Иммунохроматографический тест в диагностике энтеровирусной инфекции

Назначение

Краткая информация

Энтеровирусы (вирусы полиомелита, вирусы Коксаки А и В, эховирусы, энтеровирусы) относятся к семейству пикорнавирусов. Передаются фекально-оральным путем, изо рта в рот, при прямом контакте с выделениями, при глазных или кожных повреждениях. Контаминированные инфицированными фекалиями вода, почва, продукты питания являются внешним источником заражения, способствуют быстрому распространению инфекции и могут вызвать вспышку эпидемии.

Более 90% инфекций, вызванных вирусом полиомиелита, и более 50% остальных энтеровирусных инфекций протекают стерто. Если симптомы появляются, то они чаще неспецифичны – лихорадка, воспаление верхних дыхательных путей. Характерная клиническая картина развивается лишь в небольшой части случаев. Инкубационный период может продолжаться от 3-10 до 30 дней.

Принцип метода

Определение основано на принципе иммунохроматографического анализа. Анализируемый образец жидкого биологического материала абсорбируется поглощающим участком тест-полоски. При наличии в образце энтеровирусов они вступают в реакцию с нанесенными на стартовую зону специфическими моноклональными антителами против энтеровирусов, меченными окрашенными частицами, и продолжает движение с током жидкости. В аналитической зоне тест-полоски происходит взаимодействие со специфическими моноклональными антителами, иммобилизованными на поверхности мембраны, с образованием окрашенного иммунного комплекса.

В контрольной зоне тест-полоски специфический окрашенный иммунный комплекс образуется независимо от наличия в тестируемом биологическом материале энтеровирусов.

В том случае, если в анализируемом образце присутствуют энтеровирусы, на тест-полоске образуются две параллельные окрашенные линии (красная аналитическая, обозначенная буквой Т, и зеленая контрольная, обозначенная буквой С), что указывает на положительный результат анализа. В случае отсутствия в анализируемом образце энтеровирусов на тест-полоске образуется одна зеленая контрольная линия (С), что указывает на отрицательный результат анализа.

Состав

Кассеты с тест-полосками упакованы в индивидуальные вакуумные упаковки из фольги алюминиевой, содержащие пакетики с силикагелем.

Необходимые оборудование и материалы, не входящие в состав набора

Аналитические характеристики

Меры предосторожности

При проведении определения следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. исследуемые образцы биологического материала следует рассматривать как потенциально инфицированные.

Использованные тесты и остатки биологического материала должны быть помещены в специальный контейнер для санитарных отходов.

Анализируемые образцы

Свежесобранный биологический материал (кал), не содержащий консерванты.

Образцы кала должны быть собраны в чистый контейнер. Следует отбирать образцы кала для анализа в первые 1-2 дня после появления симптомов.

Образцы кала до определения можно хранить при температуре 2–4°С не более 2 сут., при необходимости более длительного (до 1 года) хранения – при температуре –20°С и ниже.

Перед анализом образцы кала должны быть полностью разморожены и доведены до комнатной температуры.

Повторное замораживание и оттаивание образцов недопустимо.

Подготовка образцов

1. Снять крышку-капельницу с пробирки и с помощью стержня на крышке взять небольшое количество анализируемого образца. Для этого ввести стержень в 2 разные зоны образца, собрав примерно 100 мг кала (рис. 1-1). Если образец жидкий, отобрать 100 мкл с помощью пипетки. Ввести стержень с образцом в пробирку с буфером для растворения образца и плотно завинтить крышку-капельницу (рис. 1-2).


2. Несколько раз встряхнуть пробирку, чтобы облегчить растворение образца (рис. 2-1).

Проведение анализа

3. Встряхнуть пробирку с раствором образца (рис. 2-1). Отрезать или отломить кончик крышки-капельницы.


6. Через 10 мин визуально оценить результат реакции.

Интерпретация результатов

Выявление в тестовом окошке кассеты одной зеленой контрольной линии (С) свидетельствует об отрицательном результате анализа, т.е. указывает на отсутствие в анализируемом образце кала энтеровирусов (рис. 3-1).

Выявление в тестовом окошке кассеты двух параллельных окрашенных линий (С и Т) свидетельствует о положительном результате анализа, т.е. указывает на наличие в анализируемом образце кала энтеровирусов (рис.3-2). Интенсивность красной аналитической линии (Т) в тестовом окошке кассеты может меняться в зависимости от концентрации энтеровирусов в образце.


Условия хранения и эксплуатации

Москва, Кулакова ул., 20, Телефоны: , 757-99-15, 757-96-96, 8 (800) 600-54-27, e-mail: tender@bioworld.ru

УДК: 616.98:(578.823.91+578.826.2]-07
Год издания: 2013

РОТА-АДЕНО-АГ-ИХМ-Конф — тест-система для одновременной экспресс-диагностики ротавирусной и аденовирусной инфекций

Нашей задачей являлась разработка и освоение про­изводства тест-системы для определения обеих указан­ных ОКИ методом иммунохроматографического анали­за с конфирматорным тестом. Отличительной конструк­тивной особенностью разработанной тест-системы яв­ляется наличие в ней компонентов, позволяющих вы­полнять подтверждающий тест методом ИХМ.

Разработанное лекарственное средство предназна­чено для качественного иммунохроматографического определения и подтверждения выявления антигенов ротавирусов и аденовирусов в биологических субстра­тах при проведении профессиональной специфической лабораторной диагностики этих инфекций у пациентов с клиникой ОКИ.

Тест-система представляет набор, состоящий из 10 компонентов, и имеет следующую комплектацию:

№ 2. Буферный раствор объемом для приготовления проб.

№ 3. Буферный раствор объемом для растворения иммунобиологических компонентов.

№ 4. Антиген ротавирусный (ПК-РОТА).

№ 5. Антиген аденовирусный (ПК-АДЕНО).

№ 6. Неинфицированная культура клеток (ОК).

№ 7. Сыворотка крови кролика, не содержащая ан­титела к ротавирусам (КР-РОТА).

№ 8. Асцитическая жидкость мышей, не содержа­щая антител к аденовирусам (КР-АДЕНО).

№ 9. Сыворотка крови кролика, содержащая антите­ла к ротавирусам (КфР-РОТА).

№ 10. Иммунная асцитическая жидкость мышей, содержащая антитела к аденовирусам (КфР-АДЕНО).

• Инструкция по применению.

Указанная комплектация лекарственного средства позволяет выполнить диагностическое исследование и подтвердить его специфичность без использования дополнительных реагентов и оборудования. В каждом наборе имеется 20 диагностических тестов, включая контроли и подтверждающие тесты.

Исследование проводится в два этапа: прямой (вы­являющий одновременно антигены ротавирусов и аде­новирусов) тест и тест, подтверждающий специфич­ность полученных положительных результатов.

Прямой тест. Иммунологическая реакция по опре­делению антигенов рота- и аденовирусов осущест­вляется на мембране с предварительно нанесенными ингредиентами. Мембрана помещена в кассету (тест-кассета), на которой имеются окна с зонами внесения исследуемой пробы (S) и учета результатов реакции (Р). Содержащийся в пробе рота- или аденовирусный антигены специфически взаимодействует с соответ­ствующими моноклональными антителами, ковалент­но связанными с красными или синими микросфера­ми. Микросферы с образовавшимися на них иммунны­ми комплексами под действием капиллярных сил ми­грирует по мембране и пересекают поперечные поло­ски ковалентно связанных с мембраной противорота­вирусных и противоаденовирусных иммуноглобули­нов в зоне Р. Мигрирующие на красных и синих микро­сферах иммунные комплексы специфически взаимо­действуют с антителами и останавливаются на уровне этих полосок. О наличии антигенов ротавирусов в про­бе свидетельствует появление красной полоски в зоне Р, о наличии аденовирусных антигенов - появление синей полоски в зоне Р. Зеленая полоска служит вну­тренним контролем каждой тест-кассеты.

Подтверждающий тест. Добавление в положитель­ную на содержание ротавирусного антигена пробу про­тиворотавирусных антител в специально подобранной концентрации (КфР-РОТА) приводит к образованию им­мунных комплексов и специфическому блокированию антигена. При постановке прямого иммунохроматогра­фического теста ротавируссодержащая проба с добав­ленным конфирматорным реагентом не должна образо­вывать красной полоски в зоне Р. Добавление в положи­тельную на содержание аденовирусного антигена пробу противоаденовирусных антител в специально подобран­ной концентрации (КфР-АДЕНО) приводит к образова­нию иммунных комплексов и специфическому блокиро­ванию антигена. При постановке прямого иммунохро­матографического теста аденовируссодержащая проба с добавленным конфирматорным реагентом не должна образовывать синей полоски в зоне Р.

Лекарственное средство зарегистрировано в Мини­стерстве здравоохранения Республики Беларусь, реги­страционное удостоверение № ИМ-7.99763.

При малейшем подозрении на инфекции быстрота, высокая чувствительность и специфичность экспресс-тестов позволяет получить быстрый ответ и принять срочные меры. Тесты основаны на иммунохроматографической идентификации антител, вырабатываемых в ответ на присутствие возбудителя или на непосредственном определении антигенов бактерий и вирусов.

VEDALAB, Франция

Регистрационное удостоверение № ФСЗ 2009/05725.

Аденовирус тест
(Adenovirus Test
(Adeno-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения антигена аденовируса в фекалиях. 100% корреляция результатов с MERIDIAN ИФА тестом. Время анализа 15 мин

Грипп В тест
(Influenza B Test
(Influenza B-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения вируса гриппа В в носоглоточных выделениях. Чувствительность 25 нг/мл для штамма B/Hong Kong 5/72, 50 нг/мл для штамма B/Qingdao/102/91, 500 нг/мл для штамма B/Victiria/504/00 и 25 нг/мл для штамма B/Tokio/53/99. Специфичность 100%. Время анализа 15 мин

Грипп А + В двойной тест
(Duo Influenza A + B Test
(Duo Influenza A+B-Check-1))

Двойной экспресс-тест для качественного одновременного определения вирусов гриппа А и гриппа В в носоглоточных выделениях. Чувствительность и специфичность соответствуют индивидуальным тестам. Время анализа 15 мин

Инфекционный мононуклеоз тест
(Infectious Mononucleosis Test
(IM-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения гетерофильных антител (IgМ) при ИМ в сыворотке, плазме и цельной крови. Чувствительность 12,5 Ед/мл, или 88,2%, и специфичность 75,7%. Время анализа 5–10 мин

