Ифа при бруцеллезе животных

Бруцеллез (лихорадка мальтийская, средиземноморская, гибралтарская, кипрская, ундулирующая, тифомалярийная, болезнь Банга) – инфекционное заболевание из группы бактериальных зоонозов, возбудителем которого являются микроорганизмы рода Brucella. Патогенными для человека являются В. melitensis, Br. abortus, Br. suis. Инфицирование человека происходит преимущественно алиментарным путем, реже контактным или аэрогенным. Представляет собой системное инфекционно-аллергическое заболевание со склонностью к хроническому рецидивирующему течению с преимущественным поражением опорно-двигательной, нервной и мочеполовой систем организма. В зависимости от клинической картины выделяют острую, подострую, хроническую и резидуальную форму бруцеллеза. Наиболее чувствительным в настоящее время является иммуноферментный анализ (ИФА), который рекомендуют в качестве экспресс-метода при массовых обследованиях.

Антитела к бруцеллезу.

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Бруцеллез - зоонозная инфекция, характеризующаяся полиорганным поражением и склонностью к хронизации. Значимым патогенетическим компонентом бруцеллеза является аллергическая реактивность. Передача бруцелл происходит в основном пищевым и водным путем, наиболее часто через молоко и мясо зараженных животных. У скотоводов может реализоваться воздушный и контактный путь передачи бруцеллеза. Диагноз устанавливается при выявлении возбудителя в крови, пунктате лимфатического узла или цереброспинальной жидкости.

Заболевание вызывается неподвижными полиморфными грамположительными микроорганизмами рода Brucella. Вид бруцелл, вызывающих инфекцию, оказывает влияние на тяжесть течения, наиболее тяжело протекает бруцеллез, обусловленный заражением Brucella melitensis. Бруцеллы высокоинвазивны, размножаются внутри клеток организма хозяина, но способны сохранять активность и вне клетки. В окружающей среде устойчивы, сохраняются в воде более двух месяцев, три месяца - в сыром мясе (30 дней - в засоленном), около двух месяцев - в брынзе и до четырех - в шерсти животных. Губительно для бруцелл кипячение, нагревание до 60 °С убивает их через 30 минут.

Резервуаром бруцеллеза являются животные, источником заражения для человека преимущественно являются козы, овцы, коровы и свиньи. В некоторых случаях возможна передача от лошадей, верблюдов, некоторых других животных. Выделение возбудителя больными животными происходит с испражнениями (кал, моча), молоком, амниотической жидкостью. Передача инфекции осуществляется преимущественно фекально-оральным механизмом, чаще всего пищевым и водным путем, в некоторых случаях возможна реализация контактно-бытового (при внедрении возбудителя через микротравмы кожи и слизистых оболочек) и аэрогенного (при вдыхании инфицированной пыли) пути.

Значительную эпидемиологическую опасность представляют собой молоко, полученное от больных животных, и молочные продукты (брынза, кумыс, сыры), мясо, изделия из животного сырья (шерсть, кожа). Животные загрязняют испражнениями почву, воду, корм, что также может способствовать заражению человека непищевым путем. Контактно-бытовой и воздушно-пылевой пути реализуются при уходе за животными и обработке животного сырья.

При бруцеллезе у беременных существует вероятность внутриутробной передачи инфекции, кроме того, возможна постнатальная передача при лактации. Люди обладают высокой восприимчивостью к бруцеллезу, после перенесения инфекции в течение 6-9 месяцев сохраняется иммунитет. Повторное инфицирование бруцеллами отмечается в 2-7 % случаев.

Инкубационный период бруцеллеза в среднем составляет 1-4 недели, но при формировании латентного носительства удлиняется до 2-3 месяцев. Острый бруцеллез обычно развивается быстро, у пожилых лиц начало может быть постепенным (в этом случае больные отмечают продромальные явления в виде общего недомогания, бессонницы, разбитости, артралгий и миалгий с постепенным нарастанием интоксикации на протяжении нескольких дней). Температура тела резко поднимается, сильный озноб чередуется с потом, развивается интоксикация, чаще всего умеренная, несмотря на выраженную температурную реакцию.

Хронический бруцеллез протекает волнообразно, с проявлением симптоматики полиорганных поражений. При этом симптомы общей инфекционной интоксикации обычно выражены умеренно, температура редко превышает субфебрильные значения. Промежутки между обострениями заболевания могут продолжаться 1-2 месяца. В случае формирования нового инфекционного очага внутри организма общее состояние ухудшается. Симптоматика хронического бруцеллеза зависит от преимущественного поражения той или иной функциональной системы возбудителем и выраженности аллергического компонента.

Достаточным для подтверждения диагноза является определение антигенов бруцелл и антител к ним в крови пациента при помощи серологических методов. Исследованию подвергается обычно сыворотка крови, но возможно обнаружение антигенов и в спинномозговой жидкости. Положительный результат серологического исследования не менее чем в 3-4 различных тестах, с характерной соответствующей динамикой показателей, является достаточным основанием для подтверждения этиологии заболевания. Начиная с 20-25-го дня болезни и в течение длительного периода (несколько лет) после выздоровления отмечается положительная реакция на кожную пробу Бюрне (подкожное введение бруцеллина).

Серологические методы также могут быть полезны для дифференцировки острой и хронической формы бруцеллеза. С этой целью может выполняться определение отдельных классов иммуноглобулинов.

Для чего используется исследование?

• Для выявления инфекции (острой и хронической).

Когда назначается исследование?

• При симптомах бруцеллеза (остросептической формы): высокая температура 39-40 °С и выше, озноб, потливость, слабость, миалгия, артралгия, артрит;
• при обследовании пациентов с изолированным поражением мочеполовой системы и суставов при наличии в анамнезе указаний на употребление сырого козьего молока, особенно в эндемичных по бруцеллезу районах, и профессиональных особенностей (ветеринары, работники молочной и мясной промышленности);
• при эпидемиологическом обследовании населения и при отборе лиц для вакцинации против бруцеллезной инфекции;
• дифференциальная диагностика с гриппом, брюшным тифом, малярией, инфекционным мононуклеозом, лептоспирозом, лимфогранулематозом, ревматоидным полиартритом.

Что означают результаты?

Референсные значения: антитела не обнаружены.

Коэффициент позитивности (КП):

1,1 – положительный результат (антитела обнаружены).

КП – концентрация специфических антител в единице объема. Чем выше КП пробы, тем выше концентрация антител.

• отсутствие инфекции;
• слабая иммунная реакция пациента;
• низкий уровень антител.

• острая инфекция;
• рецидив заболевания;
• хроническая форма инфекции.

В случае получения сомнительного результата рекомендуется повторить исследование через 10-14 дней. При повторном результате "Сомнительно" результат следует рассматривать как отрицательный.

В случае заражения бактерией Brucella сначала появляются антитела IgM, затем через некоторое время антитела IgG. Диагноз "острый бруцеллез" подтверждается выявлением антител при острой симптоматике заболевания, совместным выявлением антител IgG, IgA, IgM или только IgM. Если было применено лечение, в течение 2-4 месяцев концентрация IgG, как правило, значительно уменьшается.

В случае хронического бруцеллеза особое значение имеют антитела IgG и IgA. Они свидетельствуют также о давно перенесенном заражении.

Наличие IgA, IgG при отсутствии IgM говорит о хронической инфекции или реинфекции бруцеллой.

41 Клинический и биохимический анализы крови - основные показатели

22 Сифилис RPR (антикардиолипиновый тест/микрореакция преципитации), титр

О . А . Верк о вс кий , доктор биологических наук, заведующий отделом иммунологии НПО НАР ВАК

Теоретические и практические достижения ве­теринарной науки значительно расширили арсенал методов диагностики и средств специфической профилактики инфекционных болезней крупного рогатого скота. При этом развитие новых подходов к предупреждению инфекционных болезней и изу­чение механизмов иммунологической защиты жи­вотных неразрывно связаны с разработкой и внед­рением новых методов и технологий, основанных на современных представлениях об эффекторных механизмах иммунитета, среди которых главное место занимает взаимодействие анти ген-антитело.

Иммуноферментный анализ (ИФА) к настоя­щему времени прошел путь от новейшей научной разработки до рутинного метода в клинической диагностике. С его помощью можно проводить как массовое обследование стад, так и поставить окончательный диагноз у конкретного животного.

По сравнению с другими методами выявления антигенов и антител профессионально разработан­ные иммуноферментные тест-системы обладают следующими преимуществами:

• высокой чувствительностью, позволяющей выявлять концентрации белка в диапазоне нг/мл, и специфичностью;

• воспроизводимостью полученных резуль­татов;

• стабильностью при хранении всех необходи­мых реагентов (до года и более);

• простотой проведения реакции и возможнос­тью использования минимальных объемов иссле­дуемого материала;

• наличием инструментального (в качествен­ном и количественном варианте) учета реакции и возможностью автоматизации всех ее этапов.

При инструментальной оценке результат ИФА может быть качественным (позволяет судить о наличии или отсутствии специфических антител) и полуколичественным (позволяет получить ин­формацию об относительном содержании анти­тел в испытуемых пробах). Оба варианта являются приблизительными, однако они намного точнее методов определения титров антител в реакциях с визуальным учетом.

узаконенным методом диагностики лейкоза, ящура и бруцеллеза крупного рогатого скота.

Специалисты НПО НАРВАК в сотрудничестве с ведущими отечественными и зарубежными учены­ми внедрили в ветеринарную практику нашей стра­ны ИФА-наборы для диагностики лейкоза и ящура, проводят эксперименты по созданию ИФА-набора для диагностики бруцеллеза. Условия применения данных наборов - любые лаборатории, оснащен­ные стандартным оборудованием для ИФА. ИФА - диагностика лейкоза

"Набор для выявления антител к вирусу лей­коза крупного рогатого скота (ВЛКРС методом им-муноферментного анализа (ИфА)", выпускаемый в двух вариантах:

• И ФА-набор для проведения массовых скри-нинговых исследований - скринирующий тест;

• ИФА-набор (VeriTest) для подтверждения по­ложительных результатов - подтверждающий (кон­фирмационный или верификационный) тест.

Как и большинство зарубежных аналогов оба варианта ИФА предназначены для выявления анти­тел к поверхностному гликопротеину др51 ВЛКРС в сыворотке крови и молоке животных.

Использование подтверждающего ИфА-набо-ра VeriTest является очень важным моментом при диагностических исследованиях на лейкоз, пос­кольку одним из наиболее важных вопросов при проведении ИФА является вопрос о специфичности результатов. Так при применении только скриниру-ющего теста, некоторые пробы, взятые от животных с различной патологией, могут давать ложнополо-жительные результаты вследствие синтеза пере­крестно-реагирующих антител. Поэтому возмож­ное существование ложнопозитивных результатов ставит перед лабораторным работником задачу их разграничения с истинным выявлением антител к ВЛКРС. Для решения этой задачи и служит ИФА-на­бор VeriTest, который применяется для подтверж­дения положительных результатов скринирующего теста.

Таким образом, алгоритм серологического об­следования на лейкоз при совместном применении РИД и ИФА следующий.

1) Животные положительные в РИД считаются инфицированными, в ИФА не проверяются и под­лежат выбраковке.

2) Отрицательные результаты в РИД, должны быть перепроверены в ИФА и только после этого животные могут считаться серонегативными.

3) Первичное тестирование проб в ИФА про­водится в скринирующем тесте и при отсутствии положительной реакции выдается заключение об отсутствии серологических данных инфицирования ВЛКРС. При положительном результате теста проба подлежит исследованию в подтверждающем тесте. При отрицательном результате подтверждающего теста, проба считается серонегативной по ВЛКРС, положительный результат является основанием для окончательного подтверждения серологического диагноза на лейкоз.

Такая схема проведения диагностических ис­следование за два последних года с успехом апро­бирована в ряде ветеринарных лабораторий нашей страны и показан ее практический эффект.

Если имеется возможность, то вместо скрини­рующего ИФА-набора можно сразу же использо­вать ИФА-набор VeriTest и тем самым упростить алгоритм серологического обследования на лейкоз и сократить число необходимых анализов. ИФА - диагностика ящура

"Набор для выявления антител к вирусу ящура ЗАВС иммуноферментным методом (ИФА)" пред­назначен для выявления постинфекционных анти­тел в сыворотке крови крупного рогатого скота.

Набор позволяет обнаружить антитела к неструктурному белку вируса ящура - ЗАВС (в систе­ме используется рекомбинантный белок MSP ЗАВС в качестве антигена), который отсутствует (или скрыт для распознавания клетками иммунной системы) в инактивированных вакцинных препаратах. Поэ­тому у здоровых или вакцинированных животных антител к ЗАВС белку нет (реакция отрицательная),

а у экспериментально зараженных или спонтанно инфицированных животных (даже ранее вакцини­рованных), в организме которых присутствовал жи­вой вирус ящура - антитела данной специфичности есть (реакция положительная).

Данное заключение демонстрируют резуль­таты, полученные нами при испытании данного набора в профильной лаборатории ФГУ ВНИИЗЖ (табл.1). Для проверки были использованы сыво­ротки крови крупного рогатого скота, полученные от. а) животных, переболевших ящуром (в дина­мике с интервалом 3- 5 суток после заражения); б) от животных, вакцинированных против ящура; в) животных сначала вакцинированных против ящура, затем экспериментально зараженных вирулентным вирусом; г) от клинически здоровых неиммунных животных. Исследования проводили в сравнитель­ном аспекте с набором аналогичной направлен­ности и с параллельным определением активности испытуемых сывороток в реакции микронейтрали­зации и в стандартном варианте непрямого ЙфА, где в качестве антигена используются структурные белки вириона.

Таким образом, отличительной особеннос­тью ИФА-набора для выявления антител к анти­гену ЗАВС вируса ящура является его способность дифференцировать здоровых и вакцинированных животных от инфицированных и вирусоносите-лей, поэтому его использование незаменимо при проведении оздоровительных и мониторинговых мероприятий.

ИФА - диагностика бруцеллеза

В течение последних лет ряд зарубежных ком­паний выпускают ИФА-наборы, предназначенные для выявления антител к возбудителям бруцеллеза крупного рогатого скота, овец и коз (Brucella abortus и Brucella melitensis). В настоящее время в НПО про­водятся подобные исследования.

В лабораторных исследованиях обычно исполь­зуют два варианта ИФА: непрямой и конкурентный. Однако на практике наибольшей ценностью обла­дает конкурентный ИФА, отличительной особенностью которого является возможность дифферен­цировать животных инфицированных бруцеллами от животных, вакцинированных вакциной из штам­ма 19 (и возможно из штамма 82). Метод основан на конкурентном взаимодействии моноклональных антител к о-полисахариду S-LPS антигена В. abortus и сывороточных антител к бруцеллам с S-LPS анти­геном В. abortus. При отсутствии в исследуемой сы­воротке крови антител к В. abortus или В. melitensis, МкА связывается с иммобилизованным S-LPS анти­геном, формируя при этом комплекс антиген-анти­тело. Полученный иммунный комплекс выявляется после взаимодействия с антивидовым конъюгатом, фермент которого после добавления субстрата, вызывает разложение субстрат-индикаторного рас­твора и образование окрашенного продукта. Если исследуемая сыворотка содержит антитела к бру­целлам, то они конкурируют с МкА за связывание с сайтами антигена и препятствуют взаимодействию МкА с о-полисахаридом S-LPS антигена, в результа­те чего интенсивность окраски снижается.

Сыворотка крови животных, вакцинированных вакциной из штамма 19, содержит низкоаффинные антитела, которые не конкурируют с МкА за связы­вание с антигеном, что приводит к отрицательной реакции. Однако в ряде случаев через 6 месяцев после вакцинации животные могут реагировать по­ложительно.

Нами были проведены предварительные испы­тания двух тест-систем с использованием охаракте­ризованных в РА сывороток крови крупного рогато­го, полученных из ФГУ ВГНКИ (табл.2).

Проведенные исследования показали, что по чувствительности оба варианта ИФА превосходят РА, однако для подтверждения диагностической ценности конкурентного метода проводятся более расширенные испытания с хорошо охарактеризо­ванной панелью сывороток крови, полученных от больных и вакцинированных животных. Есть пред­положение, что данная тест-система может быть также использована в медицине для выявления антител к бруцеллам у инфицированных людей.

Телефон горячей линии на время ЧМ по футболу +7 (495) 700-01-37

Бруцеллез считается актуальной болезнью для животноводства нашей страны и многих зарубежных стран. Человек также подвержен этому заболеванию. Учреждениями Россельхознадзора ежегодно осуществляется эпизоотологический мониторинг по всей территории Российской Федерации. По результатам мониторинга и плановых противоэпизоотических мероприятий выявляются животные с наличием антител к бруцеллам, также выделяются возбудители бруцеллеза из биологического и патологического материала. Наибольшее количество неблагополучных по бруцеллезу животных пунктов выявляется в Северо- Кавказском федеральном округе.

Бруцеллы существует в двух основных формах - гладкой S-форме и шероховатой R-форме. Они различаются между собой по антигенной структуре клеток и характеру метаболизма.

Главным антигенным отличием является отсутствие у R-вариантов полисахаридной цепи S-эндотоксина, в которой антигенными детерминантами, определяющими бруцеллезную специфичность, являются структуры альфа-2-маннопиранозы.

Средства и методы диагностики бруцеллеза, применяемые в Российской Федерации:

1. Набор компонентов для диагностики бруцеллеза животных в РА, РСК, РДСК (реакция агглютинации (РА), реакция связывания комплемента *(РСК);

2. Набор для серологической диагностики бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) (реакция непрямой гемагглютинации (РНГА);

3. Набор для диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота иммуноферментным методом (непрямой иммуноферментный анализ (ИФА);

5. Набор компонентов для диагностики бруцеллеза животных в роз бенгал пробе (роз бенгал проба (РБП) (экспресс-тест);

6. Набор компонентов для диагностики бруцеллеза животных в кольцевой реакции с молоком (кольцевая реакция с молоком (КР);

7. Тест-система для диагностики

бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота, и северных оленей в РИД (реакция иммунодиффузии в агаровом геле с О-ПС –антигеном);

9. Бруцеллин ВИЭВ (аллергическое исследование)

Вакцины против бруцеллеза, выпускаемые и применяемые в Российской Федерации для иммунизации крупного рогатого скота:

• Вакцина против бруцеллеза из слабоагглютиногенного штамма Бруцелла абортус № 82 живая сухая;
• живая сухая вакцина против бруцеллеза сельскохозяйственных животных из штамма B.abortus 19;
• вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота из штамма B.abortus 75/79-АВ живая сухая;
• адъювант-вакцина из штамма B.abortus КВ 17/100 против бруцеллеза крупного рогатого скота.

Вакцины для иммунизации мелкого рогатого скота:

• Вакцина против бруцеллеза сельскохозяйственных животных из штамма B.abortus 19 живая сухая;
• вакцина против бруцеллеза овец и коз, и инфекционного эпидидимита баранов из штамма Brucella melitensis REV-1 живая сухая.

Разработанная и внедренная в нашей стране с учетом мирового опыта система мер борьбы с бруцеллезом, предусматривающая иммунизацию животных противобруцеллезными вакцинами, позволила значительно снизить количество неблагополучных пунктов, полностью оздоровить от бруцеллеза ряд регионов страны и снизить заболеваемость людей. Тем не менее, с учетом относительной иммуногенной эффективности всех известных на сегодняшний день в мире противобруцеллезных вакцин в случае абортов в хозяйствах, контакта животных с вирулентным возбудителем в большой инфицируемой дозе, не стоит рассчитывать на их успешное применение без соблюдения ветеринарно-санитарных правил при содержании животных. Опыт профилактики и борьбы с бруцеллезом показывает, что проблему бруцеллеза невозможно разрешить, ограничиваясь реализацией только специальных ветеринарных мероприятий.

Существует ряд проблем, затрудняющие искоренение бруцеллеза в Российской Федерации:

• несанкционированное перемещения животных на территории страны;
• торговля вакцинированными животными из субъектов неблагополучных по бруцеллезу, в субъекты благополучные, в которых вакцины не применяют;
• не применение экономических санкций к субъектам неблагополучным по бруцеллезу;
• отсутствие в большинстве субъектов России мясокомбинатов и боен, выполняющих убой больных бруцеллезом животных (что обусловливает несвоевременный убой больных животных);
• неэффективное проведение организационно-хозяйственных мероприятий при бруцеллезе (без наложения ограничений, оздоровление неблагополучных по бруцеллезу хозяйств по правилам для инфицированных В.abortus, введение нетелей и ярок в стада и отары взрослых животных, концентрация поголовья в хозяйствах молочного направления, продолжительное применения способа оздоровления путем периодических исследований и вакцинации в стадах где реагировало на бруцеллез более 20 % животных);

Первостепенное значение для успешной борьбы с бруцеллезом имеет решение проблемы компенсации владельцам убытка, неизбежного при изъятии больных животных, в первую очередь, в условиях отгонного животноводства.

Код	Наименование услуг	Цена, руб.	Доступность экспресс	Ед. измер.	Материалы	Заказать
003	Бруцеллез (ПЦР)	800 p (Время исполнения до 72 часов)	1 исслед.	J N V E C U C

Животные: Собаки, КРС, МРС

Выявление ДНК возбудителя бруцеллеза (микроорганизмов рода Род Brucella: Brucella melitensis, Brucella abortus, Brucella suis, Brucella ovis, Brucella canis методом ПЦР в реальном времени.

Материал для исследовнаия: Материал НЕ требующий оформления пробоподготовки: - сперма, моча - молоко от абортировавших животных - содержимое бурс и гигром - выделения из половых путей, взятые в первые 5 дней после аборта Материал требующий оформления дополнительной пробоподготовки. - Абортированный плод целиком или пат материал от него (содержимое брюшной полости и желудка, околоплодная жидкость или слизь между оболочками и плодом), парензиматозные органы (селезенка, печень, сердце, почки)). - плацента и плодовые оболочки от абортировавших животных; - в случае диагностического убоя животных для исследования отбирают парные лимфатические узлы (не менее 7 пар) подчелюстные, заглоточные, предлопаточные, надколенные, подколенные, надвыменные, парааортальные, тазовые и кусочки паренхиматозных органов (печень, селезенка); - от самцов с признаками орхита или эпидидимита отбирают семенники с придатками. Для пат органов и абортированных плодов необходимо дополнительная утилизация отходов по весу на момент поступления в лабораторию Правила отбора проб для исследования: 1) Лимфоузлы берут целиком. 2) Жидкости для исследования, кроме молока, отбирают в объеме 5 - 10 мл в стерильные контейнеры. 3) Из органов и тканей вырезают кусочки не более 5 х 5 х 5 см, каждый орган помещается в отдельный герметичный пакет, подписывается. Органы, расфасованные в пакеты, от одного животного складываются в общий пакет и маркируются идентификатором животного. Доставляются в лабораторию в течение 2-х часов после отбора. При не возможности соблюсти данное требование, отобранный пат материал замораживается и через 1 сутки в замороженном виде доставляется в лабораторию, размораживание при транспортировке не допускается. 4) Взятие содержимого гигром, бурс. В области поражения выстригают шерсть, кожный покров дезинфицируют 70%-ным спиртом и смазывают настойкой йода. Затем стерильным шприцем с иглой большого диаметра делают пункцию, отсасывают содержимое гигромы (бурсы) и переносят его в стерильную пробирку с плотной пробкой. 5) Молоко. Перед взятием проб молока у коров вымя обмывают теплой водой, соски обрабатывают 70%-ным спиртом. Для исследования из каждой доли вымени берут последние порции молока в количестве 10 - 15 мл в отдельные стерильные пробирки с резиновыми пробками.У собак при взятии проб молока соски обмывают теплой водой и обрабатывают 70%-ным спиртом. Для исследования из каждого соска сцеживают около 0,5-1 мл молока в стерильнуюпробирку с крышкой без консервантов, без активаторов свертывания. У овец и коз пробы молока берут путем пункции цистерны вымени. Для этого животное фиксируют в боковом положении, вымя у основания соска протирают 70%-ным спиртом и смазывают настойкой йода. Стерильным шприцем с иглой делают пункцию у основания соска и после попадания иглы в цистерну (о чем судят по свободному движению конца иглы) набирают в шприц молоко и переносят его в стерильную пробирку с крышкой без консервантов, без активаторов свертывания. Молоко должно быть доставлено в лабораторию в день взятия пробы. 6) Абортированные плоды весом до 1 кг берется целиком. Плод помещается в отдельный чистый пакет, маркируется. Если вес плода более 1 кг, то необходимо провести вскрытие плода и взятие органов для исследования. Хранение: в холодильнике не более 48 часов при температуре +2-+8⁰С моча храниься не более суток (24 часа) при температуре +2-+8⁰С более длительное хранение при температуре не выше -16⁰С, кроме кровии мочи. Молоко и моча должны быть доставлены в лабораторию в день взятия пробы.

На сегодняшний день основными методами борьбы с бруцеллезом являются своевременное проведение диагностических исследований на бруцеллез крупного рогатого скота и выбраковки положительно реагирующих животных и использование противобруцеллезных вакцин.

Кратко о вакцинах, которые практически все выпускаются на нашем биокомбинате.

Сухая живая вакцина в S -форме из штамма №19,В SR –форме из штамма 82, в R -форме из штамма 75/79 и выпускалась инактивированная эмульгированная вакцина из штамма 17/100 КВ в R -форме. Все эти вакцины обеспечивают защиту в пределах 60-100%. Более иммуногенными считаются живые вакцины. И все вакцины имеют свои недостатки.

Вакцина из шт. № 19 предохраняет животных от абортов и все же главным ее недостатком является ее высокая агглютиногенность. Дело в том, что при исследовании привитого, крупного рогатого скота в установленные сроки, выявлялось значительное количество животных (особенно) коров с положительными реакциями. Причем эта реакция сохранялась в течение длительного времени (5-8) лет, а отличить их в серологических реакциях больного от вакцинированного животного не возможно.

Вакцина в этом отношении наиболее предпочтительная, через три месяца после применения вакцины не должны быть агглютиногенные реакции, но вызывает аборты у нетелей.

Вакцина из шт. 75/79 не абортогенна и не дает титры агглютиногенности, но по иммуногенности она ниже, чем вакцины из штаммов 19 и 82.

Инактивированная эмульгированная вакцина из штамма 17/100 КВ из-за очень сильных общих и местных воспалительных реакций, значительно снижающие продуктивность животных, пока требует ее доработки по снижению реактогенности.

При диагностике бруцеллеза также возникают пока вопросы. Хотя на сегодняшний много диагностических препаратов и часто возникают вопросы почему их столько? Каждый автор приводит доводы, что этот диагностический препарат выявляет больше реагирующих животных на несколько процентов по сравнению с другими диагностиками.

А диагностировать бруцеллез не всегда удается в 100% случаев. Очень часто у хронических больных животных в крови отсутствуют специфические антитела, на обнаружение которых в основном и построена диагностика. И болезнь никак не проявляется.

Это связано с тем, что возбудитель, персистируя внутри макрофагов, отгорожен мембранами этих клеток от контактов с иммунной системой хозяина. Лишь периодически, когда случается какое-либо ослабление иммунной резистентности (при стрессах, беременности, переохлаждении, токсикозах и т. д.) происходит некое обострение болезни и антигены бруцелл попадают в кровь. В результате активируются находящиеся в крови клетки памяти - долгоживущие В-лимфоциты. Они быстро дифферинциируются в плазматические клетки, которые начинают продуцировать антитела.

Наиболее информативна для выявления бруцеллеза на ранних стадиях или в период обострения это реакция агглютинации. В этот период в большом количестве синтезируются IGM .

В более поздние сроки (при хроническом течении болезни) образуются иммуноглобулины IgG , IgA , IgE , которые выявляются в РСК.

Кроме того используются аллергический тест, ИФА –наборы, разрабатываются очень чувствительные методы улавливания фрагментов ДНК бруцелл в крови, тканях или секретах (ПЦР). Этот метод перспективен, но нужно еще время чтобы его оценить.

Предлагается принципиально иной подход установления всех больных животных за счет провокации синтеза антител у хронически больных животных. Метод разработал д. б. н. Игнатов Петр Евгеньевич.

Для провокации синтеза антител предлагается использовать антиген БИВ. Антиген производится на нашем биокомбинате из биомассы бруцелл абортус штамма №19 и содержит в своем составе специфические компоненты нуклеопротеидной природы с добавлением сахарозно-желатинового стабилизатора. Это стерильный препарат не вызывающий синтеза противобруцеллезных антител у здоровых животных и индукции реакции гиперчувствительности замедленного типа, не реактогенен и не абортогенен.

Если обработать всех поголовно животных в иммунизирующей дозе, то здоровые животные приобретут некоторый краткосрочный иммунитет, то у больных животных произойдет провокация латентного бруцеллеза и в крови появятся антитела.

Если в определенное время провести диагностику на наличие бруцеллезных антител обычными антигенами (единый, РБП), то всех больных можно выделить и выбраковать для убоя.

Учитывая, что для развития реакция обострения и образования антител требуется время, первые диагностические тесты целесообразно проводить через 15 дней после обработки. Еще через 15 дней следует провести повторный тест, чтобы убедиться в отсутствии больных.

Если положительные реакции повторяются, можно через 15-20 дней проводить новые тесты до получения двукратного результата. При осложненных случаях, если через два-три месяца не удается полностью оздоровить стадо - рекомендуется еще раз ввести антиген БИВ, что еще больше иммунизирует здоровых и усилит провоцирующий эффект у больных.

Первые такие эксперименты на КРС проводили в Даниловском районе Волгоградской области (в трех хозяйствах на 2 тыс. голов КРС).

До введения антигена БИВ выявляли при каждом исследовании 1,5- 2,0% от всего поголовья, то через 15 дней после введения БИВ обнаруживалось от 4 до 6%. При повторном исследовании через 15 дней выявили еще 2-3%. При последующих исследованиях количество положительно реагирующих колебалось от 0 до 1%. А через некоторое время во всех хозяйствах получали отрицательные результаты.

То есть, за несколько месяцев при правильной организации работы можно быстро добиться двукратных отрицательных результатов.