Пцр или ифа что достовернее на инфекции

Давайте поговорим об одном из важнейших вопросов в диагностике инфекционных заболеваний у животных.

На данную тему многое сказано и написано, но у владельцев и заводчиков до сих пор возникают вопросы и сложности. В настоящее время ИФА (иммуноферментный анализ) и ПЦР (полимеразная цепная реакция) являются наиболее достоверными методами диагностики инфекционных заболеваний у животных и человека.

Основанные на последних достижениях молекулярной биологии, данные способы исследования быстро вошли в ветеринарную практику и, тем самым, значительно подняли общий уровень диагностики в целом. Каждый из этих методов позволяет оценить ситуацию с определенной стороны, в зависимости от цели, которая ставится при исследовании.

ПЦР – один из самых точных и чувствительных методов в лабораторной диагностике. Он обнаруживает макромолекулы ДНК или РНК возбудителей даже в случае присутствия незначительного их количества в пробе. Генетический материал бактериальной или вирусной инфекции индивидуален, а это значит, что метод обладает самой высокой специфичностью. Принцип ПЦР заключается в том, что происходит многократное избирательное копирование искомого участка генетического кода предполагаемой инфекции.

ИФА – это лабораторный иммунологический метод качественного определения и количественного измерения антител к различным возбудителям инфекций, а именно – антигенам. Также антигенами могут выступать собственные клетки организма, образующиеся в результате аутоиммунных или онкологических заболеваний. Метод ИФА обладает высокой чувствительностью и специфичностью, которая в настоящее время составляет более 90% и позволяет обнаружить реакцию организма животного на инфекционный процесс.

Достоинства ИФА — возможность диагностики через 1-3 недели после контакта с возбудителем инфекции и возможность прослеживать динамику развития заболевания.

ИФА, относясь к непрямым методам диагностики, основан на выявлении не самой инфекции, а продуктов ее жизнедеятельности в организме животного — белков–маркеров – иммуноглобулинов, которые вырабатывает иммунная система в ответ на инфекцию. Для каждого возбудителя заболевания продуцируются сугубо индивидуальные антитела, которые впоследствии и будут идентифицированы системой ИФА. Время обнаружения антител зависит как от самой инфекции, так и от особенностей иммунной системы конкретного животного.

Наличие иммуноглобулинов не гарантирует присутствия в организме искомого инфекционного агента.

Отсутствие антител не говорит о том, что инфекции нет.

Если результат анализа методом ИФА положительный, то это значит, что нужно искать инфекцию более специфическими методами – ПЦР, бактериологические посевы.

Определить, какой лучше сдать анализ для диагностики, в каждой конкретной ситуации может только врач, назначающий обследование. Для комплексной оценки инфекции, в некоторых случаях, может потребоваться как выявление самого возбудителя (ПЦР), так и определение антител к нему в организме животного (ИФА), с последующим контролем после проведенного лечения.

Случается, что результаты ПЦР и ИФА-диагностики могут не совпадать и в этом случае необходимо грамотно интерпретировать полученные результаты, основываясь на патогенезе предполагаемого инфекционного заболевания.

Как результат — ПЦР–диагностика дает отрицательный, а ИФА — положительный результат. Например, микроорганизмы семейства Chlamydiacеae могут локализироваться в организме животных в различных местах. И анализ ПЦР, взятый в неправильной области, ДНК хламидии не обнаружит. Но ИФА–метод все равно выявит выработку антител, сопровождающую инфекционный процесс. В таком случае необходимо сдавать оба анализа для подтверждения инфекционной природы заболевания.

Единственным ограничением продукции антител в организме при наличии инфекции может быть иммунодефицитное состояние у животного, например, при лейкозе или иммунодефиците у кошек.

Следует помнить, что антитела в организме могут образовываться в ответ на недавнюю вакцинацию и высокий их уровень, очевидно, может быть связан с искусственным введением антигена в организм животного.

Немаловажно то, что материал, взятый сразу после лечения инфекции, может содержать мертвые частицы микроорганизмов, которые метод ПЦР идентифицирует за счет своей высокой чувствительности. В таком случае, результат будет ложноположительный.

Получение положительного результата ПЦР может быть вызвано использованием тест-систем, которые выявляют все виды бактерий, в том числе и те, которые в определенном количестве в норме содержатся в организме животного. Например, тест-система для ПЦР–диагностики настроена на выявление всех видов микроорганизмов семейства Chlamydiaceae: Chlamydophila Pneumonia, C. Psitaci, C. Abortus, C. felis. Однако хламидиями заражено примерно 18-38% собак, а клинически выраженный хламидиоз встречается в спорадических случаях.

Носительство хламидий выявляется также у 65-70 % кошек. Кошки – латентные носители возбудителя (содержится в слюне, моче, экскрементах, на лапках внешне здоровых животных). Поэтому положительный результат ПЦР–анализа в таком случае должен быть правильно интерпретирован врачом, согласован с материалом исследования, картиной заболевания и, обязательно, ИФА – диагностикой крови пациента.

Другой пример: у кошек встречается несколько видов микроорганизмов рода Mycoplasma, чаще всего М. felis и М. gatae. Это частые обитатели слизистых оболочек, М. felis и М. gatae обнаруживаются у 70-80% здоровых кошек. Предполагается, что М. felis может быть патогенной, а М. gatae – естественный коммерсал конъюнктивы и верхних дыхательных путей кошек (то есть безвредная микрофлора). При проведении ПЦР–анализа результат может быть положительным, а ИФА – отрицательным, вследствие отсутствия специфической реакции организма на присутствующую условно-патогенную микрофлору, следовательно, возможное заболевание, например, конъюнктивы глаз было вызвано не данным микроорганизмом.

Ветеринарному врачу необходимо понимать патогенез того или иного заболевания, так коронавирусная инфекция кошек, вызываемая семейством Coronaviridae, а именно штаммами FIPV, подавляет иммунитет, и антитела к возбудителю могут и не обнаруживаться. Положительный результат ИФА говорит о наличии в организме коронавируса, но не дает информации о том, где этот вирус находится – в кишечнике или в тканях.

В связи с этим важным является непосредственное выявление возбудителя заболевания – ПЦР. Однако использование метода ПЦР не может позволить провести дифференциацию условно-патогенных и патогенных штаммов в организме и отличить состояние носительства от заболевания, вызывающего тяжелый перитонит, как правило, с летальным исходом. Положительный ответ ПЦР при выделении вируса с фекалиями говорит о том, что животное в данный момент представляет опасность для окружающих кошек. Согласно ряду исследований, некоторые кошки, в организме которых еще находится вирус, перестают распространять его в течение нескольких недель. Но есть вероятность длительного вирусоносительства, с повторяющимися периодами выделения вируса во внешнюю среду со слюной и фекальными массами.

Подводя итоги, можно сказать, что и ИФА, и ПЦР–анализы сами по себе не являются панацеей в диагностике инфекций. Нельзя одной ПЦР или ИФА–диагностикой заменить все существующие методы исследования, ими можно лишь дополнить их, позволив всем методам достигнуть реальных, точных, достоверных результатов.

Заведущая лабораторий – Крылова А.Б. ВЛДОЦ СТАТУС. Март 2017 г.

Далеко не всякая инфекция проявляет себя — многие бактерии и вирусы могут годами жить в нашем организме, не вызывая никаких подозрений. Однако последствия скрытых инфекций бывают очень серьезными. В этой статье мы расскажем о том, как найти и определить возбудителя заболевания и какими бывают анализы на скрытые инфекции.

В основном к скрытым инфекциям относятся заболевания, передающиеся половым путем. Это болезни с продолжительным инкубационным периодом. Они могут никак не проявляться на протяжении нескольких месяцев и даже лет. Таких инфекций более 30. К самым распространенным относятся сифилис, герпес, гонорея, а также менее опасные уреаплазмоз, вирус папилломы человека и хламидиоз. Однако и они могут создать значительные проблемы, особенно при планировании беременности.

Протекая бессимптомно, скрытые инфекции вызывают воспаление и легко переходят в хроническую форму. Последствиями скрытых инфекций, передающихся половым путем, могут быть частые воспалительные заболевания мочеполовой сферы, сложности с зачатием, у мужчин — проблемы с потенцией, у женщин — с менструальным циклом и вынашиванием детей.

Чаще всего скрытые инфекции обнаруживаются практически случайно — во время исследований, которые проводятся по совершенно иному поводу, например, во время выяснения причин бесплодия. Еще хуже, если скрытые инфекции у женщин диагностируются во время планового обследования после наступления беременности — многие из них оказывают негативное воздействие на плод, которое особенно выражено в первые недели беременности.

Именно поэтому сдавать анализы на скрытые инфекции нужно регулярно — если диагностировать их вскоре после заражения, лечение будет более простым и быстрым, они не успеют нанести существенного вреда здоровью. Рекомендуется сдавать анализы на скрытые инфекции через несколько недель после предполагаемого заражения (после незащищенного полового акта), а также перед планированием беременности — причем в этом случае сдать анализы нужно обоим партнерам. Врачи советуют проходить плановое обследование хотя бы раз в год. Анализы на скрытые инфекции доступны и стоят недорого, но при этом они могут помочь вам сохранить здоровье и средства.

Существует несколько методов лабораторной диагностики скрытых инфекций. Все они позволяют обнаружить возбудителя болезни на ранних стадиях, еще до появления первых симптомов заболевания. Некоторые анализы могут также показать стадию болезни, был ли человек заражен определенной инфекцией в прошлом, а также более или менее точно указать время заражения.

Микроскопический анализ. Биоматериалом обычно является мазок — клетки эпителия, которые берут из уретры или цервикального канала при помощи специальной мягкой щеточки, напоминающей щеточку от туши для ресниц. Для того чтобы результат был точным, перед забором материала нельзя пользоваться тампонами, вагинальными свечами и гелями, антибактериальным мылом, желательно также отказаться от половых контактов. Биоматериал из уретры берут до мочеиспускания. Полученный биоматериал переносят на предметное стекло и окрашивают специальными красителями (анилиновые красители, окраска по Граму, окраска по Романовскому), которые позволяют отчетливо увидеть определенных возбудителей заболеваний. Микроскопическое исследование также позволяет заметить косвенные признаки наличия воспалительной реакции — например, повышенное содержание лейкоцитов или фибрина. Такие возбудители, как трихомонады, гонококки, гарднереллы и грибки, отлично видны при микроскопическом исследовании, особенно во время острой стадии заболевания. Но вот при хроническом течении трихомониаза и гонореи точность этого метода не превышает 40%, что довольно небольшой показатель.

Бактериологический посев на микрофлору и чувствительность к антибиотикам. Для этого анализа также используется мазок. Полученный биоматериал переносят на питательную среду. В течение нескольких дней бактерии, полученные вместе с биоматериалом, размножаются в ней, а затем специалист рассматривает их в микроскоп и идентифицирует. У метода бактериологического посева есть один существенный плюс. При этом исследовании возможно не только выявить возбудителя болезни, но и экспериментальным путем выяснить, к какому типу антибиотиков он наиболее чувствителен. Это позволяет врачу сразу подобрать самые действенные препараты, которые однозначно сработают.

Иммуноферментный анализ (ИФА). Методом ИФА исследуют сыворотку крови, взятой утром натощак, или мазок из уретры или цервикального канала. Метод ИФА показывает не самих возбудителей, а антитела к ним. Антитела вырабатываются нашей иммунной системой при столкновении с инфекцией. Эти белки специфичны, то есть для каждой отдельной инфекции защитная система вырабатывает определенный, характерный только для нее белок. ИФА эффективен и точен при выявлении тех инфекций, к которым формируются антитела — уреаплазмам, микоплазмам, хламидиям, различным паразитам и вирусам. Точность метода доходит до 90% [1] .

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ). Этим методом чаще всего исследуют мазок. Суть его заключается в окраске биоматериала специальными флуоресцентными антителами. Они соединяются с определенными возбудителями болезни, и специалист может увидеть их при помощи люминесцентного микроскопа — в особом излучении они начинают светиться. Это очень эффективный метод диагностики уреаплазмоза, микоплазмоза, хламидиоза, трихомониаза и некоторых других инфекций, которые порой непросто выявить другими способами. Точность этого метода — около 80% [2] .

Полимерная цепная реакция (ПЦР). Этим методом можно исследовать любой биоматериал, но на практике чаще всего для анализа берут мазок или кровь. Сегодня этот метод считается одним из самых современных и точных. Суть этого способа диагностики скрытых инфекций заключается в многократном копировании фрагмента ДНК или РНК возбудителя. Когда копий будет достаточно много, специалист идентифицирует их и выяснит, какой именно вирус или бактерия присутствует в организме. Преимущество метода ПЦР в том, что для диагностики достаточно наличия всего одного фрагмента РНК или ДНК. На практике это означает, что метод ПЦР позволяет проводить диагностику на самых ранних стадиях заболевания, тогда, когда остальные методы в этом случае могут дать ложноотрицательный результат [3] . Этот способ особенно точен в отношении вирусов, уреаплазм, микоплазм, гарднерелл, грибковых инфекций.

Скорость получения результатов зависит от метода исследования.

Дольше всего придется ждать результатов бактериологического посева. Это исследование никак нельзя отнести к экспресс-методам — результаты можно будет получить самое раннее через неделю, а часто приходится ждать еще дольше.

Результаты анализов, проводимых методом ИФА, РИФ или ПЦР, обычно выдают уже через сутки или через 2 дня.

Если лаборатория перегружена, результаты выдадут позже. Чаще всего это бывает с небольшими лабораториями, у которых нет достаточного количества сотрудников и оборудования. Крупные же учреждения работают быстрее.

Результаты анализов расшифровывает врач, он же выписывает направление на дополнительные исследования, если результат вызывает сомнения. Иногда результаты анализов, проведенных разными способами, не совпадают друг с другом — один дает положительный результат, а другой — отрицательный. Пусть это вас не настораживает — причина подобного положения вещей не в слабости методов, а в их специфике. Например, если ПЦР показал наличие инфекции, а ИФА — нет, это значит, что болезнь давно перешла в хроническую стадию и иммунная система уже не реагирует на нее, так как ПЦР показывает наличие возбудителя как такового, а ИФА — лишь реакцию защиты организма.

Бывает и наоборот: ПЦР — отрицательный, а ИФА — положительный. Это достаточно характерно для пациентов, которые не так давно вылечились от заболевания. Бактерий или вирусов уже нет, но антитела, выработанные организмом, еще присутствуют в биоматериале.

Сдать анализы на скрытые инфекции можно в государственных или частных лабораториях. Первый вариант — бесплатный, однако он сопряжен с некоторыми неудобствами. Нужно записаться на прием к врачу, получить направление, отстоять очередь. Часы работы муниципальных медучреждений не всегда удобны.

Именно поэтому многие предпочитают выбрать более короткий путь и обращаются в коммерческие лаборатории и частные клиники. Сдать анализы там можно и без направления от врача, по собственной инициативе, в любое удобное время, без очередей. Многие лаборатории даже предлагают комплексные обследования, в которые входят анализы на все самые распространенные скрытые инфекции, а также пакеты диагностических услуг для женщин, мужчин и тех, кто планирует стать родителями. Это очень удобно: во-первых, такие обследования дешевле, во-вторых, вам не придется думать, какие именно анализы целесообразно сдавать.

Цена анализов на скрытые инфекции может значительно различаться в разных лабораториях. На стоимость влияет и расположение лаборатории (чем она ближе к центру, тем дороже), и ее оснащение, и, наконец, уровень обслуживания.

Стоимость ПЦР на скрытые инфекции зависит от типа возбудителя. В среднем стоимость исследования составляет приблизительно 200–600 рублей за анализ на одного возбудителя и около 1500–2000 рублей за комплексное обследование.

Микроскопическое исследование стоит примерно 250–400 рублей.

ИФА — метод весьма недорогой и доступный, такой анализ обойдется в сумму около 200–600 рублей.

Бактериологическое исследование с определением чувствительности к антибиотикам стоит около 1400–2000 рублей.

Исследование методом РИФ обойдется для пациента приблизительно в 250–800 рублей.

К стоимости анализа как такового нужно прибавить и стоимость забора биоматериала — в районе 150–250 рублей за забор крови и от 200 рублей — за забор мазка.

Все современные методы диагностики скрытых инфекций информативны, но для того чтобы получить полную картину, нужно сдать несколько анализов — только тогда, сопоставив их результаты, врач сможет установить, есть ли инфекция и как именно нужно ее лечить.

Своевременная и качественная диагностика инфекций, преимущественно или частично передаваемых половым путем (ИППП), является одной из важнейших проблем здравоохранения. Актуальность проблемы определяется высоким уровнем инфицирования и заболеваемости людей репродуктивного возраста.

ПЦР-метод

На сегодняшний день, всемирно признанными и занимающими лидирующее место в алгоритмах обследования пациентов, являются методы молекулярной диагностики. Среди существующих методов молекулярной диагностики наиболее распространен ПЦР-анализ, позволяющий определять генетический материал любого микроорганизма в пробе пациента и оценивать его количество.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это метод лабораторной диагностики, направленный на выявление генов возбудителей инфекционных заболеваний.

Полимеразную цепную реакцию (ПЦР, PCR) изобрел в 1983 году Кэри Мюллис (американский ученый). Впоследствии он получил за это изобретение Нобелевскую премию. В настоящее время ПЦР-диагностика является одним из самых точных и чувствительных методов диагностики инфекционных заболеваний.

ПЦР - метод молекулярной диагностики, ставший для ряда инфекций "золотым стандартом", проверен временем и тщательно апробирован клинически. Метод ПЦР позволяет определить наличие возбудителя заболевания, даже если в пробе присутствует всего несколько молекул ДНК возбудителя.

ПЦР позволяет диагностировать наличие долго растущих возбудителей, не прибегая к трудоёмким микробиологическим методам, что особенно актуально в гинекологии и урологии при диагностике урогенитальных инфекций и заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП):

Антитела к ВИЧ 1/2 (anti-HIV) и Антиген ВИЧ 1/2 (HIV Ag/Ab Combo) (кровь)
Гепатит В (HBV) (кровь)
Гепатит С (HBC) (кровь)
Цитомегаловирус (CMV) (соскоб)
Герпес (HSV) (соскоб)
Вирус папилломы человека (ВПЧ 16,18) (соскоб)
Хламидии (Chlamidia trachomatis) (соскоб)
Микоплазма (Mycoplasma hominis) (соскоб)
Уреаплазма (Ureahlasma urealyticum) (соскоб)
Трихомонады (Trichomonas vaginalis) (соскоб)
Гонорея (Neisseria gonorrhoreae) (соскоб)
Гарднерелла (Gardnerella vaginalis) (соскоб)
Кандида (Candida albicans) (соскоб)

В лаборатории Клиники №1 ПРЦ-исследования выполняются на новейшем оборудовании - амплификаторе. Управление прибором осуществляет программное обеспечение, которое минимизирует возможность ошибок.

ИФА-метод

TORCH-инфекции. Название образовано начальными буквами в латинских наименованиях возбудителей - Toxoplasma, Rubella, Cytomegalovirus, Herpes - заболеваний, потенциально опасных для нормального развития плода во время беременности.

Лабораторное обследование на TORCH-инфекции наиболее целесообразно проводить за 2-3 месяца до планируемой беременности. Это дает возможность предпринять необходимые лечебные или профилактические меры и служит точкой отсчета для сравнения с результатами обследований во время беременности.

Токсоплазма (Anti-Toxo-IgG, IgM - антитела класса IgG, IgM к Тoxoplasma gondii)
Цитомегаловирус (Anti-CMV-IgG, IgM - антитела класса IgG,IgM к цитомегаловирусу, ЦМВ, CMV)
Краснуха (Anti-Rubella-IgG, IgM - антитела класса IgG,IgM к вирусу краснухи)
Герпетическая инфекция (Anti-HSV-IgG, IgM - антитела класса IgG,IgМ к вирусу простого герпеса)
Микоплазма (Mycoplasma hominis IgA,IgG - антитела класса IgA, IgG)
Уреаплазма (Ureaplasma urealyticum IgG,IgA)
Сифилис
Сифилис RPR (Rapid Plasma Reagin – антикардиолипиновый тест) (кровь)
Антитела класса IgM и IgG к Treponema pallidum (anti-Treponema pallidum IgM, IgG) (кровь)

Инвазионные инфекции и гельминтозы

По данным ВОЗ, причиной 80% заболеваний, являются паразиты, живущие в организме человека, либо последствия, вызванные жизнедеятельностью все тех же паразитов.

Заражение человека паразитами может происходить различными путями: в результате употребления в пищу плохо вымытых овощей и фруктов, недожаренного или недоваренного мяса; при питье воды из водоёмов, в которых содержатся личинки паразитов. C большой долей вероятности можно заразиться и от своих домашних питомцев. Заражение аскаридозом возможно даже с пылью.

Гельминты (Описторхоз, Трихинеллез, Токсокороз, Эхинококкоз);
Аскариды;
Лямблии

Узнать о выполнении исследования, стоимость, уточнить подготовку к анализу Вы можете по телефону лаборатории: 8 (484) 395-22-80.

Адрес Клинико-диагностической лаборатории: г. Обнинск, ул. Аксёнова, д. 6а.

Исследование позволяет выявить возбудителя новой коронавирусной инфекции COVID-19. Тест проводят методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Метод обладает высокой чувствительностью и позволяет получить максимально точные результаты. Тест-система, применяемая для исследования, разработана учеными ФБУН Центрального НИИ Эпидемиологии.

Современная медицина невозможна без лабораторной диагностики. Это показатель состояния здоровья пациента. Качественная диагностика помогает врачу в постановке верного диагноза и назначения эффективного лечения.

Показанием к выполнению анализов служит направление на госпитализацию.

Ряд анализов выполняют натощак (т.е. когда между последним приемом пищи и взятием крови проходит от 8 до 12 ч).

Технологии лабораторной диагностики, применяемые сегодня, позволяют обнаружить рак на самых ранних стадиях, тем самым существенно увеличить вероятность излечения.

Гормоны - биологически активные вещества, которые вырабатываются железами внутренней секреции.

Для постановки диагноза при наличии тех или иных симптомов, как правило, требуется сдача анализов.

Перед сдачей материала (за 3-4 дня) необходимо отменить прием лекарственных препаратов (слабительных, касторового и вазелинового масла, ректальных свечей). Не допускается для исследования кал, полученный после клизмы или приема бария (при рентгеновском обследовании).

Накануне сдачи мочи на анализ не рекомендуется употреблять в пищу фрукты и овощи, способные изменять цвет мочи (свелка, морковь и т.д.), не принимать диуретики, избегать значительных физических нагрузок.

Для сдачи биоматериала на анализ необходимо полное воздержание от половой жизни от 2 до 7 дней, оптимально 3-4 дня.

Асептическое удаление клеща и проверка его на опасные инфекции теперь доступна нашим пациентам!

ПЦР — полимеразная цепная реакция, высокочувствительная методика, которая позволяет обнаружить не только возбудителя болезни (вирус, бактерию), но и малейший фрагмент его ДНК. Для исследования может быть взят образец плазмы, полученной из венозной крови, моча, слюна, спинномозговая жидкость и др. ПЦР стоит проводить при подозрении на латентную форму болезни или хроническое течение инфекционного процесса в организме. При этом анализ ПЦР обнаруживает присутствие инфекции, но из-за своей высокой чувствительности не дает сведений о жизнеспособности возбудителей (т.е. инфекция уже вылечена, но в организме остались мертвые клетки возбудителей, что ведет к ложноположительным результатам).

К особенностям и достоинствам ПЦР относят:

высокую 100% чувствительность к возбудителям любого типа с наличием уникальных фрагментов нуклеиновых кислот;
возможность определения численности одного вида возбудителя;
одновременное диагностирование нескольких возбудителей;
возможность отслеживать и оценивать результаты лечения после назначения медикаментозной терапии.

В нашей лаборатории проводится ПЦР исследование на определение возбудителей следующих заболеваний:

Гепатита С;
Гепатита В;
Генотипа гепатитов В и С;
Цитомегаловируса;
Вируса Эпштена Барр;
Вируса простого герпеса 1, 2 типа;
Вируса герпеса 6 типа;
Возбудителей клещевого энцефалита, Лайм Боррелиоза, анаплазмоза, эрлихиоза.

ПЦР анализ относится к прямым методам выявления возбудителей инфекций, и позволяет сделать вывод о непосредственном наличии инфекционного агента у человека на момент исследования.

Во-первых, в отличие от ИФА, ПЦР может сказать о наличии возбудителя только в месте взятия биоматериала, которое ограничено мазком (например, из зева).

ИФА (иммуноферментный анализ) – это определение в крови пациента антител к инфекционным агентам. Антитела (иммуноглобулины, Ig) представляют собой белки, которые вырабатывает наша иммунная система в ответ на инфекцию. Для каждого возбудителя заболевания продуцируются сугубо индивидуальные антитела. Антитела к одному возбудителю могут отличаться между собой по срокам появления, что позволяет определить стадию развития патологии:
IgM – в острый период болезни;
IgG – если процесс хронический, или в качестве постоянного иммунитета (в зависимости от вида возбудителя)
Метод ИФА позволяет увидеть ответную реакцию организма на вторжение инфекции, а не саму инфекцию!
Из-за низкой цены и использования в качестве биоматериала крови, метод применяется в качестве скрининга.

В нашей лаборатории проводится ИФА исследование

при подозрении на:

гепатиты B, C, А;
токсоплазмоз;
цитомегаловирус;
вирус простого герпеса 1,2 типа;
токсокару;
аскариду;
трихинеллу;
вирус Эпштейна Барр;
ротавирус;
Лайм боррелиоз;
клещевой энцефалит.

Иммуноферментное исследование имеет множество достоинств:

простота и быстрота проведения;
высокая чувствительность при реакциях антиген-антитело даже на фоне незначительной концентрации возбудителя в организме;
высокий уровень специфичности анализа.

Результат ИФА-диагностики изредка может получиться ложноотрицательным, если с момента заражения прошло еще недостаточно времени, и организм не успел среагировать на инфекцию выделением специфических белков-маркеров. Эти факторы следует учитывать при интерпретации результатов, поэтому анализы, получаемые методом ИФА в сомнительных случаях перепроверяют.

За звучной аббревиатурой ПЦР скрывается сложная и не слишком понятная для рядового пациента расшифровка — полимеразная цепная реакция. Что же такое ПЦР-диагностика, на чем она основана и почему в последнее время ее стали считать самой перспективной технологией в постановке диагнозов, касающихся инфекционных и вирусных заболеваний? Мы расскажем о преимуществах ПЦР-метода, его особенностях и этапах проведения.

ПЦР-диагностика: что это такое?

Диагностика методом ПЦР существует чуть более 30 лет. Значительно эволюционировав за это время, она зарекомендовала себя как один из наиболее точных способов выявления инфекций. В основе метода лежит принцип многократного увеличения микроскопических концентраций фрагментов ДНК возбудителя в биологической пробе пациента в искусственных условиях. В результате сложного процесса, называемого амплификацией, под воздействием ферментов и изменения температуры (от 50 до 95°С) из одной молекулы ДНК образуется две. При этом происходит копирование участка ДНК, который присутствует только у того вида патогенного микроорганизма, который интересует врача.

Цикл образования новой молекулы ДНК занимает всего около 3 минут, а тридцати-сорока циклов вполне достаточно, чтобы получить количество молекул, необходимое для достоверного визуального определения методом электрофореза.

Кроме амплификации, то есть простого увеличения числа копий молекулы ДНК, с помощью ПЦР можно производить и другие манипуляции с генетическим материалом, например, сращивать фрагменты ДНК, вводить мутации и т.д. Это позволяет использовать ПЦР не только для диагностики инфекционных и генетических заболеваний, но и для установления отцовства, клонирования и выделения новых генов.

ПЦР-диагностика проводится в специальных лабораториях с помощью амплификационного оборудования. На сегодня существует множество различных модификаций ПЦР, включая технологии с использованием не только ДНК, но и фрагментов рибонуклеиновой кислоты (РНК). В некоторых из них амплификация осуществляется при постоянной температуре, и для их проведения специальное оборудование не требуется.

Еще одна популярная модификация ПЦР — мультиплексная амплификация (МПА), которая позволяет проводить исследование сразу нескольких изучаемых фрагментов в одной пробирке. Это не только ускоряет и удешевляет проведение анализа, но и позволяет рассматривать одни фрагменты, получившиеся в результате реакции, в качестве положительных маркеров для других, что еще больше увеличивает точность исследования методом ПЦР.

В клинической медицине ПЦР-диагностика является одним из наиболее востребованных методов анализа в самых разных сферах:

Прямое определение возбудителя инфекции. Некоторые традиционные методы, такие как иммуноферментный анализ (ИФА), выделяют только белки-маркеры, которые являются продуктом жизнедеятельности возбудителей инфекции, а потому только косвенно указывают на присутствие микроорганизмов. Наличие специфического участка в ДНК, выявленное с помощью ПЦР, безошибочно или почти безошибочно указывает на присутствие конкретной инфекции.
Высокая специфичность метода . Она обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется фрагмент ДНК, характерный только для конкретного возбудителя инфекции. Специфичность исключает возможность ложных результатов анализа, тогда как в иммунологических методах исследований ошибки вполне вероятны из-за перекрестной реакции антигенов.
Высокая чувствительность . При помощи ПЦР-диагностики можно выявить присутствие в организме даже единичных клеток вирусов или бактерий в тех случаях, когда обычными методами сделать это практически невозможно. ПРЦ определяет наличие всего 10–100 клеток в пробе, тогда как иммунологическими и микроскопическими тестами можно определить наличие инфекции при количестве клеток не менее 103–105.
Универсальность . Сходство состава всех ДНК или РНК дает возможность применять универсальные методы лабораторных исследований, диагностируя сразу несколько возбудителей из одной биологической пробы.
Скорость получения результатов . Поскольку для проведения ПЦР-диагностики не нужен посев и выделение культуры возбудителя, то и большого количества времени на нее не требуется. Весь цикл — от забора биоматериала до получения результатов — занимает 4–5 часов.
Диагностика латентных инфекций . ПЦР-методом диагностируются трудно культивируемые и некультивируемые формы микроорганизмов, встречающиеся в тех случаях, когда заболевание протекает в скрытой форме.

Методом ПЦР можно выявлять возбудителей инфекции не только в организме человека, но и в почве, воде, продуктах питания.

Тем не менее не стоит думать, что ПЦР-диагностика не имеет недостатков. У нее есть свои ограничения, но их количество настолько незначительно, что не может отрицательно повлиять на популярность и эффективность метода:

Вероятность амплификации ДНК не только живого, но и погибшего микроорганизма . При проведении ПЦР-диагностики для контроля эффективности лечения необходимо соблюдать определенные требования. В частности, проводить ПЦР нужно после определенного промежутка времени (1–2 месяца), за который происходит полное исчезновение возбудителя инфекции в организме.
Возможность возникновения перекрестной реакции . Подбор фрагментов ДНК (праймеров) осуществляется на основе знаний о генетическом строении конкретного микроорганизма. Но теоретически такой же фрагмент может присутствовать и у других микроорганизмов, геном которых на сегодняшний день еще не расшифрован. Их присутствие в пробе может привести к ложноположительному результату анализа.
Изменчивость микроорганизмов . Эта способность возбудителей к мутации иногда приводит к тому, что некоторые их штаммы становятся неуловимыми в процессе ПЦР-анализа.

Чтобы уменьшить риски, разработаны стандарты объемов испытаний тест-систем ПЦР-диагностики, включающие проверку на перекрестные реакции и тестирование всех известных штаммов конкретного возбудителя.

ПЦР-диагностика проводится в специальной лаборатории в несколько этапов.

Забор биоматериала . Процедура, предшествующая непосредственному анализу, которая осуществляется в процедурном кабинете соответствующего профиля. Забор делается с помощью стерильного оборудования только в стерильные пробирки. Материалом для исследования могут быть:
- Эпителиальные соскобы со слизистых оболочек: из уретры, из цервикального канала, со слизистой дыхательных путей и зева, из конъюнктивы. Забор проводится с помощью специального ершика, при этом недопустимо попадание в материал следов крови.
- Моча . Собираются первые 50 г утренней мочи в стерильную емкость. Материал используется для диагностики мочеполовых инфекций.
- Мокрота . Используется для ПЦР-диагностики туберкулеза и респираторных форм микоплазмоза и хламидиоза. Мокроту собирают в стерильный флакон в количестве 15–20 мг.
- Кровь, сыворотка, плазма . С их помощью диагностируются гепатиты, герпес, ВИЧ-инфекция. Для анализа используется венозная кровь (1–1,5 мл), собранная у пациента натощак в стерильную пробирку. Хранить биоматериал можно не более суток при температуре 4°С. Замораживать кровь категорически запрещается.
- Биологические жидкости . К ним относятся слюна, сок простаты, околоплодная, плевральная, спинномозговая, суставная жидкости. Собираются при помощи пункции с использованием стерильного инструментария в количестве 0,1–1,5 мл в стерильные пробирки.
- Биоптаты , т.е. материалы, полученные путем биопсии. Обычно на анализ отправляют биоптаты двенадцатиперстной кишки или желудка, чтобы выявить хеликобактерную инфекцию. Объем материала 2–3 мм 3 .
Хранение и транспортировка биоматериала . Хранить образцы можно при комнатной температуре не более 2 часов. Если необходимо длительное хранение, то пробы помещают в холодильник с температурой 2–8°С на срок не более одних суток. Допустимо хранение некоторых биоматериалов в течение двух недель в замороженном виде при температуре -20°С. Оттаивание и повторное замораживание проб запрещено. Транспортировка, если она необходима, должна проводиться в специальных термоконтейнерах или термосах с соблюдением всех правил хранения и перевозки биоматериалов.
Выделение ДНК из образца . Способ выделения зависит от вида определяемого микроорганизма и от вида биологического образца. Если, например, анализируется соскоб эпителиальных клеток, используется так называемый метод твердофазной сорбции, заключающийся в добавлении в образец специального вещества, концентрации ДНК на сорбенте и его многократной отмывке буферным раствором.
Проведение ПЦР . Некоторое количество образца из биологической пробы переносится в специальную микроцентрифужную пробирку. Туда же добавляется амплификационная смесь, имеющая сложный состав, в объеме 25 мл. Пробирки устанавливают в программируемый термостат, и автоматическом режиме проводится амплификация. Время ее проведения зависит от заданной программы и составляет 2–3 часа. Одновременно с опытными пробами проводятся контрольные — положительные , включающие в себя контрольный препарат ДНК исследуемого возбудителя, и отрицательные , не содержащие исследуемую ДНК. Количество циклов амплификации варьирует от 30 до 40, более 40 циклов проводить не рекомендуется, так как это способствует увеличению количества неспецифических продуктов в пробе.
Регистрация результатов . Фрагмент ДНК, характерный для возбудителя инфекции, выделяют методом электрофореза в присутствии специального вещества — бромистого этидия. Его соединение с фрагментами ДНК дает светящиеся полосы при облучении ультрафиолетовым излучением. Образец помещают в камеру для электрофореза и в течение 35–40 минут проводят разделение продуктов амплификации. После этого образец просматривают в ультрафиолетовом свете — наличие оранжевой светящейся полосы свидетельствует о положительном результате.
Интерпретация результатов исследования . Результат ПЦР-диагностики может быть либо положительным, либо отрицательным. Положительный результат говорит о том, что в организме человека обнаружены следы инфекции, причем именно в данный момент времени. Количественный результат ПЦР-анализа оценить может только врач, они индивидуальны для разных типов инфекций. На основании количественного результата можно сделать вывод о степени активности заболевания и определить характер лечения.

Цена ПЦР-диагностики зависит от того, на какую конкретно инфекцию пациент планирует проверяться, от вида анализируемого материала, методики тестирования — качественной или количественной. Цена за определение одной инфекции составляет от 200 до 800 рублей в разных клиниках. Кроме того, к стоимости анализа добавится и плата за забор биоматериала — около 400 рублей. Средняя стоимость ПЦР-диагностики разных видов приведена в таблице 1.

Таблица 1 . Примерные цены на анализы ПЦР в Москве

Название анализа	Цена, руб.
Определение ДНК хламидия	750
Определение ДНК микоплазмы хоминис	540
Определение микоплазмы гениталиум	350
Определение ДНК уреаплазмы	350
Гонококк, определение ДНК	350
Определение ДНК герпеса (разные типы)	350–600
Определение ДНК кандиды	570
Вирус краснухи, определение РНК	800
Дифференцированное определение ДНК ВПЧ (разные типы)	350–1900 [1]

Читайте также: