Предубойная диагностика при лептоспирозе

Лептоспироз (лат. – Leptospirosis) – в основном остро протекающая природно-очаговая болезнь животных многих видов и человека, проявляющаяся кратковременной лихорадкой, гемоглобинурией, геморрагиями, желтушным окрашиванием и очаговыми некрозами слизистых оболочек и кожи, атонией желудочно-кишечного тракта, абортами, маститами, рождением нежизнеспособного потомства, периодической офтальмией и менингоэнцефалитами, снижением продуктивности животных.

Возбудители лептоспироза – микроорганизмы рода Leptospira. Патогенные лептоспиры представлены 202 сероварами, которые по степени антигенного родства объединены в 23 серологические группы.

Установлена выраженная видовая чувствительность животных к лептоспирам определенных серологических групп и вариантов. Так, основными возбудителями лептоспироза свиней являются Tarassovi и Pomona, крупного рогатого скота – Hebdomadis, Pomona и Grippotyphosa, мелкого рогатого скота – Grippotyphosa,Pomona и Tarassovi, собак – Icterohaemorrhagiae и Canicola.

Основными резервуарами инфекции являются стоячие водоемы, в которых, как правило, сохраняются лептоспиры годами, а дикие грызуны (мыши-полевки, тушканчики и др.) являясь чрезвычайно чувствительными объектами для воспроизведения данной инфекции, поддерживают патологический процесс, болея лептоспирозом, который может протекать у них в различных формах – от бессимптомного носительства до тяжелых генерализованных форм.

Животные заражаются лептоспирозом чаще при водопое, при поедании трупов грызунов или кормов, инфицированных мочой грызунов. Возможно и внутриутробное заражение у КРС, овец и свиней. Доказана возможность передачи возбудителя половым путем.

Лептоспиры проникают в организм животного и человека через поврежденные участки кожи, слизистые оболочки ротовой и носовой полостей, глаз, половых путей и через желудочно-кишечный тракт. Болезнь наблюдается в любое время года, но у животных с пастбищным содержанием – преимущественно в летне-осенний период.

Диагностические исследования на лептоспироз проводятся в нашей лаборатории согласно ГОСТ 25386-91. Отдел диагностики лептоспироза функционирует с 2011года. Диагностика проводится по 15-и серогруппам лептоспир:

1) Pomons; 2) Tarassovi; 3) Grippotyphosa; 4) Hebdomadis; 5) Sejroe; 6) Mini; 7) Icterohaemorrhagiae; 8) Canicola; 9) Bataviae; 10) Javanica; 11) Australis; 12) Autumnalis; 13) Ballum; 14) Pyrogenes; 15) Cynopteri.

Основным методом диагностики лептоспироза является серологический для определения уровня антител в крови животного в реакции микроагглютинации (РМА). Для исследования используют сыворотку крови.

Для предварительной диагностики и обнаружения антител в сыворотке (плазме) крови используется метод ИФА. Время предварительной диагностики методом ИФА – 2,5 часа, методом РМА – 3-4 часа на одну пробу. Для обнаружения антигена в патологическом материале (плазме крови или в моче) используется метод ПЦР (время на исследование 3 часа). Проводится также микроскопия мочи на обнаружение лептоспир (доставить мочу необходимо в течении 2-3 часов после отбора)

Профилактикой заболевания лептоспирозом является ежегодная вакцинация согласно графику.

Ведущий ветеринарный врач отдела диагностики лептоспироза

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ЛЕПТОСПИРОЗА

Инкубационный период составляет от четырех до четырнадцати дней. Заболевание поражает внезапно, без каких либо предвестников. Происходит быстрое повышение температуры до 40 градусов, появляется озноб.

Лептоспироз вызывает Leptospira interrogans. Это грамотрицательная аэробная подвижная спиралевидная палочка, напоминающая спирохету. В настоящее время выделено более 230 сероваров лептоспиры. Бактерии обладают умеренной устойчивостью в окружающей среде, патогенные лептоспиры погибают при воздействии солнечного света, высоких температур. В воде разные штаммы могут существовать от нескольких часов до месяца. В сухой почве жизнеспособность лептоспиры сохраняется 2 часа, в заболоченной - до 10 месяцев. Могут переносить замораживание, во влажной почве и водоемах способны пережить зиму. На пищевых продуктах лептоспиры сохраняются 1-2 дня. Погибают с течение 20 минут при воздействии однопроцентной хлороводородной кислотой и полупроцентным раствором фенола.

Лептоспироз распространяется с помощью фекально-орального механизма преимущественно водным путем. Кроме того, можно отметить вероятность передачи контактным и пищевым (кормовым) путем.

Современная лабораторная диагностика лептоспирозов основана на комплексе микробиологических и иммунологических методов, которые используются в различных комбинациях в зависимости от фазы заболевания и диагностических возможностей лаборатории.

Материалом для исследования являются кровь, моча, спинномозговая жидкость (СМЖ) больного, а при летальных исходах - паренхиматозные органы, грудной и брюшной транссудат.

Метод прямой микроскопии

Лептоспиры плохо воспринимают окраску, поэтому все наблюдения проводят с живыми возбудителями в темном поле зрения микроскопа. С этой целью используют конденсор темного поля (например, ОИ-13) и осветитель ОИ-19 или другой системы.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Принцип метода. В основе метода ПЦР лежит многократное копирование (амплификация) специфического фрагмента ДНК-мишени, который является маркерным для данного вида.

Бактериологическим методом исследуют тот же материал и в те же сроки, что и при использовании метода микроскопии.

Дифференциация патогенных лептоспир от сапрофитных проводится по результатам биопробы и культурально-биохимическим тестам.

Биологический метод в диагностике лептоспирозов используется редко.

Серологические исследования - основа лабораторной диагностики лептоспирозов.

Выделенные на местах штаммы лептоспир идентифицируются до серогруппы с помощью набора диагностических агглютинирующих сывороток [2].

Переболевшие лептоспирозом животные приобретают стойкий и напряженный иммунитет, длящийся годами. Но после переболевания у части животных с мочой долгое время выделяются лептоспиры, т.е. иммунитет нестерильный. У другой части животных – иммунитет стерильный.

При лептоспирозе развивается как клеточный, так и гуморальный иммунитет.

В целях своевременного выявления лептоспироза проводят исследование сыворотки крови животных в реакции микроагглютинации (РМА): на племпредприятиях, станциях (пунктах) искусственного осеменения и в племенных хозяйствах (фермах) всех производителей 2 раза в год; свиней, крупный и мелкий рогатый скот, лошадей - перед вводом (ввозом) и выводом для племенных и пользовательных целей (за исключением животных на откорм) поголовно; во всех случаях при подозрении на лептоспироз.

При остром и подостром течении лептоспироза применяют сыворотку поливалентную гипериммунную против лептоспироза животных, стрептомицин, канамицин, антибиотики тетрациклинового ряда. Для санации лептоспироносителей используют стрептомицин, а у свиней - дитетрациклин. При осложнениях после абортов лептоспирозной этиологии проводят симптоматическое лечение. Патогененическая терапия направлена на детоксикацию и лечение осложнений. У мелких домашних животных применяют плазмаферез, гемосорбцию, экстракорпоральный диализ [3].

Кисленко В. Н. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии. – М.: КолосС, 2010. – 232с.

Асонов Н. Р. Микробиология. – 4-е изд. И доп. – М.: КолосС, 2011г. – 352с.

Андреев Г.М., "Справочник ветеринарного врача", Санкт- Петербург, 2011г., 895с.

Лептоспироз Лептоспирозы – группа природноочаговых нетрансмиссивных зоонозов, сходных по этиологии и клиническим проявлениям. Возбудителями лептоспироза являются микроорганизмы рода Leptospira, семейства Leptospiracea, порядка Spirohaetales. Род Leptospira объединяет патогенные и сапрофитные виды лептоспир. В основу систематики как патогенных, так и сапрофитных лептоспир положены антигенные различия. Основным таксоном у лептоспир является серовар, серовары с родственной антигенной структурой объединены в серогруппы. В этиологической структуре лептоспирозов человека преобладают возбудители серогрупп Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae, Canicola, Pomona, Sejroe.

В России лептоспироз регистрируется во всех федеральных округах, наиболее высокая заболеваемость приходится на Центральный федеральный округ (Москва и Московская область, Смоленская, Тульская области), Северо-западный ФО (Вологодская область, Санкт-Петербург), Южный ФО (Краснодарский край), Приволжский ФО (Республика Мордовия, Республика Удмуртия, Кировская область, Пермский край). Резервуарными хозяевами лептоспир в природных очагах являются грызуны: серые крысы, обыкновенные полевки, полевые и домовые мыши и насекомоядные: ежи и землеройки. В антропургических очагах лептоспиры циркулируют среди свиней, крупного и мелкого рогатого скота, лошадей, собак, в популяциях крыс и домовых мышей.

Заражение человека может происходить через воду пресных естественных и искусственных водоемов (при купании, рыбной ловле, питье воды и т.д.), при употреблении инфицированных лептоспирами пищевых продуктов, прямом контакте с больными животными. Для лептоспироза свойственна осенне-летняя сезонность, но от домашних животных-лептоспироносителей можно заразиться в любое время года. Регистрируется как спорадическая заболеваемость, так и эпидемические вспышки.

Инкубационный период длится от 7 до 20 дней, во время которого развивается кратковременная бессимптомная лептоспиремия, вслед за ней происходит паренхиматозная диффузия лептоспир в печень, почки, надпочечники, селезенку, легкие, возможно проникновение в ткани мозга. Вторая фаза, или начальный период заболевания, длящийся, как правило, 3–7 дней, заключается в развитии клинической картины заболевания: высокая лихорадка, головная боль, тошнота, то есть проявлений интоксикации организма, вызванной эндотоксинами лептоспир при повторном выходе лептоспир в кровь; вторая фаза заканчивается повторной паренхиматозной диффузией. В разгар заболевания отмечается максимальный уровень токсемии и поражения внутренних органов: печени, почек, легких, эндокарда; заболевание может осложниться геморрагическими явлениями различной степени выраженности (геморрагическая сыпь на коже и слизистых оболочках, мелкие диапедезные органные кровоизлияния, внутренние и наружные кровотечения), развитием инфекционно-токсического шока, острой почечной или острой печеночно-почечной недостаточности. Через месяц остается возможным развитие осложнений со стороны почек, сердца, ЦНС; через 1,5 месяца, как, правило, наступает стадия реконвалесценции и формирование длительного серогруппспецифического иммунитета.

Дифференциальная диагностика

Инфекционные заболевания: ГЛПС, геморрагические лихорадки, вирусные гепатиты, иерсиниозы, менингококковая инфекция, инфекционный мононуклеоз, клещевой энцефалит, боррелиоз, острые кишечные инфекции, пневмонии и серозные менингиты иной этиологии;
соматические заболевания: пиелонефрит, панкреатит, почечная колика, заболевания крови;
отравления.

Показания к обследованию

Лихорадка с общеинтоксикационным синдромом у лиц, находившихся в последние 1,5 месяца на территории, эндемичной по лептоспирозу, особенно при наличии симптомов: острое начало болезни, высокая лихорадка, боли в икроножных мышцах, гиперемия лица, инъекция склер и гиперемия конъюнктивы, экзантема, множественные геморрагические высыпания на различных участках тела, боли в пояснице, микро- и макрогематурия, олиго- или анурия, увеличение размеров печени, развитие желтухи.

Материал для исследований

Кровь, СМЖ, моча – обнаружение ДНК, культуральные исследования;
сыворотка крови – определение АТ;
кровь – микроскопические исследования.

Этиологическая лабораторная диагностика включает визуальное выявление лептоспир с использованием микроскопии, изоляцию микроорганизма методом посева на специальных средах, обнаружение ДНК лептоспир, определение АТ IgM и IgG или суммарных АТ к АГ лептоспир.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики

Диагностическая чувствительность выявление ДНК лептоспир методом ПЦР в крови пациентов, взятой на первой неделе заболевания, составляет 55–90%, на второй неделе заболевания – 30–40%, на третьей неделе заболевания ДНК лептоспир в крови обнаруживается у 15–25% больных. Специфические АТ при использовании методов микроагглютинации (РМА) или реакции макроагглютинации на стекле (слайд-агглютинация) на первой неделе заболевания выявляются у 18–30% заболевших, на второй-третьей неделе заболевания – у 70–80%, на 4-й неделе – у 90%. При использовании метода ИФА АТ IgM и IgА можно определить на первой неделе болезни, максимальных значений эти АТ достигают к третьей неделе. Начало обнаружения АТ IgG – 5–6 дни болезни, их максимальная концентрация наблюдается на 5-й неделе заболевания. При тяжелом течении лептоспироза отмечается подавление иммуногенеза, следствием чего является замедление первичного появления АТ или их отсутствие.

При использовании для лабораторного подтверждения лептоспироза результатов определения АТ необходимо исследовать образцы крови, взятые с интервалом в 7–10 дней (парные сыворотки). При применении РМА с использованием панели лептоспир различных серогрупп, актуальных для территории, где произошло заражение больного, возможно определение серогрупповой принадлежности выявленных АТ, что важно для последующего эпидобследования очага.

Для визуального обнаружения лептоспир методом микроскопии и их изоляции с использованием культуральных методов, пробы крови рекомендуется исследовать на 1-й неделе заболевания, СМЖ (при развитии серозных менингитов) – на 2-й, мочу – на 3-й неделе.

Обнаружение лептоспир в пробах биологического материала при использовании микроскопии является достаточно простым методом раннего подтверждения лептоспирозной этиологии заболевания. Использование микроскопических исследований ограничивает низкая аналитическая чувствительность: 106 клеток/мл. Ограничение на использование данного метода накладывает также короткий период выживания лептоспир в моче: при температуре 20–25°С материал должен быть исследован в течение 6–8 часов с момента взятия пробы.

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований

Клинический диагноз лептоспироз считают подтвержденным при выделении инфекционного агента, идентифицированного как патогенный для человека вид лептоспиры; при выявлении методом ИФА АТ IgM или IgA и роста титров IgG при исследовании образцов крови, взятых в динамике; при выявлении методами РМА, слайд-агглютинации нарастания титров АТ в образцах крови, взятых в динамике. Обнаружение ДНК лептоспир в крови и СМЖ пациента является основанием для предварительной постановки диагноза.

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

"Лептоспиры. Диагностика лептоспироза"

Нижний Новгород 2010 г.

1. Историческая справка

Лептоспироз (лат. – Leptospirosis ; болезнь Вейля, тиф собак) – в основном остро протекающая природно-очаговая болезнь животных многих видов и человека, проявляющаяся кратковременной лихорадкой, гемоглобинурией или гематурией, геморрагиями, желтушным окрашиванием и очаговыми некрозами слизистых оболочек и кожи, атонией желудочно-кишечного тракта, абортами, маститами, рождением нежизнеспособного потомства, периодической офтальмией и менингоэнцефалитами, снижением продуктивности животных.

80-е годы 19 века являются чрезвычайно насыщенным периодом микробиологических исследований и открытий. Вейн – врач-клиницист, описал первый реакцию агглютинации при риккетсиозе, сыпном тифе. Он подчеркнул, что это заболевание имеет выраженную вариабельность симптомов, оно может протекать в форме ОПН, с выраженным геморрагическим синдромом, всегда сопровождается желтухой.

В 1888 году Васильев независимо от Вейна описал лептоспироз как самостоятельную желтуху ничего общего не имеющую с болезнью Боткина.
Возбудитель поселяется в желчи, и может закупоривать желчные протоки.

Также лептоспироз называется иктерогеморрагическая лихорадка.
В 1928 году В.А. Башенин описал безжелтушную форму лептоспироза, и назвал ее водной лихорадкой. В 1972 году предложено разделить лептоспироз на две группы: желтушный лептоспироз и безжелтушный лептоспироз.

