Наставление по лабораторной диагностике орнитоза хламидиоза птиц

ОРНИТОЗ ДЕКОРАТИВНЫХ ПТИЦ

Шилова Е.Н. Садчикова С.В.
ГНУ Уральский научно-исследовательский ветеринарный институт

В последнее время обилие дикой и синантропной орнитофауны, постоянные миграции перелетных птиц, широко развитое птицеводство, в том числе утиное и индюшиное, популярность охоты на диких птиц и содержание экзотических и декоративных птиц, контрабанда экзотической птицы приводят к эпизоо-тологическим и эпидемиологическим предпосылкам возникновения вспышек орнитоза в России [1,2].

Данное заболевание регистрируется у многих видов птиц и является опасным для человека.

Возбудителем орнитоза, согласно современной классификации, является Chlamydophila psittaci (OIE, 2008). Исторически данное заболевание называли пситтакоз, или попугайная болезнь, т.к. источниками возбудителя для человека наиболее часто являются разные виды попугаев.

У попугаев отмечается наиболее характерное клиническое проявление орнитоза. Острое течение наблюдается, главным образом, у молодняка. Заболевание начинается снижением аппетита, сонливостью, повышением температуры, затем появляются понос, слабость ног, параличи. Заболевание продолжается 1-2 недели. Большинство больных птенцов гибнет (2-5% попугаев). У амазонских попугаев также наблюдают поражение центральной нервной системы. У австралийских попугаев часто бывает односторонний или двусторонний конъюнктивит и кератоконъюнктивит. У волнистых попугаев часто наблюдают симптомы синусита [1].

У человека заболевание может проявляться атипичной пневмонией, энтеритом, перитонитом, энцефалитом.

В настоящее время, множество людей приобретают в качестве домашних питомцев мелких, средних и крупных попугаев, а также других экзотических птиц, которые часто ввозятся в РФ контрабандой, без ветеринарных сопроводительных документов и реализуются через, так называемые, "птичьи рынки". Между тем, вакцин для профилактики орнитоза не разработано.

Исследования, проведенные в Ветеринарно-диагностическом центре УрНИВИ РАСХН (г. Екатеринбург) показывают, что выявление латентных носителей возбудителя среди таких птиц нередки: так, в 20082009 гг. из 419-ти исследованных в ПЦР проб материала от попугаев выявлена 41 положительная (что составляет 9,8% от исследованных).

Согласно наставлению N° 13-7-2/1573 Министерства сельского хозяйства по лабораторной диагностике орнитоза (хламидиоза) птиц, утвержденного Департаментом ветеринарии 26.04.99 г., лабораторные исследования на хламидиоз птиц включают:

выявление специфических антител в сыворотке крови больных птиц в РСК (РНСК) или ИФА;
обнаружение хламидий или антигенов хламидий в патологическом материале методом световой или люминесцентной микроскопии;
выделение хламидий на куриных эмбрионах или лабораторных животных с последующей их идентификацией;
выявление ДНК хламидий в патологическом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

В современных условиях менее трудоемким, достаточно быстрым и точным методом исследования на инфекционные заболевания является ПЦР-диагностика.

Для получения точных результатов важно правильно отобрать пробы и своевременно доставить их в лабораторию.

При диагностике орнитоза методом ПЦР у птиц отбирают:

для прижизненного исследования - соскобы с конъюнктивы и клоаки, помет птиц (стерильными инструментами в стерильную посуду).
при постмортальной диагностике - биоптаты (кусочки паренхиматозных органов).

Жидкости для исследования отбирают в объеме 20 куб.см, из тканей и органов вырезают кусочки размером 3х3х3 см (толщина кусочков может быть меньше).

Материалы доставляют в лабораторию в день взятия или на следующий день, хранят при температуре +2-5°С. Допускается хранение материала в течение 30 дней при - 20°С.

При групповом содержании птицы возможно брать общие пробы кала. Мы полагаем целесообразным включать в одну пробу не более 5 особей. Это гарантирует исследование материала от каждого животного и облегчает проведение противоэпизоотических мероприятий в случае лабораторного подтверждения диагноза.

При получении положительных результатов в ПЦР групповой пробы, необходимо провести исследование индивидуальных проб, отобранных специалистами государственной ветеринарной службы.

Для профилактики возникновения орнитоза декоративную птицу необходимо исследовать на орнитоз один раз в год методом ПЦР (ВЛДЦ ГНУ УрНИВИ, г. Екатеринбург), включая птиц в зоомагазинах, на выставках, а также птиц, принадлежащую частным владельцам.

Также целесообразно проводить исследования птицы на орни-тоз при приобретении новых птиц в период карантинирования и перед продажей.

Действующие ветеринарно-санитарные правила по профилактике и ликвидации орнитоза (СП 3.1. 092-96; ВП 1211-96) предусматривают противоэпизоотические мероприятия в отношении больной и подозрительной в заболевании промышленной птице [3]. В настоящее время большинство владельцев дорогих попугаев не соглашаются при отсутствии клинических признаков заболевания избавляться от своих птиц, положительно реагирующих на орнитоз, несмотря на их опасность для человека как хламидиозоносителей.

Поэтому, при выявлении положительных результатов на орнитоз в ПЦР у клинически здоровых птиц, можно рекомендовать их изоляцию и проведение химиотерапевтической обработки под наблюдением ветеринарных врачей.

Можно применять декоративным птицам один из следующих антибиотиков:

Доксициллин, орально, 25-50 мг/кг живого веса/ сут. на 1-2 приема, курсом 14-21 день.
Тетрациклин, орально, 40 мг/кг живого веса/сут. 14-21 день.
Энрофлоксацин (Байтрил, Энроксил, Энрофлон) 1 раз/день, орально или внутримышечно 2,5-5 мг/кг живого веса/сут. (0,10,2 мл 2,5% раствора на кг.), курс 14-21 день.
Эритромицин 40-50 мг/кг живого веса/сут., разделить на 2 приема, курс 14-21 дн.

Не используются антибиотики пенициллинового ряда, т.к. они не уничтожают, а лишь задерживают развитие хламидий.

Оральное применение препарата предполагает скармливание корма с антибиотиком, при этом необходимо учитывать поедаемость корма.

При введении препаратов с питьевой водой необходимо, чтобы птица получала для питья только эту воду.

Крупные попугаи и другие декоративные птицы могут отказываться потреблять корм или воду с антибиотиками, поэтому при обработке ручных птиц целесообразно лечение проводить индивидуально.

Антибиотики можно выпаивать в виде оральных растворов пипеткой или шприцом без иглы. Можно обработку антибиотиками проводить в начале курса лечения инъекционно в течение недели (байтрил, энроксил), затем этот же препарат продолжить применять орально.

При скармливании препарата групповым методом, в случае, когда в одной клетке содержится несколько птиц, необходимо контролировать потребление корма всей птицей.

После проведения курса лечения (т.е. через 2-3 недели), необходимо отобрать пробы для повторного исследования в ПЦР. При получении повторного положительного результата птица подлежит уничтожению.

При появлении клинических признаков болезни на любом этапе проведения лечения птицу также необходимо уничтожить.

На протяжении всего курса лечения необходимо проводить ежедневную санитарную обработку клетки с растворами следующих дезинфектантов: виркон, вироцид, сабисепт, септуксин, экоцид, Ника-Экстра-М.

Таким образом, карантинные и ограничительные мероприятия, ранняя диагностика, надзор со стороны государственной ветеринарной службы, использование антибиотиков с профилактической и лечебной целью, соблюдение ветеринарно-санитарных правил позволят взять под контроль эпизоотический процесс при орнитозе декоративных птиц и предупредить заболевание людей.

Список литературы

Инфекционная патология животных./ Под ред. А.Я. Самуйлен-ко, Б.В.Соловьева, Е.А. Непоклонова, Е.С.Воронина. - Т.2. - М.: ИКЦ "Академкнига", 2006. - С. 321-330.
Обухов И.Л. Лабораторная диагностика инфекционных болезней методом ДНК-амплификации при помощи полимеразной цепной реакции (ПЦР)/ И.Л.Обухов, К.Н. Груздев // Сб. науч. тр. ВГНКИ - 1995- Т. 57 - С.36-45.
Обухов И.Л. Орнитоз./ И.Л.Обухов, Ю.Д. Караваев, К.Н. Груздев и др. // Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных. Сб. сан. и вет. правил. М.: 1996 г.-с. 152155.
Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals (mammal, birds and bees). Sixth Edition.- Volume 1.- OIE:2008, Р.431-442

Реферат: Орнитоз регистрируется у многих видов птиц и является опасным для человека.

Исследования, проведенные в Ветеринарно-диагностическом центре УрНИВИ РАСХН (г. Екатеринбург) показывают, что выявление латентных носителей возбудителя среди декоративных птиц нередки. В современных условиях менее трудоемким, достаточно быстрым и точным методом исследования на инфекционные заболевания является ПЦР-диагностика. Действующие ветеринарно-санитарные правила по профилактике и ликвидации орнитоза (СП 3.1. 092-96; ВП 1211-96) предусматривают противоэпизоотические мероприятия в отношении больной и подозрительной в заболевании птице.

Ключевые слова: орнитоз, хламидии, ПЦР, противоэпизооти-ческие мероприятия, антибиотики.

ORNITOSIS OF THE DECORATIVE BIRDS

Shilova E.N., Sadchikova S.V.

Urals scientific-research veterinary institute

Ornitosis is registrated at many kinds of birds and is dangerous for men.

Investigations which were carried out in the Veterinary-diagnostic centre of the Urals state scientific-research institute of the veterinary medicine (Yekaterinburg) show that discovering of the latent carriers of the causal agents among decorative birds are not rare. In the modern conditions which are less capacious quick enough and exact method of the investigation on the infectious diseases is the PCR-diagnostics. The active sanitary-veterinary rules in the prophylaxis and liquidation of ornitosis provide unti-epizootic measures concerning the ill and suspicious in the incidence birds.

Key-words: ornitosis, chlamidia, unti-epizootic, measurements, antibiotic.

Сведения об авторах Ответственная за переписку с редакцией: Шилова Евгения Николаевна, зав. отделом инфекционной патологии ГНУ УрНИВИ, кандидат ветеринарных наук, доцент 620142, г.Екатеринбург, ул.Белинского, 112а, Тел. (343)257-20-44, факс (343)257-82-63

Садчикова Софья Владимировна, м.н.с. Ветеринарного лабо-раторно-диагностического центра ГНУ УрНИВИ, аспирант 620142, г.Екатеринбург, ул.Белинского, 112а,

Бурмистров Евгений Николаевич,

Знания будущих мам о хламидиозе чаще всего ограниченны тем, что хламидиоз – опасное заболевание, которое обязательно следует исключать перед беременностью, и что передается он половым путём. Так ли это верно, и какие еще разновидности и пути передачи этой опасной инфекции существуют, мы постараемся выяснить.

Хламидиоз - больше чем просто половая инфекция человека. Существует множество видов хламидий, поражающих практически всех животных, птиц, рыб, амфибий, рептилий, моллюсков, и даже насекомых, и многие из этих возбудителей передаются человеку, вызывая пневмонии, бронхиты, болезни желудочно-кишечного тракта, глаз, аборты и рождение нежизнеспособного потомства. И неважно, под каким названием скрывается хламидиоз: пситтакоз, орнитоз, попугайная болезнь или иное. Все эти заболевания являются опасными для человека.

Хламидии - уникальные микроорганизмы, живущие внутри клеток. Долгое время из-за малого размера их считали вирусами, затем нашли сходство с бактериями, а в настоящее время и вовсе отнесли к одноклеточным паразитам. Попав однажды в организм, они способны жить в нем долгие года, зачастую не вызывая никаких клинических проявлений, но, тем не менее, подрывая изнутри работу легких, кишечника, суставов, мозга, глаз, и других органов.

По данным исследователей, более 70% кошек заражены хламидиозом. У большинства из них болезнь никогда не проявляется, у части случаются незначительные клинические проявления, и только малое количество мурок удостаивается внимания владельцев и посещения ветеринарного врача. Главным образом, у животного поражаются органы дыхания, бывает кашель, насморк, конъюнктивит, иногда расстройства пищеварения. У беременных кошек могут быть аборты. Собаки также болеют хламидиозом, заражаясь чаще от кошек и птиц, и демонстрируют схожую симптоматику болезни.

Рассадниками инфекции могут быть птичьи рынки, выставки кошек и собак, дворовые котята, весело играющие с вашим ребенком. Как ни хочется быть менее пессимистичным, опасности подстерегают нас на каждом шагу.

В организм человека инфекция проникает через дыхательные пути или через рот. Очень часто хламидии ютятся на частичках пыли, с которыми и путешествуют по миру, ища новых хозяев. Очень быстро хламидии проникают в кровь, вызывая симптомы общей интоксикации и поражение различных органов — легких, печени, селезенки, нервной системы, матки. Инкубационный период орнитоза составляет 1-2 недели. Протекает заболевание остро или хронически, затягиваясь порой на годы.

При возникновении заболевания у беременной женщины внутриутробного инфицирования не происходит, уродства развития не возникают. Тяжелое течение болезни на ранних сроках беременности может привести к самопроизвольному аборту.

К сожалению, врачи уделяют мало внимания диагностике орнитоза. Зачастую, легкие или средней тяжести проявления заболевания списываются на банальную простуду. А многие просто не знают о серьезной опасности, исходящей от животных…

При диагностике хламидиоза важно учитывать контакты с животными - домашними, сельскохозяйственными и дикими. Если в вашей семье есть питомец, его диагностика на хламидиоз является важной частью спокойного протекания беременности. Так что весело идем, вы – в женскую консультацию, ваш четвероногий или пернатый друг – в ветеринарную лабораторию. Потом сравниваем результаты анализов.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) является наиболее чувствительным методом диагностики заболевания, при котором взятый на анализ материал сканируется на наличие ДНК хламидии. При этом возможно исследование целого семейства хламидий, а не одного вида, чаще всего предлагаемого к исполнению. Поэтому перед анализом важно узнать, покажет ли исследование тех хламидий, которые вызывают орнитоз.

Кроме ПЦР используется множество методов диагностики, такие как иммуноферментный анализ (ИФА), иммунофлюоресцентный метод, посев на культуре клеток и прочие. В любом случае, помните, что в диагностике нуждается прежде всего ваш домашний питомец.

Основная профилактика орнитоза, как и всех антропозоонозов (заболеваний, общих для человека и животных) - это ограничение контактов с домашними животными и соблюдение правил личной гигиены после них.

Важная часть профилактики – контроль за самочувствием домашних животных. Проследите за их здоровьем, посетите ветеринарную клинику: и вы прогуляетесь, и зверя своего заодно проверите. Ограничьте контакты домашних животных с дикими и бродячими, не позволяйте ловить птиц и лягушек.

Ограничьте, по возможности, своё общение с животными и птицами.
Избегайте гуляния среди голубей на площадях, не гладьте бродячих кошек и собак.
Не покупайте и не заводите животных и птиц во время беременности.
Мойте руки после общения с животными.
Посетите ветеринарную лабораторию для комплексного обследования домашних животных на хламидиоз.

Хламидиозы - разнообразные по патогенезу и клиническим проявлениям, распространенные заболевания человека и животных.

В последние десятилетия неуклонно возрастает роль в патологии человека, так называемых, антропонозных хламидиозов. Особенно большое значение приобретает урогенитальные хламидийные инфекции, которые относятся к числу наиболее распространенных заболеваний, передающихся половым путем. Они поражают мужчин и женщин, все чаще регистрируются у новорожденных, оказывают существенное влияние на репродуктивную функцию и часто являются причиной трубного бесплодия.

В связи с интенсификацией животноводства и птицеводства, созданием промышленных комплексов с высокой концентрацией животных, увеличивается потенциальная возможность возникновения крупных вспышек зоонозных хламидиозов, которые не только представляют серьезную угрозу для здоровья человека, но и наносят значительный экономический ущерб.

Следовательно, проблема хламидиозов приобретает все большее социально-экономическое и народнохозяйственное значение. Успешная организация борьбы с этими заболеваниями возможна лишь при условии их своевременного и полного выявления, а это, учитывая многообразие клинических форм, протекающих без патогномоничной симптоматики, представляет значительные трудности. В этой связи решающее значение в постановке диагноза приобретают методы лабораторной диагностики.

В настоящих Методических рекомендациях представлены основные методы лабораторной диагностики антропонозных и зоонозных хламидиозов с учетом возможности практической лабораторной службы.

Хламидии - грамотрицательные бактерии с облигатным внутриклеточным паразитизмом, характеризующиеся широким спектром естественных хозяев. Биологическое своеобразие хламидий, выражающееся в энергозависимом паразитизме и уникальном цикле развития, определяет самостоятельное положение этих микроорганизмов в системе прокариотов.

Хламидии выделены в отдельный порядок Chlamydiales, включающий одно семейство Chlamydiaceae содержащее один род Chlamydia, состоящий из 3 видов: C. trachomatis, C. psittaci, C. pneumoniae.

Вид C. trachomatis - объединяет микроорганизмы, вызывающие заболевания, главным образом, у человека (антропонозные хламидиозы). Они обусловливают разнообразную патологию урогенитального тракта, глаз и связанную с ней хламидийную инфекцию иной локализации у мужчин, женщин и детей.

Вид C. psittaci - включает микроорганизмы, первично поражающие животных. У человека они могут вызывать зоонозные хламидиозы (орнитоз, генерализованные инфекции, связанные с сельскохозяйственными и домашними животными).

Вид C. pneumoniae - включает микроорганизмы, вызывающие респираторную патологию и передающиеся от человека к человеку .

Идентифицирован в 1989 г., недостаточно изучен.

Основными морфологическими формами хламидий являются элементарные и ретикулярные тельца. Элементарные тельца - инфекционная форма, мелкие ригидные сферические клетки с плотным нуклеоидом, диаметр 0,25 - 0,35 мкм. Окрашиваются по Романовскому-Гимзе в фиолетово-красный цвет.

Ретикулярные тельца - вегетативная неинфекционная форма, пластичные сферические клетки с рыхлым нуклеоидом, диаметр 0,6 - 1,5 мкм. Окрашиваются по Романовскому-Гимзе в синий цвет.

Хламидии культивируют в желточных мешках развивающихся куриных эмбрионов, в первичных или перевиваемых культурах клеток; некоторые штаммы хламидий - в организме белых мышей, чаще при заражении в мозг. На искусственных питательных средах хламидии не размножаются. Их паразитизм обусловлен выраженной метаболитической зависимостью от клетки хозяина.

Цикл развития хламидий протекает в клетке-хозяине в "цитоплазматическом включении", представляющем собой микроколонию микроорганизма. В процессе цикла развития происходит преобразование элементарных телец в ретикулярные. Последние размножаются бинарным делением и преобразуются через переходные формы в элементарные тельца нового поколения микроорганизмов. Цитоплазматические включения и морфологические структуры хламидий выявляются при световой, люминесцентной и фазовоконтрастной микроскопии.

Хламидии имеют сложную антигенную структуру. Выделяют три основных антигенных комплекса. Родоспецифический термостабильный, липополисахаридный комплекс, характерный для всех представителей рода. Его детерминантной группой является кислый полисахарид. Родоспецифический антигенный комплекс локализуется в клеточной стенке хламидий. Видоспецифические и типоспецифические термолабильные белковые фракции. Видоспецифический антиген определяет принадлежность штаммов к соответствующему виду. Типоспецифические антигены позволяют дифференцировать различные серовары (серотипы) хламидий внутри вида.

Хламидии чувствительны к антибиотикам тетрациклинового ряда, макролидам, рифампицину (рифадину), являющимися основными средствами этиотерапии хламидиозов. Пенициллин и его производные вызывают образование Л-подобных форм микроорганизмов, способных реверсировать в инфекционные.

Хламидии быстро инактивируются под действием высокой температуры: при 60 °C - в течение 15 мин., при 80 °C - через 10 мин., при кипячении - через 3 мин. Материал, содержащий штаммы C. psittaci, может быть обеззаражен в течение 3 часов при комнатной температуре: фенолом (1% р-р), хлорамином (3% р-р), лизолом (3% р-р), марганцевокислым калием (1:500), формалином с содержанием 38 - 40% формальдегида.

"Урогенитальные штаммы" хламидий, C. trachomatis, высокочувствительны к 70° этанолу, растворам - 2% лизола, 0,05% серебра нитрата, 0,1% калия йодида, 0,5% калия перманганата, 25% перекиси водорода и инактивируются при комнатной температуре в течение 2 сут. Хлорамин в 3% концентрации инактивирует в течение 1 мин.

2.1. Методы лабораторной диагностики урогенитальных хламидиозов и связанных с ними заболеваний иной локализации.

Для диагностики этих инфекций используют бактериоскопический, бактериологический и серологические методы исследования. Техника лабораторных исследований приведена в Приложении I.

2.1.1. Бактериоскопический метод.

Бактериоскопическое исследование предполагает выявление хламидий, их морфологических структур и антигенов в пораженных клетках (клиническом материале).

Материалом для исследования служат соскобные препараты с доступных исследованию слизистых оболочек мочеполовых (уретра, шейка матки и т.п.) и других органов (конъюнктива, прямая кишка и пр.) при экстрагенитальных формах. Из исследуемого материала готовят мазки, которые окрашивают по Романовскому-Гимзе. Цитоплазматические включения хламидий (тельца Гальберштедтера-Провачека) содержат или крупные ретикулярные тельца, или мелкие элементарные тельца. Они по цвету и внутренней структуре отличаются от ядра клетки и цитоплазмы. Для постановки диагноза хламидийной инфекции достаточно обнаружить одно типичное цитоплазматическое включение. Метод характеризуется сравнительно низкой чувствительностью, позволяет диагностировать от 10 - 20% случаев урогенитальной инфекции. При хламидийной патологии глаз чувствительность способа составляет 90 - 100%.

Применение люминесцирующих поликлональных и моноклональных антител для выявления антигенов хламидий в цитоплазматических включениях в соскобных препаратах урогенитального тракта значительно увеличивает чувствительность и специфичность метода. С этой целью можно использовать как прямой, так и непрямой иммунофлуоресцентный метод. Первый предполагает обработку препарата непосредственно специфическими люминесцирующими моно- или поликлональными антителами, второй - иммунной и антивидовой флуоресцирующей сыворотками. При люминесцентной микроскопии антигены хламидий выявляют на красном или оранжевом фоне (при контрастировании синькой Эванса или родамином) цитоплазмы эпителиальных клеток в виде внутриклеточных включений ярко-зеленого цвета.

Метод отличается высокой информативностью и уступает по чувствительности только бактериологическому (выделение хламидий в клеточных культурах).

2.1.2. Бактериологический метод.

Бактериологический метод основан на выделении хламидий из исследуемого материала путем заражения куриных эмбрионов или клеточных культур с последующей идентификацией возбудителя. Исследуемый материал тот же, что и при бактериоскопическом методе. Для удаления сопутствующей бактериальной флоры клинический материал помещается в специальные транспортные среды, содержащие антибиотики, не влияющие на жизнеспособность хламидий. Способ может быть использован в течение всего периода заболевания. Особенно эффективен при острых формах, на ранних этапах инфекции до начала антибиотикотерапии.

2.1.2.1. Выделение хламидий на куриных эмбрионах.

Исследуемым материалом заражают 6 - 8-дневные куриные эмбрионы в полость желточного мешка. Наличие возбудителя определяют микроскопией мазков - отпечатков тканей оболочек желточного мешка, окрашенных по Маккиавелло, а также специфическими люминесцирующими поли- и моноклональными антителами.

2.1.2.2. Выделение хламидий в культурах клеток.

Выделение хламидий в культуре клеток проводят в 24-часовом монослое культуры клеток (L-929, McCoy, Hela), предварительно обработанном ДЕАЕ-декстраном (30 мкг/мл) в течение 30 мин. При инокуляции исследуемого материала на монослой применяют метод принудительной адсорбции - центрифугирование при 3000 об./мин. в течение часа. После центрифугирования неадсорбированный материал удаляют при промывании средой 199 без сыворотки и дальнейшее культивирование в течение 48 - 72 часов проводят при t = 36 °C в среде 199 с 5% фетальной сыворотки, 5% 0,5 М раствора глюкозы и 0,5 - 1,0 мкг/мл циклогексимида.

Оценку результатов проводят через 48 - 72 ч методами ПИФ (при использовании специфических люминесцирующих поли- и моноклональных антител), МГГ (при окраске Май-Грюнвальд-Гимза), Люголя (окраска раствором Люголя).

При исследовании препаратов инфицированных культур клеток хламидии выявляются в виде характерных цитоплазматических включений, окрашенных в соответствующий методу цвет. Выявление хотя бы одного цитоплазматического включения, имеющего специфическое окрашивание, форму и структуру достаточно для определения хламидийной инфекции в исследуемом объекте. По специфичности метод диагностического выделения хламидий в культуре клеток является эталонным.

2.1.3. Серологические методы диагностики.

Методы серологической диагностики основаны на выявлении специфических антител в сыворотке крови, а также в секретах больных и переболевших. Для серодиагностики обычно используют реакцию связывания комплемента (РСК), непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ) и реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА). Учитывая низкую иммуногенность "урогенитальных штаммов" хламидий при локализованных формах инфекции, возможность наличия антител, связанных с ранее перенесенной хламидийной инфекцией, необходимо исследовать несколько проб сыворотки в динамике заболевания с интервалом в 2 - 3 недели. Первую пробу забирают в момент обращения больного к врачу. Интерпретацию результатов серологического обследования следует проводить в совокупности с анализом клинико-эпидемиологических данных, а также с учетом особенностей использованного серологического теста. Оптимальным является параллельное применение нескольких серологических реакций. Эти серологические тесты могут быть также использованы для проведения эпиднадзора за хламидиозами.

РСК - выполняется с коммерческим диагностикумом, который выпускается Одесским предприятием по производству бактерийных препаратов Минмедпрома СССР. В РНГА и РНИФ - более эффективных серологических тестах, разработанных и успешно апробированных в последние годы, используются экспериментальные серии соответствующих препаратов, подготовленных к промышленному выпуску. Техника постановки этих реакций приведена в Приложении II.

2.1.3.1. Реакция связывания комплемента.

РСК проводят с родоспецифическим антигеном возбудителя орнитоза. Эту реакцию используют для диагностики так называемых "генерализованных" (осложненных) форы урогенитальных хламидиозов, венерической лимфогранулемы и ряда экстрагенитальных хламидийных поражений (болезнь Рейтера, пневмония новорожденных). При локализованных поражениях (уретрит, цервицит и т.п.) РСК недостаточно чувствительна.

2.2. Методы лабораторной диагностики орнитоза и других зоонозных хламидиозов у людей.

Поскольку методы диагностики орнитоза и других зоонозных хламидиозов аналогичны, то в последующем изложении материала использован только один термин - орнитоз.

Для диагностики орнитоза у людей и птиц используют бактериологический, серологический и кожно-аллергический методы исследования. Техника лабораторных исследований и постановки полной аллергической пробы приведены в Приложении I.

2.2.1. Бактериологическое исследование.

Возбудитель орнитоза по патогенности для человека относится к микроорганизмам II группы ("Положение о порядке учета, хранения, обращения, отпуска и пересылки культур бактерий, вирусов риккетсий, грибов, простейших, микоплазм, бактерийных токсинов, ядов биологического происхождения" утверждено МЗ СССР 18.05.1979), поэтому выделение возбудителей может проводиться только в лабораториях медицинского и ветеринарного профиля, имеющих разрешение режимной комиссии на работу с возбудителями второй группы патогенности со строгим соблюдением соответствующих режимных условий ("Инструкция о противоэпидемическом режиме работы с материалом, зараженным или подозрительным на зараженность возбудителями инфекционных заболеваний I - II группы патогенности" утверждена МЗ СССР 29.06.1978).

Для выделения возбудителя орнитоза от больных в качестве исследуемого материала используют кровь или мокроту. Изоляция возбудителя возможна из крови на протяжении первых 7 - 10 дней, из мокроты - 14 - 20 дней заболевания. Применение антибиотиков широкого спектра действия для лечения больных значительно снижает возможность выделения возбудителя орнитоза. При исследовании секционного материала чаще используют кусочки печени, легкого.

Патологический материал, полученный от людей, используют для заражения мышей чаще в мозг или внутрибрюшинно и развивающихся куриных эмбрионов - в желточный мешок. Наличие возбудителя контролируют микроскопией мазков-отпечатков мозговой ткани (или внутренних органов) зараженных мышей и оболочек желточных мешков зараженных куриных эмбрионов, окрашенных различными способами: по Романовскому-Гимзе, Маккиавелло, акридином оранжевым или специфическими люминесцирующими поли- или моноклональными антителами.

Тот же патологический материал можно использовать для выделения возбудителя орнитоза в монослойных культурах различных клеток (фибробласты куриных эмбрионов, клетки L-929, Hela-229, Hep-2 и другие).

В этом случае первичными критериями диагностического выделения хламидий является обнаружение типичных для этих микроорганизмов морфологических и тинкториальных характеристик, а также содержание родоспецифического хламидийного антигена, определяемого в реакции иммунофлуоресценции.

2.2.2. Серологические методы исследования.

Серологические методы являются основными средствами практической диагностики орнитоза. Они могут применяться без ограничений в различных лабораториях медицинского профиля.

Традиционно используют реакцию связывания комплемента (РСК), диагностические препараты для которой (антиген специфический, контрольный и диагностическую сыворотку) выпускает Одесское предприятие по производству бактерийных препаратов Минмедпрома СССР.

В последние годы разработаны, успешно апробированы и другие, более информативные тесты (реакция непрямой гемагглютинации - РНГА, реакция непрямой иммунофлуоресценции - РНИФ, иммунофлуоресцентная реакция микроагглютинации - ИФРМА, иммуноферментный метод - ИФА), в них используются экспериментальные серии препаратов. Техника постановки этих реакций приведена в Приложении II.

Для серологической диагностики орнитоза у людей наиболее широко применяют РСК, РНГА и РНИФ.

В целях дифференциации серологических показателей текущей орнитозной инфекции от анамнестических реакций и естественной иммунизации, серологическое обследование на орнитоз необходимо проводить неоднократно, с интервалом 10 - 14 дней. Наиболее информативным является использование комплекса серологических реакций. Бесспорным основанием для постановки диагноза орнитоза у больных является обнаружение сероконверсии - 4-кратное повышение титра хламидийных антител. Вместе с тем более низкие показатели титра антител во 2 или 3 пробе сыворотки могут быть следствием косвенного влияния интенсивной антибиотикотерапии. В этих случаях достоверное увеличение титра антител в 2 - 3 раза может оцениваться в качестве диагностического показателя.

Положительные результаты серологических реакций без сероконверсий оценивают с учетом особенностей каждого конкретного случая, во взаимосвязи с клиническими показателями и эпидемической ситуацией.

2.2.2.1. Реакция связывания комплемента (РСК).

РСК ставят с родоспецифическим антигеном возбудителя орнитоза (выпускается Одесским предприятием по производству бактерийных препаратов Минмедпрома СССР).

Комплементсвязывающие антитела определяют у больных людей к 10 - 15 дню болезни, обычно в невысоком титре (1:16). Нарастание титра антител наблюдают в течение 4 - 6 недель и их снижение - через 3 - 6 месяцев. Антитела нередко выявляют в крови переболевших 1 - 2 года, а иногда и более длительный срок.

При однократном обследовании или при отсутствии нарастания уровня антител в динамике показатель их титра 1:64 может оцениваться диагностическим при наличии соответствующих клинико-эпидемиологических данных. Определение в этих условиях меньших титров антител требует индивидуального анализа и может быть использовано для подтверждения клинико-эпидемиологического диагноза. При обследовании "профессионально угрожаемых" коллективов комплементсвязывающие антитела могут обнаруживаться и в сыворотках клинически здоровых людей. Их выявление на фоне благополучной эпидситуации, при отсутствии клинически выраженных случаев орнитоза, может быть связано с ранее перенесенным орнитозом, с естественной иммунизацией за счет постоянного контакта с микродозами возбудителя (прямая зависимость от стажа работы обследуемых на предприятии), а также с другими хламидийными инфекциями.

2.2.3. Кожно-аллергический метод.

Для диагностики орнитоза у людей может быть использована кожно-аллергическая проба с орнитозным аллергеном (выпускается Одесским предприятием по производству бактерийных препаратов Минмедпрома СССР). Внутрикожная проба с орнитозным аллергеном становится положительной с первых дней заболеваний у 87 - 95% больных, сохраняясь до года и более. Она является чувствительным индикатором эпидемиологического неблагополучия в коллективах, профессионально связанных с птицей. С увеличением стажа работы повышается вероятность обнаружения сенсибилизации к орнитозному аллергену и процент положительных находок по внутрикожной пробе возрастает. Положительные реакции могут определяться у здоровых лиц, профессионально связанных с птицами, что можно объяснить перенесенным в прошлом заболеванием, латентной формой инфекции, естественной иммунизацией.

Специфичность внутрикожной пробы на введение орнитозного аллергена на одной руке подтверждается отсутствием реакции на введение контрольного субстрата на другой.

Учитывая высокий уровень аллергизации населения и возможность развития неспецифических реакций, оценку результатов кожной пробы у людей проводят при комплексном учете данных других диагностических тестов и клинико-эпидемиологических показателей.

Читайте также: