| Ссылки для скачивания: |
Г осударственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Р оссийской Ф едерации
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
М етоды выявления и идентификации
патогенных бактерий-возбудителей
инфекционных заболеваний с пищевым
путём передачи в продуктах питания
на основе ПЦР с гибридизационно-
флуоресцентной детекцией
Методические указания
МУК 4.2.2872-11
2. Рекомендованы государственной Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (от 2.06.2011 протокол 1).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 15 июня 2011 г.
4. Введены в действие с момента утверждения.
5. Введены впервые.
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации
Дата введения: с момента утверждения
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Методы выявления и идентификации патогенных
бактерий-возбудителей инфекционных заболеваний
с пищевым путём передачи в продуктах питания
на основе ПЦР с гибридизационно-флуоресце нтной
детекцией
Методические указания
МУК 4.2.2872-11
1.1. Настоящие методические указания устанавливают метод ускоренного выявления (посредством П ЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией) в продуктах питания патогенных бактерий - возбудителей острых и хронических инфекционных заболеваний с пищевым путём передачи (родов Salmonella , Shigella (в комплексе с энтерои нвазивными E . coli ), вида Enterobacter ( Cronobacter ) sakazakii , энтерогеморрагических веротоксигенных Escherichia co li , термофильных Campylobacter spp . видов C . jejuni , C . coli , C . lari , а также Listeria monocytogenes).
1.2. Методические указания предназначены для специалистов лабораторий Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также иных организаций и учреждений, занимающихся вопросами оценки качества и безопасности пищевых продуктов, аккредитованных (лицензированных) на проведение соответствующих исследований в установленном порядке.
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
РНК - рибонуклеиновая кислота
ВКО - внутренний контрольный образец
ОКИ - острые кишечные инфекции
ТСБДЭ - триптон-соевый бульон с дрожжевым экстрактом
ТСАДЭ - триптон-соевый агар с дрожжевым экстрактом
ФБР - фосфатный буферный раствор
ЗПВ - забуференная пептонная вода
ЗФР - забуференный физиологический раствор
3.1. Лабораторный контроль загрязнённости пищевых продуктов патогенными бактериями с использованием традиционных культуральных методов анализа сопряжён с трудоемкостью, длительностью. Даже в случае отрицательного результата требуется от 3-х до 7-ми дней для выдачи ответа. Этот срок увеличивается при идентификации изолятов биохимическими и серологическими методами, что обусловливает проблемы при расследовании вспышек ОКИ и других заболеваний с пищевым путём передачи. Так, при вспышках шигеллёза, занимающих ведущее место в структуре ОКИ пищевого происхождения в РФ, из-за низкой эффективности выделения возбудителя в чистой культуре из инкриминированных продуктов возникают значительные трудности при верификации инцидентов.
3.2. Существенно оптимизировать процедуры определения, сократить время исследований и повысить специфичность позволяют новые технологии геномного анализа. Наиболее надёжным в последние годы признаётся анализ микробных нуклеиновых кислот и выявление специфичных участков ДНК путём ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией.
3.3. Представленный в настоящих указаниях метод является альтернативным классическому бактериологическому посеву и предусматривает ускоренное определение наличия или отсутствия ДНК, и соответственно, бактерий родов Salmonella , Shigella , вида Enterobacter ( Cronobacter ) sakazakii , энтерогеморрагических Escherichia co li , термофильных Campylobacter spp. видов C . jejuni , C . coli , C . lari , Listeria monocytogenes в определенной массе (объеме) пищевого продукта, подвергнутого инкубации в жидких селективных питательных средах (при необходимости дополнительно прединкубации в неселективных средах).
* При наличии эпидемиологических данных о возможности массивного заражения пищевого продукта искомыми возбудителями и только в ходе расследования вспышек пищевых отравлений и инфекций допускается исследовать инкриминированные образцы нативных пищевых продуктов с целью получения предварительных данных о причинном агенте вспышки. При этом положительные результаты ПЦР-анализа нативных пищевых продуктов должны подтверждаться выделением возбудителя в культуре, а отрицательные результаты не должны интерпретироваться и не могут служить основанием для прекращения поиска возбудителя с предварительной инкубацией в питательных средах.
3.5. ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией также подлежит включению в комплексное тестирование подозрительных культур патогенных микроорганизмов, выделенных из пищевых продуктов бактериологическими методами (согласно утвержденным в установленном порядке методам определения), с целью подтверждения их принадлежности к родам Salmonella , Shigella , Campylobacter (видов C . jejuni , C . coli , C . lari ), Listeria (вида L . monocytogenes ), энтерогеморрагическим E . coli и E .( Cr .) sakazakii в качестве дополнительных к биохимическим и серологическим методам идентификации, в т. ч. в обязательном порядке при:
· затруднениях идентификации Salmonella spp. - взамен расширенного набора биохимических тестов в случаях отсутствия агглютинации культуры с поливалентной диагностической сальмонеллезной 0-сывороткой (А, В, С, D, Е) и со смесью 0-сывороток редких групп при положительном результате стандартного набора биохимических тестов; при предположительном результате в случае наличия агглютинации с сыворотками редких групп; при положительных результатах серологического исследования и нетипичных результатах биохимических тестов (отклонения по 2 и более признакам),
· идентификации энтерогеморрагических E . coli (0157 : H7 и другие серотипы) - взамен расширенного набора биохимических тестов одновременно с подтверждением серологической принадлежности к серогруппе 0157,
· идентификации L . monocytogenes - взамен расширенного набора биохимических тестов одновременно с определением наличия лецитиназной и β -гемолитической активности,
· идентификации других вышеперечисленных микроорганизмов при нетипичных результатах биохимических тестов (отклонения по 2 и более признакам).
3.6. Метод применяется для исследования пищевых продуктов при осуществлении государственного санитарно-эпидемиологического надзора (контроля), скрининговых исследований для целей гигиенического мониторинга, санитарно-эпидемиологических экспертиз и оценок, санитарно-эпидемиологических расследований вспышек пищевых отравлений и инфекций с пищевым путем передачи, а также может быть использован для проведения производственного контроля продовольственного сырья и пищевых продуктов.
4.1. Принципом метода является выявление путём ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией последовательностей (фрагментов) ДНК, строго специфических для геномов бактерий родов Salmonella , Shigella , вида Enterobacter ( Cronobacter ) sakazakii , веротоксигенных Escherichia co li , Listeria monocytogenes, термофильных Campylobacter spp. В основе ПЦР лежит многократное увеличение числа копий (амплификация) нуклеотидных фрагментов-мишеней ДНК, ферментом Taq-полимеразой в присутствии синтетических олигонуклеотидных праймеров и дезоксирибонуклеозидтрифосфатов. Гибридизация флуоресцентно-меченых олигонуклеотидных зондов, присутствующих в составе реакционной смеси, с комплементарным участком амплифицируемой ДНК-мишени сопровождается нарастанием флуоресценции. Измерение интенсивности флуоресцентного сигнала позволяет регистрировать накопление специфического продукта амплификации.
4.2. Метод ускоренного выявления предусматривает высев определенных количеств исследуемых образцов пищевых продуктов в соответствующие неселективные и селективные питательные среды, инкубирование посевов для накопления микроорганизмов, экстракцию (выделение) ДНК из культуральной жидкости * , амплификацию участка ДНК целевых бактерий со специфичными праймерами и гибридизационно-флуоресцентную детекцию ампликонов, осуществляемую в одном из двух вариантов: в режиме реального времени в ходе ПЦР (вариант FRT ) либо после завершения амплификации (вариант FEP).
* В случае исследования образцов нативных пищевых продуктов или бактериальных культур, выделенных из пищевых продуктов, - экстракция ДНК осуществляется из соответствующим образом подготовленных проб этих продуктов или чистых культур, выращенных на пластинчатых средах по п. 8.5.1.
Выделение ДНК из каждого исследуемого образца проводится в присутствии внутреннего контрольного образца (ВКО), используемого на всех этапах исследования, начиная с этапа экстракции ДНК.
Детекция амплифицированной ДНК целевого микроорганизма и ВКО проводится по самостоятельным раздельным каналам.
