Иммунохроматографический тест для выявления сибирской язвы

На правах рукописи

Хлынцева Анна Евгеньевна

РАЗРАБОТКА КОМПЛЕКСА ИММУНОДИАГНОСТИЧЕСКИХ ТЕСТ-СИСТЕМ ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ

03.02.03 - микробиология 03.01.06 - биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

доктор биологических наук, профессор Шемякин Игорь Георгиевич;

кандидат биологических наук Козырь Арина Владимировна

Афанасьев Станислав Степанович, заслуженный деятель науки, доктор медицинских наук, профессор, Федеральное бюджетное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им Г. Н. Габричевского" Роспотребнадзора, заместитель директора по биотехнологии

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова))

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. Разработка современных диагностических систем для детекции возбудителя сибирской язвы представляет собой одну из наиболее актуальных задач борьбы с сибиреязвенной инфекцией. Сибирская язва является острым инфекционным заболеванием людей и животных, вызываемым аэробным спорообразующим грамположительным микроорганизмом Bacillus anthracis.

По классификации ВОЗ Россия относится к зоне спорадического проявления инфекции. Однако, в последние годы в стране отмечается неуклонный рост территорий, неблагополучных по сибирской язве, таким образом, службы надзора Российской Федерации оценивают санитарно-эпидемиологическую обстановку по этому заболеванию как напряженную [Лукьянова и др., 2011].

Возбудитель - В. anthracis представляет собой грамположительную палочку длиной 6-10 мкм и шириной 1-2 мкм. Она неподвижная, образует споры и капсулу. Хорошо растет на различных питательных средах. Споры сибирской язвы весьма устойчивы во внешней среде, они могут сохраняться в почве несколько десятков, а, возможно, и сотни лет, формируя устойчивые природные очаги инфекции.

Источником В. anthracis считают больных домашних и диких животных, организм которых предоставляет естественные условия для развития и размножения этого патогена [Ипатенко и др., 1987]. При этом источником могут быть и животные-бациллоносители, с атипичным или бессимптомным течением заболевания [Онищенко и др., 1999]. Заражение может наступать при уходе за больными животными, убое скота, обработке мяса, а также при контакте с продуктами животноводства (шкуры, кожи, меховые изделия, шерсть, щетина), обсемененными спорами сибиреязвенного микроба. Основным резервуаром В. anthracis считается почва [Ипатенко и др., 1987]. К тому же, почва может быть и непосредственным источником инфекции сибирской язвы - известны случаи заболевания людей и животных, возникшие в результате контакта с заражённой почвой [Маринин и др. 2008].

Важнейшую роль играет ранняя диагностика инфекции и необходимость детекции низких концентраций возбудителя сибирской язвы в окружающей среде и продуктах питания. К настоящему времени в нашей стране и за рубежом разработан целый ряд экспериментальных иммунодиагностических тест-систем, предназначенных для выявления возбудителя сибирской язвы и его антигенов [Терешкина и Девдариани, 2008]. Однако экспериментальные разработки зачастую не завершаются внедрением результатов в практику на уровне сертифицированных

препаратов, как правило, из-за несоответствия принятым параметрам специфичности (неспецифическое взаимодействие с близкородственными видами, такими как Bacillus cereus и др.).

Таким образом, для разработки эффективных средств иммунодиагностики сибирской язвы необходимы дополнительные фундаментальные и прикладные исследования. Помимо создания собственно диагностических систем, существенную роль в разработке новых диагностических средств играет идентификация антигенов или их фрагментов, специфичных исключительно для В. anthracis. В качестве основы для быстрой разработки различных типов современных диагностикумов наиболее перспективными и универсальными являются панели моноклональных антител (МКА), на основе которых можно создавать широкий спектр диагностических средств, учитывающих как особенности патогенеза сибирской язвы, так и современные форматы высокочувствительных систем детекции микроорганизмов и их факторов вирулентности.

Цель исследования - создание комплекса высокоэффективных и чувствительных иммунодиагностических тест-систем для определения возбудителя сибирской язвы, основанных на специфичных МКА, анализ их эффективности и идентификация антигенной мишени МКА.

1. Получить и охарактеризовать панель моноклональных мышиных антител к В. anthracis. Провести изучение полученных МКА на наличие внутри- и межвидовой перекрестной активности при помощи коллекции патогенных и сапрофитных бацилл.

2. Разработать на основе полученных МКА диагностические тест-системы в формате ИФА и латекс-агглютинации.

3. Сконструировать систему для селективного концентрирования возбудителя сибирской язвы на основе магнитных частиц с иммобилизованными МКА.

4. Идентифицировать антигенную мишень полученных МКА, использованных при разработке диагностических тест-систем.

1. Получена и охарактеризована панель МКА к спорам В. anthracis. Определены изотипы антител, константы аффинности, подобраны диагностически значимые пары антител, не конкурирующих за связывание антигена. Показана специфичность взаимодействия антител с возбудителем сибирской язвы и отсутствие перекрестных реакций с близкородственными микроорганизмами.

2. Идентифицирована антигенная мишень МКА, использованных при разработке тест-систем, представляющая собой белок ЕА1, поверхностный антиген В. anthracis. Показано взаимодействие МКА, примененных при разработке тест-систем, с рекомбинантным белком ЕА1, полученным в гетерологичной системе экспрессии в Е. coli.

Практическая ценность диссертации:

1. С применением МКА разработаны диагностические тест-системы на основе ИФА, латексных частиц и магноиммуносорбентов, проведено определение чувствительности и специфичности разработанных тест-систем. Тест-системы успешно прошли комиссионные испытания.

3. Тест-система на основе магноиммуносорбентов способна специфически детектировать споры штаммов сибирской язвы в концентрациях -1х103 спор/мл. Данная система позволяет проводить селективное концентрирование спор возбудителя сибирской язвы из проб окружающей среды и рекомендована к внедрению в практику работы учреждений Санэпиднадзора.

Положения, выносимые на защиту:

1. Полученная панель из шести МКА, являющихся специфичными к белку ЕА1 S-слоя возбудителя сибирской язвы и не дающих перекрестных реакций с близкородственными микроорганизмами, может быть использована для создания иммунодиагностикумов для определения В. anthracis.

3. «Набор реагентов. Тест-система иммуноферментная магноиммуносорбентная для выявления возбудителя сибирской язвы в споровой

Личный вклад соискателя. Экспериментальные результаты, представленные в диссертации, получены лично автором в сотрудничестве, главным образом, с к.б.н. Е.В. Беловой (ГНЦ ПМБ), к.б.н. A.M. Барановым (ГНЦ ПМБ), к.б.н. A.B. Козырь (ГНЦ ПМБ), к.б.н. A.B. Колесниковым (ГНЦ ПМБ), к.м.н. С.С. Ветчининым (ГНЦ ПМБ), к.м.н. Е.В. Барановой (ГНЦ ПМБ), д.б.н. И.В. Жарниковой (СтавНИПЧИ) и д.б.н., проф. И.Г. Шемякиным. На защиту вынесены только те положения и результаты экспериментов, в получении которых роль автора была определяющей. В исследованиях также принимали участие сотрудники ГНЦ ПМБ Р.И. Миронова и Н.М. Лунева.

План и аннотация диссертации обсуждены и одобрены на заседании Ученого совета ГНЦ ПМБ 24 декабря 2008 г., протокол № 8. Результаты исследований доложены на заседании межлабораторного семинара ГНЦ ПМБ (протокол № 22 от 28 декабря 2011 г).

Публикации. Основное содержание работы отражено в 10 научных публикациях, в том числе в трех статьях, опубликованных в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК, в одном патенте на изобретение №2439148 С1 РФ. ив МУ 4.2.2941-11,2011 г.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 138 страницах машинописного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты исследований с их обсуждением, заключение, выводы и указатель литературы, включающий 38 работ отечественных и 119 - зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 9 рисунками и

16 таблицами. Приложения состоят из трех статей, опубликованных по теме диссертации.

Материалы и методы исследования

Штаммы микроорганизмов. В работе использованы 29 штаммов возбудителя сибирской язвы и 57 штаммов близкородственных споровых сапрофитов рода Bacillus, полученных из лаборатории микробиологии сибирской язвы ФБУН ГНЦ ПМБ, из коллекции патогенных микроорганизмов ФГУЗ СтавНИПЧИ, из коллекции микроорганизмов ФКУЗ ИркутскНИПЧИ Сибири и ДВ и из коллекционного центра живых культур ФГУЗ ВолгоградНИПЧИ.

Споры использованных в работе штаммов микроорганизмов получали при выращивании микроорганизмов на голодном L-агаре/по Луриа (Луриа-Бертани), вегетативные клетки микроорганизмов получали при выращивании микроорганизмов на агаре Хоттингера (Оболенск, РФ).

Получение гибридом. Для иммунизации использовали мышей линии BALB/c. Мышей иммунизировали путем двукратного, с тридцатидневной экспозицией, подкожного введения спор штамма В. anthracis СТИ-1, эмульгированных с полным (первая иммунизация) и неполным (вторая иммунизация) адъювантом Фрейнца (Sigma, США). Бустер-дозы препарата (107спор) вводили внутривенно в физиологическом растворе. Проверку титра специфичных антител у иммунизированных мышей проводили непрямым твердофазным ИФА по методу A.M. Егорова [Егоров и др., 1991]. Интенсивность окрашивания анализировали при длине волны 492 нм (фотометр Пикон, РФ). В качестве отрицательного контроля использовали сыворотку крови интактной мыши. Для гибридизации брали мышей с титром специфичности 1:32000. Гибридизацию проводили по стандартному протоколу [Kohler & Milstein, 1975], в качестве партнера для слияния использовали мышиную миеломную клеточную линию X63-Ag8.653. Полученные гибридомные клоны были первично проскринированы в ИФА. Гибридомы, проявляющие иммунореактивность в отношении спор В. anthracis в ИФА, клонировали и переклонировали методом лимитирующих разведений на 96-луночных планшетах с макрофагальным фидерным слоем. После повторной проверки специфической активности в ИФА отобрали гибридные клоны, продуцирующие антитела к спорам В. anthracis. Полученные клоны гибридом продуцентов МКА масштабировали, заложили на хранение в жидком азоте и использовали для наработки специфичных антител in vivo и in vitro.

Выделение и очистка МКА. Выделение МКА из асцитической жидкости проводили путем аффинной хроматографии на колонке с белком G-сефарозой (Protein G Sepharose 4 Fast Flow), согласно рекомендации производителя (GE Healthcare, Швеция). Чистоту полученных иммуноглобулиновых фракций оценивали методом SDS-PAGE-электрофореза в денатурирующих условиях. Концентрацию иммуноглобулинов определяли спектрофотометрически при длине волны 280 нм на спектрофотометре Smart Spec Plus (BIO RAD, США).

Определение подклаееовой принадлежности. Подклассы полученных МКА определяли с помощью набора для определения изотипов мышиных моноклональных антител (Roche Diagnostic Corporation, США).

Определение аффинностн МКА. Константу аффинности МКА определяли в неконкурентном иммуноферментном анализе по методу Beatty [Beatty et al., 1987].

Определение специфической и перекрестной активности полученных

МКА в отношении спор В. anthracis и спор близкородственных спорообразующих бацилл проводили методом дот-блот анализа.

Подбор пар МКА проводили в двухсайтовом дот-блот анализе. Приготовление биотинилирующего реагента проводили по методу Duk [Duk, 1994]. Рабочий титр конъюгированных МКА определяли в ИФА.

Для разработки тест-системы иммуноферментной

магнонммуносорбентой были использованы магноиммуносорбенты (МИС), полученные по методике, описанной в изобретении [Пат. РФ. №2138813, G-01, №33/543]. Чувствительность и специфичность МИС проверяли путем постановки ИФА со штаммами В. anthracis и штаммами близкородственных бацилл в споровой форме. В качестве отрицательного контроля использовали фосфатно-солевой буфер с альбумин-твином (USB, США). Учет результатов проводили на фотометре (Пикон, РФ) для ИФА при длине волны 492 нм. Положительными считали результаты, если оптическая плотность образцов в два и более раз превышала оптическую плотность отрицательного контроля.

