Питательный агар для культивирования и выделения возбудителя бруцеллеза

Питательный агар для культивирования и выделения возбудителя бруцеллеза, сухой. Набор реагентов для бактериологических исследований.

Описание

Набор реагентов состоит из одной банки с Бруцеллагаром и 12 флаконов с селективными добавками (СД 1 и СД 2).

Бруцеллагар представляет собой смесь сухих компонентов в виде мелкодисперсного гигроскопичного порошка светло-коричневого цвета.

СД 1: 6 флаконов с полимиксином В сульфат – мелкодисперсный порошок белого цвета.

СД 2: 6 флаконов с афотерицином В – пористая масса желтого цвета.

Бруцеллагар выпускается в полиэтиленовых банках по 250 г, СД 1 и СД 2 во флаконах по 0,005 г и 0,01 г соответственно.

Совокупность компонентов, входящих в состав среды, обеспечивает питательные потребности для роста бруцелл и др. высокотребовательных микроорганизмов.

Бруцеллагар представляет собой смесь сухих компонентов из расчета, г/л:

Панкреатический гидролизат рыбной муки (ПГРМ) …………………… 7,5
Пептон мясной ……………………………………………………………. 7,5
Панкреатический гидролизат казеина (ПГК) …………………………….. 10,0
Стимулятор роста гемофильных микроорганизмов ……………………… 5,0
Дрожжевой экстракт ………………………………………………………. 3,0
Д-глюкоза …………………………………….……………………………. 2,0
Натрий хлористый …………………………………………………………. 3,5
Тиамина хлорид ….……………………………………………..………… 0,005
meso-Erythritol ……………………………………………………………. 0,01
Натрий пиросернистокислый (натрия метабисульфит) …………..…….. 0,1
Агар микробиологический …………………………………….…………… 10,0±3,0
СД 1, г/л:
Полимиксина В сульфат …………………………………………………. 0,005
СД 2, г/л:
Амфотерицин В …………………………………………………………… 0,01

Бруцеллагар Оболенск обеспечивает рост бруцелл не позднее 72 ч инкубации при температуре (37±1)°С и подавляет рост эшерихий и грибов.

Объекты исследований в клинической микробиологии.

7.1 Приготовление Бруцеллагара для культивирования бруцелл.

Препарат в количестве, указанном на этикетке, тщательно размешивают в 1 л дистиллированной воды, кипятят в течение 3 мин до полного расплавления агара и стерилизуют автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин.

7.2 Приготовление Бруцеллагара с селективными добавками для выделения бруцелл.

Для приготовления 1 л среды с селективными добавками во флаконы с СД 1 и СД 2 наливают по 5 мл дистиллированной воды, вносят в стерильный, охлажденный до температуры 50-55 °С Бруцеллагар (п. 7.1), тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри.

Готовая питательная среда непрозрачная коричневого цвета с темно-коричневыми вкраплениями.

Готовую среду можно использовать в течение 7 сут после её приготовления при условии хранения при температуре 2-8 °С.

7.4. Исследуемый материал вносят соответственно на две чашки Петри с Бруцеллагаром с СД и равномерно распределяют микробную взвесь покачиванием чашек по всей поверхности. Инкубируют при температуре (37±1) °С в течение 72 ч.

Учет результатов проводят не позднее 72 ч инкубации визуально учитывая наличие и характер роста бруцелл — выпуклые, гладкие, бесцветные, мутноватые, круглые колонии диаметром 1,0-1,5 мм.

Отмечают отсутствие роста тест-штаммов E.coli и C. albicans на чашках Петри со средой Бруцеллагар и наличие роста на контрольных средах.

Для получения достоверных результатов посевы образцов производить не менее чем в трех повторностях.

Набор реагентов необходимо хранить в герметично закрытой упаковке при температуре от 2 до 30 С. СД хранят при температуре 2-8 °С.

Срок годности набора реагентов: Бруцеллагара – 2 года, СД 1 и СД 2 – не менее срока годности среды. Среда с истекшим сроком годности использованию не подлежит. После вскрытия банки с Бруцеллагаром гарантируется соответствие требуемым параметрам при соблюдении условий хранения (влажность, температура, герметичность) до окончания срока годности.

Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей инструкции по применению.

Наименование товаров Фасовка
Товар основной /микробиология/
Оболенск ФБУН ГНЦ ПМБ
FT- агар (Набор реагентов для бактериологических исследова-ний "Питательный агар для культивирования и выде-ления туляремийного микроба сухая" (FT-агар) комп.:0,25+ добавка 0,045) Набор
Набор питательных сред для ускоренного определения чувствительности микобактерий туберкулеза к пиразинамиду (PZA-тест) Набор
SS-агар. Набор реагентов для бактериологических исследований "Питательная среда для выделения сальмонелл и ши-гелл сухая" (SS-агар)" (Оболенск) 0,25 кг
ТCBS - агар. Набор реагентов для бактериологических исследова-ний "Питательная среда для выделения и культивиро-вания возбудителя холеры и других энтеропатогенных вибрионов сухая" ( ТCBS - агар) (Оболенск) 0,25 кг
Агар МакКонки (0,25) (Об) 0,25 кг
Среда типа АГВ (Оболенск) (Питат. среда для опред. атибиотикочувствит. микроорганизмов, сухая) 0,25 кг
Бифидум- среда (Оболенск) (Питат. среда для культив. и выдел. бифидобактерий) 0,25 кг
Бордетелагар (Оболенск) (Питат. среда для выделения и культивирования коклюшного микроба, сухая) 0,25 кг
Бруцеллагар (Питательная среда для выделения бру-целл сухая) (Оболенск)
Бруцеллагар Набор реагентов для бактериологических исследова-ний "Питательный агар для культивирования и выде-ления возбудителя бруцеллеза сухой" (Оболенск) Набор
Бульон МакКонки (Оболенск) 0,25 кг
Висмут-сульфит -агар (Оболенск) Набор реагентов для бактериологических исследований "Питательная среда для выделения сальмонелл сухая" (Висмут-сульфит-ГРМ-агар) 0,25 кг
Питательная среда для культивирования и выделения гемофильной палочки, готовая к применению ( Гемофилус агар) (Оболенск) Набор
Среда Гисса-ГРМ с глюкозой /Оболенск/для идентификации энтеробактерий сухая 0,25 кг
Среда Гисса-ГРМ с лактозой (Оболенск) (Питат. среда для идентиф. энтеробактерий, сухая) 0,25 кг
Среда Гисса-ГРМ с мальтозой (Оболенск) (Питат. среда для идентиф. энтеробактерий, сухая) 0,25 кг
Среда Гисса-ГРМ с маннитом (Оболенск)(Питательная среда для идентификации энтеробактерий сухая) 0,25 кг
Среда Гисса-ГРМ с сахарозой (Оболенск) (Питат. среда для идентиф. энтеробактерий, сухая) 0,25 кг
Иерсиниозная среда(Оболенск) (питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза) 0,25 кг
Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс-выявления и идентификации спор возбудителя сибирской язвы (ИХ тест B.anthracis) НДС 10 % Набор
Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс-выявления и идентификации спор возбудителя сибирской язвы (ИХ тест B.anthracis) НДС 10 % Набор
Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс-выявления и идентификации возбудителя чу-мы (ИХ тест Y.pestis) НДС 10 % Набор
Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс-выявления и идентификации возбудителя чу-мы (ИХ тест Y.pestis) НДС 10 % Набор
Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс-выявления и идентификации возбудителя туляремии ( ИХ тест F.tularensis)
НДС 10 %
Набор
Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс-выявления и идентификации возбудителя туляремии ( ИХ тест F.tularensis)
НДС 10 %
Набор
Среда Кесслера-ГРМ (Оболенск) (Питат. среда для обнаружения бактерий кишечной палочки, сухая) 0,25 кг
Агар Клиглера-ГРМ (Оболенск) (Питат. среда для идентиф. энтеробактерий, сухая) 0,25 кг
SDS-бульон (Оболенск) (Питат. среда для выделения и индентиф. энтеробактерий, сухая) 0,25 кг
Коринебакагар (Оболенск) (Питат. среда для выделения коринебактерий) 0,25 кг
Коринетоксагар (Питат. среда д\опр. токсиоген. диф.микробов)(Оболенск) 0,25 кг
XLD-агар (Оболенск) (Питательная среда для выд.дифференции патологенных энтеробактерий) 0,25 кг
Лактобакагар (Оболенск) (Питат. среда для выдел. и культив. лактобацилл, сухая) 0,25 кг
Набор реагентов для быстрой идентификации возбудителя легионеллеза. (Тест полоска Legionella pneumophilla 1) Набор
Набор реагентов для быстрой идентификации Listeria.monocytoqenes в реакции латекс-агглютинации жидкий (Латексная тест-система Listeria.monocytoqenes) Набор
Среда Левина-ГРМ (Оболенск) (Питат. среда с эозин-метиленовым синим , сухая) 0,25 кг
Железо-глюкозо-лактозный агар с мочевиной (Олькеницкого) (Оболенск) (Питат. среда для идентиф. энтеробактерий , сухая) 0,25 кг
Питательный агар для выделения листерий (ПАЛ -0,25,Селективная добавка для выделения листерий- 5фл. Набор
Питательный агар для выделения и культивирования листерий ПАЛ (Оболенск) 0,25 кг
Питательный Бульон для выделения листерий (ПБЛ -0,25,Селективная добавка для выделения листерий- 5фл. Набор
Питательный бульон для выделения и культивирования листерий ПБЛ (Оболенск) 0,25 0,25 кг
Пептон основной сухой (Оболенск) 0,25 кг
Пизу среда (Оболенск) (Питат. среда для идентиф. коринебактерий по тесту расщепления цистина, сухая) 0,25 кг
Питательный ГРМ-агар (Оболенск) (Питат. агар для культив. микроорганизма, сухой) 0,25 кг
Питательный ГРМ-бульон (Оболенск) Набор реагентов для бактериологических исследований " Питательный бульон для культивирования микроор-ганизмов сухой" (ГРМ-бульон)" 0,25 кг
Агар Плоскирев - ГРМ (Оболенск) (Питат. среда для выдел. шигелл и сальмонелл, сухая) 0,25 кг
RVS-бульон /Оболенск/(Питательный бульон для накопления сальмонелл по Раппапорту-Вассилиадису) 0,25 кг
Ресселя ГРМ-среда (Оболенск) (Питат. среда для первичной идент. энтеробактерий, сухая) 0,25 кг
Сабуро мальтоза агар (Оболенск) 0,25 кг
Сабуро среда (среда №2) (Оболенск) (Для выращивания грибов) 0,25 кг
Сибиреязвенная среда (Оболенск) (набор) 0,25среды+6 флаконов сел.доб Набор
Набор реагентов для бактериологических исследований "Питательная среда для выделения возбудителя сибирской язвы сухая" НДС 10 % 0,25 кг
Питат среда №14 ГРМ (Оболенск) (цитратный агар Симмонса) 0,25 кг
Сорбитол E.coli 0157:Н7 агар (Питательная среда для выделения и дифференциации E.сoli O 157: H7 и других энтеробактерий по признаку ферментации сорбита сухая)(Оболенск) 0,25 кг
Питат. среда № 1(для выращивания бактерий) (Оболенск) 0,25 кг
Питательная среда № 10 ГРМ (Оболенск)(для идентификации Staphylococcus aureus ) 0,25 кг
Питательная среда № 11 ГРМ (Оболенск)(лактозный бульон - среда для предварительного накопления бактерий се-мейства Enterobacteriaceae) (лактозный бульон) 0,25 кг
Питат. среда № 13 (Оболенск) (Трехсахарный агар с солями железа для выяв. серовод. и опред. фермент. лактозы, глюк., сахар.) 0,25 кг
Питат.среда №15 ГРМ (Оболенск) (для определения индола) 0,25 кг
Питат.среда №3 ГРМ (Оболенск) (для обогащения энтеробактерий) 0,25 кг
Питательная среда № 6 ГРМ (Оболенск)(для определения фер-ментации глюкозы (Оболенск) 0,25 кг
Питат. среда № 7 ГРМ (Оболенск) (для опред. нитритов в нитраты) 0,25 кг
Питат.среда №8 ГРМ (д\опред. синегнойной палочки и стафилококков) (Оболенск) 0,25 кг
Питат.среда №9 ГРМ (Оболенск) (для выявления пигмента пиоцианина) 0,25 кг
Среда Эйкмана с глюкозой (Оболенск) 0,25 кг
Среда Эйкмана с лактозой (Оболенск) 0,25 кг
Стафилококкагар (Оболенск) (Питат. среда для выделения стафилококков, сухая) 0,25 кг
Сульфитный агар Модификация № 1 Оболенск(Питательная среда для выявления сульфитредуцирующих клостридий 0,25 кг
Сульфитный агар Модификация № 2 Оболенск (Питательная среда для выявления сульфитредуцирующих клостридий 0,25 кг
Сульфитный агар Модификация № 3 Оболенск (Питательная среда для выявления сульфитредуцирующих клостридий 0,25 кг
ТБ тест-набор (набор питательных сред для ускоренного определения лекарственной чувствительности и первичной идентификации микобактерий туберкулеза) Оболенск Набор
Набор реагентов для быстрой идентификации возбуди-теля легионеллеза "Тест-полоска Leqionella pneumo-philla 1" / 10 полосок в пластиковой пробирке Набор
Набор реагентов для быстрой идентификации листерий "Тест-полоска Listеria spp." 10 полосок в пластиковой пробирке Набор
Набор реагентов для быстрой идентификации возбуди-теля холеры О1 группы "Тест-полоска V.cholerae O1" / 10 полосок в пластиковой пробирке / Набор
Набор реагентов для выявления специфич.ДНК-маркеров Escherichia coli О 157:Н7 методом полимеразной цепной реакции "Тест-система ТЭК-О157" Набор
Тиогликолевая среда (Оболенск) Набор реагентов для бактериологических исследований "Питательная среда для контроля стерильности сухая" (Тиогликолевая среда)" 0,25 кг
Набор реагентов для бактериологических исследований "Питательная среда для культивирования и выделения туляремийного микроба, готовая к применению" НДС 10 % 0,25 кг
ЧПС (Питательная среда для культивирования чумного микроба) (Оболенск) 0,25 кг
Шоколадный агар (Оболенск)Набор реагентов для бактериологических исследований "Питательная среда для выделения возбудителей гной-ных бактериальных менингитов, готовая к примене-нию" (Шоколадный агар) Набор
Щелочной агар (Оболенск) (Питат. среда для выделения и культивор. холерного вибриона, сухая) 0,25 кг
Агар Эндо-ГРМ (среда №4) (Оболенск)(Питательная среда для выделения энтеробактерий сухая) 0,25 кг
Энтерококкагар (Оболенск) (Питат. среда для выделения энтерококков, сухая) 0,25 кг

Выпускает высококачественные питательные среды для санитарной и клинической микробиологии, для контроля микробной загрязненности лекарственных средств, а также среды для диагностики дифтерии, холеры, туляремии, сибирской язвы, иерсиниозов, дисбактериозов, листериоза, гемофильной палочки, кампилобактериоза. Разработки защищены патентами.

Качество питательных сред и условия культивирования для получения бруцелл в первой генерации имеют очень важное значение не только для количества результативных исследований, но и для выделения возбудителя болезни с наименьшими признаками диссоциации.

Стабильность последующих генераций также зависит от условий культивирования и состава питательных сред. Поэтому хотя изготовление питательных сред производится строго по рецептам, все же необходимо в диагностических лабораториях отрабатывать методику приготовления и контроля питательных сред. Требуется испытывать их качество на референтных штаммах бруцелл. Это особенно важно при использовании нестандартных ингредиентов среды.

В 5-м докладе Комитета экспертов по бруцеллезу ФАО/ВОЗ предлагается испытать основные питательные среды (в которые не добавляются ингибиторы) на рост клеток 2-го биотипа Br. abortus при незначительном их содержании (5 -10 клеток) о засеваемом материале.

Наиболее популярной средой, рекомендованной указанным Комитетом, является селективный сывороточно-декстрозный агар, на котором Br. abortus, Br. melitensis и Br. suis и их биотипы растут лучше, чем на других средах. Эта среда содержит 5% сыворотки крови и следующие антибиотики: бацитроцин, полимиксин В и циклогексимид. Кроме того, амфотериксин может заменить циклогексимид или может быть добавлен к нему.

Считается, что добавление красок может частично препятствовать росту биотипов основных видов бруцелл, но краски все же рекомендуются.

Ниже приводится методика изготовления питательных сред, использующихся в нашей стране.

Плотный печеночно-глюкозно-глицериновый агар (ППГГА). Эту среду применяют для исследования и культивирования Br. abortus, Br. melitensis и Br. suis.

Берут 400 г свежей говяжьей печени, освобождают ее от жора и пленок, измельчают на куски по 5—8 г, добавляют 0,5 л водопроводной воды и кипятят в течение 1 ч (при большом объеме мечет, загружают в кипящую воду). Затем фильтруют через нейлоновый или ватный фильтр.

Этот печеночный отвар разводят пополам водопроводной водой, добавляют 1% пептона, 0,5% химически чистого хлорида натрия, 2,5% агара и 17 мл на 1 л 10%-ного раствора гидрокарбоната натрия.

Затем среду автоклавируют при 115° С в течение 20 мин, отстаивают в автоклаве 3—4 ч до осаждения грубых частиц и фильтруют в горячем виде через ватный или нейлоновый фильтр, устанавливают pH 7—7,2. В этот печеночный агар добавляют 1 % виноградного сахара и 2—3% глицерина. Среду разливают в пробирки или посевные колбы и стерилизуют однократно при температуре 110° С в течение 20— 25 мин.

На этой свежей (до 3-суточной давности) среде без ингибиторов при первичном посеве хорошо растут бруцеллы из свежих или замороженных абортированных плодов и отдельных органов животных, убиваемых с диагностической целью, содержимого полостей, абсцессов. Длительные пересевы музейных штаммов не вызывают большой их изменчивости. Эту же среду применяют при бактериостатическом методе дифференциации бруцелл.

Полужидкий сывороточный агар. Данную среду готовят по следующей прописи. Берут печеночного отвара (см. выше) и мясного настоя по 25%, водопроводной воды — 50%, добавляют пептона 1%, хлорида натрия — 0,5%, агара — 0,15—0,2%, устанавливают pH 7—7,2. Смесь разливают в колбы и стерилизуют в автоклаве при 115° С в течение 20—25 мин. Хранят среду при 0—4° С. Перед употреблением к среде добавляют 10% стерильной овечьей или бычьей сыворотки и разливают в пробирки,

Сывороточно-декстрозный агар. К 835 мл дистиллированной воды добавляют 15 г агара, 10 г пептона, 5 г химически чистого хлорида натрия и 165 мл мясной воды. После смешивания содержимое колбы обрабатывают текущим паром в течение 1 ч. Устанавливают pH 7,8. Затем среду автоклавируют в течение 30 мин при 127° С (0,2 М/Па) для осаждения фосфора. После автоклавирования среду фильтруют через бумажный фильтр, регулируют pH до 7,4, разливают смесь в мерную посуду, стерилизуют при 116 С в течение 15 мин. Перед употреблением среду расплавляют, остуживают до 50 С, после чего к ней добавляют нормальную лошадиную или бычью сыворотку и раствор декстрозы. Эту смесь предварительно фильтруют через фильтр Зейтца. Окончательная концентрация сыворотки в среде должна быть 5%, декстрозы— 1%.

Печеночный агар Хеддлесона. Вначале готовят печеночный отвар. К 500 г свежего фарша из говяжей печени (без жира и пленок) добавляют 500 мл воды, затем кипятят в течение 1 ч при помешивании, фильтруют через ватно-марлевый или нейлоновый фильтр и стерилизуют в автоклаве.

Для изготовления агаровой среды берут 500 мл воды, 10 г пептона, 5 г хлорида натрия, 20 г агара и автоклавируют в течение 30 мин, затем добавляют к среде 500 мл печеночного отвара, охлаждают до 60° С, устанавливают pH 7. К 1 л среды добавляют один яичный белок, автоклавируют в течение 30 мин при 120° С, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавливают pH 7, разливают и стерилизуют в автоклаве при 115° С в течение 30 мин.

Среда Первушина для выделения гемокультур. Мясо-пептонный бульон (МПБ), содержащий 1% глюкозы и 4% глицерина, разливают в колбы по 100 мл. Затем вводят в них по 0,5 г гигроскопической стерильной ваты. Стерилизуют и используют для посева крови.

Полужидкий агар (ПЖА) и МПБ с добавлением 1 % глюкозы и 2—3% глицерина без введения в колбы комков ваты могут быть использованы для выращивания бруцелл из крови животных и других материалов, пробы которых в стерильном состоянии.

Картофельный агар Корнеевой. Берут хорошо очищенный картофель в количестве 500 г, нарезают ломтиками, варят в 1 л водопроводной воды. Затем отвар фильтруют через слой гигроскопической ваты и доливают водой до 1 л. На 1 л фильтрата добавляют следующие ингредиенты: хлорида натрия — 5 г, пептона — 10 г, глицерина — 30 г, глюкозы—10 г, ангара — 20 г для пробирок и 30 г для колб. Смесь варят до расплавления агара, затем ее отстаивают в теплом месте. В остывшем агаре нижний слой с осадком срезают, а прозрачную часть агара режут кусочками и расплавляют. Расплавленный агар фильтруют через ватный фильтр, устанавливают pH 7. Стерилизуют при 115° С в течение 20—30 мин и устанавливают pH 6,8.

Среда Кроля. Указанную среду применяют при выделении культур бруцелл из молока. К печеночному агару Хеддлесона добавляют насыщенный раствор генцианвиолета в соотношении 1 : 100000. Выращивают первые 15 ч в обычных условиях, а затем при наличии в сосуде 10% СO2.

Среда Moore и др. Эту среду применяют для выделения культуры Br. canis из крови собак. В колбе вместимостью 100 мл готовят скошенный триптозный агар (коммерческий). Затем в эту же колбу вводят 15 мл бульона, приготовленного из мозга и мышцы сердца крупного рогатого скота. Затем берут по 2 мл крови в асептических условиях из яремной вены собак и тут же добавляют ее в среду, тщательно смешивают и инкубируют 3 нед, придав колбам наклонное положение, чтобы часть плотной среды была открыта.

Наиболее целесообразными являются посевы на плотные среды свежевзятого материала. На плотных средах растут изолированные колонии, что обеспечивает меньшую их диссоциацию по сравнению с жидкими средами. Отсев на плотную среду с жидких сред следует производить через 2—3-е сут. При выращивании культуры бруцелл на жидкой среде, в которой находились одновременно посторонние микроорганизмы, чаще обнаруживаются измененные варианты.

Из загрязненного посторонней микрофлорой материала, например, несвоевременно доставленные абортированные плоды (направленные в незамороженном и неохлажденном виде через сутки после выкидыша), куски плаценты, отдельные органы животных или плодов, моча, содержимое полостей трупов и др., лучше производить параллельно биопробу на морских свинках или белых мышах.

Посевы следует делать на ППГГА с содержанием в нем генцианвиолета или кристаллвиолета, которые в виде насыщенного, водного раствора вводят в среду в соотношении 1 : 200000.

При посевах крови в комбинированных условиях (косяк ППГГА + жидкая среда) СO2 может быть введен в колбу через резиновую нетолстую пробку, под давлением, через иглу со шлангом, соединенным с источником СO2.

Посевы на куриные эмбрионы и жировые (неоплодотворенные) яйца кур лучше производить только материалом, взятым в стерильных условиях.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Читайте также:

Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!
При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.

Copyright © Иммунитет и инфекции