4.3. При положительных результатах обнаружения патогена жизнеспособность присутствующих в исследуемом продукте искомых микроорганизмов должна быть подтверждена бактериологическим посевом с соответствующим биохимическим и серологическим типированием или ПЦР-анализом парных проб (прошедшей и не прошедшей культуральное обогащение) в режиме FRT.
4.4. Анализ осуществляется с применением коммерчески доступных комплектов реагентов, обеспечивающих амплификацию и детекцию ампликонов в одной пробирке, прошедших регистрацию в РФ в установленном порядке после стандартизации относительно официально утвержденных методов анализа.
5.2. Исследование осуществляется с применением описанных в настоящих указаниях методов культурального бактериологического анализа и коммерчески доступных ПЦР тест-систем с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации, предназначенных для применения в данной области и разрешенных к применению на территории РФ в установленном порядке. Для экстракции ДНК и ее детекции методом ПЦР должны применяться наборы реагентов, предусматривающие возможность использования внутреннего контрольного образца, проходящего все этапы исследования и служащего для выявления возможных ошибок при его проведении.
5.3. Условия безопасного проведения работ.
1) не открывать ПЦР-пробирки после амплификации, удалять отходы с продуктами ПЦР только в закрытом виде;
2) перед входом в рабочую зону снимать уже использованные перчатки. Заранее готовить новые перчатки, перед тем как покинуть рабочую зону;
3) сбрасывать наконечники с пипеток в пластиковый пакет и выносить его после каждого использования из рабочей зоны;
4) промывать рабочую зону после каждого использования дезсредством * ;
5) для биологической зашиты рабочей зоны использовать ультрафиолетовые облучатели до и после работы в течение 15 - 30 мин;
6) деконтаминировать пипетки еженедельно согласно рекомендациям производителя (121 °С в течение 30 мин);
7) обрабатывать охлаждающие блоки в следующей последовательности: обработка дезсредством * , ополаскивание водой и протирка сухой салфеткой перед размещением в холодильнике;
8) убирать и дезинфицировать разлитые образцы или реактивы, используя дезсредства * ;
9) утилизировать неиспользованные образцы и реактивы.
В случае обнаружения контаминации (положительный результат в ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией для отрицательного контрольного образца), вся рабочая зона должна быть подвергнута тщательной санитарной обработке. Для этого необходимо следовать перечисленным указаниям:
11) протереть наружные поверхности раствором дезсредства * . Оставить жидкость на поверхности примерно на 10 мин, затем вытереть насухо одноразовыми салфетками. Затем протереть поверхности 70 % этиловым спиртом. Облучить поверхности ультрафиолетом в течение ночи;
12) утилизировать все расходные материалы (наконечники для пипеток, растворы реагентов и т.д.), которые были извлечены из упаковок и частично израсходованы, путем автоклавирования при 121 °С в течение 30 мин;
13) очистить наружные поверхности всех используемых приборов и инструментов (амплификатор, пипетки и т.д.) с применением дезсредства и спирта;
14) простерилизовать пипетки и все использованные инструменты и приспособления, стойкие к автоклавированию, при 121 °С в течение 30 мин или в соответствии с рекомендациями производителей.
При выполнении анализов также необходимо соблюдать требования техники безопасности по ГОСТ 12.0.004-90 , в т.ч. при работе с химическими реактивами - по ГОСТ 12.1.007-76 , требования пожарной безопасности - ГОСТ 12.1.004-91 и электробезопасности - по ГОСТ 12.1.019-79 , а также требования, изложенные в технической документации на амплификатор, сушильный шкаф, центрифуги, в инструкциях по применению наборов реагентов (тест-системы) для экстракции ДНК и для выявления ДНК методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией.
Необходимо избегать контакта компонентов наборов с кожей, глазами и слизистыми оболочками носа и рта; при попадании немедленно промыть пораженное место водой и обратиться за медицинской помощью.
5.4. Требования к подготовке персонала.
Выполнение измерений могут проводить только специально обученные специалисты, способные после освоения техники ПЦР - анализа и приемов по эксплуатации аппаратуры получать результаты в пределах нормативов оперативного контроля погрешности.
Персонал должен допускаться к работе в одноразовой лабораторной одежде (халат, шапочка, резиновые или пластиковые перчатки, маска, бахилы).
5.5. Условия выполнения измерений (детекции).
