Пцр положительный ифа на инфекции отрицательный

Существует несколько лабораторных способов определения ВИЧ-инфекции. В каких случаях они проводятся и где можно сделать анализ?

Определить наличие ВИЧ-инфекции можно только одним способом – с помощью специального лабораторного обследования. Что бы ни казалось пациентам относительно их здоровья и самочувствия, клинических признаков, строго специфичных для ВИЧ, не существует.

Существуют различные методы диагностики ВИЧ. Наиболее распространённый на данный момент – анализ крови на антитела к ВИЧ. Антитела – специальные белки, которые вырабатываются иммунной системой организма в ответ на проникновения вируса с целью защиты организма.

Метод ИФА в диагностике ВИЧ является самым распространённым предварительным методом, его также можно назвать скрининговым тестом. Второй тест, или иммунный блот, подтверждает специфичность антител к ВИЧ. Если с помощью ИФА определяется положительный результат, тогда тот же образец крови перепроверяют методом иммунного блота на специфичность антител. Обнаружение антител к ВИЧ свидетельствует о ВИЧ-инфекции.

Экпресс-тесты чаще всего используются при поступлении необследованных женщин в родильные дома, а также при аварийных ситуациях – для медицинских работников, оказывающих помощь пациентам с неизвестным ВИЧ-статусом. Вирусологические методы диагностики (ПЦР-исследование).

ПЦР-диагностика используется для установления первичного диагноза ВИЧ-инфекции только в определённых клинических ситуациях. Например, при подозрении на острую инфекцию или при подозрении на вертикальную передачу ВИЧ от матери к ребёнку.

Все исследования на ВИЧ проводятся с использованием различных тест-систем, как отечественных, так и зарубежных. Нужно отметить, что ни одна тест-система не является стопроцентно чувствительной и специфичной. Все результаты лабораторных методов диагностики требуют грамотной интерпретации специалиста в зависимости от ситуации и клинических проявлений.

Обследоваться на ВИЧ просто – достаточно обратиться к своему терапевту в поликлинике по месту жительства с просьбой сдать анализ крови на наличие ВИЧ. В сельской местности анализ крови на ВИЧ можно сделать в центральных районных больницах. Во всех городских поликлиниках есть возможность сделать анализ крови на антитела к ВИЧ иммуноферментным методом, причём абсолютно бесплатно.

Существуют специальные кабинеты анонимного обследования на ВИЧ, то есть без предоставления документов. В Москве они есть в каждом административном округе – на базе различных поликлиник и в Московском городском центре профилактики и борьбы со СПИД. Если вы решили обследоваться анонимно, заранее предупредите медицинский персонал. Анонимное обследование также проводится бесплатно.

Когда и кому следует проходить тестирование на ВИЧ
Как проходит ВИЧ-диагностика

Обычно тест на ВИЧ является строго добровольной процедурой. Однако существуют обстоятельства, когда обследоваться на ВИЧ-инфекцию просто необходимо.

Тестирование на ВИЧ в большинстве случаев носит добровольный характер. Бывают случаи, когда обследование на ВИЧ является обязательным.

Обследоваться на ВИЧ следует каждому, кто начинает вести половую жизнь. Оптимально выяснить ВИЧ-статус партнёра ещё до вступления с ним в интимные отношения. Если это не удалось сделать, то обследоваться на ВИЧ-инфекцию нужно через 3 месяца после начала половой жизни. То же самое касается и ситуации смены полового партнёра. Если на протяжении долгого времени половой партнёр всегда постоянный, то необходимости в периодическом обследовании на ВИЧ нет.

Аналогичная ситуация – при подозрении заражения через кровь, например, при употреблении инъекционных наркотиков нестерильным шприцем. После опасных, с точки зрения заражения ВИЧ, ситуаций при отрицательных результатах первого обследования повторные анализы желательно сдавать каждые три месяца в течение года.

Иногда анализ крови на ВИЧ необходим по клиническим признакам – например, если у человека имеется выраженный иммунодефицит или есть клинические признаки, позволяющие заподозрить ВИЧ-инфекцию или СПИД. Рекомендовано обследование также при выявлении заболеваний, передающихся половым путём, гепатита В или С, туберкулёза.

Представителям ряда профессий, которые при работе непосредственно контактируют с кровью и биологическими жидкостями – врачам, лаборантам, медицинским сёстрам – анализ крови на ВИЧ-инфекцию следует делать ежегодно. Кроме того, обследоваться нужно медицинским работникам СПИД-центров, которые постоянно контактируют с ВИЧ-позитивными.

Особенно важно тестирование для лиц, контактирующих с ВИЧ-инфицированными, в том числе в быту. Людям, имеющим регулярные половые контакты с ВИЧ-инфицированным, нужно обследоваться каждые три месяца, даже при условии постоянного использования презерватива.

Пациентам, которым переливались компоненты крови (особенно это касается эритроцитарной массы), через три месяца желательно сделать исследование на ВИЧ. То же самое касается тех, кому были пересажены донорские органы и ткани.

Что касается детей, рождённых от ВИЧ-инфицированных женщин, в течение первых 12-18 месяцев анализ крови на антитела к ВИЧ проводить нецелесообразно. Дело в том, что при беременности материнские антитела к ВИЧ переносятся с кровью к плоду и сохраняются у ребёнка в крови до 18-ти месяцев даже при отсутствии ВИЧ-инфекции. Таким образом, новорожденным или выполняют ПЦР-диагностику ВИЧ, или после 18-ти месяцев – анализ на антитела к ВИЧ.

Людям из групп риска по заражению ВИЧ – гомосексуалам и коммерческим секс-работникам – следует тестироваться на ВИЧ каждые три месяца, независимо от того, пользуются ли они презервативом при половых контактах. Употребляющим наркотики также нужно обследоваться регулярно, раз в три месяца, в том числе и тем, кто употребляет неинъекционные формы наркотиков.

Повторные и дальнейшие тесты на ВИЧ-инфекцию определяются специалистом на основании результатов первоначального обследования, клинических данных и в зависимости от ситуации.

Тестирование на ВИЧ – простая и безболезненная процедура. Как она проходит, нужно ли готовиться, что показывают результаты тестов.

Обследование на ВИЧ в большинстве случаев – дело добровольное, поэтому осуществляется только после получения информированного согласия пациента.

Кровь забирают на анализ в процедурном кабинете. Забор крови производится из локтевой вены в количестве 3-5 мл в стерильную пробирку. Кровь желательно сдавать утром натощак.

В медицинских учреждениях используются только одноразовые инструменты. При сдаче крови заразиться ВИЧ невозможно.

Результаты первичной диагностики ВИЧ бывают трёх видов – положительный, отрицательный и сомнительный.

Положительный результат означает, что тест-системой в образце крови обнаружены антитела к ВИЧ, это может говорить о том, что у вас действительно есть ВИЧ-инфекция. Положительный результат в ИФА обязательно подтверждают в иммунном блоте с тем же образцом крови. В редких случаях результат бывает ложноположительным. Ложноположительные результаты бывают при вирусной инфекции у беременных, и при аутоиммунных заболеваниях. Положительный результат могут по-другому называть серопозитивным или статусом ВИЧ+.

Достаточно редко результаты тестов бывают сомнительными. Это может быть в двух случаях: когда человек недавно заразился ВИЧ и для обнаружения обычными тест-системами концентрация антител недостаточна, или когда ВИЧ отсутствует, но есть другие хронические заболевания – обменного или аутоиммунного характера. Поэтому проводить тестирование сразу после опасного контакта нецелесообразно. Если сомнительный результат был получен при обследовании иммуноферментным методом, обычно дополнительно проводят подтверждающий анализ с помощью иммуноблота. При сохранении сомнительного результата обследование повторяют через 1-3 месяца и наблюдают пациента в течение полугода.

Далеко не всякая инфекция проявляет себя — многие бактерии и вирусы могут годами жить в нашем организме, не вызывая никаких подозрений. Однако последствия скрытых инфекций бывают очень серьезными. В этой статье мы расскажем о том, как найти и определить возбудителя заболевания и какими бывают анализы на скрытые инфекции.

В основном к скрытым инфекциям относятся заболевания, передающиеся половым путем. Это болезни с продолжительным инкубационным периодом. Они могут никак не проявляться на протяжении нескольких месяцев и даже лет. Таких инфекций более 30. К самым распространенным относятся сифилис, герпес, гонорея, а также менее опасные уреаплазмоз, вирус папилломы человека и хламидиоз. Однако и они могут создать значительные проблемы, особенно при планировании беременности.

Протекая бессимптомно, скрытые инфекции вызывают воспаление и легко переходят в хроническую форму. Последствиями скрытых инфекций, передающихся половым путем, могут быть частые воспалительные заболевания мочеполовой сферы, сложности с зачатием, у мужчин — проблемы с потенцией, у женщин — с менструальным циклом и вынашиванием детей.

Чаще всего скрытые инфекции обнаруживаются практически случайно — во время исследований, которые проводятся по совершенно иному поводу, например, во время выяснения причин бесплодия. Еще хуже, если скрытые инфекции у женщин диагностируются во время планового обследования после наступления беременности — многие из них оказывают негативное воздействие на плод, которое особенно выражено в первые недели беременности.

Именно поэтому сдавать анализы на скрытые инфекции нужно регулярно — если диагностировать их вскоре после заражения, лечение будет более простым и быстрым, они не успеют нанести существенного вреда здоровью. Рекомендуется сдавать анализы на скрытые инфекции через несколько недель после предполагаемого заражения (после незащищенного полового акта), а также перед планированием беременности — причем в этом случае сдать анализы нужно обоим партнерам. Врачи советуют проходить плановое обследование хотя бы раз в год. Анализы на скрытые инфекции доступны и стоят недорого, но при этом они могут помочь вам сохранить здоровье и средства.

Существует несколько методов лабораторной диагностики скрытых инфекций. Все они позволяют обнаружить возбудителя болезни на ранних стадиях, еще до появления первых симптомов заболевания. Некоторые анализы могут также показать стадию болезни, был ли человек заражен определенной инфекцией в прошлом, а также более или менее точно указать время заражения.

Микроскопический анализ. Биоматериалом обычно является мазок — клетки эпителия, которые берут из уретры или цервикального канала при помощи специальной мягкой щеточки, напоминающей щеточку от туши для ресниц. Для того чтобы результат был точным, перед забором материала нельзя пользоваться тампонами, вагинальными свечами и гелями, антибактериальным мылом, желательно также отказаться от половых контактов. Биоматериал из уретры берут до мочеиспускания. Полученный биоматериал переносят на предметное стекло и окрашивают специальными красителями (анилиновые красители, окраска по Граму, окраска по Романовскому), которые позволяют отчетливо увидеть определенных возбудителей заболеваний. Микроскопическое исследование также позволяет заметить косвенные признаки наличия воспалительной реакции — например, повышенное содержание лейкоцитов или фибрина. Такие возбудители, как трихомонады, гонококки, гарднереллы и грибки, отлично видны при микроскопическом исследовании, особенно во время острой стадии заболевания. Но вот при хроническом течении трихомониаза и гонореи точность этого метода не превышает 40%, что довольно небольшой показатель.

Бактериологический посев на микрофлору и чувствительность к антибиотикам. Для этого анализа также используется мазок. Полученный биоматериал переносят на питательную среду. В течение нескольких дней бактерии, полученные вместе с биоматериалом, размножаются в ней, а затем специалист рассматривает их в микроскоп и идентифицирует. У метода бактериологического посева есть один существенный плюс. При этом исследовании возможно не только выявить возбудителя болезни, но и экспериментальным путем выяснить, к какому типу антибиотиков он наиболее чувствителен. Это позволяет врачу сразу подобрать самые действенные препараты, которые однозначно сработают.

Иммуноферментный анализ (ИФА). Методом ИФА исследуют сыворотку крови, взятой утром натощак, или мазок из уретры или цервикального канала. Метод ИФА показывает не самих возбудителей, а антитела к ним. Антитела вырабатываются нашей иммунной системой при столкновении с инфекцией. Эти белки специфичны, то есть для каждой отдельной инфекции защитная система вырабатывает определенный, характерный только для нее белок. ИФА эффективен и точен при выявлении тех инфекций, к которым формируются антитела — уреаплазмам, микоплазмам, хламидиям, различным паразитам и вирусам. Точность метода доходит до 90% [1] .

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ). Этим методом чаще всего исследуют мазок. Суть его заключается в окраске биоматериала специальными флуоресцентными антителами. Они соединяются с определенными возбудителями болезни, и специалист может увидеть их при помощи люминесцентного микроскопа — в особом излучении они начинают светиться. Это очень эффективный метод диагностики уреаплазмоза, микоплазмоза, хламидиоза, трихомониаза и некоторых других инфекций, которые порой непросто выявить другими способами. Точность этого метода — около 80% [2] .

Полимерная цепная реакция (ПЦР). Этим методом можно исследовать любой биоматериал, но на практике чаще всего для анализа берут мазок или кровь. Сегодня этот метод считается одним из самых современных и точных. Суть этого способа диагностики скрытых инфекций заключается в многократном копировании фрагмента ДНК или РНК возбудителя. Когда копий будет достаточно много, специалист идентифицирует их и выяснит, какой именно вирус или бактерия присутствует в организме. Преимущество метода ПЦР в том, что для диагностики достаточно наличия всего одного фрагмента РНК или ДНК. На практике это означает, что метод ПЦР позволяет проводить диагностику на самых ранних стадиях заболевания, тогда, когда остальные методы в этом случае могут дать ложноотрицательный результат [3] . Этот способ особенно точен в отношении вирусов, уреаплазм, микоплазм, гарднерелл, грибковых инфекций.

Скорость получения результатов зависит от метода исследования.

Дольше всего придется ждать результатов бактериологического посева. Это исследование никак нельзя отнести к экспресс-методам — результаты можно будет получить самое раннее через неделю, а часто приходится ждать еще дольше.

Результаты анализов, проводимых методом ИФА, РИФ или ПЦР, обычно выдают уже через сутки или через 2 дня.

Если лаборатория перегружена, результаты выдадут позже. Чаще всего это бывает с небольшими лабораториями, у которых нет достаточного количества сотрудников и оборудования. Крупные же учреждения работают быстрее.

Результаты анализов расшифровывает врач, он же выписывает направление на дополнительные исследования, если результат вызывает сомнения. Иногда результаты анализов, проведенных разными способами, не совпадают друг с другом — один дает положительный результат, а другой — отрицательный. Пусть это вас не настораживает — причина подобного положения вещей не в слабости методов, а в их специфике. Например, если ПЦР показал наличие инфекции, а ИФА — нет, это значит, что болезнь давно перешла в хроническую стадию и иммунная система уже не реагирует на нее, так как ПЦР показывает наличие возбудителя как такового, а ИФА — лишь реакцию защиты организма.

Бывает и наоборот: ПЦР — отрицательный, а ИФА — положительный. Это достаточно характерно для пациентов, которые не так давно вылечились от заболевания. Бактерий или вирусов уже нет, но антитела, выработанные организмом, еще присутствуют в биоматериале.

Сдать анализы на скрытые инфекции можно в государственных или частных лабораториях. Первый вариант — бесплатный, однако он сопряжен с некоторыми неудобствами. Нужно записаться на прием к врачу, получить направление, отстоять очередь. Часы работы муниципальных медучреждений не всегда удобны.

Именно поэтому многие предпочитают выбрать более короткий путь и обращаются в коммерческие лаборатории и частные клиники. Сдать анализы там можно и без направления от врача, по собственной инициативе, в любое удобное время, без очередей. Многие лаборатории даже предлагают комплексные обследования, в которые входят анализы на все самые распространенные скрытые инфекции, а также пакеты диагностических услуг для женщин, мужчин и тех, кто планирует стать родителями. Это очень удобно: во-первых, такие обследования дешевле, во-вторых, вам не придется думать, какие именно анализы целесообразно сдавать.

Цена анализов на скрытые инфекции может значительно различаться в разных лабораториях. На стоимость влияет и расположение лаборатории (чем она ближе к центру, тем дороже), и ее оснащение, и, наконец, уровень обслуживания.

Стоимость ПЦР на скрытые инфекции зависит от типа возбудителя. В среднем стоимость исследования составляет приблизительно 200–600 рублей за анализ на одного возбудителя и около 1500–2000 рублей за комплексное обследование.

Микроскопическое исследование стоит примерно 250–400 рублей.

ИФА — метод весьма недорогой и доступный, такой анализ обойдется в сумму около 200–600 рублей.

Бактериологическое исследование с определением чувствительности к антибиотикам стоит около 1400–2000 рублей.

Исследование методом РИФ обойдется для пациента приблизительно в 250–800 рублей.

К стоимости анализа как такового нужно прибавить и стоимость забора биоматериала — в районе 150–250 рублей за забор крови и от 200 рублей — за забор мазка.

Все современные методы диагностики скрытых инфекций информативны, но для того чтобы получить полную картину, нужно сдать несколько анализов — только тогда, сопоставив их результаты, врач сможет установить, есть ли инфекция и как именно нужно ее лечить.

За звучной аббревиатурой ПЦР скрывается сложная и не слишком понятная для рядового пациента расшифровка — полимеразная цепная реакция. Что же такое ПЦР-диагностика, на чем она основана и почему в последнее время ее стали считать самой перспективной технологией в постановке диагнозов, касающихся инфекционных и вирусных заболеваний? Мы расскажем о преимуществах ПЦР-метода, его особенностях и этапах проведения.

ПЦР-диагностика: что это такое?

Диагностика методом ПЦР существует чуть более 30 лет. Значительно эволюционировав за это время, она зарекомендовала себя как один из наиболее точных способов выявления инфекций. В основе метода лежит принцип многократного увеличения микроскопических концентраций фрагментов ДНК возбудителя в биологической пробе пациента в искусственных условиях. В результате сложного процесса, называемого амплификацией, под воздействием ферментов и изменения температуры (от 50 до 95°С) из одной молекулы ДНК образуется две. При этом происходит копирование участка ДНК, который присутствует только у того вида патогенного микроорганизма, который интересует врача.

Цикл образования новой молекулы ДНК занимает всего около 3 минут, а тридцати-сорока циклов вполне достаточно, чтобы получить количество молекул, необходимое для достоверного визуального определения методом электрофореза.

Кроме амплификации, то есть простого увеличения числа копий молекулы ДНК, с помощью ПЦР можно производить и другие манипуляции с генетическим материалом, например, сращивать фрагменты ДНК, вводить мутации и т.д. Это позволяет использовать ПЦР не только для диагностики инфекционных и генетических заболеваний, но и для установления отцовства, клонирования и выделения новых генов.

ПЦР-диагностика проводится в специальных лабораториях с помощью амплификационного оборудования. На сегодня существует множество различных модификаций ПЦР, включая технологии с использованием не только ДНК, но и фрагментов рибонуклеиновой кислоты (РНК). В некоторых из них амплификация осуществляется при постоянной температуре, и для их проведения специальное оборудование не требуется.

Еще одна популярная модификация ПЦР — мультиплексная амплификация (МПА), которая позволяет проводить исследование сразу нескольких изучаемых фрагментов в одной пробирке. Это не только ускоряет и удешевляет проведение анализа, но и позволяет рассматривать одни фрагменты, получившиеся в результате реакции, в качестве положительных маркеров для других, что еще больше увеличивает точность исследования методом ПЦР.

В клинической медицине ПЦР-диагностика является одним из наиболее востребованных методов анализа в самых разных сферах:

Прямое определение возбудителя инфекции. Некоторые традиционные методы, такие как иммуноферментный анализ (ИФА), выделяют только белки-маркеры, которые являются продуктом жизнедеятельности возбудителей инфекции, а потому только косвенно указывают на присутствие микроорганизмов. Наличие специфического участка в ДНК, выявленное с помощью ПЦР, безошибочно или почти безошибочно указывает на присутствие конкретной инфекции.
Высокая специфичность метода . Она обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется фрагмент ДНК, характерный только для конкретного возбудителя инфекции. Специфичность исключает возможность ложных результатов анализа, тогда как в иммунологических методах исследований ошибки вполне вероятны из-за перекрестной реакции антигенов.
Высокая чувствительность . При помощи ПЦР-диагностики можно выявить присутствие в организме даже единичных клеток вирусов или бактерий в тех случаях, когда обычными методами сделать это практически невозможно. ПРЦ определяет наличие всего 10–100 клеток в пробе, тогда как иммунологическими и микроскопическими тестами можно определить наличие инфекции при количестве клеток не менее 103–105.
Универсальность . Сходство состава всех ДНК или РНК дает возможность применять универсальные методы лабораторных исследований, диагностируя сразу несколько возбудителей из одной биологической пробы.
Скорость получения результатов . Поскольку для проведения ПЦР-диагностики не нужен посев и выделение культуры возбудителя, то и большого количества времени на нее не требуется. Весь цикл — от забора биоматериала до получения результатов — занимает 4–5 часов.
Диагностика латентных инфекций . ПЦР-методом диагностируются трудно культивируемые и некультивируемые формы микроорганизмов, встречающиеся в тех случаях, когда заболевание протекает в скрытой форме.

Методом ПЦР можно выявлять возбудителей инфекции не только в организме человека, но и в почве, воде, продуктах питания.

Тем не менее не стоит думать, что ПЦР-диагностика не имеет недостатков. У нее есть свои ограничения, но их количество настолько незначительно, что не может отрицательно повлиять на популярность и эффективность метода:

Вероятность амплификации ДНК не только живого, но и погибшего микроорганизма . При проведении ПЦР-диагностики для контроля эффективности лечения необходимо соблюдать определенные требования. В частности, проводить ПЦР нужно после определенного промежутка времени (1–2 месяца), за который происходит полное исчезновение возбудителя инфекции в организме.
Возможность возникновения перекрестной реакции . Подбор фрагментов ДНК (праймеров) осуществляется на основе знаний о генетическом строении конкретного микроорганизма. Но теоретически такой же фрагмент может присутствовать и у других микроорганизмов, геном которых на сегодняшний день еще не расшифрован. Их присутствие в пробе может привести к ложноположительному результату анализа.
Изменчивость микроорганизмов . Эта способность возбудителей к мутации иногда приводит к тому, что некоторые их штаммы становятся неуловимыми в процессе ПЦР-анализа.

Чтобы уменьшить риски, разработаны стандарты объемов испытаний тест-систем ПЦР-диагностики, включающие проверку на перекрестные реакции и тестирование всех известных штаммов конкретного возбудителя.

ПЦР-диагностика проводится в специальной лаборатории в несколько этапов.

Забор биоматериала . Процедура, предшествующая непосредственному анализу, которая осуществляется в процедурном кабинете соответствующего профиля. Забор делается с помощью стерильного оборудования только в стерильные пробирки. Материалом для исследования могут быть:
- Эпителиальные соскобы со слизистых оболочек: из уретры, из цервикального канала, со слизистой дыхательных путей и зева, из конъюнктивы. Забор проводится с помощью специального ершика, при этом недопустимо попадание в материал следов крови.
- Моча . Собираются первые 50 г утренней мочи в стерильную емкость. Материал используется для диагностики мочеполовых инфекций.
- Мокрота . Используется для ПЦР-диагностики туберкулеза и респираторных форм микоплазмоза и хламидиоза. Мокроту собирают в стерильный флакон в количестве 15–20 мг.
- Кровь, сыворотка, плазма . С их помощью диагностируются гепатиты, герпес, ВИЧ-инфекция. Для анализа используется венозная кровь (1–1,5 мл), собранная у пациента натощак в стерильную пробирку. Хранить биоматериал можно не более суток при температуре 4°С. Замораживать кровь категорически запрещается.
- Биологические жидкости . К ним относятся слюна, сок простаты, околоплодная, плевральная, спинномозговая, суставная жидкости. Собираются при помощи пункции с использованием стерильного инструментария в количестве 0,1–1,5 мл в стерильные пробирки.
- Биоптаты , т.е. материалы, полученные путем биопсии. Обычно на анализ отправляют биоптаты двенадцатиперстной кишки или желудка, чтобы выявить хеликобактерную инфекцию. Объем материала 2–3 мм 3 .
Хранение и транспортировка биоматериала . Хранить образцы можно при комнатной температуре не более 2 часов. Если необходимо длительное хранение, то пробы помещают в холодильник с температурой 2–8°С на срок не более одних суток. Допустимо хранение некоторых биоматериалов в течение двух недель в замороженном виде при температуре -20°С. Оттаивание и повторное замораживание проб запрещено. Транспортировка, если она необходима, должна проводиться в специальных термоконтейнерах или термосах с соблюдением всех правил хранения и перевозки биоматериалов.
Выделение ДНК из образца . Способ выделения зависит от вида определяемого микроорганизма и от вида биологического образца. Если, например, анализируется соскоб эпителиальных клеток, используется так называемый метод твердофазной сорбции, заключающийся в добавлении в образец специального вещества, концентрации ДНК на сорбенте и его многократной отмывке буферным раствором.
Проведение ПЦР . Некоторое количество образца из биологической пробы переносится в специальную микроцентрифужную пробирку. Туда же добавляется амплификационная смесь, имеющая сложный состав, в объеме 25 мл. Пробирки устанавливают в программируемый термостат, и автоматическом режиме проводится амплификация. Время ее проведения зависит от заданной программы и составляет 2–3 часа. Одновременно с опытными пробами проводятся контрольные — положительные , включающие в себя контрольный препарат ДНК исследуемого возбудителя, и отрицательные , не содержащие исследуемую ДНК. Количество циклов амплификации варьирует от 30 до 40, более 40 циклов проводить не рекомендуется, так как это способствует увеличению количества неспецифических продуктов в пробе.
Регистрация результатов . Фрагмент ДНК, характерный для возбудителя инфекции, выделяют методом электрофореза в присутствии специального вещества — бромистого этидия. Его соединение с фрагментами ДНК дает светящиеся полосы при облучении ультрафиолетовым излучением. Образец помещают в камеру для электрофореза и в течение 35–40 минут проводят разделение продуктов амплификации. После этого образец просматривают в ультрафиолетовом свете — наличие оранжевой светящейся полосы свидетельствует о положительном результате.
Интерпретация результатов исследования . Результат ПЦР-диагностики может быть либо положительным, либо отрицательным. Положительный результат говорит о том, что в организме человека обнаружены следы инфекции, причем именно в данный момент времени. Количественный результат ПЦР-анализа оценить может только врач, они индивидуальны для разных типов инфекций. На основании количественного результата можно сделать вывод о степени активности заболевания и определить характер лечения.

Цена ПЦР-диагностики зависит от того, на какую конкретно инфекцию пациент планирует проверяться, от вида анализируемого материала, методики тестирования — качественной или количественной. Цена за определение одной инфекции составляет от 200 до 800 рублей в разных клиниках. Кроме того, к стоимости анализа добавится и плата за забор биоматериала — около 400 рублей. Средняя стоимость ПЦР-диагностики разных видов приведена в таблице 1.

Таблица 1 . Примерные цены на анализы ПЦР в Москве

Название анализа	Цена, руб.
Определение ДНК хламидия	750
Определение ДНК микоплазмы хоминис	540
Определение микоплазмы гениталиум	350
Определение ДНК уреаплазмы	350
Гонококк, определение ДНК	350
Определение ДНК герпеса (разные типы)	350–600
Определение ДНК кандиды	570
Вирус краснухи, определение РНК	800
Дифференцированное определение ДНК ВПЧ (разные типы)	350–1900 [1]

Читайте также: