при латентной форме. В клинической лаборатории проводят исследование цитоза, содержание белка, реакции Панди и Нонне - Апельта. В серологических лабораториях проводится реакция Вассермана, реакция Ланге, РИФ, РИФю,РИФц, РИТ.

Читайте также: