Результат на коклюш 1 1280

Многие считают, что коклюш — детская инфекция, редко встречающаяся и легко протекающая. В действительности и коклюш, и паракоклюш становятся все более серьезной проблемой в мире из-за тяжелого течения и наличия атипичных, или стертых, форм. В этой статье мы расскажем, как вовремя распознать это непростое заболевание.

Коклюш — острое инфекционное заболевание, поражающее преимущественно детский организм и сопровождающееся спазматическим кашлем. Инфекция передается воздушно-капельным путем: при кашле, чихании и даже во время разговора.

Коклюш вызывает бактерия Bordetella pertussis, которая попадает в дыхательные пути и прикрепляется к клеткам эпителия. В результате микроскопические реснички, помогающие выводить мокроту и очищать бронхи, повреждаются. Бактерия начинает размножаться и выделять несколько видов токсинов, которые и приводят к появлению симптомов.

Первый симптом коклюша — ночной кашель. Постепенно он усиливается и появляется днем. Так может продолжаться до двух недель. Со временем состояние ухудшается, кашель становится спастическим, или спазматическим. Во время приступа человек с трудом может вдохнуть, напрягается, лицо становится красным или даже синеватым, появляется ощущение нехватки воздуха. Приступ такого мучительного кашля иногда заканчивается рвотой или выделением очень густой стекловидной мокроты.

Проблема своевременной диагностики заключается в том, что патология начинается с незначительных симптомов. Сухое покашливание ночью или перед сном напоминает кашель при ОРВИ. Температура тела больного может как незначительно повыситься на несколько дней, так и остаться нормальной. Общее самочувствие инфицированного почти не страдает. И только когда появляются более серьезные симптомы, врачи начинают задумываться о полноценной лабораторной диагностике коклюша.

Еще в начале прошлого столетия коклюш считался одной из самых опасных инфекций, он ежегодно становился причиной смерти тысяч детей. Но даже на современном уровне развития медицины коклюш может протекать очень тяжело.

Исследования, проведенные в 2000-е годы, указывают на значительное увеличение за последнее десятилетие доли тяжелых и среднетяжелых случаев коклюша. Если в 1990-х годах регистрировалось только 18,6% тяжелых форм болезни, то в 2000-е — уже 43,2%.

Токсины, которые выделяет возбудитель коклюша, поражают дыхательный центр в головном мозге. Из-за этого возникает нарушение дыхания, в крови становится меньше кислорода, увеличивается содержание углекислого газа. Возникает гипоксия — кислородное голодание. Поражаются сосуды, развивается повреждение головного мозга (энцефалопатия). В крови увеличивается количество лимфоцитов и лейкоцитов.

К осложнениям коклюшной инфекции относят ателектаз легкого (сближение и сжатие стенок легкого, сопровождающееся выходом воздуха с данного участка), кровоизлияния на коже и в конъюнктиву глаза, поражение сосудов, энцефалопатию, легочное сердце. Из-за снижения иммунитета часто присоединяется вторичная инфекция, развивается бронхит или пневмония.

Паракоклюш — острое инфекционное заболевание, вызываемое бактерией Bordetella parapertussis. Она очень похожа по своему строению на возбудитель коклюша и поэтому вызывает практически такие же симптомы.

Раньше считалось, что паракоклюш — более легкое заболевание. Но последние исследования доказали, что он тоже может привести к тяжелому судорожному кашлю, рвоте и нарушению дыхания. Единственное клиническое отличие этого заболевания от коклюша — отсутствие повышения уровня лейкоцитов в крови.

Особо тяжелые последствия наблюдаются при заражении взрослых и подростков. По данным серологических исследований, проведенных в США, 12–21% взрослых с кашлем более 2 недель могут болеть коклюшем. В России ситуация примерно такая же. Согласно исследованиям ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского, проведенным в очагах коклюша, после контакта с зараженным заболело 23,7% взрослых.

Существуют бактериологические, серологические и ПЦР-методы диагностики коклюша и паракоклюша. Биологический метод (посев материала из носоглотки и культивирование его на питательной среде) информативен на раннем этапе. В первые дни болезни он дает достоверный результат в 86–98% случаев. Но со временем показатели точности снижаются до 15–20%. Особенно если ребенок начинает принимать антибиотики.

Каждый из анализов на коклюш имеет свои особенности, показания, принципы интерпретации результатов. Давайте разберем их все.

Этот анализ проводят в катаральном периоде заболевания, то есть в первые дни появления кашля. Исследование назначают после контакта с больным коклюшем, особенно если у ребенка нет прививок или нет данных об их проведении.

Чувствительность теста колеблется в зависимости от качества и сроков исследования от 20 до 90%. При этом анализ выявляет и коклюш, и паракоклюш. В более поздний период заболевания и при приеме антибиотиков его результативность сильно снижается. Исследование проводится натощак, через 2–3 часа после питья или еды. Материал забирают в среднем на 5–7 день заболевания двукратно: два дня подряд или через день. Мазок берется с поверхности ротоглотки.

Биоматериал помещают в специальную емкость и направляют в лабораторию. Там проводится посев материала на питательную среду. Через несколько дней проводится микроскопическое исследование выросших колоний бактерий. Предварительный результат обычно можно получить на 3–5 день, окончательный — на 5–7 день.

Наличие Bordetella в организме говорит или о заболевании коклюшем (паракоклюшем), или о бессимптомном носительстве. Лечение необходимо в любом из этих случаев.

Исследование проводят при подозрении на инфекционное заболевание, при кашле, повышении температуры и практически при любых заболеваниях. Анализ может дать информацию о наличии воспаления в организме, но что послужило причиной, на его основании сказать нельзя.

Кровь забирают натощак и отвозят в лабораторию. Само исследование проводится или на специальном гемоанализаторе, или с помощью ручного подсчета клеток крови.

Результаты анализа крови при коклюше у детей нельзя анализировать без учета клинической картины и данных других методов исследования. При заражении коклюшной инфекцией значительно повышается количество лейкоцитов и лимфоцитов, при этом скорость оседания эритроцитов (СОЭ) остается в пределах нормы. При паракоклюше повышения лейкоцитов не наблюдается.

При проведении анализа на антитела к коклюшу выявляют три вида иммуноглобулинов — IgA, IgG и IgM.

ИФА назначают при подозрении на коклюш, часто на поздних стадиях болезни, когда бактериологическое исследование уже неэффективно. То есть начиная со 2-3 недели заболевания. Диагностическая чувствительность этого метода — 66,6%, специфичность — 100%.

Забор крови проводится натощак, не раньше чем через 4 часа после последнего приема пищи. После этого из крови выделяют сыворотку, которая и является материалом для исследования. Собранный материал отправляется в лабораторию, где проводится серологический анализ на коклюш методом ИФА.

Исследование можно проводить в течение первых 4-х недель заболевания. Чувствительность этого теста превосходит бактериологическое исследование во много раз. Специфичность метода —100%.

Мазок берется из носа или из ротоглотки. Забор материала желательно проводить натощак или через 2-3 часа после питья и еды. Предварительно полоскать рот не нужно.

В лаборатории в забранном материале определяются специфические участки ДНК бактерии, которая вызывает коклюш. Положительный результат говорит о заболевании коклюшем или о бактерионосительстве.

Не стоит самостоятельно выбирать тип анализа на коклюш, необходимо проконсультироваться со специалистом. И помните, на результат исследования влияет качество подготовки и проведения: техника взятия материала, условия транспортировки, состояние питательных сред.

В среднем определение каждого типа иммуноглобулинов обойдется в 700–850 рублей. Бактериологический анализ на коклюш будет стоить уже дороже — от 850 до 1400 рублей. Ценовая разница при ПЦР-тестировании составляет от 300 до 800 рублей.

При этом стоит учесть расходы на взятие анализа крови (100–150 рублей) или мазка (200–250 рублей). Дополнительно клинический анализ крови с определением СОЭ будет стоить примерно 400–460 рублей.

Определение в крови антител к возбудителю коклюша и паракоклюша (Bordetella pertussis и Bordetella parapertussis), используемое для диагностики этих заболеваний, а также для оценки эффективности вакцинации АКДС (адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная прививка).

Антитела к палочке коклюша и паракоклюша, бактериям Борде – Жангу, иммуноглобулины к возбудителю коклюша и паракоклюша.

Синонимы английские

Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis Antibodies, Abs.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Bordetella pertussis – это грамотрицательная аэробная коккобацилла, являющаяся возбудителем коклюша. Ближайший родственник этого микроорганизма, бактерия Bordetella parapertussis, также способна вызывать схожее по клинической картине, но более мягкое по течению заболевание респираторного тракта, называемое паракоклюшем. Риску заболевания коклюшем и паракоклюшем подвержены все возрастные группы, и прививка АКДС не обеспечивает 100-процентную защиту от инфекции Bordetella.

Антитела к возбудителям коклюша и паракоклюша могут быть обнаружены через 1-2 недели после возникновения первых симптомов заболевания (эти сроки могут быть увеличены у новорождённых детей). Основными антигенами, взаимодействующими с anti-Bordetella pertussis и anti-Bordetella parapertussis, являются филаментозный гемагглютинин, коклюшный токсин, белок пертактин, липоолигосахарид и фимбриальные антигены. В ответ на инфекцию вырабатываются все классы иммуноглобулинов. Титр защитных антител постепенно снижается в течение первых 1-3 лет после заболевания или вакцинации.

Существует несколько лабораторных методов диагностики Bordetella-ассоциированной инфекции. Обнаружение специфических антител к Bordetella составляет основу серологических методов диагностики. Одним из используемых методов является реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). При выборе РНГА в качестве диагностического теста при подозрении на коклюш и паракоклюш следует учитывать клиническую стадию заболевания, возраст пациента и наличие вакцинации в прошлом.

В течении коклюша можно выделить 4 стадии: инкубационный период, катаральную, пароксизмальную стадию и стадию выздоровления. Чаще всего пациент обращается за медицинской помощью при явных клинических признаках заболевания (спастическом кашле, рвоте, цианозе), характерных для пароксизмальной стадии. Серологическим методам принадлежит ведущая роль в выявлении коклюша в пароксизмальной стадии. Точность диагностики коклюша с помощью серологии в этой стадии значительно превосходит точность бактериологического метода.

РНГА – реакция непрямой гемагглютинации – это непрямой метод диагностики, результаты которого зависят от особенностей иммунной системы пациента. Она может быть с успехом применена при подозрении на коклюш и паракоклюш у детей и взрослых. РНГА не используется для диагностики коклюша у младенцев – это связано с некоторыми сложностями при интерпретации результатов, возникающими в результате незрелости иммунной системы новорождённых и влияния материнских антител. Также с особой осторожностью следует трактовать результаты РНГА у пожилых пациентов, а также пациентов с иммуносупрессией (ВИЧ-инфекция, прием глюкокортикостероидов).

Следует отметить, что РНГА не может быть использована в качестве диагностического теста в течение года после прививки АКДС, так как не позволяет различить иммунологический ответ, вызванный текущей инфекцией и вакцинацией.

Для доказательства текущей инфекции сравнивают титр антител в парных сыворотках, полученных с промежутком примерно в 1 месяц. В отличие от большинства других методов диагностики, чувствительность РНГА не зависит от назначения антибактериальных препаратов. Диагностически значимым является 50-100-процентное нарастание титра антител в парных сыворотках. Постепенное нарастание концентрации антител наблюдается при инфекции ранее не вакцинированных пациентов, и наоборот, при повторном заражении пациентов, получивших в течение предшествующих 3 лет вакцину АКДС, титр антител нарастает не постепенно, а стремительно. Отсутствие нарастания титра в парных сыворотках также менее характерно для взрослых пациентов. В такой ситуации обнаружение высокого титра антител при однократном исследовании сыворотки в сочетании с клиническими признаками коклюша может оказаться достаточным критерием для постановки диагноза.

РНГА является дополнительным методом диагностики коклюша и паракоклюша. Для получения максимально полной диагностической информации рекомендуется провести некоторые дополнительные лабораторные тесты (ПЦР, посев на среду).

Эффективность стандартного протокола вакцинации ребенка с помощью вакцины АКДС составляет 80-85 %. Титр антител к Bordetella pertussis может быть определен для оценки эффективности прививки АКДС у детей.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики коклюша и паракоклюша у детей и взрослых, особенно в пароксизмальную стадию заболевания.
• Для оценки эффективности вакцинации АКДС.

Когда назначается исследование?

• При симптомах коклюша (пароксизмальная фаза): интенсивном кашле, сопровождающемся глубоким свистящим вдохом, рвоте, синюшней коже на лице.
• При оценке эффективности вакцинации АКДС.

Что означают результаты?

1. anti-Bordetella pertussis

Титр: после вакцинации: 1:160.

2. anti-Bordetella parapertussis

Титр: Положительный результат:

• коклюш или паракоклюш;
• иммунный ответ после вакцинации АКДС.

• отсутствие инфекции Bordetella pertussis и Bordetella parapertussis;
• неэффективная вакцинация АКДС;
• угасание иммунологического ответа после вакцинации АКДС.

Что может влиять на результат?

• Особенности иммунного ответа: РНГА не используется для диагностики коклюша или паракоклюша у младенцев, результаты исследования у пожилых пациентов и пациентов с иммуносупрессией следует интерпретировать с особой осторожностью.
• Вакцинация АКДС в предшествующие 1-3 года: результат РНГА будет положительным даже при отсутствии текущей инфекции.



• При интерпретации результатов анализа необходимо учитывать клиническую стадию заболевания, возраст пациента и наличие вакцинации в прошлом.
• Исследование имеет наибольшее значение при диагностике коклюша и паракоклюша в пароксизмальной стадии заболевания.

Кто назначает исследование?

Инфекционист, педиатр, пульмонолог, врач общей практики.

Литература

• Laboratory manual for the diagnosis of whooping cough caused by Bordetella pertussis / Bordetella parapertussis. World Health Organization. Dept. of Immunization, Vaccines and Biologicals. WHO/IVB/04.14, 2004.
• Müller FM, Hoppe JE, Wirsing von König CH. Laboratory diagnosis of pertussis: state of the art in 1997. J Clin Microbiol. 1997 Oct;35(10):2435-43.
• Fauci et al. Harrison's Principles of Internal Medicine/A. Fauci, D. Kasper, D. Longo, E. Braunwald, S. Hauser, J. L. Jameson, J. Loscalzo; 17 ed. - The McGraw-Hill Companies, 2008.

На сегодня болезнь также является довольно опасной. Ежегодно около 300 000 людей умирает от этой патологии. Смертельными являются осложнения болезни, которые чаще наблюдаются у пациентов детского и преклонного возраста, в силу анатомо-физиологических и иммунных особенностей. Это говорит о том, насколько важно знать симптомы болезни и особенности лечения.

Особенности симптомов зависят от периода болезни. Они бывают следующие:

Рассмотрим их подробнее.

Инкубационный период длится с момента поступления возбудителя в организм до появления первых симптомов. Как правило, это от 3 до 20 суток. За это время дыхательные пути поражаются возбудителем настолько, что организм перестаёт компенсировать состояние и начинается клиническая картина болезни.