Возбудитель лептоспироза был обнаружен в 1914 году японскими учеными Инардо и Идо (в 1915 году), они независимо друг от друга выделили возбудителя.

2. Распространение в природе

лептоспироз заболевание лечение диагностирование

Лептоспирозы относятся к группе заболеваний, которые являются не только зоонозами, но и природно-очагововыми заболеваниями. Основными резервуарами инфекции являются стоячие водоемы, в которых, как правило, сохраняются лептоспиры годами, а дикие грызуны (мыши-полевки, тушканчики и др.) являясь чрезвычайно чувствительными объектами для воспроизведения данной инфекции, поддерживают патологический процесс, болея лептоспирозом, который может протекать у них в различных формах – от бессимптомного носительства до тяжелых генерализованных форм.

Природные очаги лептоспирозов, обусловленные наличием инфекции среди диких животных, имеют ландшафтную стациальную приуроченность. Они располагаются преимущественно в лесной, лесотундровой зонах, а по долинам рек и ирригационным каналам проникают в лесостепную, степную и полупустынные зоны. В пределах своего ареала они встречаются не повсеместно, а в понижениях рельефа, где приурочены главным образом к сырым заболоченным и чрезмерно увлажненным местам. Наивысшей интенсивности лептоспирозного эпизоотического процесса и наибольшего эпидемического потенциала природные очаги достигают в летне-осенний период (июль – октябрь), что связано с пиком численности мелких млекопитающих.

Антропургические очаги, в противоположность природным очагам, не имеют определенной ландшафтной приуроченности и могут возникать повсеместно как в сельской местности, так и в городах. Антропургические очаги имеют важнейшее эпидемиологическое значение, особенно в условиях формирования крупных животноводческих хозяйств. Активность эпизоотического процесса возрастает летом. Манифестность инфекции при этом увеличивается. После острой инфекции через 10 – 20 дней у ряда особей развивается лептоспироносительство, которое продолжается в течение нескольких месяцев и до 1–2 лет, у свиней практически в течение жизни. Все вышеизложенное свидетельствует о том, что для эпизоотического процесса лептоспироза в природных и антропургических очагах характерна саморегулирующаяся смена фаз резервации и эпизоотического распространения возбудителя.

Грызуны выделяют возбудителя с мочой в окружающую среду: почву, инфицируя растения, что приводит к формированию природных очагов, но сформированных дикими животными, которые поедают растения, пьют инфицированную воду. В природе постоянно поддерживается циркуляция лептоспироз. Массивность инфицирования лептоспирами водоема зависит от количества рядом обитающих грызунов, которые являются основными поставщиками инфекции.

Таким образом, можно сказать, что любой район, любая сельская местность, может быть районом обитания грызуном, то есть любая местность может быть опасна с точки зрения формирования очага.

Механизм развития и проявления эпизоотического процесса (резервуар возбудителя).

Хозяевами лептоспир являются мелкие млекопитающие в природных очагах, синантропные грызуны, а также свиньи, крупный рогатый скот и другие домашние животные. Обычно в популяции диких штаммов лептоспир, выделенных от животных, характеризующихся высокой степенью вирулентности, содержатся и невирулентные клетки в 10 7, как и в невирулентной популяции – 107 вирулентных клеток.

У крупного рогатого скота, помимо бессимптомных форм, имеют место проявления иктерогемоглобинурии и желтухи. У супоросных свиноматок и реже у коров заболевание сопровождается абортами. Популяция каждого отдельного серовара лептоспир поражает главным образом популяции определенного вида животных. Этой особенностью определяются основные источники лептоспирозной инфекции. Но у совместно обитающих видов животных наблюдаются и перекрестные заражения.

С экологической точки зрения отдельные серогруппы имеют видовые свойства. Однако по официальной классификации все патогенные лептоспиры объединены пока в один вид L. interrogan в отличие от сапрофитного вида L. biflеха.

Эпидемические лептоспиры в популяции или стаде млекопитающих передаются от особи к особи водным путем.

Наибольшую опасность представляют свиньи, которые бывают поголовно инфицированы. Чрезвычайно опасны собаки как резервуар лептоспир и источник инфекции. Собакам не отводилось должной роли примерно до 1992–93 года, когда резко повысилась роль собачьей лептоспиры в возникновении лептоспироза. Этот лепоспироз, как правило, безжелтушный, протекает не так тяжело, без выраженных геморрагического синдрома, ОПН, но явления менингита есть. К 1995 году эта лептоспира опять стала занимать малый удельный вес в заболевании лептоспирозом. В 1996 года эта лептоспира занимала в структуре 8%.

Особую эпизоотологическую и эпидемиологическую опасность представляют бессимптомно больные животные-лептоспироносители. Количество лептоспироносителей на неблагополучной по лептоспирозу ферме среди крупного и мелкого рогатого скота колеблется от 1–5 до 10–20%; среди свиней – 30–80%. Срок лептоспироносительства после переболевания или скрытого инфицирования довольно продолжительный: у крупного рогатого скота 1,5–6 месяцев; у овец, коз – 6–9 месяцев; у свиней – от 15 дней до 2 лет; у собак – от 110 дней до 3 лет; у кошек – от 4 до 119 дней; у кур, уток, гусей – от 108 до 158 дней.

Выделяющиеся из организма больных животных и микробоносителей лептоспиры инфицируют воду, корма, пастбища, почву, подстилку, и другие объекты внешней среды, через которые заражаются здоровые животные. Среди указанных факторов передачи возбудителя водный путь является основным. Особую опасность представляют невысыхающие лужи, пруды, болота, медленно текущие речки, влажная почва.

Животные заражаются лептоспирозом чаще при водопое, при поедании трупов грызунов – лептоспироносителей или кормов, инфицированных мочей этих грызунов. Промысловые животные при клеточном их содержании инфицируются в основном при поедании продуктов убоя больных лептоспирозом животных; свиньи – во время купания в открытых водоемах, молодняк – при выпойке молока от больных матерей.

Возможно и внутриутробное заражение у крупного рогатого скота, овец и свиней. Доказана возможность передачи возбудителя половым путем.

Лептоспиры проникают в организм животного и человека через поврежденные участки кожи (царапины, порезы, раны, укусы), слизистые оболочки ротовой и носовой полостей, глаз, половых путей и через желудочно-кишечный тракт.

Лептоспироз чаще встречается в местностях, где почва влажная, содержит много гумуса, имеет нейтральную или слабощелочную реакцию.

Болезнь наблюдается в любое время года, но у животных с пастбищным содержанием – преимущественно в летне-осенний период. Так, анализ заболеваемости крупного рогатого скота лептоспирозом в России показывает, что на июнь-сентябрь приходится 77% заболевших животных. Сезонная динамика болезни в различных природно-экономических зонах неодинакова.

Лептоспироз свиней относится к числу болезней без выраженной сезонности, проявляющийся с равной интенсивностью на протяжении всего года. Это объясняется тем, что водный фактор в распространении заболевания среди свиней имеет значительно меньшее значение, чем для животных других видов.

Лептоспироз проявляется в виде небольших эпизоотий и спорадических случаев. Характерная особенность эпизоотии состоит в том, что вначале в течение 5–10 дней заболевает небольшая группа животных, затем вспышка затихает, но через несколько дней снова повторяется. Это обстоятельство связано с накоплением возбудителя инфекции во внешней среде, т. к. длительность паузы примерно равна инкубационному периоду.

Главной эпизоотологической особенностью лептоспироза сельскохозяйственных животных в настоящее время является преобладание бессимптомных форм инфекции в виде лептоспироносительства и лептоспирозной иммунизирующей субинфекции.

УДК: 616.986.7:576.856.7]-07
Год издания: 2009

Разработка отечественной диагностической иммуноферментной тест-системы для выявления иммуноглобулинов класса G к возбудителю лептоспироза в сыворотке крови человека

Лептоспироз занимает ведущее место в структуре природно-очаговых инфекций и представляет серьезную опасность для здоровья населения. Заболевание вызывают микроорганизмы из рода Leptospira interrogans, объединенные в настоящее время в 23 серогруппы и включающие более 200 сероваров. Инфекция широко распространена во всем мире. Клиника лептоспироза характеризуется выраженным полиморфизмом, цикличностью и различной степенью тяжести - от легких, стертых до крайне тяжелых форм. В период разгара болезни выражены поражения печени, почек, легких, сердечно-сосудистой и центральной нервной систем, есть признаки генерализованного капилляротоксикоза и нарушения в системе гемостаза. Летальность при лептоспирозе зависит от многих причин и в разных странах колеблется от 5 до 48%. Непосредственной причиной смерти является токсико-инфекционный шок, острая почечная недостаточность. Полиморфизм клинической картины, сочетание синдромов или преобладание одного из них определяет трудности в лабораторной диагностике лептоспироза, в постановке своевременного диагноза, оценке тяжести состояния больного и прогнозировании исхода заболевания.

Снижение уровня официальной заболеваемости лептоспирозом в последние годы до 2-5 случаев в год определяет отсутствие настороженности у практических врачей в отношении данной инфекции. В то же время ландшафтно-климатические условия в республике способствуют функционированию активных природных очагов инфекции и циркуляции возбудителя в популяции населения. Недостаток точных эпидемиологических данных по лептоспирозу диктует необходимость проведения масштабных скрининговых исследований.

На практике лабораторная диагностика лептоспироза проводится с использованием реакции микроагглютинации (РМА) и непрямой реакции иммунофлюоресценции (нРИФ). Реакции имеют определенные недостатки, главными из которых являются трудоемкость, длительность, ограничения при выявлении противолептоспирозных антител вследствие замедленного иммуногенеза у заболевшего. Создание диагностической тест-системы, отличающейся высокой чувствительностью и специфичностью, простотой выполнения анализов и возможностью автоматизации получения результатов, исключающей субъективизм в оценке результатов, является актуальной и своевременной.

Цель исследования - разработка отечественной тест-системы на основе иммуноферментного анализа (ИФА), предназначенной для серологической диагностики лептоспироза.

Положительный контрольный образец (K+) получен путем объединения нескольких инактивированных (56 °С, 3 ч) сывороток крови переболевших лептоспирозом людей с высокими титрами противолептоспирозных антител класса G (титры в РМА не ниже 1:400). Отрицательным контрольным образцом (K-) служит сыворотка крови здорового человека, инактивированная прогреванием и не содержащая антител к НВsАg, ВИЧ и вирусу гепатита С. Конъюгат представлен моноклональными мышиными антителами против иммуноглобулинов G человека, конъюгированными с ферментом пероксидазой хрена. Хромоген - 3,3′,5,5′-тетраметилбензидин. В состав тест-системы также входят 10-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином-20 (ФСБ-Т) для промывания планшетов, разводящий буферный раствор для сывороток (РБР-С), разводящий буферный раствор для конъюгата (РБР-К) и стоп-реагент - 0,1н серная кислота.

На диагностическую тест-систему разработан Лабораторный регламент и Технические условия на производство. Тест-система проходит регистрацию в Министерстве здравоохранения в соответствии с установленным порядком.

Область применения: клиническая и лабораторная диагностика.
Рекомендации по использованию: диагностическая тест-система предназначена для серологической диагностики лептоспироза и позволяет выявлять антитела класса G к возбудителю лептоспироза Leptospira interrogans в сыворотке и плазме крови человека методом иммуноферментного анализа. Может быть использована для текущей и ретроспективной диагностики лептоспироза при эпидемиологических исследованиях и мониторинге терапии заболевания.
Предложения по сотрудничеству: изготовление по заказам малых партий продукции для оценки эффективности тест-системы с привлечением Республиканского и областных центров гигиены, эпидемиологии и общественного здоровья МЗ РБ.

Читайте также: