Анализ кровь при бактериемии
, MD, FACP, Charles E. Schmidt College of Medicine, Florida Atlantic University
Last full review/revision October 2018 by Larry M. Bush, MD, FACP
Бактериемия может быть преходящей и не вызывать осложнений, или у нее могут быть метастатические или системные последствия. К системным осложнениям относятся:
Этиология
У бактериемии много возможных причин, включая:
Катетеризацию инфицированного нижнего отдела мочевых путей
Хирургическое лечение абсцесса или зараженной раны
Колонизацию вживляемых устройств, особенно внутривенных и внутрисердечных катетеров, мочеиспускательных катетеров, стом и трубок
Грамотрицательная бактериемия, которая является вторичной к инфекции, обычно проявляется в мочеполовых путях или ЖКТ или на коже пациентов с пролежнями. У хронически больных и пациентов с ослабленным иммунитетом наблюдается повышенный риск грамотрицательной бактериемии. У них также может развиться бактериемия, обусловленная грамположительными кокками и анаэробами, и они подвержены риску возникновения гематогенных грибковых заболеваний. Стафилококковая бактериемия распространена среди наркоманов, использующих внутривенные наркотики, пациентов с внутривенными катетерами, а также среди лиц, имеющих осложнённые инфекции кожи и мягких тканей. Бактериемия, вызванная Bacteroides, может развиться у пациентов с инфекциями живота и таза, особенно женских половых органов. Если инфекция в абдоминальной области вызывает бактериемию, наиболее вероятно, что микроорганизм – грамотрицательная бацилла. Если инфекция, локализованная выше диафрагмы, вызывает бактериемию, наиболее вероятно, что микроорганизм – грамположительная бактерия.
Патофизиология
Временная или длительная бактериемия может вызвать метастатическую инфекцию мягких мозговых оболочек или серозных полостей, таких как перикард или большие суставы. Метастатические абсцессы могут проявиться почти где угодно. Формирование множественного абсцесса особенно распространено при стафилококковой бактериемии.
Бактериемия может вызывать эндокардит, обычно при стафилококковой, стрептококковой или энтерококковой бактериемии и реже при грамотрицательной бактериемии или фунгемии. Пациенты с врожденной болезнью сердца (например, клапанный порок, определенные врожденные аномалии), протезами сердечных клапанов или другими внутрисосудистыми протезами предрасположены к эндокардиту. Стафилококки могут вызвать бактериальный эндокардит, особенно у наркоманов, вводящих наркотики внутривенно, обычно поражается трехстворчатый клапан. Staphylococcus также является наиболее частой причиной гематогенного распространения вертебрального остеомиелита и дисцита.
Клинические проявления
У некоторых пациентов нет симптомов или у них только умеренная лихорадка.
Развитие симптомов, таких как тахипноэ, озноб с дрожью, постоянная лихорадка, изменение сознания, гипотония и ЖКТ симптомы (боль в животе, тошнота, рвота, диарея), предполагает сепсис или септический шок. Септический шок развивается у 25–40% пациентов с существенной бактериемией. Длительная бактериемия может вызвать метастатическую очаговую инфекцию или сепсис.
Диагностика
Если подозреваются бактериемия, сепсис или септический шок, то назначаются посевы крови и любых других образцов биологического материала на микрофлору.
Лечение
Пациентам с подозрением на бактериемию назначают антибиотики эмпирически после того, как произведены соответствующие посевы. Раннее лечение бактериемии с соответствующим антибактериальным режимом повышает выживаемость.
Продолжение терапии включает необходимые антибиотики согласно результатам посевов и анализов восприимчивости, хирургическое дренирование любых абсцессов и обычно удаление любых внутренних устройств, которые являются возможным источником бактерий.
Основные положения
Бактериемия может быть временной и не имеет никаких последствий, но устойчивая бактериемия может вызвать метастатическую очаговую инфекцию или сепсис.
Бактериемия более распространена после инвазивных процедур, особенно тех, которые связаны с вживлением устройств или материалов.
Если подозревается бактериемия, эмперически назначаются антибиотики после того, как взяты посевы из потенциальных источников и крови.
Постановка (или предположение) диагноза сепсиса входит в функциональные обязанности врача любой специальности вне зависимости от стажа и места работы. Следует подчеркнуть, что указанные в предыдущем разделе клинико-лабораторные критерии не являются высокоспецифичными для сепсиса. Тем не менее, регистрация этих критериев служит основанием для предположения диагноза сепсис и начала диагностического поиска инфекционного очага.В настоящее время международным экспертным сообществом настоятельно рекомендуется ежедневный скрининг тяжелых пациентов, имеющих риск инфицирования, особенно пациентов, госпитализирован-ных в ОРИТ, для своевременного выявления как минимум клинических признаков сепсиса и как можно более раннего начала адекватной антимикробной и патогенетической терапии.Минимальный объем исследований, который должен быть выполнен при подозрении на сепсис включает в себя:
− общий анализ крови с тромбоцитами (имеет место снижение уровня тромбоцитов);
− коагулограмму (отмечается удлинение АЧТВ, протромбинового и тромбинового времени, снижение содержания фибриногена и повышение уровня D-димеров);
− определение группы крови и Rh-фактора;
− биохимический анализ крови (общий белок, альбумин, общий и прямой билирубины, мочевина, креатинин, натрий, калий, кальций, хлор, трансаминазы, глюкоза);
− КОС (рН и газы артериальной крови);
− рентгенографию органов грудной клетки;
− микроскопию и посев материала из предполагаемого первичного очага;
Микробиологическое исследование крови.
Клиническая значимость регистрации бактериемии:
− подтверждение диагноза и определение этиологии инфекционного процесса;
− доказательство механизма развития н(апример, катетер-ассоциированый сепсис);
− для некоторых ситуаций аргументация тяжести течения патологического процесса (например, инфекционный эндокардит);
− обоснование выбора или смены режима антибиотикотерапии;
− оценка эффективности терапии.
Отсутствие бактериемии не должно исключать возможность диагноза при наличии критериев сепсиса! При соблюдении строгих требований к правильному забору мате-риала и использовании современных микробиологических методик положительнаягемокультура при сепсисе наблюдается более чем в 50 % случаев. При выделении типичных патогенов (Staphylococcusaureus,Streptococcuspneumoniae, Klebsiellapneumoniae, Pseudomonasaeruginosa,Acinetobacterbaumannii, грибы) для постановки диагноза, как правило, достаточно одного положительного результата. Однако при выделении микроорганизмов, являющихся кожными сапрофитами и способных кон-таминировать образец (Staphylococcusepidermidis, другие коагулазонегативные стафилококки, дифтероиды), для подтверждения истинной бактериемии требуются как минимум две положительные гемокультуры.
Показания для забора крови на стерильность:
− признаки полиорганной дисфункции.
Для проведения адекватного микробиологического исследования крови следует строго соблюдать следующие правила:
1. Кровь для исследования необходимо брать до назначения антибиотиков. Если больной уже получает антибактериальную терапию, то кровь следует брать непосредственно перед очередным введением препарата.
2. Стандартом исследования крови на стерильность является забор материала из двух периферических вен с интервалом до 30 мин, при этом из каждой вены кровь необходимо отбирать в два флакона (со средами для выделения аэробов и анаэробов).
Забор крови на самом пике лихорадки не повышает чувствительности метода.
3. Дополнительно рекомендуется произвести забор крови из каждого сосудистого катетера, если он был установлен за 48 ч или более до исследования.
4. Кровь для исследования необходимо брать из периферической вены. Не показано преимуществ забора крови из артерии.
5. Брать кровь из периферической вены следует, тщательно соблюдая правила асептики. Кожу в месте венепункции дважды обрабатывают раствором йода или повидон-йода концентрическими движениями от центра к периферии в течение 1 мин. Непосредственно перед забором кожу обрабатывают 70%-ным спиртом. Каждую пробу (около 10 мл крови или в объеме, рекомендованном инструкцией производителя флаконов) забирают в отдельный шприц.
6. При наличии установленного (предполагаемого) инфекционного очага следует проводить микробиологическое исследование субстрата (мочи, ликвора, мокроты и т. д.) из вероятного очага инфекции и периферической крови. Если из предполагаемого очага инфекции и периферической крови выделяется один и тот же микроорганизм, его этиологическую роль в развитии сепсиса следует считать доказанной.
7. При наличии факторов риска грибковой этиологии сепсиса дополнительно следует выполнять посев крови на специальные селективные среды (среда Сабуро). Биологические лабораторные маркеры сепсиса. Одним из наиболее значимых ограничений использования бактериологического исследования крови для подтверждения диагноза является продолжительное время, необходимое для выполнения данного исследования (не менее 72 ч). Кроме того,гемокультура может быть ложноотрицательной у пациентов, заболевание которых вызвано медленнорастущими микроорганизмами, микроорганизмами, требующими особых условий культивирования или присутствующими в малых концентрациях, а также у пациентов, получающих на момент взятия крови для исследования антимикробную терапию. Вследствие этого в настоящее время наблюдается интенсивное развитие методик, основанных на определении различных биологических лабораторных маркеров (биомаркеров). Существующие биомаркеры сепсиса позволяют более эффективно исключать наличие инфекции, чем подтверждать ее присутствие, т. е. обладают в основном отрицательной предикативной ценностью. Помимо этого, биомаркеры потенциально могут использоваться для прогнозирования развития органной дисфункции, определения режима эмпирической антибактериальной терапии, а также для контроля за эффективностью проводимого лечения.
В табл. 1суммированыбиомаркеры сепсиса, эффективность которых продемонстрирована как минимум в одном клиническом исследовании.
Однако из перечисленных в табл.1 биомаркеров сепсиса только некоторые имеют доказательную базу, основанную на крупных международных рандомизированных исследованиях, и широко внедрены в клиническую практику:С-реактивный белок ипрокальцитонин (ПКТ) — преимущественно для идентификации бактериальной этиологии, маннан/антиманнан и 1,3-β-D-глюкан — для грибковой этиологии сепсиса. Однако стоит отметить, что даже эти маркеры не являются строго специфичными для подтверждения наличия инфекции и, соответственно, сепсиса.
Концентрация С-реактивного белка в сыворотке крови свыше 87 мг/л указывает на наличие инфекции с чувствительностью 93,4 % и специфичностью 86,1 %, а ее комбинация с лихорадкой более 38,2 °С повышает специфичность методики до 100 %. Учитывая неспецифичность С-реактивного белка, изменения его уровня в динамике обладают большей диагностической ценностью, чем однократное определение. Увеличение уровня свыше 41 мг/л указывает на развитие инфекции с чувствительностью 92,1 % и специфичностью 71,4 %, а повышение при повторном измерении свыше 87 мг/л — с чувствительностью и специфичностью 92,1 и 82,1 % соответственно.
В ряде исследований было также убедительно продемонстрировано, что повышение уровня С-реактивного белка свыше 100 мг/л с высокой степенью вероятности свидетельствует о бактериальной этиологии сепсиса, до 100 мг/л — о грибковой этиологии. Однако уровень С-реактивного белка как острофазового повышается практически при любом состоянии, сопровождающемся развитием воспалительной реакции, в том числе при ревматоидном артрите. Кроме того, его повышение происходит через 12–24 ч от начала инфекционного процесса, что резко снижает его диагностическую ценность в начальном периоде сепсиса, когда эффект от начатой антимикробной терапии максимален.
ПКТ представляет собой предшественник гормона кальцитонина и присутствует в сыворотке крови здоровых людей в очень низких концентрациях (0,033 нг/мл). Однако при развитии инфекционного процесса в течение 2–4 ч его уровень повышается более чем в 1000 раз, достигая пика через 6–8 ч. Пороговым значением, указывающим на необходимость назначения антибактериальной терапии при наличии клинической симптоматики, служит повышение уровня ПКТ свыше 0,25 мкг/л. При значении ПКТ ниже 0,25 мкг/л, но сохраняющемся подозрении на наличие бактериальной инфекции, рекомендуется повторно определить уровень ПКТ через 6–24 ч. При отсутствии повышения уровня в динамике вероятность наличия бактериальной инфекции не превышает 5 %.
Рекомендуется динамическое определение уровня ПКТ (1 раз в2–3 дня) у пациентов, находящихся на антибактериальной терапии, для контроля за эффективностью проводимого лечения и определения времени отмены антибиотика. Снижение ПКТ на 25–35 % в течение 3 дней указывает на эффективность проводимой антибактериальной терапии. Снижение ПКТ на 80–90 % от максимального уровня, зафиксированного у данного пациента, может служить основанием для отмены антибактериальных препаратов.
Определение ПКТ особенно актуально для дифференциальной диагностики бактериального сепсиса, однако необходимо учитывать, что его уровень может быть ниже порогового значения (0,25 мкг/л) у пациентов с дыхательной или сердечно-сосудистой недостаточностью, а также у пациентов с тяжелыми множественными сопутствующими заболеваниями, что связано с более медленным ростом уровня ПКТ у данной категории пациентов.Кроме того, ложноотрицательные низкие уровни ПКТ могу наблюдаться на ранних этапах инфекционного процесса (в первые 6 ч), у пациентов с подострым эндокардитом, а также при локализованных инфекциях. Высокие ложноположительные уровни ПКТ могут наблюдаться у пациентов:
− в первые 72 ч после серьезной травмы, обширного хирургического вмешательства, тяжелых ожогов, применения иммуноглобулинов и прочих лекарственных средств, стимулирующий выделение провоспалительных цитокинов;
− с инвазивными грибковыми инфекциями;
− с малярией, вызванной Pl. falciparum;
− с продолжительным или тяжелым кардиогенным шоком, продолжительным нарушением кровоснабжения органов;
− с мелкоклеточным раком легкого или с C-клеточной карциномой щитовидной железы;
− с острым панкреатитом;
− с инфарктом миокарда;
− рецепиентов после пересадки почки;
− новорожденных детей в первые 48 ч после рождения.
В вышеперечисленных случаях установления как ложноотрицательных, так и ложноположительных значений ПКТ при наличии подозрения на бактериальный сепсис также рекомендуется повторить определение уровня ПКТ через 6–24 ч. При отсутствии динамики уровня ПКТ назначение/продолжение антибактериальной терапии не показано.
Ввиду того, что для выполнения микологического исследования крови необходимо время (не менее 5 суток), а его чувствительность не превышает 50–75 %, при подозрении на грибковую этиологию сепсиса и наличии возможности одновременно с посевом крови на специальную питательную среду необходимо выполнить определение уровня 1,3-β-D-глюкана илиманнана/антиманнана в сыворотке крови ввиду высокой отрицательной предикативной ценности обоих методов в отношении наиболее частых возбудителей грибковых инфекций в общесоматических стационарах Candidaspp. и Aspergillusspp. Определение маннана/антиманнана позволяет определить наличие инвазивной грибковой инфекции в среднем за 6–9 дней до появления положительной гемокультуры (чувствительность и специфичность данного метода составляют 73–80 и 80–85 % соответственно). Определение 1,3-β-D-глюкана также позволяет выявить с относительно высокими чувствительностью (> 62,5 %) и специ-фичностью (> 80 %) наличие инвазивной грибковой инфекции на 1–3 дня раньше по сравнению с методом гемокультуры.
В случае отрицательного результата определения маннана/антиманнана у пациента с факторами риска грибковой инфекции и наличием поражения легочной ткани (особенно в виде первичного септического очага) целесообразно дополнительно определить уровень галактоманнанав сыворотке крови.
Однако при этом следует помнить, что вышеуказанные методы не позволяют подтвердить или исключить грибковые инфекции, вызванные рядом сравнительно более редких возбудителей (игомицеты, Cryptococcusspp. и др.), чаще встречающихся в специализированных стационарах (гематологических, онкологических, инфекционных и т. д.). Кроме того, основным отрицательным моментом определения маннана и антител к нему является высокая частота (более 20 %) ложноположительных и ложноотрицательных реакций.
Ложноположительные результаты исследования на 1,3-β-D-глюканимеют место:
− после инфузии пациенту раствора альбумина, иммуноглобулинов;
− при использовании марлевых повязок;
− при нахождении пациента на гемодиализе.
Кроме вышеперечисленныхбиомаркеровдостаточно широко обсуждается возможность использования в диагностике сепсиса пресепсина. Данный маркер является чрезвычайно перспективным с позиций патофизиологии сепсиса, так как представляет собой продукт превращений мембранного белка (рецептора) моноцитов/макрофагов (mCD14) под воздействием эндотоксинов бактериальной клетки, уровень которого повышается только при воспалительных процессах, сопровож-дающихся фагоцитозом, и коррелирует с их выраженностью и тяжестью течения. Однако данные проведенных в отношении пресепсина клинических (в большинстве случаев небольших по объему) и лабораторных исследований несколько противоречивы, что требует более углубленного изучения данного биомаркера и не позволяет однозначно рекомендовать его для использования в клинической практике.
Другие методы диагностики сепсиса. В диагностике сепсиса также возможно использовать методики, основанные на исследовании крови с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени (SeptiFast®, SeptiTest® и др.) или гибридизации insitu (например, PNA-FISH — Peptidenucleicacidfluorescentinsituhybridization), которыепозволяютопределитьэтиологию септического процесса в течение нескольких часов после забора материала от пациента, причем их чувствительность и специфичность достигает 94–99 и 98 % соответственно.
Однако в настоящее время данные методики можно применять лишь как дополнение к традиционному микробиологическому исследованию, так как они отлично идентифицируют микроорганизм, но неспособны дать детальную информацию о его чувствительности к антимикробным препаратам, ограничиваясь определением лишь нескольких наиболее ключевых маркеров резистентности (например,генов отвечающих за продукцию металло-β-лактамаз или сериновыхкарбапенемаз у грамотицательных бак-терий, гена, отвечающего за модицификацию пенициллин-связывающего белка уметициллин-резистентных стафилококков и т. д.). Дополнительными негативными моментами являются: способность идентифицировать только заранее предопределенный спектр микроорганизмов и относительно высокая вероятность ложноположительных результатов исследования в связи с контаминацией.
Врач лаборант ЦДЛ городской больницы
Константин Костюк
Приемная главного врача
(+375 214) 50-62-70
(+375 214) 50-62-11 (факс)
Канцелярия
(+375 214) 50-15-39 (факс)
Бюджетное учреждение здравоохранения
Исследование крови на стерильность на современном этапе
Департамент здравоохранения Воронежской области
Исследование крови на стерильность
на современном этапе
Информационно-методическое письмо для врачей-бактериологов
Составители: главный внештатный специалист по микробиологической диагностике
департамента здравоохранения Воронежской области, заведующий бактериологической лабораторией
БУЗ ВО ВОКБ №1 Е.В. Бондаренко
Врач-бактериолог БУЗ ВО ВОКБ№1 Т.М. Лапа
Кровь - один из наиболее распространенных образцов биоматериала, исследуемых в бактериологической лаборатории. Исследование крови на стерильность является важнейшим методом лабораторного исследования у пациентов с определенными показаниями.
Основные показания для посева крови:
- Лихорадка (более 38°C)
- Гипотермия (менее 36°C)
- Лейкоцитоз
- Гранулоцитопения
Бактерии проникают в кровь экзогенным (например, при травме) и эндогенным (из очага инфекции) путями.
Бактериемия : Наличие бактерий в крови, подтвержденное результатами посева
- Транзиторная бактериемия, когда происходит кратковременный выброс в кровь микроорганизмов под действием таких факторов, как физическая нагрузка, перегревание, переохлаждение. Подобные явления протекают обычно бессимптомно.
- Интермиттирующая бактериемия, когда существует локальный очаг инфекции, например пневмония или внутрибрюшной абсцесс.
- Продолжающаяся бактериемия проявляется внутрисосудистой
инфекцией, например, инфекционным эндокардитом или септическим тромбофлебитом.
Сепсис – это патологический процесс, в основе которого лежит реакция организма в виде генерализованного (системного) воспаления на инфекцию различной природы (бактериальную, вирусную, грибковую).
В последнее десятилетие в мире отмечается учащение случаев бактериемии и фунгемии. Это связано с развитием инвазивных медицинских вмешательств, старением населения, увеличением количества трансплантаций органов и костного мозга, увеличением количества более вирулентных и трудно поддающихся лечению микроорганизмов, более агрессивной внутрибольничной инфекцией.
Факторы риска, способствующие проникновению бактерий в кровяное русло и развитию бактериемии:
- внутривенные катетеры
- катетер мочевого пузыря
- любые инвазивные процедуры
- операционные вмешательства
- нейтропения
- терапия антибиотиками (эмпирическая), кортикостероидами, цитотоксическая
Принципы микробиологической диагностики
Точный диагноз устанавливается только при обнаружении возбудителей в крови пациентов. Важное условие - своевременный забор пробы. Для проведения анализа используют кровь непосредственно из венозного сосуда. Сбор пробы из постоянного внутривенного или внутриартериального катетеров допускается только в случаях подозрения на наличие катетер-ассоциированной инфекции или отсутствия возможности ее получения венопункцией.
- Лихорадка и озноб начинается примерно через час после попадания микроорганизмов в кровоток
- Чаще всего кровь забирается как можно скорее после приступа лихорадки или озноба при подозрении на инфекцию
- Забор крови должен осуществляться по возможности до назначения антимикробной терапии.
Объем крови – один из наиболее значимых факторов в повышении чувствительности гемокультивирования. Считается, что риск случайной контаминации 1 отдельно взятой пробы крови составляет 3% (0,03).
Тогда вероятность случайной контаминации одновременно 2 проб составляет: 0,03*0,03=0,0009= 0,09%. Поэтому более информативно исследование 2 и более проб каждая объемом не менее 10мл.
Рекомендуемое число отбираемых проб крови в зависимости от предполагаемого заболевания по МУ 4.2.2039-05Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории:
1) Острый сепсис, менингит, менингококоцемия, остеомиелит, артрит, острая пневмония, пиелонефрит 2 пробы из двух сосудов или двух участков кровеносного сосуда перед началом антибактериальной терапии
2) Лихорадка неясного генеза 4 сначала 2 пробы из разных кровеносных сосудов (двух участков сосуда), затем через 24-36 ч. еще 2 пробы
3) При подозрениях на наличие эндокардита и вялотекущего сепсиса: при обострении 2 пробы из двух сосудов в течение первых 1 - 2 ч подъема температуры тела (не на пике температуры!) до начала терапии; при подостром и вялотекущем течении сначала 3 пробы с интервалом 15 мин. и более. Если все пробы отрицательны, на вторые сутки после посева собирают еще 3
4) у пациентов с эндокардитами, получающими антибиотики, собирают по 2 отдельные пробы в течение трех дней
5) У больных, в комплекс терапии которых включены антибиотики, собирают 6 проб в течение 48 ч; пробы необходимо собирать непосредственно перед введением следующей дозы препарата
6) при лихорадке неясного генеза сначала 2 пробы из разных кровеносных сосудов, затем через 24-36 часов еще 2 пробы
Минимальный набор сред для посева крови согласно положениям Приказа 535:
“Двойная среда” - скошенный во флаконе 1,7-2% питательный агар (150 мл) и 150 мл полужидкой среды, приготовленной на питательном бульоне с добавлением 15 г глюкозы и 0,15 г агара.
“Среда для контроля стерильности” - стандартная тиогликолевая среда к которой добавляют 15-20 г дрожжевого экстракта и агар 4,25-5 г на 1 литр к среде добавляют 0,001 г резазурина в качестве индикатора анаэробиоза.
Необходимое оснащение для взятия крови:
- Флаконы с питательными средами.
- 70о этиловый спирт;
- 2% или 5% настойка йода
- венозный жгут
- резиновые (латексные, виниловые) перчатки
- спиртовка (только при использовании флаконов со средами, изготовленными в лаборатории)
Техника получения пробы крови . Сбор проб крови для посева производят 2 человека у постели больного или в процедурной.
- участок кожи над выбранным для пункции сосудом продезинфицировать: обработать кожу тампоном, смоченным 70%-м этиловым спиртом, затем другим тампоном, смоченным 1 - 2%-м раствором йода или другим дезинфектантом, разрешенным к применению для этих целей в установленном порядке, круговыми движениями, начиная от центра, в течение 30 с; подождать, пока высохнет обработанный участок. Не допускается пальпировать сосуд после обработки кожи перед введением иглы;
- при работе с флаконами с двойной средой: стерильным шприцем собрать у взрослых 10 мл крови, у детей - 5 мл; над пламенем спиртовки открыть флакон; внести кровь во флакон из шприца, предварительно сняв иглу; обжечь горлышко и пробку флакона в пламени спиртовки, закрыть флакон пробкой; осторожно, чтобы не замочить пробку флакона, перемешать его содержимое круговыми движениями.
Визуальные признаки роста гемокультур при посевах крови
Макроскопические
изменения среды
Listeria spp., клостридии, Bacillus spp.
Аэробные грам(-) палочки, стафилококки, Bacteroides spp.
Аэробные грам(-) палочки, анаэробы
Pseudomonas spp., Bacillus spp.,
Причины отрицательных результатов:
- Локальная инфекция (защитные силы организма удерживают инфекцию в одном месте)
- Неактуальное время взятия материала (вероятность упустить интермиттирующую бактериемию )
- Слишком маленький объем полученного материала
- Прием антибиотиков пациентом
Идентификация выделенных бактерий при бактериемиях:
- Значимы и часто встречаются - S.aureus, S.pneumoniae, E.coli и др. энтеробактерии, P.aeruginosa, C.albicans
- Значимы - S.pyogenes, S.agalactiae, L.monocytogenes, N.meningitidis, N.gonorrhoeae, H.influenzae, B.fragilis группа, Candida spp, Cryptococcus neoformans
- Контаминанты или нет? (зависит от конкретных случаев)– КОС, зеленящие стрептококки, Propionibacterium acnes, Acinetobacter calcoaceticus, Clostridium spp., Corynebacterium spp., Bacillus spp
Дополнительные критерии в пользу клинической значимости изолята:
- Быстрое выделение культуры – в течение первых 48 часов
- Выделение одного и того же вида микроорганизма в разных пробах
- Выделение одного и того же вида микроорганизма из крови и других локусов
Помимо ручных методов существуют методы автоматизированного культивирования крови, которые являются более современными, более чувствительными. Самая известная серия бактериологических анализаторов для посева крови на стерильность,- BDBACTEC.
Прибор Bactec предназначен для ускоренного обнаружения бактерий и грибов в клинических образцах крови. Образцы крови отбираются у пациентов и вносятся напрямую в оригинальные флаконы с питательной средой, после чего – по возможности незамедлительно – помещаются в рабочие станции приборов серии BD Bactec™ 9000. Наличие микроорганизмов в крови устанавливается с помощью высокочувствительной флуоресцентной технологии, основанной на индикации СО2, выделяемого в питательную среду растущими и интенсивно делящимися микроорганизмами. С помощью системы BD BACTEC 90% положительных результатов выявляются в первые 24 часа инкубации, что позволяет своевременно начать эмпирическую антибактериальную терапию либо внести изменения в действующую схему лекарственной терапии. Своевременная бактериологическая диагностика бактериемии значительно сокращает частоту возникновения септического шока и увеличивает выживаемость больных.
Флаконы для гемокультивирования выпускаются нескольких видов. Наиболее часто используются следующие:
- Флаконы со средой для культивирования аэробов
- Флаконы со средой для культивирования анаэробов
- содержат частицы латекса, адсорбирующие антибиотики из крови, а также способствующие лизису клеток крови и освобеждению внутриклеточных бактерий.
- Флаконы со средой для культивирования детской крови
- предназначены для исследования малого объема крови до 3 мл, также содержат частицы латекса
- Флаконы с селективной средой для выявления дрожжей и грибов
- содержат хлорамфеникол и тобрамицин для подавления роста сопутствующих бактерий, лизирующие вещества, способствующие освобождать из лейкоцитов фагоцитированные грибы.
Используется вакуумное взятие крови с использованием системы для забора крови игла-бабочка. Под действием вакуума кровь втягивается через иглу BD VacutainerTM напрямую из вены в пробирки BD VacutainerTM и флаконы BD BactecTM и сразу же смешивается с питательной средой.
Традиционно отбор проб крови осуществляется одномоментно в аэробный (BD BACTEC™ PLUS+ Aerobic/F) и в анаэробный (BD BACTEC™ PLUS+ Anaerobic/F) флаконы. Альтернативный набор складывается из: а) аэробного флакона и дополнительного аэробного; б) анаэробного и/или Mycosis IC/F, и/или Myco F/Lytic флаконов (оба типа флаконов – для культивирования гемокультур грибов).
Оптимальный объем крови для гемокультивирования
- Дети:
- Новорожденные 1-2 мл крови/флакон (допустимый для посева объём крови – 0,5-5 мл)
- Дети 2-5 мл/флакон
- Подростки 10-20 мл/флакон
- Взрослые:
Одномоментно 20 -30 мл (по 10 мл во флакон) крови 2 или 3 раза в течение 24 ч
| ШАГ 1 |
|
| ШАГ 2 |
|
| ШАГ 3 |
|
| |
| ШАГ 4 |
|
При правильном заборе крови контаминация составляет не более 2-3 % всех гемокультур. Использование наборов для забора крови BD VacutainerTM существенно снижает степень контаминированности культур.
При наличии роста микроорганизма во флаконе анализатор оповещает персонал лаборатории с помощью световой индикации на передней панели прибора, а также с помощью звуковой индикации. Таким образом, нет необходимости делать высевы из всех флаконов, высев делается целенаправленно из положительного флакона.
Объем исследований и микропейзаж при гемокультивировании в бактериологических лабораториях ЛПУ Воронежской области.
Общее количество проб крови для исследования на стерильность по Воронежской области составило 12515. В 2013г это число было гораздо меньше: 8406. Доля этих анализов по лечебно-профилактическим учреждениям показана в таблице:
Читайте также:
