Исследование крови спинномозговой жидкости на сифилис

Выявление антител класса IgG против Treponema pallidum в спинномозговой жидкости.

Антитела класса IgG к возбудителю сифилиса, иммуноглобулины класса G к бледной трепонеме, спинномозговая (цереброспинальная) жидкость.

Синонимы английские

Syphilis IgG, Antibodies to T. pallidum, IgG, Anti-TP IgG, Cerebrospinal Fluid (CSF).

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Подготовки не требуется.

Общая информация об исследовании

Treponema pallidum (бледная трепонема) – бактерия из семейства спирохет, возбудитель сифилиса. Есть ряд тропических заболеваний (пинта, беджель и фрамбезия), возбудителями которых являются другие подвиды T. pallidum.

Сифилис – это венерическое заболевание, наиболее часто он передается половым путем. Кроме того, возможно заражение через кровь (например, при совместном использовании шприцев, бритв и пр.), ребенка от матери или бытовым путем (очень редко).

Выделяют врождённый, ранний и поздний сифилис, а также неуточненные формы. В медицинской литературе также используются понятия "первичный", "вторичный" и "третичный сифилис".

Инкубационный период – стадия от момента заражения до первых симптомов (твердого шанкра). Он длится в среднем 21 день (от 10 до 90 дней).

Первичный сифилис – стадия с момента образования твердого шанкра до появления сыпи. Твердый шанкр – это язвочка в том месте, где возбудитель проник в организм (обычно на половых органах). Он не болит и исчезает (без лечения) через 2-6 недель. Шанкр появляется не всегда. Кроме того, на этой же стадии могут увеличиваться лимфоузлы. В первое время заболевший человек остается серонегативным (т. е. в его крови еще не обнаруживаются антитела против сифилиса).

Примерно через 4-8 недель после образования шанкра возникают новые симптомы – это вторичный сифилис: общее недомогание, повышение температуры, головная боль и сыпь. Иногда вторичный сифилис проявляется в виде гепатита (в 10 % случаев), менингита (в 1 %), воспаления надкостницы и др.

Затем симптомы сифилиса проходят и заболевание переходит в латентную фазу. При этом возбудитель не исчезает полностью, поэтому при ослаблении иммунитета могут возникать рецидивы болезни. Их симптомы совпадают с проявлениями вторичного сифилиса.

Иногда сифилис так и остается в латентной форме. Но в ряде случаев, если пациент не лечится, с годами развивается третичный сифилис. При этом поражаются различные органы и ткани: нервная и сердечно-сосудистая система, кости, суставы.

Одна из форм сифилиса, при которой оказывается затронута нервная система, – это нейросифилис. Его внешние проявления становятся заметны на стадии вторичного и третичного сифилиса. Формы нейросифилиса: сифилитический менингит, менинговаскуолярный сифилис, спинная сухотка и прогрессивный паралич.

После заражения сифилисом в крови появляются антитела против T. pallidum. Первыми, через 1-2 недели, возникают IgM, через 6-9 недель их уровень снижается.

Антитела IgG присутствуют в крови в наибольшем количестве (по сравнению с другими типами иммуноглобулинов). Обычно они появляются через 3-4 недели после заражения. В отличие от IgM, уровень иммуноглобулинов G остается высоким долгое время (десятилетия) даже после успешного лечения.

Таким образом, антитела IgG позволяют диагностировать сифилис на любой стадии, начиная с первичного сифилиса (в том числе и латентную форму).

При нейросифилисе антитела присутствуют не только в крови, но и в спинномозговой жидкости. Там можно обнаружить и кардиолипиновые антитела (с помощью нетрепонемных тестов), и специфические антитела против трепонем.

Достаточно часто встречается бессимптомный нейросифилис. Это означает, что воспалительный процесс в нервной системе уже начался, но проявления выражены слабо или отсутствуют.

Для диагностики сифилиса широко используют серологические тесты (т. е. основанные на определении антител). Существует много различных методов, которые можно разделить на две группы: трепонемные и нетрепонемные.

Нетрепонемные тесты выявляют неспецифические антитела, направленные против кардиолипина (липида, который входит в состав мембраны митохондрий и бактерий). Эти антитела появляются в организме со стадии первичного сифилиса. К нетрепонемным тестам относят микрореакции преципитации (например, VDRL или RPR).

Посредством трепонемных тестов детектируют антитела именно против самих бактерий T. pallidum. Специфические трепонемные антигены используются при РПГА (реакции пассивной гемагглютинации), РИФ (реакции иммунофлуоресценции) или ИФА (иммуноферментного анализа).

Для диагностики нейросифилиса исследуют ликвор (спинномозговую жидкость). При заболевании в нем повышены содержание лимфоцитов и уровень белка и присутствуют антитела против T. pallidum.

Для чего используется исследование?

• Чтобы выявить нейросифилис (у больных сифилисом), т. е. определить, затронута ли при сифилисе нервная система. Это позволяет выбрать правильный метод лечения.
• Если есть симптомы поражения нервной системы, тест позволяет уточнить, действительно ли сифилис является их причиной или же существует другой возбудитель.
• Если нет симптомов поражения нервной системы, анализ выявляет бессимптомный нейросифилис.

Когда назначается исследование?

• При раннем сифилисе, если присутствуют симптомы поражения нервной системы.
• При позднем сифилисе и при предполагаемой латентной форме болезни.

Что означают результаты?

КП (коэффициент позитивности): 0 - 0,99.

• Нейросифилиса нет. Если есть симптомы поражения нервной системы, то они объясняются другими причинами (вызваны другим возбудителем).

• Нейросифилис. Однозначный вывод можно сделать, когда другие данные (симптомы и лабораторные тесты) тоже подтверждают этот диагноз.
• Нейросифилис в прошлом. Уровень IgG остается высоким долгое время, даже если заболевание уже вылечено.

Что может влиять на результат?

Повреждение кровеносных сосудов во время пункции – попадание крови в ликвор – может привести к ложноположительному показателю (если в крови есть антитела, а в ликворе – нет).

Кто назначает исследование?

Врач общей практики, терапевт, инфекционист, венеролог.

Анализ на сифилис давно стал частью рутинного медицинского обследования. Его обязательно назначают при беременности, перед госпитализацией. Результаты анализа часто требуют при приеме на работу или в ходе диспансеризации. Сегодня диагностика сифилиса находится на высоком уровне развития, но искоренить болезнь окончательно не удается — каждый год выявляют тысячи новых случаев заболевания.

Так ли страшен сифилис, как о нем говорят?

Сифилис вызывает бактерия Treponema pallidum, или бледная трепонема. Попадая в организм, она постепенно поражает все органы. Причем вне организма трепонема быстро погибает. Дезинфицирующие, моющие средства и даже обычный солнечный свет губительно воздействуют на нее. Эта бактерия может долго сохраняться только во влажных условиях и при замораживании.

Первый симптом сифилиса — сифилома. Уплотнение на коже, на котором появляется эрозия или язвочка. Она возникает в том месте, где трепонема проникла в организм. Чаще всего это кожа половых органов и промежности.

Через некоторое время язвочка бесследно проходит и человек часто думает, что полностью излечился. Но примерно через 1,5 месяца на коже появляется сыпь в виде розовых небольших пятен. Это стадия вторичного сифилиса, которая может длиться несколько лет.

Если и на этой стадии человек не проходит лечение, развивается третичный сифилис. Болезнь поражает все органы и ткани, появляются гуммы — плотные узлы, которые разрушаются и оставляют грубые рубцы.

Самые серьезные осложнения сифилиса — нейросифилис, поражение внутренних органов, воспаление суставов. Особенно тяжело протекает врожденный сифилис. Если во время беременности женщина переносит это заболевание, то примерно в 25% случаев ребенок погибает на 6–7 месяце беременности, еще в 14% — сразу после рождения [2] . А у выжившего младенца развиваются тяжелые поражения кожи, легких, печени и внутренних органов.

На рубеже XX–XXI веков Россия пережила вспышку сифилиса. За 2000 год было выявлено более 239 тысяч новых заболевших. После этого заболеваемость начала снижаться. В 2005 году новых заболевших было 97,9 тысяч, в 2010 — 63,7 тысяч, а в 2015 — только 34,4 тысячи. В феврале 2017 года за один месяц в России выявлено 2300 новых случаев сифилиса [3] . Но, к сожалению, как говорят специалисты, реальное количество заболевших примерно в 3–4 раза больше.

Сифилис до сих пор является распространенной болезнью в том числе и из-за проблем диагностики. Первичная сифилома не вызывает боли и самостоятельно бесследно заживает, поэтому далеко не все обращаются к врачу. Сыпь во вторичном периоде не вызывает боли, зуда и шелушения, проходит сама и не оставляет следов. В третичном периоде количество антител против этой инфекции может снижаться настолько, что не обнаруживается серологическими тестами. Есть проблемы и с обследованием половых партнеров — далеко не все готовы раскрыть врачу историю своих любовных похождений и пригласить своих партнеров на обследование.

Стоит помнить, что любые высыпания, особенно возникшие на половых органах — повод обратиться к дерматовенерологу и пройти обследование.

Для беременных и доноров анализ на сифилис обязателен. Для некоторых работающих (госслужащие, военнослужащие, медицинские работники, повара) предоставление результатов данного исследования обязательно при поступлении на работу и затем каждый год при диспансеризации.

Анализ также сдают перед плановой операцией, при поступлении в стационар или при обращении к врачу с симптомами, характерными для этого заболевания.

Основная часть методов диагностики предполагает анализ сыворотки крови. Из нее выделяют антитела к трепонеме и ДНК возбудителя. Сами трепонемы чаще обнаруживают в соскобах с высыпаний, которые появляются при сифилисе.

Для выявления ДНК трепонемы также могут проводить исследование мочи, эякулята, соскоба со слизистых оболочек, спинномозговой жидкости, клеток кожи или конъюнктивы глаза. То есть биоматериала из тех органов, которые могут быть поражены сифилисом.

В зависимости от вида исследования кровь могут брать из вены или из пальца. Некоторые исследования желательно проводить натощак, для других достаточно не есть 4 часа до забора биоматериала.

Материал для выявления ДНК трепонемы лучше собирать до начала антибактериальной терапии. Спинномозговую жидкость забирают только в стационаре в стерильную емкость. Соскоб со слизистых оболочек, с поверхности кожи или глаза не требует особой подготовки. Его может взять врач или специалист лаборатории.

Женщинам, перед тем как сдавать анализ на сифилис из влагалища, желательно воздержаться от спринцевания, половых контактов, диагностических гинекологических манипуляций хотя бы в течение двух суток.

Исследования на сифилис разделяют на две группы — выявление трепонемы или косвенных следов ее присутствия. Для выявления возбудителя заболевания исследуют материал с язвы или из пораженных органов. Эти методы эффективны уже при первых признаках болезни.

Серологические исследования можно проводить примерно через 8–9 дней после появления первичной язвы. То есть сдавать анализ на сифилис сразу после полового контакта бесполезно.

К прямым методам относят темнопольную микроскопию, ПЦР и RIT-тест. Темнопольная микроскопия — это быстрое исследование, которое занимает один рабочий день. Его достоверность — 100%. Но при выраженном воспалении, кровоточивости, при травме элемента или после начала наружного лечения обнаружить живые трепонемы становится почти невозможно.

Микроскопия практически полностью уступила место ПЦР-диагностике. Метод ПЦР позволяет выделить участки ДНК трепонемы в соскобах с кожи и слизистых, из другого биологического материала.

Специфичность ПЦР диагностики приравнивается к 100%. Чувствительность зависит от расходных материалов, которые используются в лаборатории.

RIT-тест — это биологический метод, при котором материал от заболевшего человека прививают лабораторным кроликам. Этот метод очень точен, но сейчас используется только в исследовательских целях. Во-первых, это дорого. Во-вторых, ждать, пока у животного появятся признаки заболевания, слишком долго. Поэтому рассматривать его как реальную альтернативу другим методам диагностики нет смысла.

Непрямые методы позволяют выявить в крови признаки присутствия трепонемы — различные виды антител. Они разделяются на специфические и неспецифические.

РПР-тест (RPR) , или тест с быстрыми плазменными реагинами — это современный зарубежный аналог реакции микропреципитации. К этой же группе относится исследование с толуидиновым красным.

Все эти методы обладают хорошей чувствительностью, но могут давать положительные результаты при отсутствии заболевания. Поэтому если одна из этих проб оказалась положительной, проводятся подтверждающие тесты. К ним относят РСКт, РИТ, ИФА, РИФ, РПГА и иммуноблот.

ИФА и РПГА — это специфичные (100%), чувствительные (95%) и незатратные методы. Эти реакции иногда дают ложный положительный результат при воспалении и некоторых нарушениях обменных процессов. Поэтому чтобы поставить диагноз, нужны результаты минимум двух тестов.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) и иммобилизации бледных трепонем (РИТ) — это специфичные, но достаточно дорогие методы. На практике они почти не используются.

Реакция связывания комплимента с трепонемным антигеном (РСКт) является более точным аналогом реакции Вассермана. В ней анализируется антиген, характерный только для бледной трепонемы.

Еще одним подтверждающим тестом является иммуноблот . Этот метод используется для углубленной диагностики в сомнительных случаях. В отличие от других анализов, которые могут быть готовы за 1–2 рабочих дня, результата иммуноблота придется ждать около недели.

Цена анализа на сифилис зависит от его вида. Скрининговые реакции, такие как РМП или RPR, обойдутся примерно в 320–380 рублей. Определение ДНК в различных субстратах от соскобов со слизистых оболочек до спинномозговой жидкости стоит около 350–450 рублей. Стоимость зависит от ценовой политики лаборатории и используемых расходных материалов. Чем более чувствителен тест, тем больше будет его цена.

ИФА анализ на сифилис стоит приблизительно 500–800 рублей в зависимости от модификации метода. За иммуноблот придется отдать около 1600–1700 рублей. Другие методы исследования практически не используются в реальной практике.

Кровь для исследования на сифилис можно сдать в любой поликлинике или лаборатории. Преимущество поликлиники в том, что биоматериал на анализ по направлению можно сдать бесплатно. Это актуально при обследовании перед плановой госпитализацией, при диспансеризации или если человек устраивается на работу. Минус — время ожидания, в некоторых случаях отсутствие современного оборудования и относительная открытость информации.

Если результат нужен быстро, точно и строго конфиденциально, возможно, стоит обратиться в частные лаборатории. За такой анализ придется заплатить, но при этом есть возможность выбрать метод исследования, а результат в большинстве случаев будет готов уже через 1–2 дня. Для особенно нетерпеливых есть возможность заказать экстренное проведение исследования и получить результаты уже через 2 часа.

Некоторые лаборатории проводят такие исследования на условиях анонимности: личные данные пациента не фигурируют даже в бланке направления. Результат такого анализа нельзя предъявить в больницу или работодателю, но зато можно не беспокоиться за раскрытие личных данных.

Обязательно обратите внимание на метод исследования. Вместо морально устаревшей RW желательно выбирать более современные тесты — РМП или RPR и их аналоги. При ПЦР исследовании обратите внимание на чувствительность метода, количество копий ДНК в образце, при котором тест сработает как положительный.

Сифилис — заболевание, которое может вызвать многочисленные осложнения. Но оно развивается достаточно медленно. Это значит, что у человека есть время, чтобы сдать биоматериал на анализы и пройти лечение до того, как последствия станут необратимыми.

… параллельно с ростом общей заболеваемости сифилисом отмечается увеличение доли случаев нейросифилиса.

Согласно инструкции по лечению и профилактике сифилиса, исследование спинномозговой жидкости необходимо проводить до лечения у больных ранним и поздним скрытым сифилисом при наличии клинических поражений нервной системы, а также при скрытых и поздних формах нейросифилиса.

Ликворологические обследования при снятии с учета проводятся:

( 1 ) пациентам, лечение которых было начато по поводу раннего и позднего нейросифилиса;

( 2 ) лицам, у которых в процессе клинико-серологического контроля появились какие-либо клинические проявления специфического поражения нервной системы (острый сифилитический менингит, менинговаскулярный сифилис, сифилитический менингомиелит, спинная сухотка (tabes dorsalis), сифилитическая гумма, сифилитические невриты и полиневриты, сифилитическое поражение зрительных нервов, сифилитическое поражение слуховых нервов, сифилитический менингомиелит, прогрессивный паралич);

( 3 ) лицам с серологической резистентностью, сохраняющейся к концу срока клинико-серологического наблюдения.

Спинномозговую жидкость для исследования получают путем поясничного прокола между III и IV или IV и V поясничными позвонками при помощи длинных тонких пункционных игл (диаметром от 0,4 до 0,8 мм и длиной 10-12 см). Ликвор по 3-4 мл собирают в две стерильные пробирки (не более 8-10 мл). Необходимо следить, чтобы жидкость вытекла и канюли каплями (20-40 капель в минуту). Если жидкость после извлечения мандрена из иглы вытекает струей, то надо незамедлительно ввести мандрен обратно на небольшую глубину с целью регулировки скорости вытекания жидкости.

Если первые капли ликвора окрашены кровью, следует изменить положение иглы (продвинуть глубже или слегка вытянуть). Затем прозрачную жидкость собирают в другую пробирку (порция ликвора с примесью крови не исследуется).

После пункции место прокола обрабатывается 3-5%-ной йодной настойкой и накладывают стерильную повязку. Чтобы предупредить осложнения, больного укладывают на кровать животом вниз (ножной конец кровати приподнимают на 20-30 см). Спустя 3-4 часа ему разрешается повернуться набок. Постельный режим соблюдается 24-48 часов. Больному рекомендуется обильное питье и голод в течение 6-8 часов после пункции.

Одну порцию спинномозговой жидкости (3-4 мл) направляют в клинико-биохимическую лабораторию для исследования цитоза, содержания белка, постановки глобулиновых (Панди, Нонне-Аппельта, Вейхбродта или Таката-Ара) и коллоидных (Ланге или парафиновой) реакций.

Реакция Нонне-Апельта. С помощью насыщенного раствора сульфата аммония на границе соприкосновения реактива со спинномозговой жидкостью образуется белковое кольцо. После стряхивания, а следовательно, смешения жидкостей получается опалесценция или помутнение различной интенсивности. Реакцию Нонне-Апельта оценивают по четырехбалльной системе: слабо положительная (+) - опалесценция слабо заметна, умеренно положительная (++) - незначительное помутнение, положительная (+++) - выраженное помутнение и резко положительная (++++) - интенсивное помутнение. Росс-Джонс несколько модифицировал эту реакцию. Он предложил не смешивать спинномозговую жидкость с насыщенным раствором сульфата аммония, а осторожно сверху наливать ее из пипетки каплями на более концентрированный реактив. Причем спинномозговая жидкость готовится в различных степенях разведения. Через 3 мин определяется степень помутнения кольца, образовавшегося на границе жидкостей и раствора сульфата аммония. Кольцо опалесценции образуется при содержании белка в спинномозговой жидкости в концентрации 3 г/л.

Реакция Панди осаждает не только глобулины, но и все белки спинномозговой жидкости. Заключается в том, что на часовое стеклышко, которое ставится на темном фоне, наносят 10-15 капель 10 % раствора карболовой кислоты, затем одну каплю спинномозговой жидкости. Реакция отличается высокой чувствительностью и определяется по интенсивности помутнения, образовавшегося на месте соприкосновения жидкости и реактива, по истечении 3 мин.

Реакция Вайнброхта производится таким образом, что к 7 частям спинномозговой жидкости прибавляют 3 части 0,1 % раствора серебра нитрата, а затем встряхивают. При этом наступает различной степени помутнение, по которому судят о содержании белковых веществ (не только глобулинов).

Таката-Ара реакция. Коллоидная реакция. При добавлении к подщелоченному ликвору растворов сулемы и фуксина в норме наблюдается смесь фиолетового цвета. При просветлении жидкости и выпадении осадка реакцию обозначают как метасифилитическую (прогрессивный паралич), при окрашивании в красный цвет - как менингитическую.

Реакция Ланге основана на способности патологически измененного ликвора при смешении его с коллоидными растворами менять дисперсность раствора и тем самым его цвет; при нормальном ликворе пурпурно-красный цвет раствора не меняется. При патологии различают несколько типов кривой изменения цвета. Первый тип - паралитический: при постепенно повышающихся степенях расщепления ликвора в пробирках обесцвечивание происходит только в первых 5 пробирках с довольно крутым возвращением к норме. Такой ход реакции свойствен прогрессивному параличу. Для других форм нейросифилиса более характерен сифилитический зубец - умеренное изменение цвета во 2-5-й пробирке. Второй тип кривой - менингитический (острые менингиты): изменение цвета отмечается со 2-3-й пробирки, достигает максимума в 6-й и 7-й пробирках, после чего круто возвращается к норме. При других заболеваниях центральной нервной системы реакция Ланге является достаточно типичной и не может служить подсобным диагностическим средством.

Вторую порцию ликвора (3-4 мл) отправляют в серологическую лабораторию для проведения реакции Вассермана с кардиолипиновым и трепонемным антигенами, РИФ и РИБТ.

Реакция Вассермана (реакция связывания комплемента, РСК) с трепонемным и кардиолипиновым антигенами применяются для подтверждения диагноза сифилиса при наличии активных проявлений болезни, для обследования лиц, бывших в пловом контакте с больным сифилисом, выявления латентного (скрытого) сифилиса, эффективности проводимой терапии. При обследовании больных психиатрических и неврологических стационаров. Доноров и беременных, включая лиц, направляемых на искусственное прерывание беременности.

Кровь для исследования берут в количестве 5-7 мл из локтевой вены стерильной иглой. У грудных детей кровь берут из височной вены или из надрезов на пятке. Взятие крови производят строго натощак. И оставляют ее в чистых сухих пробирках на 2-3 ч при комнатной температуре для свертывания. Постановку КСР и специфических реакций производят в серологических лабораториях кожно-венерологических учреждений.

Принцип РСК заключается в том, что реагины, находящиеся в сыворотке крови больных сифилисом, обладают свойством вступать в соединения с различными антигенами. Образовавшиеся комплексы сортируют введенный в реакцию комплемент. Для индикации комплекса реагины–антиген–комплемент используется гемолитическая система (смесь эритроцитов барана с гемолитической сывороткой). При наличии комплекса эритроциты выпадают в осадок. Что заметно не вооруженынм глазом. Выраженность гемолиза обозначается врачом ключами: резко положительная 4+, положительная 3+, слабоположительная 2+ ли 1+ и отрицательная. Кроме качественной оценки этих реакций имеется и количественная, имеющая значение в диагностике некоторых стадий сифилиса и при контроле за эффективностью терапии.

В настоящее время в качестве антигенов рекомендовано применять кордилипиловый антиген (экстракт из сердца быка, обогащенный холестерином и лецитином) и трипонемный антиген (обработанная ультразвуком взвесь апатогенных культуральных трепонем). Реакция связывания комплемента с кардиолипиновым и трепонемным антигенами становится положительной через 2-4 недели постепенно нарастает и достигает максимума (1:160 – 1:320 и выше) при вторичном свежем сифилисе. Затем титр реагинов постепенно падает и при вторичном рецидивном сифилисе обычно не превышает 1:180 - 1:120. среди больных с третичным сифилисом указанные реакции дают положительный результат только у 70%.

Следует подчеркнуть, что КСР не являются строго специфичным для сифилиса и в ряде случае в может давать ложноположительные (неспецифические) результаты, они могут получаться в связи с техническими ошибками (полный гемолиз, нестерильное взятие крови, недостаточная квалификация лаборантов). Ложные реакции наблюдаются у больных лепрой, малярии, иногда с ситуационными заболеваниями, новообразованиями, туберкуле, заболеваниями печени, при приеме лекарственных препаратов, а также во время беременности. При менструациях и т.д. Не рекомендуется исследовать кровь в течение первой недели после вакцинации, травм, хирургических вмешательств, при лихорадочных состояниях в течение первых 2 –х недель после родов, у новорожденных в первые 10 дней жизни, т.к. физико- химические изменения в сыворотке крови при этих состояниях могут быть сходы с теми, которые наблюдаются у больных сифилисом.

РИФ основана на непрямом методе определения флюоресцирующих антител. Антигеном в этой реакции служит взвесь убитых культурных бледных трепонем, фиксированная к предметным стеклам на которые наносят исследуемую и антивидовую флюоресцирующую сыворотки. Результаты РИФ определяют под люминесцентным микроскопом путем оценки свечения трепонем в препарате. При положительном результате трепонемы имеют желтовато-зеленое свечение, степень которого, обозначают плюсами от 1+ до 4+, при отрицательных результатах трепонемы не светятся. РИФ в настоящее время ставят в нескольких модификациях (РИФ – abs, РИФ– 200).

РИБТ, предложенная в 1949 г.Р. Нельсоном и М. Мейером, основана на феномене обездвиживания бледных трепонем антигенами сыворотки крови больного в присутствии комплемента. В качестве антигена для РИБТ используют взвесь бледных живых трепонем, полученных от зараженных сифилисом кроликов. Подсчет утративших подвижность (иммобилизированных) трепонем ведут под микроскопом. Результаты реакций оценивают в процентах от 0 до 20% – отрицательный, от 21 до 31% - сомнительная, от 31 до 50% - слабоположительная, от 51 до 100% - положительная. РИБТ становится положительным в конце первичного периода сифилис а и остается таковой в течениие всех периодов этого заболевания, а иногда и после полноценного противосифилического лечения. РИБТ может давать ложноположительные результаты, если в исследуемой сыворотке содержаться трепонемоционные вещества (антибиотики – пенициллин, тетрациклин), вызывающие неспецифическую иммобилизацию бледных трепонем. Поэтому нельзя исследовать кровь на эту реакцию ранее 2 недель после окончания прима антибиотиков.

Для проведения специфических серологических реакций (РИФ и РИБТ) кровь берут из локтевой вены натощак в количестве 5-10 мл. Шприц и иглу после стерилизации промывают изотоническим раствором хлорида натрия, и кровь вливают в сухую пробирку для исследования на РИФ и в стерильную пробирку для исследования на РИБТ. Постановка специфических серологических реакций на сифилис производится в специализированных лабораториях кожно- венерологических учреждений.

Результаты ликворологического исследования оцениваются по шкале Робустова, дополненной последними данными о РИФ и РИБТ со спинномозговой жидкостью. Согласно этой классификации, различают четыре степени изменений спинномозговой жидкости у больных сифилисом.

I степень – незначительные изолированные или комбинированные изменения спинномозговой жидкости.

Изменения спинномозговой жидкости считаются незначительными, когда определяются: цитоз более 8 клеток в 1 мм 3 , белок свыше 0,33%, реакции Нонне-Апельта (++), реакция Панди (+++), реакция Ланге больше двоек или одна тройка, РВ слабоположительна, РИФ положительна.

Если обнаруживается одно из таких изменений, говорят об изолированных изменениях ликвора, если же два – о комбинированных. чаще всего они выявляются до лечения у больных первичным и вторичным сифилисом, сосудистым нейросифилисом, у некоторых больных, недавно закончивших лечение нейросифилиса, а также у отдельных обследуемых после контрольного срока наблюдения.

II степень – значительные изменения ликвора при отрицательных результатах РВ и РИБТ.

Отмечается белково-клеточная диссоциация (цитоз в пределах нормы или слегка повышен, количество белка резко повышено, глобулиновые коллоидные реакции положительны) или клеточно-белковая (плеоцитоз и незначительное повышение белка, реакция Панди и Нонне-Аппельта слабоположительны или отрицательны).

Такие изменения чаще обнаруживаются у больных различными клиническими формами сифилитического менингита, менинговаскулярным сифилисом.

III степень – резкие изменения спинномозговой жидкости (клеточно-белковая или белково-клеточная диссоциация, глобулиновые реакции чаще положительны) и положительные результаты РВ, РИБТ и РИФ.

Определяется у больных запущенным ранним скрытым или острым ранним сифилитическим менингитом, менинго-васкулярным сифилисом, поздним мезенхимальным нейросифилисом и у некоторых больных спинной сухоткой.

IV степень – паралитичсекий тип изменений спинномозговой жидкости: высокий плеоцитоз или большое содержание белка, глобулиновые реакции, РВ, РИФ, РИБТ положительны, кривая Ланге паралитичсекого типа.

Такие изменения ликвора наиболее характерны для больных прогрессивным параличом, табопараличом, в меньшей степени – для больных спинной сухоткой и в еще меньшей степени – для больных поздним мезенхимальным нейросифилисом.

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии и дерматологии. Определяют количество сфингомиелина в ликворе больных с помощью проточной тонкослойной хроматографии. При уровне сфингомиелина в количестве от 3,0 до 3,7 мг% диагностируют не осложненный сифилис. При уровне сфингомиелина в количестве от 8,7 до 11,1 мг% - нейросифилис. Данный способ обладает качественно новым подходом и высокой эффективностью.

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии и дерматовенерологии.

Нейросифилис - общее название разнообразных клинических форм поражения нервной системы сифилитической этиологии, характеризующихся склонностью к прогрессированию при отсутствии адекватного лечения. Термин "нейросифилис" включает широкий спектр поражений ЦНС, которые по мере прогрессирования заболевания постепенно трансформируются один в другой. Изменения нервной системы встречаются у 25-90% больных сифилисом. Диагностика нейросифилиса нередко представляет сложную задачу, установление правильного диагноза возможно лишь в 30-70% случаев. Это связано с тем, что выявление характерных для нейросифилиса неврологических симптомов и синдромов в настоящее время затруднено тем, что структура сифилитических поражений нервной системы изменилась в сторону преобладания стертых и скрытых форм с незначительно выраженной или отсутствующей неврологической симптоматикой. С другой стороны, обнаружение у больных сифилисом тех или иных неврологических нарушений не может служить основанием для диагностики нейросифилиса, поскольку эти нарушения нередко являются следствием различных заболеваний и поражений нервной системы несифилитической природы. Поэтому основную роль в диагностике нейросифилиса играет лабораторное исследование сыворотки крови и спинномозговой жидкости. Исследование сыворотки крови больных (серологическое исследование) проводится с использованием нетрепонемных (реакция Вассермана, микрореакции преципитации с кардиолипиновым антигеном) и более чувствительных и специфических трепонемных тестов (реакция иммунофлуоресценции - РИФ, реакция иммобилизации трепонем - РИТ). Однако при диагностике нейросифилиса следует учитывать, что серологические реакции на сифилис могут быть ложноположительными при наличии многих других заболеваний несифилитической природы. Так, ложноположительные нетрепонемные и трепонемные тесты могут отмечаться у больных ВИЧ-инфекцией/СПИДом, а ложноположительная реакция Вассермана выявляется при исследовании сыворотки крови у 10% лиц пожилого возраста. Поэтому основным подтверждающим методом диагностики нейросифилиса в настоящее время является лабораторное исследование спинномозговой жидкости больных с помощью нетрепонемных и трепонемных тестов.

Аналогом заявленного способа авторы предлагают способ диагностики нейросифилиса с помощью лабораторного исследования ликвора реакцией связывания комплемента с трепонемным и кардиолипиновыми антигенами (реакция Вассермана) (Овчинников Н.М., Беднова В.Н., Делекторский В.В. Лабораторная диагностика заболеваний, передающихся половым путем. - М.: Медицина, 1987, с. 39-166). Однако реакция Вассермана у трети больных бывает отрицательной и поэтому не исключает нейросифилис. Кроме того, при исследовании ликвора с примесью крови возможна ложноположительная реакция Вассермана.

По мнению авторов, прототипом заявляемого способа диагностики нейросифилиса является способ ликвородиагностики с помощью иммуноферментного анализа - ИФА (Дмитриев Г.А., Беднова В.Н., Тимченко Г.Ф. и др. Постановка отборочных и диагностических тестов на сифилис. Методические указания. - М., 2001, 41 с.). Способ основан на том, что на твердофазном носителе (лунки полистеролового планшета) фиксируется антиген возбудителя сифилиса, который инкубируется со спинномозговой жидкостью. При наличии в исследуемом ликворе противотрепонемных антител происходит их связывание в комплекс “антиген-антитело” (фаза I реакции). После удаления не связавшихся иммуноглобулинов следует инкубация с меченными ферментом антителами и к активированным иммуноглобулинам (конъюгат), в ходе которой на поверхности носителя происходит присоединение к имеющимся комплексам “антиген-антитело” антител, меченных ферментом (фаза II). После удаления не связавшегося конъюгата в ходе инкубации происходит взаимодействие фермента с субстратом, в результате чего развивается цветная реакция, интенсивность которой зависит от количества связанных сывороточных антител (фаза III). Результат реакции оценивается спектрофотометрически с выводом цифровых данных или визуально.

Однако иммуноферментный способ ликвородиагностики технически сложен, дорогостоящ и поэтому доступен немногим лабораториям. Для применения этого способа необходимы специальные тест-системы, большинство из которых не адаптированы к исследованию спинномозговой жидкости.

Авторы предлагают собственный способ диагностики нейросифилиса с помощью исследования содержания сфингомиелина в ликворе больных методом проточной тонкослойной хроматографии на слоях силикагеля в системе хлороформ-метанол-аммиак.

Нами обследовано 50 больных с различными формами сифилиса (сифилис вторичный кожи и слизистых оболочек, сифилис ранний скрытый, серорезистентный сифилис), которым после консультации невролога было рекомендовано проведение люмбальной пункции. При исследовании спинномозговой жидкости методом горизонтальной тонкослойной проточной хроматографии установлено, что содержание сфингомиелина в ликворе у 30 больных (23 мужчины и 7 женщин в возрасте 24-40 лет) находится в пределах 8,7-11,1 мг%, а у 20 больных - в пределах 3,0-3,7 мг%. Больным первой группы был выставлен диагноз нейросифилиса (менинговаскулярная форма - у 16 человек, асимптомный нейросифилис - у 11, базальный сифилитический менингит - у 3), который подтвержден другими лабораторными исследованиями ликвора: положительная реакция Вассермана и реакция иммунофлюоресценции (РИФ). У больных второй группы исследование ликвора указали на отрицательные реакции Вассермана и иммунофлюоресценции (РИФ).

Таким образом, данный способ обладает качественно новым подходом и высокой эффективностью, так как повышение уровня сфингомиелина в ликворе больных в 2,5-3,5 раза может служить лабораторным диагностическим критерием развития сифилитического поражения нервной системы у больных с сифилисом.

Больной М., 38 лет, поступил в неврологическое отделение для обследования с диагнозом: Дисциркуляторная энцефалопатия неясной этиологии. При поступлении жалобы на головные боли, усиливающиеся при умственном напряжении, частые головокружения при ходьбе, легкую слабость в правой руке, плохой сон. Год назад отмечался эпизод слабости в правых конечностях, больше в руке при нормальном артериальном давлении.

При осмотре состояние удовлетворительное. Патологии внутренних органов не выявлено. АД 120/75 мм рт.ст. Пульс 72 в минуту. В неврологическом статусе: сознание ясное, менингеальные симптомы не выражены. Зрачки округлой формы, неравномерны (Д>S), реакция на свет вялая, на аккомодацию резко снижена, на конвергенцию сохранена. Отмечаются легкая амимия и асимметрия носогубных складок. Движения конечностей в полном объеме, легкое повышение мышечного тонуса в правой верхней конечности. При исследовании болевой чувствительности отмечается гемигипестезия в правых конечностях, больше в руке. Суставно-мышечное, вибрационное и стереогностическое чувства не расстроены. Рефлексы со слизистых оболочек сохранены; периостальные - нижнечелюстной повышен, с верхних и нижних конечностей понижены, неравномерные (Д>S), брюшные также неравномерны (S>Д). Отмечаются патологические рефлексы: хоботковый, Маринеско-Радовичи, непостоянный симптом Россолимо справа. Статическая и кинетическая координация не нарушена. Шкала MMSE - легкие когнитивные нарушения.

Учитывая жалобы больного и выявленную неврологическую симптоматику, включая патологию зрачков и зрачковых реакций, больному рекомендовано проведение люмбальной пункции.

Спинномозговая жидкость: увеличение белка (0,66 г/л), лимфоцитарный плеоцитоз 28 клеток в 1 мм. Содержание сфингомиелина 9,6 мг%. Больному был диагностирован менинговаскулярный сифилис. В последующем получены результаты подтверждающих тестов: реакция Вассермана и иммунофлюоресценции (РИФ) в ликворе положительные (4+).

Способ диагностики нейросифилиса, включающий исследование ликвора, отличающийся тем, что определяют количество сфингомиелина в ликворе больных с помощью проточной тонкослойной хроматографии и при уровне сфингомиелина в количестве 3,0-3,7 мг% диагностируют неосложненный сифилис, а при уровне сфингомиелина в количестве 8,7-11,1 мг% - нейросифилис.