Катаральный период соответствует степени поражения организма патогенным агентом, а значит развивается постепенно. Пациент даже не может сразу определить начало болезни, настолько размытыми являются первые симптомы. Первый знак - сухой кашель или даже небольшое откашливание. Может быть насморк, при котором из носовых ходов выделяется слизь в незначительном количестве. Пациенты младшего возраста более тяжело переносят этот период, так как их анатомическое строение дыхательных путей способствует более быстрому развитию болезни. В целом, начало болезни напоминает ОРВИ, что часто сбивает с толку как пациентов, так и специалистов. Кашель постепенно становится все сильнее, к нему присоединяется раздражительность и беспокойное состояние пациента.

Далее развивается период спазматического кашля, что, обычно, совпадает с 2 неделей катарального периода. Длительность этого отрезка болезни - несколько недель, 3-4. В это время наблюдаются наиболее яркие проявления болезни, а именно спазматический кашель, который возникает приступами. Перед приступом появляются его предвестники - дискомфорт и першение в горле, чувство сдавливания в грудной клетке, паника и беспокойство. Время возникновения приступов может быть разным, нередко они беспокоят ночью.

Как распознать приступ кашля? Он состоит из сильных толчков, которые сменяют судорожные вдохи. Такой вдох сопровождается слабым стоном и свистом и называется репризой. Этот звук возникает при прохождении воздуха через сильно суженные дыхательные пути. По окончанию приступа у пациента начинает отходить вязкая прозрачная мокрота.

Если болезнь доходит до тяжёлой степени, могут появляться рвота, судороги, тахикардия, дыхательная недостаточность.

Внешне такой приступ сопровождается отёчностью тканей лица, цианозом, набуханием сосудов шеи. Может наблюдаться покраснение глаз, в повышенном количестве отходит слюна и слёзная жидкость.

Между приступами кашля ребёнок находится в нормальном состоянии, играет, кушает с аппетитом, не испытывает какого-либо дискомфорта. Из характерных симптомов, которые бывают при коклюше: язва белого цвета на уздечке языка, которая бывает при его повреждении зубами, кровоизлияния в конъюнктиву, склонность к носовым кровотечениям.

Стадия разрешения болезни постепенно сменяет предыдущий этап. Кашель возникает все реже, становится менее специфичным, исчезают приступы и репризы. Пациент становится слабым, астеничным, ощущает раздражительность и усталость. Это состояние истощённости может удерживаться некоторое время после болезни.

Период восстановления или реконвалесценции занимает около полугода. Пациент устаёт при физических нагрузках, детям трудно даются уроки, наблюдается капризность и эмоциональная лабильность. В этот период несколько снижена иммунная функция организма и пациент становится более склонный к ОРВИ, во время которых опять возникает типичный кашель для коклюша.

Такие периоды характерны для типичной клинической картины коклюша. Но есть и атипичные формы заболевания. Это абортивная и стёртая форма. Они могут наблюдаться у тех, кто вакцинирован, а также у взрослых, чей иммунитет более развит, чем у детей и пожилых людей.

Стёртая форма сопровождается обычным сухим кашлем, который не проходит на фоне приёма противокашлевых средств. Характерных приступов при этом нету. такой кашель может беспокоить пациента от нескольких недель до нескольких месяцев, однако состояние остаётся стабильным, осложнения не проявляются.

Абортивная форма характеризуется молниеносным течением, при котором симптомы внезапно появляются и так же внезапно проходят через несколько дней.

Когда необходима диагностика коклюша?

Показаниями к диагностике коклюша являются клинические проявления болезни, которые необходимо подтвердить или опровергнуть. Так как патология имеет инфекционный характер, постановка диагноза на основе клинических данных невозможны - необходимы результаты лабораторного исследования. Если у пациента есть характерные приступы кашля - анализ обязателен.

Существуют также эпидемические показания к диагностике. Необходимо сдавать анализы всем лицам, которые посещают или находились в детских учреждениях, больницах, родильных отделениях, где были обнаружены пациенты с коклюшем и есть риск заражения.

Кроме того, диагностика требуется для дифференциального диагноза при таких состояниях, как муковисцидоз, инородное тело дыхательных путей, астма, острые бронхиты, лимфогранулематоз, корь, пневмония, ОРЗ.

Современные методы диагностики патологии

На сегодня используются такие методы исследования:

Рассмотрим подробнее эти виды диагностики.

Исследование проводится на 5-7 день болезни, именно в это время оно обладает наибольшей информативностью. Также следует учесть то, что лучше всего проводить забор материала до начала приёма антибактериальной терапии, иначе результат может быть ложноотрицательным. Перед сдачей анализа нельзя принимать пищу, полоскать рот, пить, чистить зубы. Забор материала проходит с задней стенки глотки с помощью специального тампона. Иногда к пациенту подносят посуду с питательной средой во время кашля. Полученный материал сеют на питательный среды, которые подходят для жизнедеятельности и роста микроорганизма. Через несколько суток после получения материала можно сделать предварительной заключение, а через неделю - точный результат анализа.

Данная методика применяется на более поздних сроках болезни, через несколько недель после появления характерных симптомов. К этому времени бактериологический метод теряет свою эффективность, так как возбудитель практически исчезает из дыхательных путей, а вот антитела к нему циркулируют по организму. Определяются титры антител к патогену и их тип. Различают три класса иммуноглобулинов, М, А и G. Антитела класса М появляются на 2 неделе заболевания, иммуноглобулины А говорят о том, что болезнь развивается больше 2-3 недель, а иммуноглобулины G можно обнаружить после 4 недель болезни.

Это основной метод из серологической диагностики. Для исследования требуется венозная кровь. Полученный материал соединяют с лабораторным реактивом, который содержит патоген. Если в крови есть антитела, происходит возникновение иммунокомплекса, что говорит о наличии заболевания. Перед сдачей анализов пациент не должен принимать пищу, медикаменты, подвергаться физическим нагрузкам. Проводится исследование парных сывороток, промежуток между которыми от 10 до 14 дней. Результаты получают на основе прироста титра антител, что говорит о дальнейшем развитии патологии и позволяет исключить тот факт, что антитела появились в результате вакцины или ранее перенесённой болезни.

Метод полимеразно-цепной реакции - наиболее современный и качественный способ подтверждения или исключения диагноза. Для реакции необходимо сдать кровь. В лабораторных условиях проводится её исследование на предмет фрагментов аминокислот генетического материала возбудителя. Далее подтверждается или исключается принадлежность полученной структуры именно к тому типу возбудителя, который вызывает коклюш. Для анализа требуются специфические дорогостоящие реактивы и соответствующее оборудование лаборатории, а также навыки персонала.

Имеется в виду обычный анализ крови, который не обладает специфическими результатами. На его основе можно только уверенно сказать про наличие воспалительного процесса бактериального генеза, так как наблюдается лейкоцитоз с типичным сдвигом лейкоцитарной формулы. Такой результат может стать началом лабораторной диагностики, на основе которого врач сделает следующие назначения.

Схема диагностического исследования

Схема диагностики отличается по возрасту пациента, а также по наличию прививки от болезни.

Схема диагностики для тех, кто не прививался:

в первые две недели болезни эффективно проведение бактериологического обследования или ПЦР;

на 3-4 неделе болезни применяют ПЦР или серологическое исследование;

более 4 недель болезни - показание для серологического обследования.

На фоне приёма антибиотиков применяется ПЦР.

Для привитых лиц применяется такая схема обследования:

на 1-2 неделе болезни - метод ПЦР, бактериологический анализ;

на 3-4 неделе используют ПЦР;

срок болезни более 4 недель требует серологической диагностики.

Расшифровка результатов

Результаты бактериологического метода однозначны: наличие микроорганизмов в материале говорит о том, что именно они являются причиной патологии.

Гематологический метод является неспецифичным, диагностическое значение имеет повышение лейкоцитов более чем 9·109/л.

Результаты ПЦР являются положительными, если в организме есть фрагменты генетического материала бактерии.

Результаты серологической диагностики расшифровываются следующим образом:

менее 10,0 - отрицательный результат, отсутствие антител. Такой результат может быть у здорового человека или у пациента, который заболел менее, чем три недели назад;

от 10,0 до 50,0 - слабоположительная реакция, недостоверный результат, который требует повторной диагностики;

более 50,0 - реакция положительная, антитела обнаружены. Такой результат говорит о том, что человек болен или недавно перенёс коклюш.

Основные аспекты профилактики и лечения болезни

Профилактика коклюша заключается в плановой вакцинации. Применяется вакцина АКДС, которая содержит компоненты против коклюша, дифтерии и столбняка и применяется в возрасте 3, 4, 5, 6 месяцев, а после этого в 1,5 и 6 лет. Существует также экстренная профилактика, которая заключается в введении специфического иммуноглобулина после контакта непривитого ребёнка или ребёнка до года с носителем бактерии.

Вакцина обладает высокой эффективностью, однако она не исключает возможного заболевания. Обратите внимание на то, что болезнь в таком случае будет более лёгкой формы, не принесёт осложнений, а также не приведёт к тяжёлым последствиям, ограничившись лишь стёртыми симптомами болезни. Вакцина необходимо не столько для предотвращения самой болезни, сколько для профилактики её тяжёлого течения и смертельных осложнений. Неспецифическая профилактика заключается в соблюдении эпидемических мероприятий в коллективе, где есть случаи заболевания, ограничении контакта с носителями микроорганизма, санитарно-гигиеническими мероприятиями.

Лечение проводится в амбулаторных условиях для пациентов с лёгким течение болезни, а госпитализируют тех, кто тяжело переносит болезнь, детей маленького возраста. Применяется антибактериальная терапия, глюкокортикоиды, антигистаминные средства, витамины, препараты, которые влияют на дыхательную функцию. В тяжёлых случаях требуется дополнительное введение кислорода, ноотропов, психостимулирующих препаратов.

Причины пройти диагностику в СЗЦДМ

Лаборатория центра оснащена новейшим диагностическим оборудованием. Анализы выполняются быстро и качественно. В штате медицинских центров работают высококвалифицированные специалисты, что позволяет сделать диагностику разносторонней и эффективной. Пациент может не только установить факт заболевания, но и пройти расширенную проверку организма, а также лечение. Для наших врачей нет заболевания отдельной системы - они оценивают полноценное состояние пациента и лечат его, а не патологию. Есть возможность получить результаты исследования на личную электронную почту или получить их в распечатанном виде в медицинском центре.

Содержимое (Table of Contents)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Вакцина коклюшно-дифтерийно- ФС.3.3.1.0010.15

cтолбнячная адсорбированная

(АКДС-вакцина) Взамен ФС 42-3362-97

Настоящая фармакопейная статья распространяется на иммунобиологический лекарственный препарат — вакцину коклюшно-дифтерийно-столбнячную адсорбированную (АКДС-вакцину), которая представляет собой смесь инактивированных коклюшных клеток и обезвреженных формальдегидом при нагревании дифтерийного и столбнячного токсинов, очищенных и адсорбированных на алюминия гидроксиде или другом разрешенном к применению минеральном сорбенте.

В состав лекарственного средства может входить антимикробный консервант.

АКДС-вакцина предназначена для специфической профилактики коклюша, дифтерии и столбняка.

ПРОИЗВОДСТВО

Все этапы производства АКДС-вакцины должны быть валидированы с целью подтверждения установленных требований и должны гарантировать безопасность ее применения.

При производстве столбнячного анатоксина используют штаммы/штамм Clostridium tetani, полученные и депонированные в Государственной коллекции. Микробные клетки культивируют на жидких питательных средах, обеспечивающих высокую продукцию столбнячного токсина. Методы культивирования должны гарантировать сохранение свойств штаммов и предотвращать их контаминацию. Токсинсодержащую культуральную жидкость, освобожденную от микробных клеток и продуктов их распада, проверяют на стерильность, рН и содержание токсина. Для производства столбнячного анатоксина используют культуральную среду с активностью токсина не менее 15 L+/₁₀₀ в 1 мл. Детоксикация столбнячного токсина должна обеспечивать сохранение антигенной активности анатоксина и гарантировать его безопасность – отсутствие остаточной токсичности (специфическая безопасность) и реверсии токсических свойств. Столбнячный анатоксин должен быть очищен от примесей, вызывающих побочные реакции при введении человеку. Для характеристики очищенного столбнячного анатоксина определяют рН, специфическую (антигенную) активность, содержание общего и белкового азота, антигенную чистоту (удельную активность).

Определение специфической безопасности столбнячного анатоксина. Вводят подкожно 5 морским свинкам массой 250 — 350 г 1500 Lf столбнячного анатоксина (суммарно в бок и внутреннюю поверхность верхней трети бедра). В течение 21 сут наблюдения у животных не должны обнаруживаться признаки столбняка (ригидность лапки, искривление позвоночника или сочетание указанных признаков) и потери массы тела. Если фиксируют гибель более 1 животного по причине, не связанной со специфической интоксикацией, испытание повторяют. Если при повторном испытании наблюдают гибель более 1 животного, столбнячный анатоксин считают не прошедшим испытание.

Реверсия токсичности столбнячного анатоксина. Готовят раствор, содержащий столбнячный анатоксин, консервант (при его наличии) в 0,9 % растворе натрия хлорида в концентрации, принятой для готового продукта. Полученную смесь делят на 2 части и выдерживают в течение 42 сут: первую — при температуре (37 ± 1) ºС, вторую — при температуре от 2 до 8 ºС. Каждый образец вводят подкожно 5 морским свинкам массой 250 – 350 г в объеме 5 мл (по 2,5 мл в оба бока). Наличие признаков столбняка в течение 21 сут наблюдения за животными свидетельствует о присутствии в пробе столбнячного токсина.

Для производства АКДС-вакцины используют только стерильный и безопасный столбнячный анатоксин с удельной активностью не менее 1000 ЕС (или Lf) на мг белкового азота.

При производстве дифтерийного анатоксина используют токсигенный штамм Corynebacterium diphtheriae, полученный и депонированный в Государственной коллекции. Микробные клетки культивируют на жидких питательных средах, обеспечивающих высокую продукцию дифтерийного токсина. Методы культивирования должны гарантировать сохранение свойств штамма и предотвращать его контаминацию. Токсинсодержащую культуральную жидкость, освобожденную от микробных клеток и продуктов их распада, проверяют на стерильность, рН и содержание токсина. Для производства дифтерийного анатоксина используют культуральную среду с активностью токсина не менее 80 Lf в 1 мл. Детоксикация дифтерийного токсина должна обеспечивать сохранение антигенной активности анатоксина и гарантировать его безопасность: отсутствие остаточной токсичности (специфическая безопасность) и реверсии токсических свойств. Для характеристики очищенного дифтерийного анатоксина определяют его рН, специфическую (антигенную) активность, содержание общего и белкового азота, антигенную чистоту (удельную активность). Дифтерийный анатоксин должен быть очищен от примесей, вызывающих побочные реакции при введении человеку.

Определение специфической безопасности дифтерийного анатоксина. Морским свинкам (5 животным) массой 250 — 350 г вводят подкожно 1500 Lf (суммарно в оба бока) дифтерийного анатоксина. В течение 42 сут наблюдения у животных не должны обнаруживаться изъязвления, инфильтраты, абсцессы, некрозы на местах инъекции и потеря массы тела. Если наблюдается гибель хотя бы 1 животного от дифтерийной интоксикации (красные надпочечники при аутопсии погибших животных), дифтерийный анатоксин применению не подлежит. Если наблюдают гибель более 1 животного по причине, не связанной с дифтерийной интоксикацией, испытание повторяют. Если при повторном испытании устанавливают гибель более 1 животного, дифтерийный анатоксин считают не прошедшим испытание.

Реверсия токсичности дифтерийного анатоксина. Готовят раствор, содержащий дифтерийный анатоксин, консервант (при его наличии) в 0,9 % растворе натрия хлорида в концентрации, принятой для готового продукта. Полученную смесь делят на 2 части и выдерживают в течение 42 сут: первую — при температуре (37 ± 1) ºС, вторую — при температуре от 2 до 8 ºС. По 0,1 мл каждого образца вводят внутрикожно 2 морским свинкам массой 250 — 350 г или 1 кролику массой (2,5 ± 0,5) кг в объеме 0,2 мл. Наличие реакций на месте инъекции в течение 4 сут наблюдения свидетельствует о присутствии во введенном растворе дифтерийного токсина (реверсии токсичности).

Для производства АКДС-вакцины используют только стерильный и безопасный дифтерийный анатоксин, содержащий не менее 1500 Lf на мг белкового азота.

Инактивированная коклюшная суспензия (КС) представляет собой стерильную взвесь обезвреженных формальдегидом цельных микробных клеток Bordetella pertussis. Для производства КС используют штаммы, полученные и депонированные в Государственной коллекции. Производство ЕС должно быть основано на системе посевных серий. Культуры рабочих посевных серий должны обладать теми же характеристиками, что и культуры штамма, из которого была получена исходная посевная серия. Ежегодно перед использованием в производстве посевные серии должны быть проверены по морфологии, культуральным и антигенным свойствам, дермонекротической активности, вирулентности и токсичности, а также иммуногенной активности.

Определение серологических (антигенных) свойств КС. Взвесь коклюшных микробных клеток должна содержать агглютиногены 1, 2 и 3. Уровень агглютиногенов должен выявляться в реакции агглютинации соответствующими адсорбированными агглютинирующими сыворотками в титре не ниже 1:1280. При производстве КС используют штаммы Bordetella pertussis (серотип 1.2.3 – 1 штамм, серотип 1.2.0 – 1 штамм, серотип 1.0.3 — 1 штамм), взятые в равных соотношениях или в соотношении 4:3:3. Содержание формальдегида в инактивированной КС не более 300 мкг/мл, тиомерсала (при его наличии) – от 85 до 115 мкг/мл.

Уровень агглютиногенов 1, 2 и 3 следует определять на стадии получения сведенной КС и перед добавлением адъюванта или объединением с другими компонентами (антигенами) комбинированных вакцин. Для определения уровня содержания агглютиногенов используют адсорбированные коклюшные сыворотки к агглютиногенам 1, 2, 3. Титром считают величину, соответствующую последнему удвоенному разведению сыворотки, дающему агглютинацию, соответствующую +++.

Для постановки развернутой РА готовят двукратные разведения сывороток от 1:160 до 1:10240 в 0,9 % растворе натрия хлорида, рН (7,1 ± 0,2). Для этого в ряд агглютинационных пробирок, за исключением первой, наливают по 0,5 мл 0,9 % раствора натрия хлорида, рН (7,1 ± 0,2). Затем в первую и вторую пробирки вносят по 0,5 мл сыворотки в разведении 1:160. После тщательного перемешивания содержимого переносят 0,5 мл полученного разведения 1:320 из второй пробирки в третью, получая разведение 1:640, из третьей пробирки 0,5 мл переносят в четвертую и т.д. Из последней пробирки ряда, содержащей предельное разведение сыворотки (1:10240), 0,5 мл удаляют в емкость с дезинфицирующим раствором для получения равных объемов разведенной сыворотки (по 0,5 мл) во всех опытных пробирках.

Во все пробирки с приготовленными двукратными разведениями сывороток вносят по 0,5 мл испытуемой микробной взвеси с мутностью 10 МЕ (за 1 МЕ условно принят 1,1 млрд коклюшных бактерий в 1 мл). Одновременно проводят контроль сыворотки и антигена в тех же объемах на отсутствие спонтанной агглютинации, смешивая:

• – 0,5 мл сыворотки в разведении 1:160 с 0,5 мл 0,9 % раствора натрия хлорида, рН (7,1 ± 0,2);
• – 0,5 мл микробной взвеси КС с 0,5 мл 0,9 % раствора натрия хлорида, рН (7,1 ± 0,2).

Содержимое пробирок перемешивают путем встряхивания штатива, который затем помещают на 2 ч в термостат при температуре (36 ± 1) °С, после чего оставляют на 18-20 ч при температуре (5 ± 3) °С.

Результаты реакции агглютинации учитывают визуально до встряхивания пробирок, а затем для более точного учета – в агглютиноскопе при осторожном встряхивании осадка путем медленного наклона пробирки.

Определение специфической безопасности инактивированной КС. Полноту инактивации коклюшных микробов (специфическую безопасность) определяют в опытах на животных.

Испытуемую КС вводят внутрибрюшинно в объеме 0,5 мл, содержащем 10 млрд коклюшных бактерий (прививочная доза вакцины для человека) 10 беспородным белым мышам массой 14 — 16 г. Мышам контрольной группы (10 животных) внутрибрюшинно вводят по 0,5 мл 0,9 % раствора натрия хлорида, рН (7,0 ± 0,3), содержащего в той же концентрации консервант, который присутствует в вакцине. Для испытания используют здоровых животных одного пола из одной партии. Если используют животных обоего пола, их следует равномерно распределить по группам. Непосредственно перед введением вакцины определяют общую массу каждой группы мышей. Через 72 ч и спустя 7 сут после введения определяют общую массу каждой группы мышей. Вакцина считается безопасной, если:

а) через 72 ч общая масса тела опытных животных не ниже их исходной массы тела перед введением препаратов;

б) через 7 сут относительный прирост массы тела мышей, получивших испытуемую коклюшную суспензию, составляет не менее 60 % прироста массы тела контрольных животных.

В случае гибели за этот срок хотя бы 1 мыши или потери в массе тела, по сравнению с первоначальной, опыт повторяют на удвоенном количестве мышей с теми же требованиями. В случае гибели хотя бы 1 мыши при повторном контроле испытуемая вакцинная масса признается непригодной.

Определение дермонекротической активности. Испытание проводят на кроликах или мышах-сосунках. Коклюшная суспензия в концентрации 4 МЕ в объеме 0,2 мл при внутрикожном введении кролику не должна вызывать образования инфильтратов и развития некрозов; допускается гиперемия не более 10 мм в диаметре. В качестве контроля используют введение живой культуры в объеме 0,2 мл с минимальной концентрацией микробных клеток, вызывающей некроз размером не менее 5 мм в диаметре. Определение проводят на 2 белокожих кроликах массой 1,5-2 кг. Учет результатов проводят ежедневно в течение 4 сут.

КС, содержащая 1 МЕ в объеме 0,05 мл, при подкожном введении четырехдневным мышам-сосункам в область шеи со стороны спины не должна вызывать изменения цвета кожных покровов. В качестве положительного контроля вводят живую коклюшную культуру, взятую в том же объеме с минимальной концентрацией микробных клеток, вызывающей кожную реакцию; в качестве отрицательного контроля – 0,05 мл 0,9 % раствора натрия хлорида. Каждый препарат вводят 2 животным. Реакцию учитывают в течение 24 ч. Появление сине-пурпурного окрашивания инъецированной области свидетельствует о присутствии недостаточно обезвреженного дерматонекротического токсина.

Для обоих тестов в качестве положительного контроля используют живую 2-суточную культуру тест-штамма или производственного (не подвергнутого инактивации) штамма, выращенную на среде Борде-Жангу с 30 % крови человека или КУА с 10 % крови человека.

Для производства вакцины используют КС с концентрацией клеток от 60 до 80 МЕ в 1 мл, рН 6,8–7,4.

Показатели, которые влияют на качество, но не могут быть определены в конечном продукте, должны быть проверены на промежуточных стадиях производства, что должно быть отражено в нормативной документации.

Прививочная доза АКДС-вакцины (0,5 мл) содержит 15 Lf дифтерийного анатоксина, 5 ЕС (Lf) столбнячного анатоксина и 10 млрд клеток инактивированных коклюшных бактерий. В состав лекарственного средства может входить антимикробный консервант.

ИСПЫТАНИЯ

Опалесцирующая жидкость белого цвета, которая может иметь сероватый или желтоватый оттенок. При отстаивании разделяется на рыхлый осадок белого или белого с сероватым или желтоватым оттенком цвета, легко диспергируемый при встряхивании, и прозрачную надосадочную жидкость. Испытания проводят визуально в проходящем свете.

Должна быть безопасной (дифтерийный и столбнячный компоненты) при подкожном введении 5 морским свинкам массой 250-350 г 6 прививочных доз для человека (суммарно в бок и лапку). Через 30 дней все животные должны остаться живыми без симптомов столбняка, дифтерийной интоксикации и потери массы тела. В случае гибели 1 из животных или потери массы тела от неспецифических причин испытание повторяют. Если при повторном испытании гибнет более 1 животного, лекарственный препарат признают не соответствующим требованиям.

Специфическую безопасность коклюшного компонента оценивают аналогично методу, описанному для определения специфической безопасности коклюшной суспензии.

Специфическую активность дифтерийного и столбнячного компонентов возможно оценивать по титру соответствующих антител в сыворотке крови иммунизированных животных в тестах с параллельным использованием стандартных образцов, калиброванных в МЕ.

Раздел должен содержать следующую информацию: наименование штаммов; место их депонирования; допустимое количество пассажей (при необходимости) и методику их проведения с указанием условий культивирования; при необходимости — дополнительные к паспортным данным требования к характеристикам штаммов.

Транспортирование и хранение при температуре от 2 до 8 °С.