Ротавирус тест
(Rotavirus Test
(Rota-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения антигена ротавируса
в фекалиях. 100% чувствительность и специфичность. Время анализа 10 мин

Ротавирус / Аденовирус двойной тест
(Duo Rota / Adenovirus Test
(Duo Rota-Adenovirus-Check-1))

Двойной экспресс-тест для одновременного качественного опреде-
ления антигенов ротавируса и аденовируса в фекалиях. Чувстви-
тельность и специфичность соответствуют индивидуальным тестам. Время анализа 10 мин

Столбнячный тест
(Tetanus Test
(Tetanus-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения антистолбнячных
антител в пробах сыворотки, плазмы или цельной крови. Пороговая чувствительность 0,1 МЕ/мл. Специфичность 100%. Время анализа 10–15 мин. Тест для оценки необходимости вакцинации

Стрептококк А тест
(Strep A Test
(Strep A-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения антигенов стрептококка А в мазках из зева. Чувствительность 91,80%, специфичность 97,70% от культурального метода. Время анализа 5–10 мин

Стрептококк В тест
(Strep B Test
(Strep B-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения антигенов стрептококка В в вагинальных мазках. Чувствительность 88,4%, специфичность 97,9% от культурального метода. Время анализа 5–10 мин

Токсин А тест
(Toxin A Test
(Toxin A-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения токсина А Clostridium difficile в фекалиях. Чувствительность 4 нг/мл (86,7%), специ-
фичность 91,7% по отношению к цитотоксическому методу. Время анализа 15 мин

Токсин В тест
(Toxin B Test
(Toxin B-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения токсина В Clostridium difficile в фекалиях. Чувствительность 5 нг/мл. Специфичность 100%. Время анализа 15 мин

Токсин А + В двойной тест
(Duo Toxin A + B Test
(Duo Toxin A+B-Check-1))

Двойной экспресс-тест для одновременного качественного определения токсинов А и В Clostridium difficile в фекалиях. Чувствительность и специфичность соответствуют индивидуальным тестам. Время анализа 15 мин

Туберкулез тест
(Tuberculosis Test
(TB-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения антител (IgG, IgA, IgM) к Mycobacterium tuberculosis в сыворотке, плазме и цельной крови. Чувствительность 350 МЕ/мл (IgG, IgA). Время анализа 10–15 мин.

Хеликобактер пилори тест
(Helicobacter Pylori Test
(H.Pylori-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения IgG против белков H.Pylori в сыворотке, плазме и цельной крови. Чувствительность 10–
15 АЕ/мл. Специфичность 89,7% от Вестерн-блоттинга и 83% от культурального высева. Время анализа 10–15 мин

VEDALAB, Франция

Регистрационное удостоверение № ФСЗ 2009/05844.

Наименование Характеристика Упаковка, кол-во тестов

Сифилис тест
(Syphilis Test
(Syph-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения антител (IgG, IgA, IgM) к Treponema pallidum в сыворотке, плазме и цельной крови. 100% чувствительность и специфичность по сравнению с RPR, TPI и FTA-ABS тестами. Время анализа 10–15 мин

Аннотация научной статьи по биотехнологиям в медицине, автор научной работы — Дедюля К. Л., Казинец О. Н., Амвросьева Т. В., Поклонская Н. В., Богуш З. Ф.

Похожие темы научных работ по биотехнологиям в медицине , автор научной работы — Дедюля К. Л., Казинец О. Н., Амвросьева Т. В., Поклонская Н. В., Богуш З. Ф.

Enzyme-linked immunosorbent assay kits, based on recombinant technologies, for human enteroviral infections diagnosis

il Иммуноферментные тест-системы

ф человека на основе использования

^ Дедюля К.Л., Казинец О.Н., Амвросьева Т.В., Поклонская Н.В., Богуш З.Ф. 1С

С Республика Беларусь

о Enzyme-linked immunosorbent assay kits,

based on recombinant technologies, for human enteroviral infections diagnosis

Dziadziulia K.L., Kazinez O.N., Amvrosieva T.V., Poklonskaya N.V., BogushZ.F.

Ключевые слова: энтеровирусные инфекции, тест-системы ИФА, энтеровирусный антиген, анти-энтеровирусные IgM, диагностика, санитарная вирусология.

Библиографическая ссылка: Дедюля К.Л., Казинец О.Н., Амвросьева Т.В., Поклонская Н.В., Богуш З.Ф. Иммуноферментные тест-системы для диагностики энтеровирусных инфекций человека на основе использования рекомбинантных технологий // Биопрепараты. 2013. № 4. С. 24-28.

Keywords: enteroviral infections, ELISA test systems, enteroviral antigen, antienteroviral IgM, diagnostics, sanitary virology.

Bibliographic description: Dziadziulia K.L., Kazinez O.N., Amvrosieva T.V., Poklonskaya N.V., Bogush Z.F.Enzyme-linked immunosorbent assay kits, based on recombinant technologies, for human enteroviral infections diagnosis//Biopreparation (Biopharmaceuticals). 2013. № 4. P. 24-28.

Дедюля К.Л. - ведущий научный сотрудник ГУ «Республиканский научно-исследовательский центр

Адрес: ГУ «Республиканский научно-исследовательский

220114, Минск, ул. Филимонова, 23

Статья поступила 09.10.2013 г, принята к печати 05.11.2013 г

Энтеровирусы (ЭВ) широко распространены в человеческой популяции, пато-генны и вызывают целый спектр заболеваний различной степени тяжести с поражением практически всех органов и тканей человека. Среди них наиболее тяжелыми клиническими формами являются полиомиелит, менингит, энцефалит, кардит, гепатит [1, 2]. Их возбудители относятся к семейству Picornaviridae, роду Enterovirus, который включает четыре группы неполиомиелитных энтеровирусных агентов - Enterovirus A, B, C, D, а также отдельный вид по-лиовирусов [2, 7].

В ряду известных методов диагностики энтеровирусных инфекций (ЭВИ) особое место занимает им-муноферментный анализ (ИФА) - как рутинный экспресс-метод, доступный и широко используемый в практических лабораториях, благодаря его относительно низкой стоимости и простоте постановки по сравнению с молекулярно-биологическими методами. Данные преимущества ИФА делают его одним из методов выбора при лабораторной диагностике ЭВИ и проведении санитарно-вирусологических исследований воды и пищевых продуктов, что особенно актуально в условиях массовых исследований при групповой заболеваемости, требующей оперативности в установлении ее этиологии, путей и факторов передачи [1, 6].

Материалы и методы

В качестве антигенного (АГ) компонента ИФА тест-систем применяли ранее созданный рекомбинантный энтеровирусспецифический полипептид СЕ/Е6 [3, 4]. Для его экспрессии использовали линию бактериальных клеток E. coli BL21(DE3), несущую векторную конструкцию pET-24b(+)/CE/E6 с клонированной последовательностью N-концевого фрагмента капсидного белка VP1, кодирующей 89 аминокислот входящих в состав так называемого общего антигенного эпитопа. Выделение экспрессированного РП из бактериальных

Накопление и титрование ЭВ осуществляли на перевиваемых культурах клеток RD (клетки эмбриональной рабдомиосаркомы человека), BGM (клетки почки зеленой мартышки), Hep-2c (клетки карциномы гортани человека), полученных из Института цитологии Российской академии наук (г Санкт-Петербург).

В качестве отрицательного контроля в разработанных ИФА тест-системах использовали 1%-й раствор БСА, в качестве положительного контроля - смесь цельнови-рионных АГ различных штаммов энтеровирусов.

Для сравнительной оценки разработанных рекомби-нантных ИФА тест-систем использовали существую-

KB1 1KB2 1 KB3 'KB4 KB5

E2 1 E3 1 E4 1 E5 1 E6 1E7 1 E8 1E9 1E11'E12 E13 E141 E15 1 E16'E17 1 E181E19'E201 E21'E22'E241E25 E26'E27'E29 E301E32

Диагностическую чувствительность разработанных тест-систем вычисляли по формуле: (количество положительных проб / количество истинно положительных проб) х 100%, диагностическую специфичность - по формуле: (количество отрицательных проб / количество истинно отрицательных проб) х 100%. В качестве истинно положительных и истинно отрицательных проб использовали пробы, оказавшиеся положительными или отрицательными при исследовании их соответствующими коммерческими тест-системами.

Результаты и обсуждение

жительным контролем (ПК) значение среднего арифметического показателя оптической плотности (ПОП) должно быть не менее чем в 2,1 раза превышать среднюю арифметическую величину ПОП для лунок с отрицательным контролем (ОК). При этом величина ПОП для ОК не должна быть более 0,2. Величина ПОП для ПК не должна быть менее 0,42.

Рисунок 2. Результаты детекции спектра серогрупп ЭВ (ECHO 1, 4, 6, 11, 14, 15, 20, 25, 30 и Коксаки В 1, 2, 3, 4, 5) конкурентным методом ИФА (ПОП - показатель оптической плотности, ОК - отрицательный контроль (для отрицательной пробы не должен быть меньше 0,8 единицы), ПП - положительная проба).

ИФА, при постановке которого использовались меченные ферментом вторичные антитела и иммобилизованный на твердой фазе в качестве АГ энтеровирусспе-цифический РП.

Следует отметить, что непрямая схема с использованием меченых антивидовых антител является одной из наиболее распространенных при постановке ИФА [5]. На поверхности носителя иммобилизуется АГ-белок, к которому добавляется раствор, содержащий определяемый АГ и фиксированную концентрацию немеченых специфических антител. После инкубации и удаления несвязавшихся компонентов добавляется фиксированная концентрация меченых антивидовых антител. Спустя 1 ч после инкубации компонентов, проводится отмывка носителя и последующая детекция ферментативной активности образовавшихся на твердой фазе специфических иммунных комплексов. Величина сигнала находится в обратно-пропорциональной зависимости от концентрации определяемого АГ. При данной постановке ИФА анализируемый образец и меченый реагент вводятся в систему на разных стадиях, что устраняет влияние содержащихся в образце эффекторов на каталитические свойства ферментной метки.

В соответствии с описанной схемой принцип работы созданной тест-системы состоит в следующем. Иссле-

дуемая проба, содержащая детектируемый АГ, добавляется одновременно с иммунной сывороткой в сенсибилизированные энтеровирусспецифическим РП лунки планшетов с целью их (АГ) конкурентного взаимодействия за специфическое связывание с антителами, содержащимися в иммунной сыворотке. В результате такой антигенной конкуренции происходит снижение показателя оптической плотности положительного контроля или пробы, содержащей энтеровирусный АГ, по сравнению с ПОП отрицательного контроля. Для данной тест-системы средний арифметический показатель оптической плотности в лунках с ОК должен быть не менее 0,8 и при этом должен превышать средний арифметический ПОП положительного контроля не менее чем в 2,1 раза.

Выявление АГ ЭВ в пробах из объектов окружающей среды

Наименование проб Количество исследованных Количество положительных Процент положительных

Сточные воды б 4 бб,7

Питьевые воды 51 2 3,92

Пищевые продукты 48 10 20,83

Результаты проведенных далее полевых испытаний созданной тест-системы с целью выявления энтеро-вирусных АГ в пробах из объектов окружающей среды свидетельствовали о достаточно высокой эффективности ее использования для проведения санитарно-вирусологических исследований воды (питьевой, сточной) и пищевых продуктов (таблица).

Оценивая перспективы использования вышеописанных рекомбинантных тест-систем для диагностики ЭВИ и индикации их возбудителей в объектах окружающей среды, важно обратить внимание на ряд имеющихся у них преимуществ при сравнении с аналогичными, уже существующими коммерческими цельновирионными тест-системами. Основными из них являются:

- возможность использования в технологии производства в качестве основного компонента стандартного АГ, что сводит к минимуму появление неспецифических реакций;

- увеличение спектра детектируемых серотипов ЭВ, что увеличивает диагностическую эффективность ИФА исследований;

- снижение себестоимости производства препаратов за счет уменьшения трудовых и материальных за-

трат на трудоемкие и длительные культуральные работы по накоплению цельновирионных АГ.

Указанные достоинства рекомбинантных тест-систем, наряду с высокими показателями диагностической специфичности и чувствительности, обосновывают целесообразность их преимущественного (перед цельновирионными аналогами) использования при проведении диагностических и санитарно-вирусологи-ческих исследований, что будет способствовать повышению качества и эффективности лабораторного контроля и эпиднадзора за ЭВИ на уровне человеческой популяции и эпидемически значимых объектов окружающей среды.

1. Богуш З.Ф., Амвросьева Т.В., Казинец О.Н. и др. Состояние и результаты лабораторного контроля за возбудителями энтеровирусной инфекции в Республике Беларусь // Медицинская панорама. 2008. № 11. С. 7-11.

2. Букринская А.Г. Вирусология. М.: Медицина, 1986. 336 с.

3. Дедюля К.Л., Поклонская Н.В., АмвросьеваТ.В. и др. Получение рекомбинантного полипептида и изучение его антигенных свойств для создания диагностических тест-систем // Здравоохранение. 2007. № 11. С. 13-17.

4. Дедюля К.Л., Поклонская Н.В., Амвросьева Т.В. Использование рекомбинантоного энтеровирус-специфического полипептида в качестве антигена при разработке диагностической тест-системы // Военная медицина. 2010. № 3. С. 87-91.

5. ЕгоровА.М., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М. Теория и практика иммуноферментного анализа. М.: Высшая школа, 1991.

6. Казинец, О.Н. и др. Использование методов серо-и генодиагностики для лабораторной расшифровки вспышек энтеровирусных инфекций // Труды международной конференции (г. Санкт-Петербург, 22-23 апреля 2004 г.). СПб. 2004. C. 236-237.

7. Family Picornaviridae // Virus Taxonomy. Eighth Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses / Eds Stanway G. et al. London: Elsevier, 2005. P. 757-778.

Аннотация научной статьи по клинической медицине, автор научной работы — Романова Е.А., Намазова-Баранова Л.С., Дьяконова Е.Ю., Романов А.Ю., Межидов К.С.

Похожие темы научных работ по клинической медицине , автор научной работы — Романова Е.А., Намазова-Баранова Л.С., Дьяконова Е.Ю., Романов А.Ю., Межидов К.С.

EXPRESS IMMUNOCHROMATOGRAPHIC DETECTION OF ROTAVIRUS AND ADENOVIRUS ANTIGENS IN PRE-HOSPITAL DIFFERENTIAL DIAGNOSIS OF ACUTE ABDOMINAL PAIN IN CHILDREN

Background. The assessment of the condition of a child with acute abdominal pain and a diagnostic search algorithm at the pre-hospital stage determine the further routing of the patient and the timeliness of healthcare delivery. Objective. Our aim was to evaluate the possibility of using immunochromatographic rapid tests (ICA) to determine the rotaand adenovirus infection in pre-hospital differential diagnosis of abdominal syndrome in children. Methods. In a retrospective cohort study, we analyzed the medical records of patients with a combination of abdominal and intestinal syndromes who applied for medical assistance to the emergency pediatric department of the FSAI “NMRC of Children's Health" of the Ministry of Health of Russia from January 2015 to December 2017. Results. Outpatient medical records of 201 patients aged from 4 months to 17 years have been analyzed. In patients with a positive ICA, only 6% (5/88) of cases had doubtful or positive symptoms of peritoneal irritation, whereas in the case of a negative rapid test, almost all children needed a surgeon’s consultation. The frequency of leukocytosis detection in a clinical blood test was not different in patients with different results of ICA. The increase оf C-reactive protein as a marker of bacterial inflammation was more common in patients with a negative rapid test. The volume of additional diagnostic care in the group of patients with a negative ICA result was significantly higher than in patients with confirmed viral gastroenteritis. None of the children with confirmed viral gastroenteritis required a surgical treatment. In the group with a negative ICA result, surgical treatment was performed in 11% (12/113) cases. Conclusion. Patients with confirmed viral gastroenteritis require significantly fewer diagnostic measures; they also have a minimal probability of acute surgical pathology. The use of laboratory rapid tests at the pre-hospital stage plays an important role in the timely diagnosis and the reduction in the frequency of non-specialized hospitalization.

Е.А. Романова1, Л.С. Намазова-Баранова1'2 3, Е.Ю. Дьяконова1, А.Ю. Романов4, К.С. Межидов5, Ж.И. Дохшукаева1 , И.А. Кротов1

1 Национальный медицинский исследовательский центр здоровья детей, Москва, Российская Федерация

2 Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова (Сеченовский Университет), Москва, Российская Федерация

3 Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова, Москва, Российская Федерация

4 Энгельсская станция скорой медицинской помощи, Энгельс, Российская Федерация

5 Республиканская детская клиническая больница имени Е.П. Глинки, Грозный, Российская Федерация

Иммунохроматографический экспресс-тест для определения антигенов ротавируса и аденовируса в дифференциальной диагностике острых болей в животе у детей на догоспитальном этапе

(Для цитирования: Романова Е.А., Намазова-Баранова Л.С., Дьяконова Е.Ю., Романов А.Ю., Межидов К.С., Дохшукаева Ж.И., Кротов И.А. Иммунохроматографический экспресс-тест для определения антигенов ротавируса и аденовируса в дифференциальной диагностике острых болей в животе у детей на догоспитальном этапе. Педиатрическая фармакология. 2018; 15 (3): 212-217. doi: 10.15690/pf.v15i3.1900)

Боль может иметь различную локализацию и причину возникновения, однако самой сложной, с позиции дифференциальной диагностики, является боль в животе [1]. За этой жалобой и у взрослых, и у детей могут стоять как различные соматические (в том числе инфекционные), так и острые хирургические заболевания.

Острая боль в животе является одним из наиболее распространенных симптомов в педиатрической практике [2, 3]. Оценка состояния ребенка с острой болью в животе и алгоритм диагностического поиска на догоспитальном этапе определяют дальнейшую маршрутизацию пациента и своевременность оказания медицинской помощи 6.

Несмотря на то, что научно-технический прогресс оснастил клиническую медицину новой диагностической и лечебной аппаратурой в условиях стационара, ключевым моментом догоспитальной диагностики острого живота остается умение сопоставить клинические признаки болезни и заподозрить патологический процесс в брюшной полости [6, 7]. Наиболее частым острым хирургическим заболеванием брюшной полости у детей, дебютирующим острой болью в животе, является острый аппендицит [8]. По данным литературы, частота неправильной диагностики аппендицита колеблется от 28 до 57% для детей старшего возраста и стремится к 100% в младшей возрастной группе [9, 10]. Группу особого риска составляют пациенты до 3 лет жизни. Симптоматика у них нередко нарастает стремительно, ребенок становится беспокойным, отказывается от еды. Острая хирургическая патология при этом часто сопровождается повышением температуры до фебрильных цифр, многократной рвотой, разжижением стула [8, 11]. Маленький ребенок обычно негативно реагирует на осмотр, что затрудняет физикальное обследование. Для выявления таких симптомов, как пассивное напряжение мышц передней брюшной стенки или локальная болезненность в правой подвздошной области, требуется опыт [8].

Для кишечных инфекций наряду с абдоминальным болевым синдромом также характерны лихорадка, рвота, диарея [12, 13]. В случае гастроэнтерита рота-вирусной этиологии наряду с высокой температурой тела, вялостью, рвотой, головной болью, т.е. признаками общей интоксикации, к клинической карти-

не присоединяются симптомы поражения желудочно-кишечного тракта в виде болей в животе и явлений диспепсии. При остром течении заболевания подобная картина проявляется на 1-2-е сут, при подостром — на 2-3-и сут [12].

Целью нашего исследования было оценить возможности использования иммунохроматографических экспресс-тестов для определения рота- и аденовирусной инфекции в дифференциальной диагностике абдоминального синдрома у детей на догоспитальном этапе.

Проведено ретроспективное когортное исследование.

Ekaterina A. Romanova1, Leyla S. Namazova-Baranova1,2,3, Elena Yu.Dyakonova1, Aleksey Yu. Romanov4, Kazbek S. Mezhidov5, Zharadat I. Dohshukaeva1, Ivan A. Krotov1

1 National Scientific and Practical Center of Children's Health, Moscow, Russian Federation

2 I.M. Sechenov First Moscow State Medical University, Moscow, Russian Federation

3 Pirogov Russian National Research Medical University, Moscow, Russian Federation

4 Engels emergency medical ward, Engels, Russian Federation

5 Republican Children's Clinical Hospital n.a. E.P. Glinka, Grozny, Moscow, Russian Federation

Express Immunochromatographic Detection of Rotavirus and Adenovirus Antigens in Pre-Hospital Differential Diagnosis of Acute Abdominal Pain in Children

Background. The assessment of the condition of a child with acute abdominal pain and a diagnostic search algorithm at the prehospital stage determine the further routing of the patient and the timeliness of healthcare delivery. Objective. Our aim was to evaluate the possibility of using immunochromatographic rapid tests (ICA) to determine the rota- and adenovirus infection in pre-hospital differential diagnosis of abdominal syndrome in children. Methods. In a retrospective cohort study, we analyzed the medical records of patients with a combination of abdominal and intestinal syndromes who applied for medical assistance to the emergency pedi-atric department of the FSAI "NMRC of Children's Health" of the Ministry of Health of Russia from January 2015 to December 2017. Results. Outpatient medical records of 201 patients aged from 4 months to 17 years have been analyzed. In patients with a positive ICA, only 6% (5/88) of cases had doubtful or positive symptoms of peritoneal irritation, whereas in the case of a negative rapid test, almost all children needed a surgeon's consultation. The frequency of leukocytosis detection in a clinical blood test was not different in patients with different results of ICA. The increase of C-reactive protein as a marker of bacterial inflammation was more common in patients with a negative rapid test. The volume of additional diagnostic care in the group of patients with a negative ICA result was significantly higher than in patients with confirmed viral gastroenteritis. None of the children with confirmed viral gastroenteritis required a surgical treatment. In the group with a negative ICA result, surgical treatment was performed in 11% (12/113) cases. Conclusion. Patients with confirmed viral gastroenteritis require significantly fewer diagnostic measures; they also have a minimal probability of acute surgical pathology. The use of laboratory rapid tests at the pre-hospital stage plays an important role in the timely diagnosis and the reduction in the frequency of non-specialized hospitalization.

Key words: abdominal pain in children, differential diagnosis, additional examination methods, laboratory rapid tests.

(For citation: Romanova Ekaterina A., Namazova-Baranova Leyla S., Dyakonova Elena Yu., Romanov Aleksey Yu., Mezhidov Kazbek S., Dohshukaeva Zharadat I., Krotov Ivan A. Express Immunochromatographic Detection of Rotavirus and Adenovirus Antigens in Pre-Hospital Differential Diagnosis of Acute Abdominal Pain in Children. Pediatricheskaya farmakologiya — Pediatric pharmacology. 2018; 15 (3): 212-217. doi: 10.15690/pf.v15i3.1900)

• дети в возрасте от 1 мес до 18 лет;

• жалобы на боль в животе;

• жалобы на рвоту и/или диарею;

• проведение иммунохроматографического теста для выявления антигенов рота-, аденовирусов в кале. Критерии невключения:

• рвота с примесью крови;

• стул с примесью крови;

• отсутствие стула более 3 дней.

Все дети, медицинская документация которых была проанализирована в исследовании, при обращении осматривались педиатром, у них проводились сбор анамнеза и клинический осмотр. Всем пациентам выполнены исследования крови (клинический анализ), уровня С-реактивного белка, а также иммунохрома-тографический экспресс-тест для определения антигенов рота- и аденовирусов в кале. Пациентам с повторной рвотой, эксикозом определяли кислотно-основное состояние крови. Ультразвуковое исследование органов брюшной полости было проведено всем детям с проявлениями боли и/или выраженного беспокойства при пальпации передней брюшной стенки, сомнительными симптомами раздражения брюшины.

Пациенты осматривались также хирургом при невозможности провести адекватную оценку пальпации передней брюшной стенки из-за выраженной негативной реакции ребенка на осмотр и/или сомнительных симптомах раздражения брюшины.

шенными частицами, и продолжают движение с током жидкости. В соответствующих аналитических зонах тест-полоски происходит взаимодействие со специфическими моноклональными антителами против рота- и аденовируса, иммобилизованными на поверхности мембраны, с образованием окрашенных иммунных комплексов [16].

Проведен анализ объема потребовавшихся диагностических мероприятий, потребности в госпитализации, а также исходов заболевания у пациентов с различным результатом иммунохроматографического экспресс-теста.

Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью пакета статистического анализа Statistica 6,0 корпорации StatSoft Inc. (США). Для описания данных использованы медианы (Ме), минимальные и максимальные значения (min-max). Для сравнения долей использовался Z-критерий (Z-score). Различия считали статистически значимыми при p Не можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

У пациентов с положительным результатом иммунохроматографического экспресс-теста только в 6% (5/88) случаев отмечались сомнительные или положительные

Таблица 1. Признаки острого живота у обследованных пациентов в зависимости от результата иммунохроматографического экспресс-теста для определения антигенов рота-/аденовируса на догоспитальном этапе

Table 1. Signs of acute abdomen in the examined patients depending on the results of immunochromatographic rapid test for determination of antigens of rota- / adenovirus at the prehospital stage

Клинические признаки ИХА+ n=88 ИХА-n=113 p

Положительные или сомнительные симптомы раздражения брюшины (%) 5 (6) 111 (98) 15х109/л, абс. (%) 12 (14) 18 (16) 0,69

С-реактивный белок >20 мг/л, абс. (%) 6 (7) 21 (19) 0,01

Примечание. ИХА+/— пациенты с положительным/отрицательным иммунохроматографическим экспресс-тестом. Note. ИХА+/— patients with positive/negative immuno-chromatographic express test.

Таблица 2. Объем диагностических мероприятий и хирургической активности у детей с абдоминальным синдромом в зависимости от результата иммунохроматографического экспресс-теста для определения антигенов рота-/аденовируса на догоспитальном этапе Table 2. The scope and character of diagnostic measures and surgical activities in children with abdominal syndrome depending on the result of immunochromatographic rapid test for determination of antigens of rota- / adenovirus at the prehospital stage

Критерии ИХА+ n=88 ИХА-n=113 p

Показания для проведения ультразвукового исследования органов брюшной полости, абс. (%) 32 (36) 104 (92) Не можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Гангренозно-перфоративный аппендицит. Периаппендикулярный абсцесс. Острый аппендицит с перитонеальным абсцессом. Оментит. Местный перитонит

Не можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Остальные авторы подтвердили отсутствие конфликта интересов, о котором необходимо сообщить.

2. Тепаев РРФ., Обедин А.Н. Синдром боли у детей: диагностика и лечение // Педиатрическая фармакология. — 2014. — Т.11. — №6 — С. 86-91. [Tepaev RF, Obedin AN. Pain syndrome in children: diagnostics and treatment (with commentary by R.F. Tepaev). Pediatric pharmacology. 2014;11(6):86-91. (In Russ).] doi: 10.15690/ pf.v11i6.1222.

4. Goos M, Schubach F, Seifert G, Boeker M. Validation of undergraduate medical student script concordance test (SCT) scores on the clinical assessment of the acute abdomen. BMC Surg. 2016;16(1):57. doi: 10.1186/s12893-016-0173-y.

5. Elstein AS. Thinking about diagnostic thinking: a 30-year perspective. Adv Health Sci Educ Theory Pract. 2009;14 Suppl 1:718. doi: 10.1007/s10459-009-9184-0.

6. WFME. World federation for medical education: global standards for quality improvement the 2015 revision. Copenhagen, Denmark: Ferney-Voltaire (France); 2015.

8. Инвагинация кишечника у детей. Клинические рекомендации. — М.; 2016. [Invaginatsiya kishechnika u detei. Klinicheskie rekomendatsii. Moscow; 2016. (In Russ).]

9. Singh M, Kadian YS, Rattan KN, Jangra B. Complicated appendicitis: analysis of risk factors in children. Afr J Paediatr Surg. 2014;11(2):109-113. doi: 10.4103/0189-6725.132796.

10. Разумовский А.Ю., Дронов А.Ф., Смирнов А.Н., (олованев М.Г. Острый аппендицит у детей // Российский вестник детской хирургии, анестезиологии и реаниматологии. — 2013. — Т.3. — №4 — С. 125-132. [Razumovsky AY Dronov AF, Smirnov AN, Golovanev MG. Acute appendicitis in children. Rossiiskii vestnik detskoi khirurgii, anesteziologii i reanimatologii. 2013;3(4):125-132. (In Russ).]

11. Mohammad S, Di Lorenzo C, Youssef NN, et al. Assessment of abdominal pain through global outcomes and recent FDA recommendations in children: are we ready for change? J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2014;58(1):46-50. doi: 10.1097/ MPG.0b013e3182a20764.

12. Федеральные клинические рекомендации по вакцинопрофи-лактике ротавирусной инфекции у детей. — М.; 2015. [Federal'nye klinicheskie rekomendatsii po vaktsinoprofilaktike rotavirusnoi infektsii u detei. Moscow; 2015. (In Russ).]

13. Сенаторова А.С., Осипенко Е.В., Ермолаев М.Н. Дифференциальная диагностика болей в животе в практике педиатра // Детский доктор. — 2009. — №1 — С. 29-40. [Senatorova AS, Osipenko EV, Ermolaev MN. Differentsial'naya diagnostika bolei v zhivote v praktike pediatra. Detskiidoktor. 2009;(1):29-40. (In Russ).]

14. Методические рекомендации по диагностике и лечению гриппа. — М.; 2016. [Metodicheskie rekomendatsii po diagnostike i lecheniyu grippa. Moscow; 2016. (In Russ).]

17. Cappendijk VC, Hazebroek FW. The impact of diagnostic delay on the course of acute appendicitis. Arch Dis Child. 2000;83(1):64-66. doi: 10.1136/adc.83.1.64.

18. Nance ML, Adamson WT, Hedrick HL. Appendicitis in the young child: a continuing diagnostic challenge. Pediatr Emerg Care. 2000;16(3):160-162. doi: 10.1097/00006565-20000600000005.

19. Prodhom G, Bille J. [Use of POCT (point of care tests) in the diagnosis of infectious diseases. Rev Med Suisse. 2008;4(152):908-913. (In French).]

Аллергология и иммунология.

Клинические рекомендации для педиатров

Под общей редакцией Л.С. Намазовой-Барановой,

А.А. Баранова и Р.М. Хаитова

Книга предназначена для практикующих врачей: педиатров, терапевтов, аллергологов, дерматологов, иммунологов; студентов медицинских вузов, а также научных сотрудников.

Читайте также:

Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!
При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.

Copyright © Иммунитет и инфекции

Наименование Характеристика Упаковка, кол-во тестов