Пцр диагностика инфекций гепатит с

В медицинском центре "МедЭлит" Вы сможете пройти точную диагностику вирусных гепатитов, дающую надежный и достоверный результат. Это стало возможным благодаря новым принципам ведения гепатитов и достижениям нашей лабораторной системы. Высокое качество лабораторной диагностики является одним из главных врачебных принципов клиники МедЭлит. Анализы, проводимые нами, позволяют ответить на следующие группы вопросов:

• Если вирус гепатита в крови или контакт с ним закончился полным выздоровлением: определение наличия или отсутствия вируса методом ПЦР.
• Если вирус все же есть, то как высока его концентрация (вирусная нагрузка) и насколько легко он поддастся противовирусной терапии (генотип вируса).
• Насколько активен гепатит (ряд биохимических показателей крови)
• Как далеко зашло поражение печени: успел ли сформироваться печеночный фиброз и какова его стадия.
• Генетическое тестирование: определение генотипа Вашего организма в отношении вероятности избавления организма от вируса.

Диагностика состояния печени без биопсии! Неинвазивное обследование печени на аппарате Фиброскан.

ИФА – определение маркеров вирусных гепатитов

Чувствительность этих анализов у нас приближается к 100% поскольку они делаются с использованием самого современного оборудования и высококачественных реактивов. Ниже приводится перечень анализов на различные формы вирусных гепатитов методом ИФА, которые можно сделать в нашем медицинском центре.

Вирус гепатита A (HAV)
Anti-HAV IgM	антитела	Антитела к вирусу гепатита A класса IgM
Anti-HAV IgG	антитела	Антитела к вирусу гепатита A класса IgG
Вирус гепатита B (HBV)
HBs-Ag	антиген	Поверхностный антиген вируса гепатита B Синоним: Австралийский антиген
Anti-HBs	антитела	Суммарные антитела к поверхностному антигену вируса гепатита B
HBe-Ag	антиген	Антиген оболочки вируса гепатита B
Anti-HBe	антитела	Суммарные антитела к антигену оболочки вируса гепатита B
HBc-Ag	антиген	Антиген ядра вируса гепатита B (core-антиген)
Anti-HBc	антитела	Суммарные антитела к антигену ядра вируса гепатита B
Anti-HBc IgM	антитела	Антитела к антигену ядра вируса гепатита В класса IgM
Вирус гепатита C (HCV)
Anti-HCV	антитела	Суммарные антитела к вирусу гепатита C
Anti-HCV IgM	антитела	Антитела к вирусу гепатита C класса IgM
Вирус гепатита D (HDV)
Anti-HDV	антитела	Суммарные антитела к вирусу гепатита D
Anti-HDV IgM	антитела	Антитела к вирусу гепатита D класса IgM
Вирус гепатита E (HEV)
Anti-HEV IgG	антитела	Антитела к вирусу гепатита E класса IgG

ПЦР — выявление возбудителей вирусных гепатитов

Самый чувствительный и специфичный метод на сегодняшний день для диагностики гепатитов (равно как и любой другой инфекции) — это полимеразная цепная реакция (ПЦР). Суть его состоит в выявлении самой чужеродной частицы (это могут быть как вирусы, так и любые другие виды микроорганизмов) даже в ничтожно малых количествах за счет повторного копирования в лабораторных условиях генетического набора микроорганизма. Это копирование состоит из нескольких циклов, которые многократно повторяются. Так за 20-30 циклов количество копий нужного фрагмента ДНК микроорганизма достигает нескольких миллионов, что позволяет обнаружить даже один вирус в одной клетке печени. Точность метода во многом зависит от того, насколько качественны реактивы. В нашем медицинском центре ПЦР диагностика инфекций отвечает самым современным требованиям науки и дает наиболее точные результаты. Кроме установления факта наличия вируса в крови важно определять его количество (так называемая вирусная нагрузка), поскольку от результатов этого анализа во многом зависит схема лечения и прогноз заболевания. Кроме того, важным показателем при выборе противовирусного лечения (в частности, гепатита С), его длительности и прогнозировании успеха, является определение генотипа вируса.

Определение вирусной нагрузки и генотипа вируса гепатита в нашей клинике осуществляется в строгом соответствии с последними мировыми стандартами.