Измерения проводятся в нормальных лабораторных условиях при:
1) температуре окружающего воздуха (20 ± 5) °С,
2) атмосферном давлении (97 ± 10) кПа,
3) относительной влажности (65 ± 15) %.
Наборы реагентов (тест-системы) для экстракции ДНК и для выявления ДНК методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией должны применяться строго по назначению, согласно прилагаемых инструкций, и не использоваться по истечении срока годности.
6.1. Аппаратура и инструменты
Анализатор потенциометрический, погрешность измерений рН ± 0,01
Шкаф сушильно-стерилизационный, позволяющий поддерживать температуру в диапазоне от 50 до 200 °С с погрешностью ±2 °С
Термостат суховоздушный с рабочей температурой 37 °С, рабочий диапазон от 20 до 60 °С, точность поддержания температуры ±1 °С
Термостат суховоздушный с рабочей температурой 42 °С, рабочий диапазон от 20 до 60 °С, точность поддержания температуры ±1 °С
Анаэробный инкубатор или настольная система для анаэробного инкубирования
Баня водяная с подогревом, позволяющая поддерживать температуру (37 ± 1) °С
Баня водяная с терморегулятором, позволяющая поддерживать температуру от 0 до 100 °С
Весы лабораторные общего назначения, 2 и 4 класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 200 г
Микроскоп биологический бинокулярный с увеличением 900× - 1000×
Стерилизаторы паровые медицинские
Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной воды по ГОСТ 6709-72
Бокс абактериальной воздушной среды (ПЦР-бокс) или ламинарный шкаф класса биологической безопасности II тип А
Автоматическая станция для экстракции ДНК типа экстрактора NucliSENS ® easyMAG® в комплекте
Компьютер, совместимый с программным обеспечением амплификатора/детектора, в комплекте с монитором, клавиатурой, мышью, кабелем, компакт-дисками с информацией по эксплуатации и инструкциями по настройке прибора
Автоматические дозаторы с переменным объемом дозирования (от 5 до 20 мм 3 с шагом 0,01 мм 3 , с точностью ±0,8 % и от 20 до 200 мм 3 с шагом 0,1 мм 3 , с точностью ±0,6 %)
Распределительная емкость, объем 1 - 2,5 дм 3
Вакуумный отсасыватель медицинский с колбой-ловушкой для удаления надосадочной жидкости
Насос вакуумный (водоструйный)
Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой не выше -16 °С для хранения выделенных проб
Облучатель бактерицидный настенный ОБН-15 0 или других видов
В настоящее время проблема инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи (ИСМП), является крайне острой и актуальной. ИСМП поражают в среднем от 5 до 15 % госпитализированных пациентов, а в отделениях высокого риска — до 40 %.
Согласно позиции Всемирной организации здравоохранения, ни одно лечебно-профилактическое учреждение в мире не может назвать себя свободным от риска возникновения ИСМП. В то же время заболеваемость ИСМП может быть минимизирована путем управления рисками возникновения и распространения инфекций за счет качественных своевременных профилактических и противоэпидемических мероприятий, в том числе дезинфекции.
Рассмотрим два современных метода дезинфекции, которые могут применяться в медицинских организациях для предотвращения случаев внутрибольничных инфекций.
АЭРОЗОЛЬНАЯ ДЕЗИНФЕКЦИЯ
Антимикробное действие мелкодисперсного аэрозоля дезинфицирующего средства достигается за счет испарения частиц препарата, их конденсации на микробном субстрате. В то же время неиспарившиеся молекулы дезинфектанта выпадают на поверхности обеззараживаемых объектов и образуют бактерицидную пленку.
В медицинских организациях для аэрозольного метода дезинфекции допускается использовать готовые к применению средства или концентраты, рабочие растворы которых относятся к IV классу малоопасных или III классу умеренно опасных химиче-
ских соединений при введении в желудок и при нанесении на кожу.
Как правило, в аэрозольном состоянии эти же средства относятся ко II классу высоко опасных или I классу чрезвычайно опасных химических соединений. В связи с этим аэрозольная дезинфекция должна осуществляться строго в отсутствие людей (как пациентов, так и медицинского персонала) при соблюдении необходимых мер безопасности и применении средств индивидуальной защиты лицами, участвующими в проведении обработки.
При проведении аэрозольной дезинфекции необходимо придерживаться стандартных мер предосторожности.
Перед началом эксплуатации нового оборудования в медицинских организациях врач-эпидемиолог и инженер по медицинской технике согласовывают режимы применения аппарата, оценивают состояние вентиляции, энергоснабжения помещений, подлежащих дезинфекции.
Сотрудник, выполняющий дезинфекционную обработку, должен находиться за пределами обрабатываемого объекта и при необходимости экстренного входа в помещение надевает средства индивидуальной защиты глаз, кожи, органов дыхания.
После активного распыления аэрозоля и выдержки экспозиции, время которой определяется в соответствии с инструкцией по применению конкретного дезсредства, проводят проветривание с целью снижения остаточного содержания распыленного средства в воздухе до безопасного уровня.
Аэрозольный метод может использоваться в рамках следующих мероприятий
- плановая профилактическая дезинфекция с целью уменьшения микробной обсемененности объектов внешней среды и предупреждения возможности размножения микроорганизмов. Чаще всего в плановом порядке аэрозольную дезинфекцию совмещают с проведением генеральных уборок;
- профилактическая дезинфекция по эпидемиологическим показаниям для предотвращения распространения возбудителей инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи. Выполняется при выявлении источников инфекций, связанных
- с оказанием медицинской помощи, а также при неудовлетворительных результатах санитарно-бактериологического производственного контроля;
- заключительная очаговая дезинфекция с целью удаления заразного начала с объектов внешней среды после выписки, перевода, выздоровления или смерти пациента, являющегося источником инфекции.
Аэрозольная дезинфекция может применяться для обработки систем вентиляции и кондиционирования воздуха, а также перед сносом и перепрофилированием медицинских организаций.
Во время генеральных уборок в операционных блоках, перевязочных, процедурных, манипуляционных, палатах отделений хирургического профиля предпочтение следует отдавать режимам обработки, эффективным в отношении бактерий, вирусов, грибов рода Кандида.
В соматических отделениях, кабинетах амбулаторного приема, физиотерапии, лечебной физкультуры, функциональной диагностики и т. д. дезинфекцию осуществляют по бактериальному режиму.
Для проведения заключительной дезинфекции выбираются средства и режимы обеззараживания, обеспечивающие гибель соответствующего возбудителя при использовании аэрозольного метода.
БИОЛОГИЧЕСКАЯ ДЕЗИНФЕКЦИЯ
Биологическая дезинфекция предполагает использование бактериофагов — особых вирусов, уничтожающих бактерии. Бактериофаги строго специфичны — каждая разновидность вируса способна взаимодействовать исключительно с определенным видом бактерий.
Типа фагов по типу взаимодействия с бактериальной клеткой
- вирулентные (литические) — приводят к гибели бактерий;
- умеренные — инфицируют бактериальную клетку, встраиваются в генетический аппарат бактерии и репродуцируются в процессе деления клетки.
Для дезинфекции биологическим методом применяют препараты лечебно-профилактических бактериофагов, которые содержат комплексы вирулентных (строго литических) бактериальных вирусов, вызывающих гибель гомологичных видов бактерий. Эффект применения бактериофагов достигается за счет внутриклеточного размножения и разрушения бактериальной клетки, что сопровождается выходом зрелых фаговых частиц, способных к заражению новых бактериальных клеток.
По своему составу лечебно-профилактические бактериофаги подразделяются на монокомпонентные препараты, содержащие вирулентные фаги бактерий одного рода или вида (например, стафилококковый, синегнойный бактериофаги), и комбинированные бактериофаги, содержащие несколько видов монокомпонентных бактериофагов (например, бактериофаг колипротейный, секстафаг).
Дезинфекция биологическим методом с использованием бактериофагов наиболее целесообразна в отделениях эпидемиологического риска, к которым принято относить клинические отделения медицинских организаций, где существует высокая вероятность возникновения инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи и других осложнений вследствие широкого применения инвазивных методик лечения, агрессивных медицинских манипуляций, а также госпитализации высоковосприимчивых пациентов, имеющих иммунодефицитные состояния и другие факторы риска.
Высокая вероятность развития ИСМП наблюдается в отделениях анестезиологии и реанимации, трансплантологии, гемодиализа, ожоговых, онкогематологических отделениях. Применение химических дезинфицирующих средств в отделениях риска нередко ограничено невозможностью регулярного освобождения помещений от пациентов, большим количеством сложной медицинской техникой и аппаратов.
Широкое применение антибактериальных препаратов в совокупности с другими факторами медицинской агрессии способствует формированию и распространению в отделениях риска госпитальных штаммов бактерий, которые отличаются устойчивостью к антибиотикам и химическим дезинфицирующим средствам, обладают высоким эпидемическим потенциалом и приводят к возникновению случаев ИСМП.
Признака формирования госпитального штамма
- резистентность (устойчивость) к антибиотикам;
- устойчивость к химическим дезинфектантам и антисептикам;
- прогрессирующее увеличение удельного веса данного микроорганизма в общей структуре возбудителей инфекций, выделяемых от пациентов медицинской организации или конкретного отделения.
Лечебно-профилактические бактериофаги представляют собой стерильные очищенные фильтраты фаголизатов соответствующих видов бактерий. В промышленных условиях их освобождают от продуктов жизнедеятельности бактерий, эндо- и экзотоксинов, продуктов фаголизиса бактериальных клеток, белковых и антигенных комплексов питательных сред.
Преимущества биологической дезинфекции
- ее можно проводить в присутствии людей, в том числе недоношенных детей и беременных женщин;
- бактериофаги устойчивы во внешней среде, совместимы со многими химическими дезинфицирующими средствами.
Эффективная дезинфекция биологическим методом с использованием бактериофагов в медицинской организации возможна при постоянном осуществлении и реализации программы микробиологического мониторинга, которая включает оценку микробного пейзажа отделений учреждения, динамическое наблюдение за циркулирующими микроорганизмами, а также их чувствительностью к антибактериальным препаратам, дезинфицирующим средствам и антисептикам.
Показаниями к проведению биологической дезинфекции
- регистрация эпидемиологического неблагополучия в медицинской организации или конкретном ее отделении, связанного с возникновением бактериальных инфекций;
- высокий риск появления и распространения инфекций, оцениваемый по данным эпидемиологического анализа и микробиологического мониторинга;
- наличие признаков формирования госпитального штамма бактерий; выявление штаммов микроорганизмов, устойчивых к антибиотикам и химическим дезинфицирующим средствам.
Существуют две схемы дезинфекции биологическим методом с использованием бактериофагов: интермиттирующая и однократная.
Врач-эпидемиолог выбирает схему дезинфекции на основании имеющихся эпидемиологических данных с учетом конкретной эпидемиологической ситуации в медицинской организации и прогнозом ее развития.
Интермиттирующая схема используется как мера профилактики возникновения и распространения инфекционных болезней при высоком риске заноса (распространения) известного возбудителя инфекции. Она предполагает проведение биологической дезинфекции регулярно, через каждые 3 дня. Обработка проводится в течение времени, равного трем инкубационным периодам инфекционного заболевания, в отношении которого осуществляется профилактика (в среднем до 3 недель).
Интермиттирующую схему используют в отделениях реанимации и интенсивной терапии, гнойной хирургии, ожоговом и других отделениях высокого эпидемиологического риска.
Однократная схема дезинфекции биологическим методом с использованием бактериофагов используется при интенсивном обсеменении больничной среды полирезистентным возбудителем или госпитальным штаммом микроорганизма, а также при заключительной дезинфекции после выведения больного инфекционным заболеванием из очага в медицинской организации.
При формировании эпидемического очага инфекционной болезни применяется как интермиттирующая, так и однократная схема.
Не рекомендуется непрерывное длительное (более 3 инкубационных периодов) использование бактериофага из-за риска формирования резистентных к фагу микроорганизмов.
При отсутствии возбудителя бактериофаг элиминируется из больничной среды в течение 3 суток.
Решение о проведении дезинфекции биологическим методом с использованием бактериофагов принимает заместитель главного врача по эпидемиологической работе (врач-эпидемиолог) медицинской организации. Биологическая дезинфекция проводится медицинским персоналом учреждения, который проходит соответствующий инструктаж.
Перед использованием проводят визуальную оценку качества жидкого бактериофага в заводской упаковке. Препарат должен быть прозрачным, не содержать осадка или хлопьев.
Вскрывают флакон с бактериофагом с соблюдением правил асептики. Перед использованием флакон тщательно встряхивают. Вскрытый флакон должен быть использован в течение 2 часов.
При проведении дезинфекции биологическим методом жидкий препарат наносится на поверхности в помещениях, медицинскую мебель, оборудование, изделия медицинского назначения. Доза препарата — 1–2 мл/м2.
Для достижения максимального эффекта бактериофаг наносится на объекты внешней среды способом орошения (распыления). С этой целью целесообразно использовать беспропеллентные аэрозольные упаковки однократного применения.
Чтобы снизить мешающий эффект вспенивания препарата, допускается его разведение физиологическим раствором в соотношении 1:1.
С целью элиминации возбудителя из наркозно-дыхательной аппаратуры бактериофаг вносится в увлажнитель.
При регистрации очагов внутрибольничного сальмонеллеза или других бактериальных острых кишечных инфекций обработка соответствующим возбудителю бактериофагом проводится в палатах для пациентов, туалетных и санитарных комнатах.
Дезинфекция биологическим методом с использованием бактериофагов проводится в любое время суток, желательно за 3–4 часа до выполнения текущей или заключительной дезинфекции химическими дезинфицирующими средствами или же
через аналогичное количество времени после ее осуществления.
При правильном распылении на участках нанесения бактериофага становится заметным мелкодисперсный слой. Это обеспечивает интенсивную циркуляцию вирусов во внешней среде и резко повышает вероятность их контакта с соответствующими бактериями, определяя высокую эффективность использования бактериофагов.
В процессе проведения биологической дезинфекции врач-эпидемиолог или помощник врача-эпидемиолога осуществляет визуальный контроль, который предполагает оценку соблюдения технологии применения препарата.
Чтобы проконтролировать качество дезинфекции биологическим методом с использованием бактериофагов, в бактериологической лаборатории проводят микробиологические исследования смывов с обработанных поверхностей через 6–8 часов после проведения дезинфекции в соответствии со следующим алгоритмом:
- С объектов внешней среды в отделениях, где проводилась биологическая дезинфекция, стандартным способом отбирают смывы, помещая тампоны в пробирки с простым питательным бульоном
- В пробирки со смывами добавляют по 2 капли взвеси 18-часовой чистой культуры свежевыделенных бактерий, чувствительных к бактериофагу. Предварительно чувствительность микроорганизмов может быть определена качественным методом. Пробирки со смывами инкубируют при 37°С 18 часов
- После инкубации пробирки прогревают на водяной бане при температуре 56–60 °С в течение 30 минут для уничтожения посторонней микрофлоры. Чтобы избавиться от посторонней микрофлоры, можно профильтровать содержимое инкубированных пробирок через бактериальные фильтры
- На чашки Петри с простым питательным агаром сплошным газоном засевают 18-часовую чистую культуру. Используется та же культура, на которой производилось подращивание фага
- Поверхность чашки делится на квадраты размером 3–4 см2, в каждый из которых отградуированной на 5 мм петлей вносится по 1 капле прогретого содержимого пробирки (или фильтрата, если использовались бактериальные фильтры). Количество исследуемых смывов определяется количеством квадратов. Через 15–20 минут чашки помещают в термостат при 37 °С на 18 часов
Результат исследования считается положительным, если на месте нанесения капли прогретого содержимого пробирок (или фильтрата) обнаруживается негативное (прозрачное) пятно лизиса бактерий. Размеры, форма и морфология его могут быть различными.
Результат дезинфекции считается успешным, если бактериофаг обнаруживается не менее чем в 75 % исследуемых смывов.
1 Утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 06.04.2015, 28.09.2015.
2 Утв. Постановлением Главного государственного санитарного врача РФ от 18.05.2010 № 58 (в ред. от 10.06.2016).
3 Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ 27.05.2015 (далее — МР 3.5.1.0101-15).
Читайте также:
Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.
Copyright © Иммунитет и инфекции
