Вирулицидное действие на вирус это
Вирулицидная активность ХЛОРАМИНА Б от фирмы BOCHEMIE
(Чешская Республика)
В.А. Кошечкин, д.м.н., профессор
К настоящему времени накоплен большой опыт по использованию Хлорамина Б в медицинской и санитарной практике. Обоснование к применению Хлорамина Б на территории Российской Федерации содержится в многочисленных нормативных документах: приказах, инструкциях, методических указаниях, методических рекомендациях, правилах, ГОСТах, ОСТах, изданных с учетом эпидемиологической ситуации в стране в различные годы (Сборник важнейших официальных материалов по вопросам дезинфекции, стерилизации, дезинсекции, дератизации. В пяти томах. Под общей редакции академика РАМН М.Г.Шандалы. Москва, ТОО Рарогъ, 1994).
Средство Хлорамин Б представляет собой бензолсульфохлорамид натрия, выпускается в виде кристаллического порошка от белого до светло-желтого цвета с легким запахом хлора. Содержание активного хлора в средстве составляет 25,0–28,0% (по объему). Механизм антисептического действия Хлорамина Б связан с образованием хлорноватистой кислоты (HClO), которая действует и как окислитель, выделяя кислород, и как средство, хлорирующее амино- и иминогруппы белков и других веществ, входящих в состав микроорганизмов.
Целью данной статьи является представление материалов исследований по определению вирулицидной активности Хлорамина Б (производитель BOCHEMIE, Чешская Республика). Исследования проводились в лаборатории Microlab GmbH, Norderoog 2, D-28259 Bremen (Германия) и в испытательном лабораторном центре ГУ НИИ Вирусологии имени Д.И.Ивановского РАМН. В качестве тест-культур (тест-вирусов) в испытаниях использовались вирусы, представленные в Таблице 1.
Таблица 1 Список вирусов, использованных для определения вирулицидной активности Хлорамина Б |
Тестирование вирулицидной активности Хлорамина Б (производитель BOCHEMIE, Чешская Республика) в лаборатории Microlab GmbH, Norderoog 2, D-28259 Bremen (Германия).
Тестирование вирулицидной активности Хлорамина Б в лаборатории Microlab GmbH против полиовируса тип 1 и аденовируса тип 5 выполнялось в соответствии с рекомендациями, опубликованными Федеральной Службой Здоровья (BGA), подготовленными Институтом им. Роберта Коха (Robert Koch Institute), Берлин (Германия) и Германской Ассоциацией по Контролю Вирусных Заболеваний (DVV). В качестве тест-вирусов использовались полиовирус тип 1 (ATCC VR-59) и аденовирус тип 5 (фильтрованный Adenoid 75 АТСС VR-5), которые входят в европейский пакет prEN14476 препаратов, рекомендуемых для проведения испытаний на вирулицидную активность химических дезинфицирующих средств количественным суспензионным методом.
Определение вирулицидности Хлорамина Б против полиовируса тип 1
Полиовирус тип 1 был представлен Dade Behring Marburg GmbH in Leiderbach (Германия). Тестирование проводилось методом титрования раствора с использованием микропроцедур. Вирулицидный эффект Хлорамина Б оценивался в концентрациях 1,0% и 2,0%. Время экспозиции выбиралось равным 30, 60, 120 и 240 минутам. Тестирование выявило, что 1%-ный раствор Хлорамина Б обладает выраженным вирулицидным эффектом против полиовируса тип 1. После экспозиции в течение 120 минут показатель снижения log10 составил >4,0 при отсутствии белковых загрязнителей. С добавлением фетальной сыворотки коров (FCS) фактор уменьшения был равен 3,50. Показатель снижения log10 (фактор уменьшения, равный 4,87) был отмечен при обработке в течение 240 минут.
При испытании 2%-ного раствора выяснилось, что время обработки может быть сокращено для достижения показателя снижения log10 вирусного титра. После 120 минут обработки требования документов BGA и DVV были выполнены полностью во время всех 3-х проведенных испытаний.
На основании выполненного тестирования сделан вывод, что инактивация полиовируса тип 1 достигается обработкой 1%-ным раствором Хлорамина Б в течение 120 мин, а 2%-ным раствором Хлорамина Б в течение 60 мин. При наличии белкового загрязнения при обработке 1%-ным и 2%-ным раствором Хлорамина Б время экспозиции должно быть увеличено двукратно (Таблица 2).
Таблица 2 Рекомендуемые концентрации рабочих растворов Хроамина Б для инактивации полиовируса тип 1 и аденовируса тип 5 |
Таблица 3 Результаты тестирования вирулицидной активности Хроамина Б в отношении вируса полиомелита, ВИЧ и гепатита В |
УДК: 615.28+614.48]:578
Год издания: 2009
Способ определения вирулицидного действия дезинфектантов и эффективности дезинфекции в отношении некультивируемых вирусов
Эффективность вирулицидного действия дезинфектантов в отношении возбудителей вирусных инфекций оценивается с использованием двух существенно различающихся подходов. Во-первых, это применение вирусов-моделей, т. е. определенных наименований (штаммов) вирусов, которые признаются адекватными критериями резистентности для широкого спектра вирусов. При этом результаты изучения вирулицидного действия дезинфектантов на вирусах-моделях априори считаются репрезентативными и для ряда вирусных агентов, непосредственно не подвергавшихся испытаниям. Этот подход распространен в странах Европы и СНГ, включая Беларусь.
В отношении вируса гепатита А (ВГА) и других кишечных вирусов такой моделью является вирус полиомиелита I типа (Wolff M.H. et al., 2001), несмотря на то, что по результатам многочисленных исследований ВГА является более устойчивым чем полиовирус к воздействию физических и химических факторов (Biziagos E. et al., 1988; Nainan O.V. et al., 2006).
Второй подход заключается в том, что вирулицидная активность дезинфектанта может быть декларирована только в отношении тех вирусов, непосредственно на которых проводилось тестирование препарата. Этот подход используется в США и Канаде. При этом изучение вирулицидного действия в отношении ВГА, как правило, проводится на немногочисленных культивируемых штаммах вируса. Однако ранее было показано, что лабораторные штаммы ВГА обладают неодинаковой чувствительностью к воздействию таких физических факторов, как гидростатическое давление и температура (Shimasaki N. et al., 2009).
Из-за сложности культивирования ВГА в некоторых случаях при изучении вирулицидного действия препаратов об изменении содержания вирусных частиц в пробе под воздействием дезинфектантов судят по результатам полимеразной цепной реакции (ПЦР) или иммуноферментного анализа (ИФА). При этом детекция вирионов в каждой из этих реакций проводится лишь по одному вирусному маркеру: нуклеиновой кислоте при использовании ПЦР или антигену при использовании ИФА. Однако было установлено, что использование одного из этих методов недостаточно для определения резистентности вируса и эффективности дезинфектантов (Li J.W. et al., 2002).
Адекватным методическим приемом может стать антигенсвязывающая полимеразная цепная реакция (АС-ПЦР), предложенная R.W. Jansen et al. (1990) для селективной амплификации антиген-ассоциированной нуклеиновой кислоты ВГА и способная выявлять полноценные вирусные частицы без процесса культивирования. Суть метода заключается в детекции вируса сразу по двум маркерам - антигену и геному, которая проводится путем обнаружения нуклеиновой кислоты возбудителя в вирионах, предварительно связанных в специфических иммунных комплексах на твердофазной подложке. Наличие у выявляемых вирусных частиц специфических белково-нуклеиновых комплексов с большой долей вероятности свидетельствует об их морфологической и функциональной полноценности.
Применение АС-ПЦР для изучения резистентности выделенного на территории Беларуси штамма ВГА к некоторым группам химических соединений и отдельным химическим веществам, использующимся в качестве основных действующих субстанций в производстве дезинфектантов, показало, что ВГА обладает выраженной резистентностью к большинству изученных веществ при воздействии на возбудитель в режимах, предусмотренных для проведения дезинфекции.
С помощью АС-ПЦР нами также изучена эффективность ряда зарегистрированных в республике дезинфектантов в отношении ВГА. Четыре препарата не соответствовали нормативам снижения инфекционной активности. Это свидетельствует о необходимости селективного испытания дезинфектантов в отношении высокорезистентных возбудителей или однородной по резистентности группы возбудителей (Плотникова К.Ю. и соавт., 2008).
Сравнительное изучение устойчивости лабораторных штаммов HAV707 и HAV027 к воздействию 70% этанола методом АС-ПЦР показало различие в снижении концентрации вирусных частиц этих штаммов под воздействием этанола более чем на 3 lg (значения составили 0,4 и 3,5 lg соответственно). Десятикратные разведения суспензии штамма HAV707 оказались более чувствительными к воздействию этанола (1,4 и 1,8 lg для разведения в 10 и 100 раз соответственно), но при этом критического значения в 3,5 lg достигнуто не было.
Таким образом, разработан метод оценки вирулицидной активности дезинфектантов и эффективности дезинфекции в отношении ВГА и других некультивируемых вирусов.
читывая существенные различия в степени резистентности различных вирусов и их штаммов к воздействию вирулицидных факторов, следует пересмотреть подход к использованию вирусов-моделей при оценке дезинфектантов и эффективности дезинфекции в Беларуси.
Область применения: эпидемиологический надзор, контроль эффективности дезинфектантов и дезинфекции, разработка и производство дезинфектантов.
Рекомендации по использованию: разработанный метод может применяться для определения вирулицидного действия дезинфектантов и вирулицидных факторов различной природы, а также эффективности проведенной дезинфекции в реальных условиях; внесение изменений в нормативную документацию по испытанию и регистрации дезинфицирующих средств в республике.
Предложения по сотрудничеству: продажа лицензии; консультативная помощь при внедрении; совместные исследования по разработке методов определения вирулицидного действия дезинфектантов и вирулицидных факторов различной природы, а также эффективности проведенной дезинфекции в реальных условиях в отношении других некультивируемых вирусов (гепатита В, С и др.).
Дезинфицирующие средства, содержащие в качестве действующих веществ (ДВ) соединения из группы поверхностно-активных веществ (ПАВ) [1], в частности четвертично-аммониевые соединения (ЧАС), имеют ряд преимуществ: их можно применять в присутствии пациентов (персонала) в лечебно-профилактических учреждениях (ЛПУ) и др.; они не раздражают верхние дыхательные пути, не имеют резкого запаха, не обесцвечивают ткани, не вызывают коррозии металлов. Кроме того, многие из них обладают, наряду с дезинфицирующими свойствами, моющим действием, что позволяет сочетать обеззараживание объектов с удалением загрязнений. В связи с этим дезинфектанты на основе ПАВ наиболее удобны при проведении текущей и профилактической дезинфекции.
Долгое время считалось, что к недостаткам средств из группы ПАВ можно отнести отсутствие способности инактивировать мелкие, не имеющие липидной оболочки РНК-содержащие, так называемые "гидрофильные" вирусы (энтеровирусы, вирусы полиомиелита и др.), вызывать гибель спор, микобактерий туберкулеза, некоторых видов грибов. В связи с этим такие средства были известны, в основном, как бактерициды и только некоторые из них - как слабые вирулициды, эффективные в отношении лишь некоторых "липофильных" вирусов (вирусы гриппа, парагриппа и др.).
Для расширения спектра антимикробной активности при разработке новых средств на основе ПАВ в состав их рецептур стали вводить такие компоненты, как глутаровый альдегид, перекись водорода и др., обуславливающие вирулицидное (Бианол, Аламинол, Пероксимед, ПВК, Септодор-форте и др.), туберкулоцидное и фунгицидное действие.
Учитывая, что для дезинфекции изделий медицинского назначения (ИМН) могут применяться только те средства, которые эффективны в отношении вируса гепатита В, других парентеральных вирусов и ВИЧ, а также необходимость обеззараживания всех ИМН после применения у пациентов, большой спрос и актуальность имеют средства, обладающие вирулицидным действием. В связи со сложившейся в стране ситуацией по туберкулезу не меньшую значимость приобретают средства для профилактики туберкулеза. Широкая распространенность дерматофитий определяет существенную роль фунгицидов в профилактике грибковых инфекций в ЛПУ, гостиницах, общежитиях, банях и др.)
В последние годы для регистрации в России из зарубежных стран все чаше стали поступать средства, содержащие в своих рецептурах ПАВы, предназначенные для дезинфекции при вирусных инфекциях (гепатите В, ВИЧ-инфекции), туберкулезе и грибковых инфекциях. При разработке отечественных средств больше внимания также стало уделяться приданию им вирулицидных, туберкулоцидных и фунгицидных свойств.
Нами проведена оценка спектра антимикробного действия некоторых средств, производимых в России и за рубежом, содержащих ПАВы в качестве действующих (ДВ). Для оценки вирулицидной активности использовали тест-вирус (вирус полиомиелита 1 типа, вакцинный штамм LSc 2ab), являющийся высокорезистентным к действию дезинфицирующих средств из различных химических групп; изучение туберкулоцидной и фунгицидной активности проводили с использованием культур Mycobacterium В5, Candida albicans, Trichophyton gypseum [2].
Перечень средств и спектр их антимикробной активности приведены в таблице.
Таблица
Спектр антимикробного действия некоторых дезинфицирующих средств из группы ПАВ отечественного и зарубежного производства
Наименование средства, фирма-производитель | Действующие вещества | Антимикробное действие | |||
Вирулицидное | Туберкулоцидное | Фунгцидное | |||
Инактивация вируса полиомиелита | Разрушение HbsAg | ||||
Катамин АБ ОАО "Синтез", Москва | ЧАС | - | не исследовалось | не исследовалось | не исследовалось |
ПВК ОАО "Синтез", Москва | ЧАС, Перекись водорода | + | + | + | + |
Аламинол ГНЦ "НИОПИК", Москва | ЧАС, глиоксаль | + | + | + | + |
Бианол ГНЦ "НИОПИК", Москва | ЧАС, глутаровый альдегид | + | + | + | + |
Септодор-форте Дорвет Лтд, Израиль | ЧАС, глутаровый альдегид | + | + | + | + |
Септустин АОЗТ "Уралстинол-С", Россия | ЧАС | + | + | + | + |
Септаксилин ЗАО "Акс-техно", Россия | ЧАС | + | + | + | + |
Дезэффект "Ликва-Тех. Индастриес, Инк", США | ЧАС | + | + | + | + |
РИК-Д ПКФ "Фантом", Россия | ЧАС | - | + | не исследовалось | + |
Велтолен ЗАО "BEЛT", Оренбург | ЧАС | - | + | + | + |
Септабик "Абик", Израиль | ЧАС | - | + | не исследовалось | + |
Бромосепт "Абик", Израиль | ЧАС | - | + | + | + |
Согласно данным, приведенным в таблице, катамин АБ не способен инактивировать тест-вирус, но в сочетании с перекисью водорода (в виде средства ПВК) композиция приобретает вирулицидное действие. Наличием перекиси водорода обусловлена вирулицидная активность Пероксимеда. Широкий спектр активности Бианола, Аламинола и Септодора-форте объясняется присутствием в рецептурах этих средств альдегидов.
Совершенно непредсказуемым оказалось наличие вирулицидного действия, причем в отношении высокорезистентного вируса - вируса полиомиелита, у таких средств, как Септаксилин, Септустин и Дезэффект (прежнее название Санифект-128, в разработке и исследованиях средства Дезэффект принимали участие З. Гэлб, США, А.В. Ригберг и И.Л. Михно, Украина). Показано, что они вызывают гибель тест-микроорганизмов: Mycobacterium В5, С.albicans и T.gypseum. Кроме того, установлено, что растворы Дезэффекта при температуре 50 о С способны вызывать гибель спор B.cereus. Изучение в лабораторных условиях эффективности обеззараживания тест-объектов из различных материалов (металлов, стекла, резин, пластмасс и др.), контаминированных микобактериями, грибами и вирусами, позволило рекомендовать средства Септаксилин, Септустин и Дезэффект для дезинфекции поверхностей в помещениях, приборов, оборудования, белья, посуды и др. объектов при туберкулезе, вирусных и грибковых инфекциях в ЛПУ.
Исследования, проведенные в НИИ вирусологии им. А.И. Ивановского (Исаева Е.И.) показали, что средства Велтолен, Септабик, Бромосепт и РИК-Д способны разрушать HBsAg. Однако эти средства не вызывали инактивацию тест-вируса (вирус полиомиелита), более устойчивого к воздействию дезинфектантов, чем HBsAg. Установлено, что они способны также вызывать гибель грибов рода Candida и Trichophyton, а Велтолен и Бромосепт, кроме того, активны в отношении Mycobacterium В5 (исследование туберкулоцидных свойств Септабика и РИК-Д не проводилось).
Были изучены дезинфицирующие свойства Велтолена и Бромосепта при обеззараживании тест-поверхностей и изделий медицинского назначения из различных материалов, белья, посуды, предметов ухода за больными, контаминированных бактериями (в том числе микобактериями), вирусами (ВИЧ, HBsAg), грибами (рода Candida, Trichophyton) в зависимости от времени воздействия, концентрации раствора, способа обработки. Разработаны режимы обеззараживания ИМН и других объектов, вошедшие в методические указания по применению этих средств.
Таким образом, получена новая информация о спектре антимикробной активности средств из группы ПАВ, а именно: о способности некоторых из них - Септаксилина, Септустина, Дезэффекта инактивировать даже высокорезистентные к дезинфицирующим средствам мелкие РНК-содержашие вирусы, типичным представителем которых является вирус полиомиелита; о наличии у средств РИК-Д, Велтолен, Септабик, Бромосепт свойства разрушать HBsAg, выявляемого современными методами его индикации; способности вышеназванных средств из группы ПАВ вызывать гибель микобактерий туберкулеза, грибов рода Candida и дерматофитов рода Trichophyton.
Все вышеназванные средства зарегистрированы в России и разрешены МЗ РФ к применению в практике здравоохранения.
Литература
1. В.И. Вашков. "Антимикробные средства и методы дезинфекции при инфекционных заболеваниях", М., 1977.
2. "Методы испытаний дезинфекционных средств для оценки их безопасности и эффективности", Москва, Минздрав РФ, 1996 г.
№ пп. | Наименование | Фасовка | Количество в одной упаковке | ||||||||||||||||||||||||||||||||
10 шт. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
- | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
10 шт. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
Таблица 1 | |||||
Вирулицидная активность вещества в отношении ВГП и вируса миксомы кроликов на КЭ. | |||||
№ | Доза, мкг/мл | Степень подавления ВГП | Степень инактивации МК | ||
lgЭЛД50 | % | lgЭЛД50 | % | ||
1 | 1000 | 0,0 | 100 | 7,25 | 100,0 |
2 | 500 | 7,25 | >99,9 | 7,25 | 100,0 |
Из табл.1 следует, что вещество полностью инактивирует вирус гриппа А подтип H5N1/05 при концентрации 1000 мкг/мл (0,1%-ный раствор), а вирус МК при концентрации 500 мкг/мл (0,05%-ный раствор).
Из данных, представленных в табл.2 следует, что вещество в концентрации 62,5 мкг/мл (0,006% раствор) и экспозиции 15 мин полностью инактивирует вирусы африканской чумы свиней и болезни Тешена.
Таблица 3 | |||
Антимикробная активность вещества | |||
№ | Тест-культура | Концентрация вешества, вызывающая | |
Бактериостатическое (споростатическое) действие, мг/мл | Бактерицидное (спороцидное) действие, мг/мл | ||
1 | Escherichia coli 0157:H7 | 0,004 | 0,0195 (ОД)* |
2 | Listeria monocytogenes 766 | 9 мс.т/25см 2 культурами Escherichia coli серотипа 0157:Н7 и Listeria monocytogenes штамм 766. |
В результате проведенных исследований установлено:
1. Хлорид 1-гексадецил-R-(-)-3-окси-1-азониабицикло[2.2.2]октана в концентрации 0,1% полностью инактивирует вирус гриппа А птиц подтипа H5N1 (РНК-содержащий вирус), а в концентрации 0,006% полностью инактивирует вирусы африканской чумы свиней (ДНК-содержащий вирус) и вирусы энтеровирусного энцефалита свиней - болезни Тешена (РНК-содержащий вирус).
В концентрации 0,05% - инактивирует вирус миксомы кролика (ДНК-содержащий вирус).
2. Бактериостатическая активность вещества находилась в пределах 0,009÷0,078 мг/мл в зависимости от используемой тест-культуры.
3. Концентрация 0,125% по действующему веществу и экспозиции 15 мин обеспечивает полное обеззараживание исследованных тест-объектов.
Полученные результаты свидетельствуют о перспективности применения вещества в качестве эффективного дезинфицирующего противоинфекционного средства.
Средство, обладающее вирулицидным, бактерицидным и дезинфицирующим действием, проявляющее активность в отношении вируса гриппа А подтип H5N1, вируса болезни Тешена (РНК-содержащие вирусы), вируса миксомы кролика, вируса африканской чумы свиней (ДНК-содержащие вирусы), бактерии Listeria monocytogenes, характеризующееся тем, что оно представляет собой хлорид-1-гексадецил-R-(-)-3-окси-1-1-азониабицикло[2.2.2]октана.
Читайте также:
- Бланк анализа крови на вирусы
- Эпидемиологический анамнез при гепатите а в истории болезни
- Руководство по диагностике и лечению вирусного гепатита с
- Днк цитомегаловируса обнаружено что это значит как лечить
- Не пандемический вирус гриппа что это
Copyright © Иммунитет и инфекции