Наименование	Материал	Количество, тип анализа	Время, рабочих дней
РНК вируса гепатита A	биоптат	качественный	7
РНК вируса гепатита A	кровь	качественный	4
ДНК вируса гепатита B	биоптат	качественный	7
ДНК вируса гепатита B	кровь	качественный	4
ДНК вируса гепатита B	кровь	количественный	10
ДНК вируса гепатита B (YMDD мутация устойчивости к лавимудину)	кровь	качественный	10
РНК вируса гепатита С	биоптат	качественный	7
РНК вируса гепатита С	кровь	качественный	4
РНК вируса гепатита С	кровь	количественный	7
РНК вируса гепатита С	кровь	генотипирование	5
РНК вируса гепатита D	биоптат	качественный	7
РНК вируса гепатита D	кровь	качественный	4
РНК вируса гепатита G	биоптат	качественный	7
РНК вируса гепатита G	кровь	качественный	4

Ультрачувствительный тест на вирусы гепатитов В и С

На сегодняшний день наша клиника располагает самым высокоточным методом обнаружения и подтверждения вирусоносительства HCV, HBV. Это - полимеразная цепная реакция (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени. Теперь мы можем точно ответить: есть инфекция или ее нет, причем даже в тех случаях, когда стандартные методы ПЦР-диагностики бессильны.

ПЦР-диагностика гепатита ультрачувствительным методом показана:

• для выявления скрытых (латентных) форм вирусных гепатитов В и С,
• при наличии в крови антител к вирусам гепатита В или С, но неподтвержденном стандартными видами ПЦР-диагностики,
• для оценки эффективности проводимой противовирусной терапии в процессе лечения и через 24 недели после окончания лечения.
• для раннего выявления острых вирусных гепатитов В и С у лиц, контактировавших с зараженным человеком

Биохимические показатели крови

Вирусы гепатитов могут в той или иной степени нарушать функции печени. В зависимости от вида и степени нарушения этих функций может коренным образом изменяться и лечение гепатита .

На основании показателей клинического и биохимического анализов крови мы определяем, есть или нет нарушение функции Вашей печени. Если есть, то каков вид этого нарушения и насколько оно выражено. В нашем центре Вам не придется долго ждать результатов исследований. Сроки выполнения анализов ограничены только технологией их выполнения. Результаты данной группы анализов, как правило, становятся известными либо в день забора крови, либо на следующий день (в зависимости от времени взятия материала). Точность анализов не вызывает сомнений.

Билирубин общий	Сывороточное железо
Билирубин прямой	Общий белок
АСТ (аспартатаминотрансфераза)	Глюкоза
АЛТ (аланинаминотрансфераза)	Креатинин
ГГТП (гаммаглутамилтранспептидаза)	Мочевина
ЩФ (щелочная фосфатаза)	Мочевая кислота
ЛДГ (лактатдегидрогеназа)	Холестерин общий
Амилаза	Триглицериды
Липаза	Определение фракций липопротеинов

Иммунный статус организма

Вирусные гепатиты почти всегда сопровождаются нарушениями в иммунной системе. Своевременная и правильная диагностика и коррекция иммунных нарушений – это тот базис, без которого невозможно полноценное лечение хронических гепатитов. Анализы показателей иммунного статуса в нашей клинике проводятся на самом высоком технологическом уровне, а их сложной трактовкой в совершенстве владеют наши врачи. Показатели Вашего иммунитета будут быстро и точно определены и правильно интерпретированы.

Запишитесь на прием ежедневно с 9 до 21: 8 495 646-07-47

Или оставьте ваш номер телефона, мы вам перезвоним в удобное для вас время

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — экспериментальный метод молекулярной биологии, способ значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе).

В основе метода ПЦР лежит многократное удвоение определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). В результате нарабатываются количества ДНК, достаточные для визуальной детекции. При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце.

Кроме простого увеличения числа копий ДНК (этот процесс называется амплификацией), ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с генетическим материалом (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК), и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов.

ПЦР позволяет диагностировать наличие долго растущих возбудителей, не прибегая к трудоёмким микробиологическим методам, что особенно актуально в гинекологии и урологии при диагностике урогенитальных инфекций, передающихся половым путем (ИППП).

Также, этим методом проводят диагностику вирусных инфекций, таких как гепатиты, ВИЧ и др. Чувствительность метода значительно превосходит таковую у иммунохомических и микробиологических методов, а принцип метода позволяет диагностировать наличие инфекций со значительной антигенной изменчивостью.

Специфичность ПЦР при использовании технологии PCR даже для всех вирусных, хламидийных, микоплазменных, уреаплазменных и большинства других бактериальных инфекций достигает 100%. Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР-диагностика обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно.

Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях.

Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т. д.). В урологической и гинекологической практике - для выявления хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, герпеса, гарднереллёза, микоплазменной инфекции, ВПЧ - вирусов папилломы человека; в пульмонологии - для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, туберкулёза; в гастроэнтерологии - для выявления хеликобактериоза; в клинике инфекционных заболеваний - в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллёза, дифтерии, вирусных гепатитов В, С и G; в гематологии - для выявления цитомегаловирусной инфекции, онковирусов.

Специфичность ПЦР основана на образовании комплементарных комплексов между матрицей и праймерами - короткими синтетическими олигонуклеотидами длиной 18 - 30 букв. Каждый из праймеров сопоставим (комплементарен) с одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка.

После соединения (гибридизации) матрицы с праймером (отжиг), последний служит затравкой для ДНК-полимеразы при синтезе комплементарной цепи матрицы.

ПЦР-исследования выполняют на амплификаторе CFX-96 Touch – это многофункциональный высокоскоростной Real Time амплификатор, позволяющий проводить мультиплексный анализ до 5 мишеней в 96 пробах одновременно. Амплификатор CFX-96 создан на основе амплификатора С1000 Touch и шестиканального оптического реакционного модуля CFX-96.

Вид биологического материала

ДНК Бордетелла пертуссис (Bordetella pertussis)

Мазки с задней стенки глотки

ДНК Вируса Эпштейна-Барр (EBV)

Слюна, моча, соскобы из уретры, цервикального канала, заднего свода влагалища, мононуклеарная фракция клеток периферической крови

ДНК Цитомегаловируса (CMV)

Слюна, моча, соскобы из уретры, цервикального канала, заднего свода влагалища, мононуклеарная фракция клеток периферической крови

РНК Энтеровирусов (Enterovirus)

Спинномозговая жидкость(ликвор), фекалии

РНК Вирусного гепатита А (HAV) качественное исследование

Периферическая кровь (плазма крови)

ДНК Вирусного гепатита В (HBV) качественное и количественное исследование

Периферическая кровь (плазма крови)

РНК Вирусного гепатита С (HCV) качественное и количественное исследование

Периферическая кровь (плазма крови)

РНК Вирусного гепатита С (HCV)

Генотипирование вируса гепатита 1, 2 и 3

Периферическая кровь (плазма крови)

РНК Вирусного гепатита D (HDV) Качественное исследование

Периферическая кровь (плазма крови)

РНК Вирусов гриппа А (Influenza А virus) Качественное исследование

Мазки и смывы из полости носа и ротоглотки, мокрота

РНК Вирусов гриппа В (Influenza В virus) Качественное исследование

Мазки и смывы из полости носа и ротоглотки, мокрота

Мазки и смывы из полости носа и ротоглотки, мокрота

Мазки и смывы из полости носа и ротоглотки, мокрота

Мазки со слизистой нижнего носового хода, мазки из ротоглотки, мокрота или аспират из трахеи, плазма крови, фекалии.

ДНК парвовирусов В 19

Смывы и мазки из ротоглотки, слюна, плазма крови

Для получения корректных результатов большое значение имеет качество образца биоматериала для исследования, его хранение, транспортировка и предварительная обработка.

Исследование методом ПЦР относится к прямым методам лабораторного исследования, поэтому взятие биологического материала необходимо проводить из места локализации инфекционного процесса.

Интерпретация результатов количественного определения ДНК вируса гепатита Б (HBV) и РНК вируса гепатита С (HCV) методом ПЦР:

· если значение вирусной нагрузки находится в пределах 7,5 х 10 2 – 1,0 х 10 8 копий/мл, результат определяется как положительный с указанием вирусной нагрузки в образце (копий/мл.)

Интерпретация результатов качественнного определения ДНК вируса гепатита Б (HBV) и РНК вируса гепатита С (HCV) методом ПЦР: обнаружена РНК HCV/ ДНК HBV, не обнаружена РНК HCV/ ДНК HBV, недостоверный результат.

Высокотехнологичные лабораторные методы диагностики дают возможность выявить множество заболеваний на самых ранних стадиях. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) — один из самых новых и точных способов диагностики. За его разработку ученый Кэри Муллис получил в 1993 году Нобелевскую премию. Сегодня этот метод хотя и считается экспериментальным, но уже широко и успешно применяется в медицине.

ПЦР-диагностика: суть подхода

Метод ПЦР использует принципы молекулярной биологии. Его суть заключается в применении особых ферментов, которые многократно копируют фрагменты РНК и ДНК возбудителей болезни, которые находятся в пробах биоматериала, например в крови.

После этого работники лаборатории сверяют полученные фрагменты с базой данных, выявляют тип возбудителя болезни и его концентрацию.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, охлаждающем и нагревающем пробирки с пробами биоматериала. Нагрев и охлаждение необходимы для проведения репликации. Точность температурного режима влияет на точность результата.

Диагностические возможности метода ПЦР огромны, с его помощью можно выявить самые разные инфекции. Чаще всего ПЦР-метод применяют для диагностики:

• ВИЧ;
• герпеса;
• различных половых инфекций, в частности хламидиоза, уреаплазмоза, гарднереллеза, микоплазмоза и трихомониаза;
• кандидоза;
• гепатитов;
• мононуклеоза;
• листериоза;
• цитомегаловируса;
• туберкулеза;
• вируса папилломы человека;
• клещевого энцефалита.

Это далеко не полный список, метод ПЦР-анализа используется в разных областях медицины.

У диагностики методом ПЦР много плюсов:

Высокая чувствительность. Метод позволяет выявить возбудителя болезни даже при наличии нескольких молекул его ДНК, то есть на очень ранних стадиях, при хронической форме заболевания, а так же в случаях, когда болезнь никак себя не проявляет, протекая латентно.

Универсальность. Для проведения ПЦР анализа подходит почти любой биоматериал — от крови и слюны до клеток кожи.

Широкий охват. Исследование одного образца может выявить сразу нескольких возбудителей болезни.

Оперативность. Результат, как правило, готов через 5–7 часов, то есть получить заключение можно уже на следующий день после забора биоматериала.

Точность. Метод ПЦР практически никогда не дает ложноположительных или ложноотрицательных результатов, если была соблюдена технология проведения этого анализа.

Невысокая стоимость. По цене ПЦР-анализ сравним с любыми другими лабораторными анализами крови.

Однако следует понимать, что совершенных методов анализа не бывает. У ПЦР есть и минус — высокие требования к соблюдению технологии и к профессионализму лаборантов. Если образец был загрязнен, анализ может дать ложный результат. Поэтому проводить ПЦР-диагностику лучше только в самых лучших лабораториях, где внедрены системы контроля качества работы.

Для ПЦР-диагностики заболеваний на анализ берут разные виды биоматериала. Выбор зависит от типа инфекции. При анализе на ЗППП методом ПЦР берут соскоб или мазок из шейки матки или уретры, а также мочу. Для выявления герпеса, цитомегаловируса, гепатита, токсоплазмоза и ВИЧ на анализ берут кровь. При анализе на мононуклеоз и цитомегаловирус берут мазок из зева. Спинномозговая жидкость используется для анализа при поражениях нервной системы, для диагностики внутриутробных инфекций исследуются ткани плаценты, для выявления легочных инфекций — мокрота или плевральная жидкость.

Подготовка к ПЦР-диагностике напрямую зависит от типа биоматериала. Кровь сдается натощак утром. Моча также сдается утром, в лабораторных условиях, в стерильный контейнер. Перед сдачей мазка или соскоба из урогенитальной области нельзя вступать в половые контакты за несколько дней до исследования, не следует проводить спринцевания. Мазок или соскоб нельзя сдавать во время менструации и в течение 2-х дней после ее окончания.

Существует немало различных методик ПЦР-диагностики: ПЦР в реальном времени, секвенирование, пиросеквенирование, микрофлюидные технологии. Сейчас наиболее распространенным способом проведения анализа является ПЦР в реальном времени — этот метод практически не допускает ложноположительных результатов, к тому же срок обработки образцов при исследовании таким способом сокращается — результат можно получить уже через час.

Для пациента результат ПЦР-анализа может быть либо положительным, либо отрицательным. Отрицательный означает, что следов враждебной ДНК не обнаружено и человек здоров. Положительный подразумевает наличие фрагментов ДНК возбудителя болезни — это значит, что человек заражен и ему требуется лечение.

Нередко ПЦР-диагностика дает положительный результат, но пациент не чувствует никакого недомогания, а признаки болезни отсутствуют. Однако это означает не ошибку, а очень раннюю стадию заболевания. В этом случае необходимы дополнительные исследования и лечение. Если заболевание было диагностировано на столь ранней стадии, следует начинать терапию как можно скорее, ведь чем дальше зайдет болезнь, тем сложнее будет ее вылечить.

ПЦР-диагностика инфекций невероятно точна — она позволяет обнаружить возбудителя болезни, даже если в пробе находится всего одна-единственная молекула его ДНК. Именно это качество сделало ПЦР-анализ одним из эффективнейших диагностических инструментов как для определения наличия инфекции, так и для контроля за ходом лечения.

Цены на ПЦР-диагностика гепатитов

• Определение генотипа вируса гепатита C (HepАtitis C virus) 1660 руб.
• Определение ДНК вируса гепатита В (HepАtitis В virus) в крови методом ПЦР, качественное исследование 520 руб.
• Определение ДНК вируса гепатита В (HepАtitis В virus) в крови методом ПЦР, количественное исследование 1560 руб.
• Определение РНК вируса гепатита C (HepАtitis C virus) в крови методом ПЦР, качественное исследование 570 руб.
• Определение РНК вируса гепатита C (HepАtitis C virus) в крови методом ПЦР, количественное исследование 2600 руб.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) является одним из методов диагностики, позволяющих добиться значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК/РНК) в биологическом материале (пробе) с использованием фермента ДНК-полимеразы.

По данным Всемирной организации здравоохранения, более 2 млрд. человек инфицированы вирусом гепатита В (HBV); число хронических носителей вируса достигает 400 млн. человек. Ежегодно в мире ВГВ инфицируется около 50 млн. человек, около 2 млн. из них умирают. Около 500 млн. лиц инфицированы вирусом гепатита С (HCV). Таким образом, на данный момент складывается достаточно неблагоприятная эпидемическая ситуация по инфекциям, вызывающим гепатит В и гепатит С.

В связи с этим актуальным является использование методов диагностики этих инфекций, которые должны удовлетворять следующим характеристикам:

- получение результатов анализа в максимально короткие сроки;

- высокие специфичность и чувствительность как предпосылки достоверности анализа.

ПЦР решает следующие задачи:

- диагностика инфекций на самых ранних стадиях заболевания (в период серонегативного окна);

- указывает на отсутствие вирусов в крови при неопределённых результатах иммуноферментных анализов;

- выявляет истинных вирусоносителей среди серопозитивных лиц;

- позволяет определить генотип вирусов гепатита С (1a,1b,2,3a/3b).

ПЦР позволяет определять в исследуемом материале (кровь, пунктат печени) ДНК вируса гепатита В или РНК вируса гепатита С как качественно, так и количественно.

Положительный анализ свидетельствует об остром или хроническом гепатите, отрицательный результат – об отсутствии инфекции.

• При повышении в биохимическом анализе крови уровня АлАТ и АсАТ
• Обследование на этапе подготовки к беременности или оперативному вмешательству
• Обследование пациентов, которые часто подвергаются внутривенным инъекциям
• При незащищённом половом контакте
• Наркомания
• При наличии признаков вирусного гепатита
• Застой желчи (холестаз)

Специальной подготовки к анализу не требуется. Рекомендуется воздержаться от приема пищи в течение 4 часов перед забором крови.

Исследование можно проводить через 2 недели после предполагаемого момента инфицирования, что дает возможность ранней диагностики заболевания.

Спасибо врачу за проведённую операцию, с легкостью легла к к нему на операционный стол и под его поддержку немножко юморной и я уснула, было не страшно , спасибо огромное за выполненную работу. Подробнее

Выражаю огромную благодарность замечательному доктору Титову Дмитрию Алексеевичу за проведенное лечение, за внимательное отношение и профессионализм! Спасибо за позитивный настрой на протяжении всего лечения. Подробнее

Проходила лечение в Отделении в IX/2019-II/2020, хочу выразить огромную благодарность всему коллективу Отделения противоопухолевой лекарственной терапии под руководством замечательного, чуткого доктора Шикиной Валентины Евгеньевны. Благодаря атмосфере, созданной в Отделении очень нелегкое лечение, перенесла морально легко! Спасибо за профессионализм, внимате. Подробнее

Я искренне благодарю очень хорошего врача Павла Юрьевича Орехова. Так сложилось, что мне по разным диагнозам довелось проходить лечение в отделении сосудистой хирургии, а Павел Юрьевич был моим лечащим врачем. Я уверен, что именно его профессиональные действия, назначения и рекомен. Подробнее

Потрясающий доктор. Спасибо ей огромное за всё, очень компентная, внимательная и что сейчас очень редко в нашей медицине, она нацелена на то, чтоб вылечить пациента и помочь ему, а не просто поговорить. Мы с мужем являемся её пациентами и очень рады, что нас судьба свела с таким чудесным доктором. Спасибо . Подробнее

Хочу выразить огромную благодарность Хлопушину Евгению Юрьевичу за профессионализм и необыкновенно чуткое отношение. Врач очень грамотно и комплексно подошел к моей ситуации: провел полную диагностику, в кратчайшие сроки организовал необходимое предоперационное лечение. Он блестяще провел сложную операцию, после которой уже практически через неделю я смогла . Подробнее

Выражаю огромнейшую благодарность хирургу-онкологу,д.м.н.Ищенко Роману Викторовичу за его добрейшее сердце, высочайший профессионализм и чуткое отношение к пациентам. Благодарю судьбу ,что мы узнали об этом замечательном враче по программе ЗдоровЯ. Роман Викторович помог нам справиться с нашей проблемой. Операция, которую он провел моему мужу на лёгком прошл. Подробнее

Огромная благодарность врачу-колопроктологу зиновскому Михаилу Вячеславовичу. Была у него на приёме 11 марта 2020 года. Острая боль, еле дошли с мужем, хотя всего и через дорогу. Сделал все, как мне кажется, возможное. Дал все необходимые рекомендации, и свой номер телефона. Сказал звонить, если будут какие либо вопросы. Звонила и консультировалась с ним у. Подробнее

В феврале 2020г попала в онкологическое отделение, где меня встретила зав отделением Косый Валентина Васильевна. Огромное ей спасибо за профессионализм и чуткое отношение. Здесь же мне была сделана сложнейшая операция Ищенко Романом Викторовичем и Астаховым Дмитрием Анатольевичем. Это мои три ангела-спасителя.
Сейчас я быстро восстанавливаюс. Подробнее

Выражаю огромную благодарность Артуру Робертовичу за его профессионализм и "золотые" руки. Оперировал маму дважды в июне 2019 и в феврале 2020 года и оба раза успешно. Очень внимательный, чуткий и отзывчивый Врач. Очень аккуратный в своей работе и что порадовало "эстет" по части швов))) Он в буквальном смысле спас жизнь моей м. Подробнее

Подайте заявку на госпитализацию или исследование.
Специалисты регистратуры свяжутся с вами и согласуют
удобное для вас время. Или перейдите к форме записи онлайн.

За звучной аббревиатурой ПЦР скрывается сложная и не слишком понятная для рядового пациента расшифровка — полимеразная цепная реакция. Что же такое ПЦР-диагностика, на чем она основана и почему в последнее время ее стали считать самой перспективной технологией в постановке диагнозов, касающихся инфекционных и вирусных заболеваний? Мы расскажем о преимуществах ПЦР-метода, его особенностях и этапах проведения.

ПЦР-диагностика: что это такое?

Диагностика методом ПЦР существует чуть более 30 лет. Значительно эволюционировав за это время, она зарекомендовала себя как один из наиболее точных способов выявления инфекций. В основе метода лежит принцип многократного увеличения микроскопических концентраций фрагментов ДНК возбудителя в биологической пробе пациента в искусственных условиях. В результате сложного процесса, называемого амплификацией, под воздействием ферментов и изменения температуры (от 50 до 95°С) из одной молекулы ДНК образуется две. При этом происходит копирование участка ДНК, который присутствует только у того вида патогенного микроорганизма, который интересует врача.

Цикл образования новой молекулы ДНК занимает всего около 3 минут, а тридцати-сорока циклов вполне достаточно, чтобы получить количество молекул, необходимое для достоверного визуального определения методом электрофореза.

Кроме амплификации, то есть простого увеличения числа копий молекулы ДНК, с помощью ПЦР можно производить и другие манипуляции с генетическим материалом, например, сращивать фрагменты ДНК, вводить мутации и т.д. Это позволяет использовать ПЦР не только для диагностики инфекционных и генетических заболеваний, но и для установления отцовства, клонирования и выделения новых генов.

ПЦР-диагностика проводится в специальных лабораториях с помощью амплификационного оборудования. На сегодня существует множество различных модификаций ПЦР, включая технологии с использованием не только ДНК, но и фрагментов рибонуклеиновой кислоты (РНК). В некоторых из них амплификация осуществляется при постоянной температуре, и для их проведения специальное оборудование не требуется.

Еще одна популярная модификация ПЦР — мультиплексная амплификация (МПА), которая позволяет проводить исследование сразу нескольких изучаемых фрагментов в одной пробирке. Это не только ускоряет и удешевляет проведение анализа, но и позволяет рассматривать одни фрагменты, получившиеся в результате реакции, в качестве положительных маркеров для других, что еще больше увеличивает точность исследования методом ПЦР.

В клинической медицине ПЦР-диагностика является одним из наиболее востребованных методов анализа в самых разных сферах:

• Прямое определение возбудителя инфекции. Некоторые традиционные методы, такие как иммуноферментный анализ (ИФА), выделяют только белки-маркеры, которые являются продуктом жизнедеятельности возбудителей инфекции, а потому только косвенно указывают на присутствие микроорганизмов. Наличие специфического участка в ДНК, выявленное с помощью ПЦР, безошибочно или почти безошибочно указывает на присутствие конкретной инфекции.
• Высокая специфичность метода . Она обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется фрагмент ДНК, характерный только для конкретного возбудителя инфекции. Специфичность исключает возможность ложных результатов анализа, тогда как в иммунологических методах исследований ошибки вполне вероятны из-за перекрестной реакции антигенов.
• Высокая чувствительность . При помощи ПЦР-диагностики можно выявить присутствие в организме даже единичных клеток вирусов или бактерий в тех случаях, когда обычными методами сделать это практически невозможно. ПРЦ определяет наличие всего 10–100 клеток в пробе, тогда как иммунологическими и микроскопическими тестами можно определить наличие инфекции при количестве клеток не менее 103–105.
• Универсальность . Сходство состава всех ДНК или РНК дает возможность применять универсальные методы лабораторных исследований, диагностируя сразу несколько возбудителей из одной биологической пробы.
• Скорость получения результатов . Поскольку для проведения ПЦР-диагностики не нужен посев и выделение культуры возбудителя, то и большого количества времени на нее не требуется. Весь цикл — от забора биоматериала до получения результатов — занимает 4–5 часов.
• Диагностика латентных инфекций . ПЦР-методом диагностируются трудно культивируемые и некультивируемые формы микроорганизмов, встречающиеся в тех случаях, когда заболевание протекает в скрытой форме.

Методом ПЦР можно выявлять возбудителей инфекции не только в организме человека, но и в почве, воде, продуктах питания.

Тем не менее не стоит думать, что ПЦР-диагностика не имеет недостатков. У нее есть свои ограничения, но их количество настолько незначительно, что не может отрицательно повлиять на популярность и эффективность метода:

• Вероятность амплификации ДНК не только живого, но и погибшего микроорганизма . При проведении ПЦР-диагностики для контроля эффективности лечения необходимо соблюдать определенные требования. В частности, проводить ПЦР нужно после определенного промежутка времени (1–2 месяца), за который происходит полное исчезновение возбудителя инфекции в организме.
• Возможность возникновения перекрестной реакции . Подбор фрагментов ДНК (праймеров) осуществляется на основе знаний о генетическом строении конкретного микроорганизма. Но теоретически такой же фрагмент может присутствовать и у других микроорганизмов, геном которых на сегодняшний день еще не расшифрован. Их присутствие в пробе может привести к ложноположительному результату анализа.
• Изменчивость микроорганизмов . Эта способность возбудителей к мутации иногда приводит к тому, что некоторые их штаммы становятся неуловимыми в процессе ПЦР-анализа.

Чтобы уменьшить риски, разработаны стандарты объемов испытаний тест-систем ПЦР-диагностики, включающие проверку на перекрестные реакции и тестирование всех известных штаммов конкретного возбудителя.

ПЦР-диагностика проводится в специальной лаборатории в несколько этапов.

1. Забор биоматериала . Процедура, предшествующая непосредственному анализу, которая осуществляется в процедурном кабинете соответствующего профиля. Забор делается с помощью стерильного оборудования только в стерильные пробирки. Материалом для исследования могут быть:
   • Эпителиальные соскобы со слизистых оболочек: из уретры, из цервикального канала, со слизистой дыхательных путей и зева, из конъюнктивы. Забор проводится с помощью специального ершика, при этом недопустимо попадание в материал следов крови.
   • Моча . Собираются первые 50 г утренней мочи в стерильную емкость. Материал используется для диагностики мочеполовых инфекций.
   • Мокрота . Используется для ПЦР-диагностики туберкулеза и респираторных форм микоплазмоза и хламидиоза. Мокроту собирают в стерильный флакон в количестве 15–20 мг.
   • Кровь, сыворотка, плазма . С их помощью диагностируются гепатиты, герпес, ВИЧ-инфекция. Для анализа используется венозная кровь (1–1,5 мл), собранная у пациента натощак в стерильную пробирку. Хранить биоматериал можно не более суток при температуре 4°С. Замораживать кровь категорически запрещается.
   • Биологические жидкости . К ним относятся слюна, сок простаты, околоплодная, плевральная, спинномозговая, суставная жидкости. Собираются при помощи пункции с использованием стерильного инструментария в количестве 0,1–1,5 мл в стерильные пробирки.
   • Биоптаты , т.е. материалы, полученные путем биопсии. Обычно на анализ отправляют биоптаты двенадцатиперстной кишки или желудка, чтобы выявить хеликобактерную инфекцию. Объем материала 2–3 мм 3 .
2. Хранение и транспортировка биоматериала . Хранить образцы можно при комнатной температуре не более 2 часов. Если необходимо длительное хранение, то пробы помещают в холодильник с температурой 2–8°С на срок не более одних суток. Допустимо хранение некоторых биоматериалов в течение двух недель в замороженном виде при температуре -20°С. Оттаивание и повторное замораживание проб запрещено. Транспортировка, если она необходима, должна проводиться в специальных термоконтейнерах или термосах с соблюдением всех правил хранения и перевозки биоматериалов.
3. Выделение ДНК из образца . Способ выделения зависит от вида определяемого микроорганизма и от вида биологического образца. Если, например, анализируется соскоб эпителиальных клеток, используется так называемый метод твердофазной сорбции, заключающийся в добавлении в образец специального вещества, концентрации ДНК на сорбенте и его многократной отмывке буферным раствором.
4. Проведение ПЦР . Некоторое количество образца из биологической пробы переносится в специальную микроцентрифужную пробирку. Туда же добавляется амплификационная смесь, имеющая сложный состав, в объеме 25 мл. Пробирки устанавливают в программируемый термостат, и автоматическом режиме проводится амплификация. Время ее проведения зависит от заданной программы и составляет 2–3 часа. Одновременно с опытными пробами проводятся контрольные — положительные , включающие в себя контрольный препарат ДНК исследуемого возбудителя, и отрицательные , не содержащие исследуемую ДНК. Количество циклов амплификации варьирует от 30 до 40, более 40 циклов проводить не рекомендуется, так как это способствует увеличению количества неспецифических продуктов в пробе.
5. Регистрация результатов . Фрагмент ДНК, характерный для возбудителя инфекции, выделяют методом электрофореза в присутствии специального вещества — бромистого этидия. Его соединение с фрагментами ДНК дает светящиеся полосы при облучении ультрафиолетовым излучением. Образец помещают в камеру для электрофореза и в течение 35–40 минут проводят разделение продуктов амплификации. После этого образец просматривают в ультрафиолетовом свете — наличие оранжевой светящейся полосы свидетельствует о положительном результате.
6. Интерпретация результатов исследования . Результат ПЦР-диагностики может быть либо положительным, либо отрицательным. Положительный результат говорит о том, что в организме человека обнаружены следы инфекции, причем именно в данный момент времени. Количественный результат ПЦР-анализа оценить может только врач, они индивидуальны для разных типов инфекций. На основании количественного результата можно сделать вывод о степени активности заболевания и определить характер лечения.

Цена ПЦР-диагностики зависит от того, на какую конкретно инфекцию пациент планирует проверяться, от вида анализируемого материала, методики тестирования — качественной или количественной. Цена за определение одной инфекции составляет от 200 до 800 рублей в разных клиниках. Кроме того, к стоимости анализа добавится и плата за забор биоматериала — около 400 рублей. Средняя стоимость ПЦР-диагностики разных видов приведена в таблице 1.

Таблица 1 . Примерные цены на анализы ПЦР в Москве

Название анализа	Цена, руб.
Определение ДНК хламидия	750
Определение ДНК микоплазмы хоминис	540
Определение микоплазмы гениталиум	350
Определение ДНК уреаплазмы	350
Гонококк, определение ДНК	350
Определение ДНК герпеса (разные типы)	350–600
Определение ДНК кандиды	570
Вирус краснухи, определение РНК	800
Дифференцированное определение ДНК ВПЧ (разные типы)	350–1900 [1]