Получение рекомбинантных белков В. anthracis ЕА1 и BclA. ДНК штамма В. anthracis СТИ-1 была амплифицировали с использованием пары праймеров, специфичных к 5' и 3'- концам кодирующих областей генов eal и bel А. Гены был клонировали в экспрессионный вектор на основе pET-MASMT [Патент РФ №2355769], содержащий последовательности для N-концевых пептидов MASMT, His6 и с-тус, используемые для аффинной очистки, детекции, и оптимизации трансляционного контекста белков. Рекомбинантные антигены ЕА1 и BclA продуцировали в Е. coli BL21(DE3) и очищали металл-хелатной хроматографией. Очищенный препарат проверяли на взаимодействие с полученными МКА методом иммуноблоттинга.

Результаты исследований и обсуждение

Отбор высокоаффннных и специфичных МКА

Одним из важных этапов работы по конструированию иммунодиагностических тест-систем с использованием МКА является отбор стабильных клеточных линий (гибридом), продуцирующих высокоаффинные, специфичные МКА.

В ходе работ получили и охарактеризовали панель из 20 гибридных клонов, продуцирующих МКА к спорам возбудителя сибирской язвы В. anthracis. Следует отметить, что антигенные различия между спорами представителей рода Bacillus минимальны [Quinlant & Foegeding, 1997], и отсутствие перекрестного взаимодействия антител, полученных к спорам В. anthracis, со спорами близкородственных спорообразующих бацилл является одним из важнейших факторов, обеспечивающих возможность применения полученных антител для разработки специфичных диагностических тест-систем.

Исследование специфической активности полученных МКА показало, что шесть из исследованных МКА - 4Е6, 2В8, 3G3, 2С8, 6В6 и 1Е6 - специфически взаимодействовали со спорами 16 штаммов возбудителя сибирской язвы в концентрации 105 спор/мл и не давали перекрестных реакций со спорами близкородственных бацилл. Результаты по определению специфической активности МКА представлены в таблице 1.

В качестве кандидатов для конструирования иммунодиагностических тест-систем было отобрано шесть МКА (4Е6, 2В8, 3G3, 2С8, 6В6 и 1Е6), специфически взаимодействовавших со спорами В. anthracis и не связывавших споры близкородственных микроорганизмов.

Отобранные МКА охарактеризовали (рис. 1), показали, что МКА, 2В8, 3G3, 2С8, 6В6, 1Е6 относятся к иммуноглобулинам изотипа Gl, а МКА 4Е6 - изотипа G2a. Чистоту выделенных препаратов иммуноглобулинов и молекулярные массы легкой и тяжелой цепей полученных МКА определяли методом белкового SDS-ПААГ электрофореза. Результаты по определению констант аффинности МКА показали, что наибольшей аффинностью обладают три антитела: 1Е6, 6В6 и 3G3.

Во многих случаях для конструирования иммунодиагностичесих тест систем используют диагностически значимые пары антител, что позволяет снизить неспецифическое взаимодействие и проводить выделение возбудителя из больших объемов проб. Для формирования диагностических пар было необходимо выбрать из имеющейся панели антитела, не только не конкурирующие за общие сайты связывания, но и не теряющие специфической активности при конъюгировании с ферментной или иной меткой. Подбор пар МКА осуществляли методом двухсайтового дот-блот анализа. В результате установили, что наибольшая чувствительность анализа (до 10б спор/мл) достигалась при использовании в качестве первого антитела МКА 1Е6, 3G3, и в качестве второго антитела - МКА 6В6. При использовании других комбинаций антител реакция была менее интенсивна (рис. 2).

Подобранные пары МКА использовали при конструировании ИФА-тест-системы и МИС для выявления возбудителя сибирской язвы в споровой форме.

Таблица 1 - Перекрестная активность МКА с бактериальными спорами

Споры (10;спор мл) штаммов микроорганизмов Реактивность моноклональных антител

Оболенск ИХ тест F.tularensis . Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс - выявления и идентификации возбудителя туляремии, 1 тест в упаковке

Оболенск ИХ тест F.tularensis . Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс - выявления и идентификации возбудителя туляремии, 3 теста в упаковке

Оболенск ИХ тест Y.pestis. Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс - выявления и идентификации возбудителя чумы, 1 тест в упаковке

Оболенск ИХ тест Y.pestis. Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс - выявления и идентификации возбудителя чумы, 3 теста в упаковке

Оболенск ИХ тест B.anthracis. Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс - выявления и идентификации спор возбудителя сибирской язвы, 1 тест в упаковке

Оболенск ИХ тест B.anthracis. Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс - выявления и идентификации спор возбудителя сибирской язвы, 3 теста в упаковке

Оболенск Латексная тест-система E.coli О 157:Н7 Диагностический набор реагентов для быстрой идентификации возбудителя геморрагического колита Escherichia coli О 157:Н7 в реакции латекс-агглютинации, жидкий, шт.

Оболенск Латексная тест-система E.coli О 104:Н4 Диагностический набор реагентов для быстрой идентификации шигатоксинпродуцирующего штамма Escherichia coli О 104:Н4 в реакции латекс-агглютинации, жидкий, шт.

Оболенск Тест – система ТЭК - О 104. Набор реагентов для выявления специфических участков ДНК маркеров Escherichia coli O 104:114 методом полимеразной цепной реакции*, шт.

Оболенск Тест – система ТЭК - О 157. Набор реагентов для выявления специфических участков ДНК энтерогеморрагических Escherichia coli O 157 методом полимеразной цепной реакции, шт.

Оболенск Тест - полоска Listeria spp. Набор реагентов для быстрой идентификации листерий, 10 полосок в уп.

Оболенск Тест - полоска Legionella pneumophilla 1. Набор реагентов для быстрой идентификации возбудителя легионеллеза, 10 полосок в уп.

Оболенск Тест - полоска V.cholerae O1. Набор реагентов для быстрой идентификации возбудителя холеры O1 группы, 10 полосок в уп.

Оболенск Латексная тест - система Listeria.monocytogenes. Набор реагентов для быстрой идентификации Listeria.monocytogenes в реакции латекс - агглютинации, жидкий. Состоит из: (- фл. №1 латексный тест L.monocytogenes 2мл.; - фл. № 2 контрольный латексный тест 2мл.; - фл. № 3 позитивный контроль L.monocytogenes 2мл.), на 100 определений

Оболенск Латексная тест-система L.pneumophilla серотип 1. Набор реагентов для быстрой идентификации L.pneumophilla в реакции латекс - агглютинации, жидкий, на 100 определений

Оболенск PZA – тест. Набор питательных сред для ускоренного определения чувствительности микробактерий туберкулеза к пиразинамиду. Состоит из: (- контрольная среда Левенштейна-Йенсена (рН 5,9) 3фл.; - среда Левенштейна-Йенсена (рН 5,9) с1000 мкг/мл пиразинамида 1фл.; - реактив Гисса для учета результатов 1фл.; - цветная шкала для учета результатов 1шт.; - шприц стерильный 2шт.) (Набор для проведения 2 анализов.), 2 теста в упаковке

Оболенск XDR – тест. Набор питательных сред для диагностики XDR- туберкулеза. Набор предназначен для ускоренного определения чувствительности M.tuberculosis к изониазиду, рифампицину, канамицину, амикацину, капреомицину и офлоксацину. Состоит из: ( - пит. среда (контроль) 2фл.; - пит. среда с 1 мкг/мл изониазида 1фл.; - пит. среда с 40 мкг/мл рифампицина 1фл.; - пит. среда с 30 мкг/мл канамицина сульфата 1фл.; - пит. среда с 30 мкг/мл амикацина сульфата 1фл.; - пит. среда с 30 мкг/мл капреомицина сульфата 1фл.; - пит.среда с 3 мкг/мл офлоксацина 1фл.; - реактив Гисса 0,75 г.; - шприц стерильный 2 шт.) (для проведения 1 анализа.), 1 тест в упаковке

Оболенск MULTI-FLU Набор реагентов для выявления ДНК возбудителей чумы, сибирской язвы и туляремии методом ПЦР в режиме реального времени, шт.

Оболенск Латексная тест-система ГБМ Диагностический набор реагентов для быстрой идентификации возбудителей гнойных бактериальных менингитов Haemphilus influenza тип b, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitides типов: A, B, C, W135 в реакции латекс-агглютинации, жидких, шт.

Наименование товаров	Фасовка
Товар основной /микробиология/
Оболенск ФБУН ГНЦ ПМБ
FT- агар (Набор реагентов для бактериологических исследова-ний "Питательный агар для культивирования и выде-ления туляремийного микроба сухая" (FT-агар) комп.:0,25+ добавка 0,045)	Набор
Набор питательных сред для ускоренного определения чувствительности микобактерий туберкулеза к пиразинамиду (PZA-тест)	Набор
SS-агар. Набор реагентов для бактериологических исследований "Питательная среда для выделения сальмонелл и ши-гелл сухая" (SS-агар)" (Оболенск)	0,25 кг
ТCBS - агар. Набор реагентов для бактериологических исследова-ний "Питательная среда для выделения и культивиро-вания возбудителя холеры и других энтеропатогенных вибрионов сухая" ( ТCBS - агар) (Оболенск)	0,25 кг
Агар МакКонки (0,25) (Об)	0,25 кг
Среда типа АГВ (Оболенск) (Питат. среда для опред. атибиотикочувствит. микроорганизмов, сухая)	0,25 кг
Бифидум- среда (Оболенск) (Питат. среда для культив. и выдел. бифидобактерий)	0,25 кг
Бордетелагар (Оболенск) (Питат. среда для выделения и культивирования коклюшного микроба, сухая)	0,25 кг
Бруцеллагар (Питательная среда для выделения бру-целл сухая) (Оболенск)
Бруцеллагар Набор реагентов для бактериологических исследова-ний "Питательный агар для культивирования и выде-ления возбудителя бруцеллеза сухой" (Оболенск)	Набор
Бульон МакКонки (Оболенск)	0,25 кг
Висмут-сульфит -агар (Оболенск) Набор реагентов для бактериологических исследований "Питательная среда для выделения сальмонелл сухая" (Висмут-сульфит-ГРМ-агар)	0,25 кг
Питательная среда для культивирования и выделения гемофильной палочки, готовая к применению ( Гемофилус агар) (Оболенск)	Набор
Среда Гисса-ГРМ с глюкозой /Оболенск/для идентификации энтеробактерий сухая	0,25 кг
Среда Гисса-ГРМ с лактозой (Оболенск) (Питат. среда для идентиф. энтеробактерий, сухая)	0,25 кг
Среда Гисса-ГРМ с мальтозой (Оболенск) (Питат. среда для идентиф. энтеробактерий, сухая)	0,25 кг
Среда Гисса-ГРМ с маннитом (Оболенск)(Питательная среда для идентификации энтеробактерий сухая)	0,25 кг
Среда Гисса-ГРМ с сахарозой (Оболенск) (Питат. среда для идентиф. энтеробактерий, сухая)	0,25 кг
Иерсиниозная среда(Оболенск) (питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза)	0,25 кг
Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс-выявления и идентификации спор возбудителя сибирской язвы (ИХ тест B.anthracis) НДС 10 %	Набор
Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс-выявления и идентификации спор возбудителя сибирской язвы (ИХ тест B.anthracis) НДС 10 %	Набор
Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс-выявления и идентификации возбудителя чу-мы (ИХ тест Y.pestis) НДС 10 %	Набор
Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс-выявления и идентификации возбудителя чу-мы (ИХ тест Y.pestis) НДС 10 %	Набор
Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс-выявления и идентификации возбудителя туляремии ( ИХ тест F.tularensis) НДС 10 %	Набор
Набор реагентов для иммунохроматографического экспресс-выявления и идентификации возбудителя туляремии ( ИХ тест F.tularensis) НДС 10 %	Набор
Среда Кесслера-ГРМ (Оболенск) (Питат. среда для обнаружения бактерий кишечной палочки, сухая)	0,25 кг
Агар Клиглера-ГРМ (Оболенск) (Питат. среда для идентиф. энтеробактерий, сухая)	0,25 кг
SDS-бульон (Оболенск) (Питат. среда для выделения и индентиф. энтеробактерий, сухая)	0,25 кг
Коринебакагар (Оболенск) (Питат. среда для выделения коринебактерий)	0,25 кг
Коринетоксагар (Питат. среда д\опр. токсиоген. диф.микробов)(Оболенск)	0,25 кг
XLD-агар (Оболенск) (Питательная среда для выд.дифференции патологенных энтеробактерий)	0,25 кг
Лактобакагар (Оболенск) (Питат. среда для выдел. и культив. лактобацилл, сухая)	0,25 кг
Набор реагентов для быстрой идентификации возбудителя легионеллеза. (Тест полоска Legionella pneumophilla 1)	Набор
Набор реагентов для быстрой идентификации Listeria.monocytoqenes в реакции латекс-агглютинации жидкий (Латексная тест-система Listeria.monocytoqenes)	Набор
Среда Левина-ГРМ (Оболенск) (Питат. среда с эозин-метиленовым синим , сухая)	0,25 кг
Железо-глюкозо-лактозный агар с мочевиной (Олькеницкого) (Оболенск) (Питат. среда для идентиф. энтеробактерий , сухая)	0,25 кг
Питательный агар для выделения листерий (ПАЛ -0,25,Селективная добавка для выделения листерий- 5фл.	Набор
Питательный агар для выделения и культивирования листерий ПАЛ (Оболенск)	0,25 кг
Питательный Бульон для выделения листерий (ПБЛ -0,25,Селективная добавка для выделения листерий- 5фл.	Набор
Питательный бульон для выделения и культивирования листерий ПБЛ (Оболенск) 0,25	0,25 кг
Пептон основной сухой (Оболенск)	0,25 кг
Пизу среда (Оболенск) (Питат. среда для идентиф. коринебактерий по тесту расщепления цистина, сухая)	0,25 кг
Питательный ГРМ-агар (Оболенск) (Питат. агар для культив. микроорганизма, сухой)	0,25 кг
Питательный ГРМ-бульон (Оболенск) Набор реагентов для бактериологических исследований " Питательный бульон для культивирования микроор-ганизмов сухой" (ГРМ-бульон)"	0,25 кг
Агар Плоскирев - ГРМ (Оболенск) (Питат. среда для выдел. шигелл и сальмонелл, сухая)	0,25 кг
RVS-бульон /Оболенск/(Питательный бульон для накопления сальмонелл по Раппапорту-Вассилиадису)	0,25 кг
Ресселя ГРМ-среда (Оболенск) (Питат. среда для первичной идент. энтеробактерий, сухая)	0,25 кг
Сабуро мальтоза агар (Оболенск)	0,25 кг
Сабуро среда (среда №2) (Оболенск) (Для выращивания грибов)	0,25 кг
Сибиреязвенная среда (Оболенск) (набор) 0,25среды+6 флаконов сел.доб	Набор
Набор реагентов для бактериологических исследований "Питательная среда для выделения возбудителя сибирской язвы сухая" НДС 10 %	0,25 кг
Питат среда №14 ГРМ (Оболенск) (цитратный агар Симмонса)	0,25 кг
Сорбитол E.coli 0157:Н7 агар (Питательная среда для выделения и дифференциации E.сoli O 157: H7 и других энтеробактерий по признаку ферментации сорбита сухая)(Оболенск)	0,25 кг
Питат. среда № 1(для выращивания бактерий) (Оболенск)	0,25 кг
Питательная среда № 10 ГРМ (Оболенск)(для идентификации Staphylococcus aureus )	0,25 кг
Питательная среда № 11 ГРМ (Оболенск)(лактозный бульон - среда для предварительного накопления бактерий се-мейства Enterobacteriaceae) (лактозный бульон)	0,25 кг
Питат. среда № 13 (Оболенск) (Трехсахарный агар с солями железа для выяв. серовод. и опред. фермент. лактозы, глюк., сахар.)	0,25 кг
Питат.среда №15 ГРМ (Оболенск) (для определения индола)	0,25 кг
Питат.среда №3 ГРМ (Оболенск) (для обогащения энтеробактерий)	0,25 кг
Питательная среда № 6 ГРМ (Оболенск)(для определения фер-ментации глюкозы (Оболенск)	0,25 кг
Питат. среда № 7 ГРМ (Оболенск) (для опред. нитритов в нитраты)	0,25 кг
Питат.среда №8 ГРМ (д\опред. синегнойной палочки и стафилококков) (Оболенск)	0,25 кг
Питат.среда №9 ГРМ (Оболенск) (для выявления пигмента пиоцианина)	0,25 кг
Среда Эйкмана с глюкозой (Оболенск)	0,25 кг
Среда Эйкмана с лактозой (Оболенск)	0,25 кг
Стафилококкагар (Оболенск) (Питат. среда для выделения стафилококков, сухая)	0,25 кг
Сульфитный агар Модификация № 1 Оболенск(Питательная среда для выявления сульфитредуцирующих клостридий	0,25 кг
Сульфитный агар Модификация № 2 Оболенск (Питательная среда для выявления сульфитредуцирующих клостридий	0,25 кг
Сульфитный агар Модификация № 3 Оболенск (Питательная среда для выявления сульфитредуцирующих клостридий	0,25 кг
ТБ тест-набор (набор питательных сред для ускоренного определения лекарственной чувствительности и первичной идентификации микобактерий туберкулеза) Оболенск	Набор
Набор реагентов для быстрой идентификации возбуди-теля легионеллеза "Тест-полоска Leqionella pneumo-philla 1" / 10 полосок в пластиковой пробирке	Набор
Набор реагентов для быстрой идентификации листерий "Тест-полоска Listеria spp." 10 полосок в пластиковой пробирке	Набор
Набор реагентов для быстрой идентификации возбуди-теля холеры О1 группы "Тест-полоска V.cholerae O1" / 10 полосок в пластиковой пробирке /	Набор
Набор реагентов для выявления специфич.ДНК-маркеров Escherichia coli О 157:Н7 методом полимеразной цепной реакции "Тест-система ТЭК-О157"	Набор
Тиогликолевая среда (Оболенск) Набор реагентов для бактериологических исследований "Питательная среда для контроля стерильности сухая" (Тиогликолевая среда)"	0,25 кг
Набор реагентов для бактериологических исследований "Питательная среда для культивирования и выделения туляремийного микроба, готовая к применению" НДС 10 %	0,25 кг
ЧПС (Питательная среда для культивирования чумного микроба) (Оболенск)	0,25 кг
Шоколадный агар (Оболенск)Набор реагентов для бактериологических исследований "Питательная среда для выделения возбудителей гной-ных бактериальных менингитов, готовая к примене-нию" (Шоколадный агар)	Набор
Щелочной агар (Оболенск) (Питат. среда для выделения и культивор. холерного вибриона, сухая)	0,25 кг
Агар Эндо-ГРМ (среда №4) (Оболенск)(Питательная среда для выделения энтеробактерий сухая)	0,25 кг
Энтерококкагар (Оболенск) (Питат. среда для выделения энтерококков, сухая)	0,25 кг

Выпускает высококачественные питательные среды для санитарной и клинической микробиологии, для контроля микробной загрязненности лекарственных средств, а также среды для диагностики дифтерии, холеры, туляремии, сибирской язвы, иерсиниозов, дисбактериозов, листериоза, гемофильной палочки, кампилобактериоза. Разработки защищены патентами.