Тест-системы для ифа на клещевой энцефалит

Антитела класса IgG к вирусу клещевого энцефалита – это специфические противовирусные белки-иммуноглобулины, вырабатываемые иммунной системой в ответ на инфицирование вирусом клещевого энцефалита и свидетельствующие о текущей либо перенесенной инфекции или об успешной вакцинации.

При положительном результате указывается концентрация обнаруженных антител, а также титр.

Антитела класса IgG к вирусу клещевого энцефалита (Encephalitis virus), иммуноглобулины класса G к вирусу клещевого энцефалита.

Синонимы английские

Anti-arboviral Encephalitis IgG, Encephalitis Virus Antibodies, IgG, Tick-borne encephalitis virus IgG (TBE virus IgG).

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Ед/мл (единица на миллилитр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Клещевой энцефалит – это сезонное (весенне-летнее) вирусное заболевание, передающееся в основном с укусом клещей; поражает преимущественно центральную нервную систему.

Возбудитель клещевого энцефалита относится к арбовирусам, семейству флавивирусов, и подразделяется на три подвида: дальневосточный, центральноевропейский и сибирский. Основной переносчик энцефалита – иксодовые клещи. Кроме того, он передается через птиц, грызунов и хищников. Инкубационный период в среднем составляет 3-7 суток. Клинические проявления болезни разнообразны. Выделяют лихорадочную, менингеальную, менингоэнцефалитическую, полиомиелитическую и полирадикулоневритическую формы заболевания. Возможно длительное вирусоносительство в виде латентной, персистентной или хронической инфекции.

В ответ на инфицирование вирусом клещевого энцефалита или на вакцинацию против этого вируса иммунной системой вырабатываются специфические противовирусные антитела – белки-иммуноглобулины. Иммуноглобулины класса G возникают в крови спустя неделю после появления первых симптомов, достигают максимума через 1,5-2,5 месяца с момента инфицирования и сохраняются на протяжении всей жизни, обеспечивая стойкий иммунитет.

Для чего используется исследование?

• Для подтверждения диагноза "клещевой энцефалит" (как текущего, так и недавно перенесенного заболевания).
• Чтобы оценить иммунитет после перенесенного клещевого энцефалита или после вакцинации против него.
• Как часть дифференциальной диагностики при поражении центральной нервной системы (инфекционных менингитах и энцефалитах другого происхождения, эпилепсии, асептическом менингите, тромбозе артерий или вен головного мозга, инсульте, внутричерепном кровоизлиянии, фебрильных судорогах, ВИЧ, цистицеркозе, саркоидозе, сифилисе, карциноматозе мозговых оболочек, паранеопластическом энцефаломиелите и др.).

Когда назначается исследование?

• При подозрении на текущий или перенесенный клещевой энцефалит.
• При проведении вакцинации против клещевого энцефалита.

Что означают результаты?

Концентрация: 0 - 100 Ед/мл.

Причины положительного результата

• Наличие активного иммунитета вследствие ранее перенесенной инфекции или вакцинации (если тест на IgM к вирусу клещевого энцефалита отрицательный).
• Текущий или недавно перенесенный клещевой энцефалит (в сочетании с положительным тестом на IgM к вирусу клещевого энцефалита) при условии, что не проводилась вакцинация.
• Недавно проведенная вакцинация против вируса клещевого энцефалита.

Четырехкратное нарастание титра IgG-антител в парных сыворотках (в остром периоде инфекции и периоде выздоровления), а также повышение уровней IgG и IgM указывает на наличие клещевого энцефалита. Повышение титра IgG после введения вакцины свидетельствует о ее успешности.

Причины отрицательного результата

• Отсутствие недавнего инфицирования и, соответственно, иммунного ответа на вирус (если IgM к вирусу клещевого энцефалита не выявляются). Если есть подозрение на инфекцию, целесообразно назначить повторные анализы на IgM и IgG через 7-10 дней.
• Ранние стадии клещевого энцефалита (если уровень IgM повышен).
• Слабый иммунный ответ (или его отсутствие) на клещевой энцефалит вследствие нарушений иммунной системы (если IgM к вирусу клещевого энцефалита не выявляются).

Что может влиять на результат?

Наличие перекрестно-реагирующих антител к другим возбудителям рода флавивирусов (вирус лихорадки Западного Нила, вирус японского энцефалита и др.).

• Профилактикаклещевого энцефалита осуществляется двумя способами. Во-первых, это вакцинация, которая проводится при риске заражения клещевым энцефалитом, а во-вторых, ревакцинация по эпидемическим показаниям перед сезоном клещевого энцефалита.
• Тем, кто лечился гамма-глобулином в первые дни болезни, через 2-3 месяца необходимо дополнительное серологическое исследование в связи с тем, что такая терапия временно угнетает формирование иммунитета.

Кто назначает исследование?

Инфекционист, невролог, терапевт, врач общей практики.

Набор реагентов ИФА ТС АГ ВКЭ Тест-система иммуноферментная для выявления антигена вируса клещевого энцефалита (Комплект № 1) включает следующие реагенты для проведения прямого твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА):
ИГ - иммуносорбент – иммуноглобулин класса G (крысиный) против вируса клещевого энцефалита (ВКЭ) – аморфный порошок белого цвета, после растворения – прозрачная или слабоопалесцирующая бесцветная жидкость.
КА+ - контрольный положительный образец – антиген ВКЭ, экстрагированный из ткани мозга мышей, инфицированных ВКЭ, инактивированный бетапропиолактоном -аморфный порошок кремового цвета, после растворения – прозрачная или слабо опалесци-рующая светло-желтого цвета жидкость.
КА– - контрольный отрицательный образец – антиген из ткани мозга неинфицированных мышей, аморфный порошок кремового цвета, после растворения – прозрачная или слабо опалесцирующая светло-желтого цвета жидкость.
Конъюгат (концентрат) – иммуноглобулин класса G против ВКЭ (крысиный), конъюгированный с пероксидазой хрена, аморфный порошок белого цвета, после растворения – прозрачная или слабо опалесцирующая бесцветная жидкость.
КББ×20 - 20-кратный концентрат карбонатно-бикарбонатного буферного раствора для разведения ИГ – прозрачная бесцветная жидкость.
ФСБ-Т×25 – 25-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином, раствор для промывания планшетов и приготовления раствора РР – прозрачная или слабо опалесцирующая бесцветная жидкость, в которой допускается выпадение кристаллов бело-го цвета, растворимых в течение 20-30 мин при температуре 37 ºС.
БСА - бычий сывороточный альбумин – стабилизатор – аморфный порошок от белого до светло-желтого цвета, после растворения в ФСБ-Т – прозрачная или слабо опалесциру-ющая светло-желтого цвета жидкость.
ЦБР - буферный раствор с перекисью водорода – раствор для разведения ТМБ – про-зрачная бесцветная жидкость.
ТМБ - концентрат тетраметилбензидина – хромоген – прозрачная бесцветная жид-кость.
Планшеты полистироловые 96-луночные монолитные для ИФА.

Комплект № 1 рассчитан на одновременное проведение 192 определений, включая контрольные.

СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ
Оборудование, материалы и реагенты (не включенные в состав набора), необ-ходимые для проведения анализа:
- многоканальный спектрофотометр, позволяющий измерять оптическую плотность содержимого лунок планшета при длине волны 450 нм;
- термостат, поддерживающий температуру (37±1) ºС;
- холодильник бытовой;
- промыватель для микропланшет, ручной или полуавтоматический;
- дозаторы (пипетки) переменного объема (механические или электронные): 8- или
12-канальные с объемом дозирования от 50 до 300 мкл и 1- канальные с объемом до-зирования от 10 до 100 мкл, от 100 до 1000 мкл и от 500 до 5000 мкл;
- наконечники для дозаторов соответствующей вместимости;
- шейкер (встряхиватель лабораторный медицинский V-3 типа вортекс);
- часы;
- бумага фильтровальная;
- перчатки резиновые хирургические;
- стаканы химические мерные или колбы мерные вместимостью 50 мл и 500 мл;
- цилиндры мерные вместимостью 25 мл, 100 мл, 500 мл;
- вода дистиллированная или вода очищенная;
- кислота серная концентрированная.
Вся посуда, используемая для постановки реакции, должна быть химически чистой и не содержать ионов тяжелых металлов. Следует избегать непосредственной близости с хлорсодержащими дезинфектантами, особенно на этапах приготовления ТМБ. Для отбора исследуемых образцов и реагентов тест-системы необходимо использовать автоматические пипетки с погрешностью измерения объёмов не более 5 %. Отбор реагентов следует произ-водить чистыми наконечниками для автоматических пипеток.

Подготовка исследуемого материала.

Обработка клещей.
Для испытания в ИФА пригодны лишь неповрежденные клещи. Клещей однократно промывают 70 % спиртом этиловым и 2-3 раза 0,9 % раствором натрия хлорида. Каждого клеща помещают в пробирку для микропроб вместимостью 0,5-1,5 мл, маркируют и хранят до исследования при температуре не выше минус 20 ºС не более 2 недель. Перед испытани-ем в ИФА готовят 10 % суспензию клеща: его растирают металлическим стержнем в той же пробирке, добавляют 0,2 мл РР (см. п. 4.4). Клеща, насосавшегося крови, растирают, добавляя РР в количестве, равном его объёму. Для ИФА берут 0,1 мл суспензии, остаток пробы хранят в той же пробирке и тех же условиях, что и клещей не более 2 недель.

Подготовка крови.
Кровь забирают из вены шприцем в количестве 2-5 мл, переносят в стерильную про-бирку, выдерживают 30-50 мин при температуре 37 оС или 1-2 ч при температуре 18-25 ºС для образования сгустка, затем центрифугируют 15-20 мин при 1500-2000 об/мин. Сыво-ротку отсасывают и помещают в стерильную пробирку, сгусток крови растирают в асепти-ческих условиях, добавляя равное ему по объёму количество РР. Затем центрифугируют при том же режиме, что и кровь. Надосадочную жидкость переносят в стерильную пробир-ку.
Приготовленные пробы маркируют и хранят до исследования при температуре от 2 до 8 оС не более 1 недели или при температуре не выше минус 20 ºС не более 3 мес. В зависимости от цели исследования в ИФА могут быть испытаны как неразведенные пробы сывороток и сгустков крови, так и в разведениях (например, от 1:2 до 1:8).

Подготовка мозговой суспензии.
Для исследования мозга инфицированных животных (или мозговой ткани людей, взятой в случае летального исхода) необходимо приготовить 1 % мозговую суспензию на РР. Суспензию центрифугируют при 3000-6000 об/мин в течение 20-30 мин, надосадочную жидкость переносят в стерильную пробирку, маркируют и хранят до исследования также как пробы крови. В ИФА проверяют как неразведенную суспензию, так и в разведении 1:10 и выше.

Подготовка культуральной жидкости.
Культуральную жидкость зараженных клеточных культур перед испытанием в ИФА освобождают от клеток центрифугированием при 3000-6000 об/мин в течение 20-30 мин. В ИФА исследуют как неразведенные пробы, так и в разведении 1:2 и более.
Подготовка растворов и реагентов (для проведения анализа на одном планшете).

Набор перед использованием необходимо выдержать не менее 30 мин при температу-ре от 18 до 25 °C.

Раствор для разведения ИГ (КББ).
0,5 мл КББ×20 разводят в 9,5 мл воды очищенной или дистиллированной (далее воды). Хранение: неиспользованный концентрат КББ×20 хранят при температуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 ºС не более 7 сут.

Иммуносорбент (ИГ).
Рабочее разведение ИГ указано на ампуле.
Содержимое ампулы с ИГ растворяют в 1 мл воды (время растворения 1,5 мин при температуре 20-25 оС), затем разводят в КББ (см. п. 4.1) до разведения, указанного на ампу-ле (например: 1:20 – 0,5 мл ИГ и 9,5 мл КББ).
Хранение: неиспользованный растворенный ИГ хранят при температуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 оС не более 7 сут.

Раствор для промывания планшетов и приготовления РР (ФСБ-Т).
Содержимое флакона с концентратом ФСБ-Т×25 разводят в 480 мл воды. В случае вы-падения осадка концентрат ФСБ-Т×25 предварительно прогревают в течение 20-30 мин при температуре 37 ºС до полного растворения осадка.
Хранение: при температуре от 2 до 8 ºС не более 2 сут или при температуре не выше минус 10 оС не более 14 сут.

Рабочий раствор (РР) для разведения образцов, конъюгата, КА+, КА–.
В 50 мл ФСБ-Т (см. п. 4.3) растворяют навеску 0,5 г стабилизатора БСА (время рас-творения 20 мин при помешивании при температуре 20-25 ºС).
Хранение: при температуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 ºС не более 7 сут.

Подготовка контрольных образцов.
Содержимое ампул с КА+ и КА– растворяют в 0,5 мл воды (время растворения 1,5 мин при температуре 20-25 ºС), затем готовят рабочее разведение каждого контрольного образ-ца в РР (см. п. 4.4) так, как указано на ампуле (например: 1:200 – 0,01 мл антигена и 2 мл РР).
Хранение: неиспользованные растворенные контрольные образцы хранят при темпе-ратуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 ºС не более 14 сут (рекомендуется разлить на аликвоты в микропробирки для исключения повторного замораживания-оттаивания).

Рабочее разведение конъюгата.
Содержимое ампулы с конъюгатом растворяют в 0,5 мл воды (время растворения
1,5 мин при температуре 20-25 ºС), затем разводят на РР (см. п. 4.4) так, как указано на ам-пуле (например: 1:40 – 0,25 мл конъюгата и 9,75 мл РР). Рабочее разведение конъюгата го-товят не ранее чем за 30 мин до использования.
Хранение: оставшийся не использованным растворенный конъюгат хранят при температуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 ºС не более 14 сут.

Подготовка рабочего раствора ТМБ.
Рабочий раствор хромогена готовят непосредственно перед использованием, соединяя 2,5 мл концентрата ТМБ и 10 мл ЦБР (разведение 1:5), тщательно перемешивают. Смесь готовят в чистой посуде, избегая контакта раствора с металлом, воздействия интенсивного источника света и близости с хлорсодержащими веществами.
Хранение: при температуре 18-25 ºС не более 15 мин в защищенном от света месте.
4.8. Стоп-реагент (кислота серная концентрации 2 моль/л) в набор не включен, гото-вится дополнительно: к 9 мл воды добавляют 1,2 мл концентрированной кислоты серной.

Проведение иммуноферментного анализа.

Внесение контрольных и исследуемых образцов.
В две лунки планшета вносят по 100 мкл КА+ (в рабочем разведении), в три лунки – КА– (в рабочем разведении), в две лунки – по 100 мкл раствора РР – контроль конъюгата.
В остальные лунки планшета (кроме 12А) вносят по 100 мкл исследуемых образцов. Планшет закрывают и помещают на 1-2 ч при температуре (37±1) ºС или на 18-25 ч при температуре от 2 до 8 ºС, после чего планшеты промывают (см. п.5.1).

Внесение конъюгата.
В каждую лунку планшета, кроме 12А, вносят по 100 мкл раствора конъюгата в рабочем разведении. Планшет закрывают и помещают на 45-60 мин при температуре (37±1) ºС, затем отмывают 5 раз, остатки влаги удаляют (см. п.5.1).

Внесение хромогена и стоп-реагента.
Во все лунки планшета вносят по 100 мкл рабочего раствора ТМБ. Планшет выдерживают в защищенном от света месте при температуре 18-25 ºС в течение 5-7 мин до появления интенсивного голубого окрашивания в лунке с КА+, после чего в лунки вносят по 50 мкл стоп-реагента (п. 4.8).

Набор реагентов ИФА ТС АГ ВКЭ Тест-система иммуноферментная для выявления антигена вируса клещевого энцефалита (Комплект № 2) включает следующие реагенты для проведения прямого твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА):
ИГ - иммуносорбент – иммуноглобулин класса G (крысиный) против вируса клещевого энцефалита (ВКЭ), аморфный порошок белого цвета, после растворения – прозрачная или слабоопалесцирующая бесцветная жидкость.
КА+ - контрольный положительный образец – антиген ВКЭ, экстрагированный из ткани мозга мышей, инфицированных ВКЭ, инактивированный бетапропиолактоном, аморфный порошок кремового цвета, после растворения – прозрачная или слабо опалесци-рующая светло-желтого цвета жидкость.
КА– - контрольный отрицательный образец – антиген из ткани мозга неинфицированных мышей, аморфный порошок кремового цвета, после растворения – прозрачная или слабо опалесцирующая светло-желтого цвета жидкость.
Конъюгат (концентрат) – иммуноглобулин класса G против ВКЭ (крысиный), конъ-югированный с пероксидазой хрена, аморфный порошок белого цвета, после растворения – прозрачная или слабо опалесцирующая бесцветная жидкость.
КББ - карбонатно-бикарбонатный буферный раствор для разведения ИГ – бесцветная прозрачная жидкость.
ФСБ-Т×25 – 25-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином, раствор для разведения образцов и промывания планшетов – прозрачная или слабо опалес-цирующая бесцветная жидкость, в которой допускается выпадение кристаллов белого цве-та, растворимых за 20-30 мин при температуре 37 ºС.
РР - раствор для разведения конъюгата, КА+, КА– и исследуемых образцов – опалес-цирующая бесцветная жидкость, допускается образование осадка белого цвета.
ЦБР - буферный раствор с перекисью водорода – раствор для разведения ТМБ – про-зрачная бесцветная жидкость.
ТМБ - концентрат тетраметилбензидина – хромоген – прозрачная бесцветная жид-кость.
Стоп-реагент – прозрачная бесцветная жидкость.
Планшет полистироловый 96-луночный разборный для ИФА.

Комплект № 2 рассчитан на проведение 96 определений, включая контрольные.

СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ
Оборудование, материалы и реагенты (не включенные в состав набора), необ-ходимые для проведения анализа:
- термостат, поддерживающий температуру (37±1) ºС;
- холодильник бытовой;
- промыватель для микропланшет, ручной или полуавтоматический;
- дозаторы (пипетки) переменного объема (механические или электронные): 8- или
12-канальные с объемом дозирования от 50 до 300 мкл и 1- канальные с объемом до-зирования от 10 до 100 мкл, от 100 до 1000 мкл и от 500 до 5000 мкл;
- наконечники для дозаторов соответствующей вместимости;
- шейкер (встряхиватель лабораторный медицинский V-3 типа вортекс);
- часы;
- бумага фильтровальная;
- перчатки резиновые хирургические;
- стаканы химические мерные или колбы мерные вместимостью 50 мл и 500 мл;
- цилиндры мерные вместимостью 25 мл, 100 мл, 500 мл;
- вода дистиллированная или вода очищенная.
Вся посуда, используемая для постановки реакции, должна быть химически чистой и не содержать ионов тяжелых металлов. Следует избегать непосредственной близости с хлорсодержащими дезинфектантами, особенно на этапах приготовления ТМБ. Для отбора исследуемых образцов и реагентов тест-системы необходимо использовать автоматические пипетки с погрешностью измерения объёмов не более 5 %. Отбор реагентов следует произ-водить чистыми наконечниками для автоматических пипеток.

Подготовка исследуемого материала.
Обработка клещей
Для испытания в ИФА пригодны лишь неповрежденные клещи. Клещей однократно промывают 70 % спиртом этиловым и 2-3 раза 0,9 % раствором натрия хлорида. Каждого клеща помещают в пробирку для микропроб вместимостью 0,5-1,5 мл, маркируют и хранят до исследования при температуре не выше минус 20 ºС не более 2 недель. Перед испытани-ем в ИФА готовят 10 % суспензию клеща: его растирают металлическим стержнем в той же пробирке, добавляют 0,2 мл РР. Клеща, насосавшегося крови, растирают, добавляя РР в количестве, равном его объёму. Для ИФА берут 0,1 мл суспензии, остаток пробы хранят в той же пробирке и тех же условиях, что и клещей не более 2 недель.

Подготовка крови
Кровь забирают из вены шприцем в количестве 2-5 мл, переносят в стерильную про-бирку, выдерживают 30-50 мин при температуре 37 оС или 1-2 ч при температуре 18-25 ºС для образования сгустка, затем центрифугируют 15-20 мин при 1500-2000 об/мин. Сыво-ротку отсасывают и помещают в стерильную пробирку, сгусток крови растирают в асепти-ческих условиях, добавляя равное ему по объёму количество РР. Затем центрифугируют при том же режиме, что и кровь. Надосадочную жидкость переносят в стерильную пробир-ку.
Приготовленные пробы маркируют и хранят до исследования при температуре от 2 до 8 ºС не более 1 недели или при температуре не выше минус 20 ºС не более 3 мес. В зависимости от цели исследования в ИФА могут быть испытаны как неразведенные пробы сывороток и сгустков крови, так и в разведениях (например, от 1:2 до 1:8).

Подготовка мозговой суспензии
Для исследования мозга инфицированных животных (или мозговой ткани людей, взятой в случае летального исхода) необходимо приготовить 1 % мозговую суспензию на РР. Суспензию центрифугируют при 3000-6000 об/мин в течение 20-30 мин, надосадочную жидкость переносят в стерильную пробирку, маркируют и хранят до исследования также как пробы крови. В ИФА проверяют как неразведенную суспензию, так и в разведении 1:10 и выше.

Подготовка культуральной жидкости
Культуральную жидкость зараженных клеточных культур перед испытанием в ИФА освобождают от клеток центрифугированием при 3000-6000 об/мин в течение 20-30 мин. В ИФА исследуют как неразведенные пробы, так и в разведении 1:2 и более.

Подготовка растворов и реагентов (для проведения анализа на одном планшете).
Набор перед использованием необходимо выдержать не менее 30 мин при температу-ре от 18 до 25 °C.

Иммуносорбент (ИГ).
Рабочее разведение ИГ указано на ампуле (например, 1:20).
Содержимое ампулы с ИГ растворяют в 0,5 мл воды очищенной или дистиллирован-ной (далее воды) (время растворения 1,5 мин при температуре 20-25 ºС), затем разводят в КББ до разведения, указанного на ампуле (например: 1:20 – 0,5 мл ИГ и 9,5 мл КББ).

Раствор для промывания планшетов (ФСБ-Т).
Необходимое количество концентрата ФСБ-Т×25 (в зависимости от количества стри-пов) разводят в 25 раз водой (см. таблицу 1). В случае выпадения осадка концентрат
ФСБ-Т×25 предварительно прогревают 20-30 мин при температуре 37 ºС до полного раство-рения осадка.
Хранение: неиспользованный концентрат ФСБ-Т×25 хранят при температуре от 2 до
8 ºС не более 2 сут или при температуре не выше минус 10 ºС не более 14 сут.

Подготовка контрольных образцов.
Содержимое ампул с КА+ и КА– растворяют в 0,3 мл воды (время растворения 1,5 мин при температуре 20-25 ºС), затем готовят из них рабочее разведение каждого контрольного образца в РР так, как указано на ампуле (например: 1:200 – 0,01 мл антигена и 2 мл РР).
Хранение: неиспользованные растворенные контрольные образцы хранят при темпе-ратуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 ºС не более
14 сут (рекомендуется разлить на аликвоты в микропробирки для исключения повторного замораживания-оттаивания).

Рабочее разведение конъюгата.
Содержимое ампулы с конъюгатом растворяют в 0,3 мл воды (время растворения
1,5 мин при температуре 20-25 ºС). Необходимое количество конъюгата (в зависимости от количества используемых стрипов) разводят РР до разведения, указанного на ампуле. Тщательно перемешивают. Рабочее разведение конъюгата готовят не ранее чем за 30 мин до использования.
Хранение: неиспользованный растворенный конъюгат хранят так же, как контроль-ные образцы.

Рабочий раствор ТМБ.
Рабочий раствор хромогена готовят непосредственно перед использованием, соединяя концентрат ТМБ с ЦБР в соотношении 1:5, тщательно перемешивают. Смесь готовят в чистой посуде, избегая контакта раствора с металлом, воздействия интенсивного источника света и близости с хлорсодержащими веществами.

Хранение: смесь хранят при температуре 18-25 ºС не более 15 мин в защищенном от света месте. Неиспользованные ТМБ и ЦБР хранят при температуре от 2 до 8 ºС не более 14 сут.

Внимание! Посуду и наконечники пипеток, контактирующие с раствором ТМБ нель-зя отмывать с применением синтетических моющих средств, поскольку даже их следы ве-дут к разложению ТМБ в ходе реакции (лучше всего готовить раствор субстрата в специ-ально выделенной промаркированной посуде).

Внесение хромогена и стоп-реагента.
Во все лунки планшета вносят по 100 мкл приготовленного хромогена. Стрипы выдерживают в защищенном от света месте при температуре 18-25 ºС в течение 5-7 мин до появления интенсивного голубого окрашивания в лунке с КА+, после чего в лунки вносят по 50 мкл стоп-реагента.

Теплые майские деньки многие предпочитают проводить на природе. Кто-то едет жарить шашлык на дачу, кто-то отправляется гулять в лес. Там-то человека и подстерегает опасность, исходящая от маленького и незаметного насекомого – клеща. Сами по себе эти маленькие паучки для человека не опасны, чего нельзя сказать о клещевом энцефалите или клещевом боррелиозе (болезнь Лайма) – вирусных инфекциях, которую переносят клещи.

Впервые вирус клещевого энцефалита ученые обнаружили в 1937 году в мозге умерших, а также в крови и спинномозговой жидкости больных людей, клещей и диких позвоночных животных Сибири, Урала и Дальнего Востока. Вирусологи хорошо изучили эпидемиологию и клиническую картинку данного вируса. Они установили, что для клещевого энцефалита характерна лихорадка, интоксикация и поражение серого вещества головного мозга (энцефалит) и/или оболочек головного и спинного мозга (менингит и менингоэнцефалит), что в свою очередь может привести к стойким неврологическим и психиатрическим осложнениям и даже к смерти больного.

Естественным резервуаром вируса и его источником являются более 130 видов различных теплокровных диких и домашних животных и птиц: грызуны, зайцы, насекомоядные, хищники и копытные. Клещи заражаются от животных-носителей вируса и при укусе передают вирус человеку.

Обычно болезнь начинается с лихорадки, которая продолжается неделю и сопровождается головной болью, болью в мышцах, тошнотой, рвотой и общим недомоганием. Затем наступает восьмидневная ремиссия, после которой у некоторых больных следует вторая фаза заболевания, сопровождающаяся поражением центральной нервной системы, включая менингит (лихорадка, сильная головная боль, ригидность мышц шеи) и/или энцефалит (различные нарушения сознания, расстройства чувствительности, моторные нарушения вплоть до паралича). Однако бывают и противоположные случаи, когда после укуса инфицированного клеща болезнь у человека не развивается, а напротив он вырабатывает иммунитет к клещевому энцефалиту.

Еще одно опасное заболевание, передающее через укус клеща - клещевой боррелиоз или, иначе говоря, болезнь Лайма. В отличие от клещевого энцефалита все вышеперечисленные симптомы проявляются у человека не сразу, а спустя 3-6 недель после контакта с зараженным насекомым. Кроме того, при болезни Лайма на месте укуса клеща появляется красное пятнышко (эритема), на которое люди часто не обращают внимания.

Как в первом, так и во втором случае на течение заболевания во многом влияет скорость диагностики. Иными словами, чем быстрее подтвержден факт укуса именно зараженным клещом, и чем быстрее начато лечение, тем больше шансов избежать необратимых изменений в организме и спасти жизнь человека.

Однако одной только клинической картины для подтверждения клещевого энцефалита и/или болезни Лайма мало. Присутствие вируса должно также подтвердить серологическое исследование - анализ на определение антител или антигенов в сыворотке крови больных, основанное на реакции иммунитета. Проблема в том, что сразу после укуса клеща анализ сдавать нет смысла, ведь антитела к вирусу клещевого энцефалита в крови появятся только через 2 недели после возможного заражения, к клещевому боррелиозу – через 3-4. Выходом может быть исследование на инфекцию самого клеща, однако не все пострадавшие имеют возможность оперативно привести насекомое в лабораторию.

Однако теперь эти проблему может решить новая совместная разработка томских и новосибирских микробиологов, а также ООО "УМИУМ" – экспресс-тест на клещевой энцефалит и болезнь Лайма. Его можно использовать и для удаления присосавшегося насекомого с поверхности тела, и для его последующего анализа.

"Устройство состоит из вилочки для удаления клеща, цилиндра и поршня пластикового шприца, небольшой шайбы из керамики и специального вещества, пробирки с водой, а также тест-полоски с антителами вируса клещевого энцефалита и болезни Лайма", - сообщил агентству "Интерфакс-Сибирь" заместитель директора ООО "УМИУМ" Александр Мягков.

По его словам, для проведения теста клещ с помощью вилочки помещается в цилиндр, где размалывается между шайбой и поршнем. Далее в цилиндр добавляется несколько капель воды, после чего полученная смесь выдавливается на тест-полоску.

"Полоска похожа на тест на беременность: появление первой полосы означает правильность проведения теста, появление второй - наличие энцефалита, третьей - наличие болезни Лайма", - пояснил собеседник агентства.

При этом он подчеркнул, что проведение экспресс-теста не освобождает пострадавшего от посещения пункта серопрофилактики, где даже перемолотый клещ будет использован для проведения полноценного анализа.

"Экспресс-тест создается для охотников, путешественников и всех, кто бывает в лесу", - отметил Мягков.

Он сообщил, что в настоящее время сибирский экспресс-тест на клещевой энцефалит и болезнь Лайма не имеет аналогов в России.

"Есть подобное устройство в Польше, но там система перемалывая клеща является открытой, с помощью зубочистки, поэтому Роспотребнадзор запретил их продажи в нашей стране. Кроме того, их система стоит 15 евро, а наша - 100 рублей", - уточнил собеседник агентства.

Он отметил, что в текущем сезоне разработчики протестируют 1 тыс. устройств, после чего планируют получить разрешение на их производство и продажу.

"Мы предполагаем что, в продажу экспресс-тест поступит в 2014 году", - добавил он.

Между тем, несмотря на появление таких высокотехнологичных устройств для удаления клещей и диагностики клещевого энцефалита и болезни Лайма, не стоит забывать о профилактике этих опасных заболеваний.

В настоящее время самой надежной превентивной мерой защиты от заражения клещевым энцефалитом является вакцинация. Обязательной вакцинации подлежат люди, работающие в эндемичных очагах (лесники, геологи, охотники). Все остальные могут сделать прививку за свой счет. Также укуса клеща помогут избежать специальные спреи, которые разбрызгиваются на одежду перед походом в лес, а также самоосмотры после выхода из леса.

Если укуса клеща избежать не удалось, то в качестве экстренной профилактики человеку вводят иммуноглобулин или йодантипирин. Причем, чем быстрее пострадавший обратиться за помощью, тем больше будет эффективность лечения.