Вакцинный штамм вируса что это

Январь 2004 года

Глобальный консультативный комитет по безопасности вакцин (ГККБВ) на своем девятом совещании, состоявшемся в Женеве (Швейцария) 3-4 декабря 2003 года, рассмотрел предложение о создании международной референс- лаборатории для изучения штаммов вируса эпидемического паротита, и о создании банка вакцинных штаммов вируса эпидемического паротита. Эпидемический паротит и асептический менингит были описаны как осложнения вакцинации против эпидемического паротита при использовании вакцин, изготовленных из штаммов Урабе, Ленинград-Загреб и Ленинград-3, но не наблюдались при вакцинации штаммом Джерил-Линн 1 . ГККБВ отметил, что в настоящее время, когда все штаммы вируса эпидемического паротита могут быть охарактеризованы с помощью полимеразной цепной реакции и метода секвенирования, становится возможным на основании научных данных ответить на многие ранее нерешенные вопросы в отношение безопасности вакцин. Это – характеристика молекулярных детерминант вирусной аттенуации и точных генетических детерминант вирулентности, безопасность вакцин, состоящих из чистых или смешанных популяций вируса с различной антигенностью, определение стадии, на которой в вирусе происходят точечные мутации (при пассажах или во время репликации в организме человека или в обеих этих стадиях), а также наличие различных подтипов вируса в разных вакцинах. Комитет рекомендовал провести дополнительное исследование гипотезы о том, что точечные мутации в определенных локализациях участка вирусного генома, ответственного за такие белки как гемагглютинин и нейраминидаза, могут быть связаны с развитием поствакцинальных асептических менингитов. Полученные данные позволять улучшить современные представления о генетических и молекулярных характеристиках штаммов, используемых для производства вакцин против эпидемического паротита. Кроме того, дальнейшие исследования могут помочь охарактеризовать профили безопасности и иммуногенности паротитных вакцин. Если с помощью методов молекулярной вирусологии можно будет дифференцировать дикие и вакцинные штаммы вируса эпидемического паротита, это поможет улучшить контроль качества как существующих, так и будущих вакцин. Комитет рекомендовал Всемирной организации здравоохранения создать международную референс-лабораторию для изучения штаммов вируса эпидемического паротита, выделенных от вакцинированных.

Комитет также принял к сведению анализ современных данных о безопасности вакцинных штаммов вируса эпидемического паротита, результаты которого показали, что хотя и имеются данные о различной частоте возникновения случаев паротита, связанных с разными вакцинными штаммами вируса, этой информации недостаточно для экстраполяции на различную степень риска развития асептического менингита. Комитет ранее уже рассматривал этот вопрос на своем заседании в июне 2003 года и пришел к заключению, что риск развития вакцино-ассоциированного паротитного менингита варьирует в разных исследованиях, что отражает различия в том, где проводились эти исследования и насколько качественным был эпидемиологический надзор. Кроме того, Комитет высказал мнение, что имеющихся в настоящее время данных недостаточно для заключительного суждения о безопасности вакцин из штаммов Урабе, Ленинград-Загреб и Ленинград-3 в отношение риска развития асептического менингита. Если вакцины, изготовленные из штаммов Урабе, Ленинград-Загреб и Ленинград-3, будет использованы для проведения кампаний массовой иммунизации, национальные программы иммунизации должны помнить о возможности появления групповых случаев асептических менингитов после вакцинации.

ГКБВ представляет собой научно-консультативный орган, который был учрежден ВОЗ с тем, чтобы проводить достоверные и независимые научно обоснованные оценки безопасности вакцин, оперативно и эффективно решать возникающие вопросы, руководствуясь при этом строгими научными доводами. В состав членов Комитета входят специалисты из разных стран мира по таким областям знаний, как эпидемиология, статистика, педиатрия, внутренние болезни, фармакология и токсикология, инфекционные заболевания, общественное здравоохранение, иммунология и аутоиммунные реакции, а также нормативный контроль и безопасность лекарственных средств.

Пандемический грипп (H1N1) - 2009 Краткое сообщение № 7

6 АВГУСТА 2009 г. | ЖЕНЕВА - После выявления и изоляции нового штамма вируса гриппа с пандемическим потенциалом требуется примерно 5-6 месяцев для получения первых партий одобренной вакцины. Такие сроки необходимы в связи с тем, что процесс производства новой вакцины включает множество последовательных этапов, каждый из которых требует определенного времени. Ниже приводится краткое описание процесса разработки вакцины - от самого начала (получение образца вируса) до конца (наличие вакцины для использования).

1. Выявление нового вируса: В рамках сети, созданной для проведения эпиднадзора, лаборатории во всем мире осуществляют плановый сбор образцов циркулирующих вирусов гриппа и направляют их в Сотрудничающие центры ВОЗ по справочным материалам и научным исследованиям в области гриппа для проведения анализа. Первый этап в процессе производства пандемической вакцины начинается, когда какой-либо из центров выявляет ранее неизвестный вирус гриппа, который значительно отличается от циркулирующих штаммов, и информирует об этом факте ВОЗ.

Вакцинный вирус выращивается в яйцах, так как вирус гриппа хорошо в них размножается и яйца легкодоступны.

2. Подготовка вакцинного штамма (называемого вакцинным вирусом): Данный вирус должен быть сначала адаптирован к использованию для производства вакцины. Чтобы сделать вакцинный вирус менее опасным и более способным к выращиванию в куриных яйцах (технология, используемая большинством производителей), он смешивается со стандартным лабораторным штаммом вируса, и создаются условия для их совместного роста. Через некоторое время образуется гибридный вирус, содержащий внутренние компоненты лабораторного штамма и внешние компоненты пандемического штамма. Для получения гибридного вируса требуется примерно три недели.

3. Верификация вакцинного штамма: После получения гибридного вируса следует провести его тестирование, чтобы убедиться в том, что он действительно производит внешние белки пандемического штамма, является безопасным и может выращиваться в яйцах. По завершении этого процесса, который занимает примерно три недели, вакцинный штамм передается производителям вакцины.

4. Приготовление реагентов для тестирования вакцины (с референс-реагентами): Одновременно с этим Сотрудничающие центры ВОЗ изготавливают стандартизированные вещества (называемые реагентами), которые предоставляются всем производителям вакцины. Они позволяют измерять, какое количество вируса они производят, и обеспечивают наличие надлежащей дозы вакцины во всех упаковках. Этот этап требует, как минимум, три месяца и часто создает серьезные трудности для производителей.

1. Оптимизация условий для роста вируса: Производители вакцины берут гибридный вакцинный вирус, который они получают из лабораторий ВОЗ, и исследуют различные условия его роста в яйцах для нахождения оптимальных условий. Этот процесс занимает примерно три недели.

2. Производство нефасованной вакцины: Для производства большинства противогриппозных вакцин используются 9-12-дневные оплодотворенные куриные яйца. Вакцинный вирус вводится в тысячи яиц, которые затем инкубируются в течение 2-3 дней для размножения вируса. После этого собирается яичный белок, который к этому времени уже содержит миллионы вакцинных вирусов, и из яичного белка выделяется вирус. Частично очищенный вирус убивают с помощью химических веществ. Затем внешние белки вируса очищаются, в результате чего получают несколько сотен или тысяч литров очищенных вирусных белков, которые называются антигенами и являются активными ингредиентами вакцины. Для производства каждой партии антигенов требуется примерно две недели, при этом приготовление новой партии можно начинать через каждые несколько дней. Размер партии зависит от того, сколько яиц производитель может получить, инокулировать и инкубировать. Другим фактором является урожай вируса с каждого яйца. После получения одной партии процесс повторяется так часто, как это необходимо для производства требуемого количества вакцины.

3. Контроль качества: Его можно начинать только после поставки лабораториями ВОЗ реагентов для тестирования вакцины, как описано выше. Каждая партия тестируется и проверяется на стерильность антигена в нефасованной форме. Этот процесс занимает две недели.

4. Расфасовка и выпуск вакцины: Партия вакцины разводится до желаемой концентрации антигена, расфасовывается в ампулы или шприцы и снабжается этикетками. Некоторые из них тестируются на предмет:

• стерильности
• подтверждения концентрации белков
• безопасности путем тестирования на животных.

Этот процесс занимает две недели.

5. Клинические испытания: В некоторых странах каждая новая противогриппозная вакцина должна апробироваться на нескольких испытуемых для подтверждения того, что она действует желаемым образом. Это требует, как минимум, четыре недели. В некоторых странах такое требование может отсутствовать, поскольку проводилось множество клинических испытаний с использованием аналогичной ежегодной вакцины, и это позволяет допустить, что новая пандемическая вакцина будет действовать аналогичным образом.

Прежде чем вакцина может поступить в продажу или вводиться людям, необходимо получить соответствующее разрешение регулирующих ведомств. Каждая страна имеет собственный регулирующий орган и свои правила. Если вакцина производится с использованием тех же процессов, что и вакцина против сезонного гриппа, и изготавливается на том же производственном предприятии, разрешение может быть получено очень быстро (в течение 1-2 дней). Регулирующие ведомства в ряде стран могут требовать проведения клинических испытаний, прежде чем разрешить выпуск вакцины, что требует дополнительного времени.

Весь процесс, при самом оптимистичном сценарии, может быть завершен через 5-6 месяцев. После этого первая партия пандемической вакцины может быть окончательно готова к распределению и использованию.

Обозначения: Пунктирные стрелки с предшествующими сплошными стрелками показывают, сколько времени требуется в первый раз для завершения каждого этапа работы (сплошные стрелки), который затем повторяется (пунктирные стрелки). Сплошные линии показывают, что данный этап работы занимает ограниченный период времени.

Предупрежден — вооружен

Каждую осень врачи предупреждают о новых вспышках гриппа, при этом нередко говорят о появлении новых штаммов вируса. Вирус гриппа славится скоростью, с которой он меняется: новые штаммы появляются довольно быстро из-за того, что генетическую информацию вируса гриппа кодирует РНК, которая легко мутирует, а многие из этих мутаций идут вирусу на пользу, например делая его менее узнаваемым для клеток нашего организма.

Чтобы бороться с постоянно меняющимся врагом, приходится работать на опережение: Всемирная организация здравоохранения через Глобальную систему эпиднадзора за гриппом и ответных мер (ГСЭГОМ) ведет мониторинг за вспышками гриппа в различных регионах планеты. И каждый год, примерно за шесть месяцев до начала сезона заболевания гриппом, ВОЗ дает рекомендации по составу вакцин против него для Северного и Южного полушарий.

Ослабленный вирус

Вакцины от многих болезней делятся на два типа: живые и инактивированные. Как следует из названия, живая вакцина — это, по сути, и есть вирус, только ослабленный. Он уже не может вызвать заболевание, но стимулирует естественный иммунный ответ без проявления симптомов, то есть без головной боли, температуры или ломоты, если речь о гриппе.

Живую вакцину от гриппа выращивают на куриных эмбрионах. Она вызывает три типа иммунитета. Местный иммунитет — это система защиты на границе проникновения инфекции в организм, при гриппе — в носоглотке. Клеточный иммунитет образуют лимфоциты и фагоциты, которые, помимо прочего, уничтожают антигены (то есть вирусы и инфекции) и вырабатывают защитные ферменты в ответ на проникновение патогенов. Третий тип иммунитета — гуморальный: для борьбы с инфекциями и вирусами в организме начинают вырабатываться специальные белки (иммуноглобулины), которые разносятся кровью.

Россия зарегистрировала живую гриппозную вакцину (ЖГВ) в 1987 году, обогнав все остальные страны. В США ЖГВ была зарегистрирована в 2003 году. По просьбе ВОЗ Институт экспериментальной медицины заключил договор на трансфер технологии производства живой гриппозной вакцины в новые индустриальные и развивающиеся страны и согласился готовить для них штаммы. С 2009 года Индия и Китай через ВОЗ получают от института вакцинные штаммы для производства сезонных вакцин. В 2010 году вакцина была зарегистрирована в Индии.

Инактивированную вакцину готовят из выращенного на курином эмбрионе вируса. Затем вирус убивают, и он становится антигеном и вызывает гуморальный иммунитет.

Кроме борьбы с гриппом, есть живые вакцины против оспы, полиомиелита, кори, желтой лихорадки и других инфекционных заболеваний. Так, в 1950-х американский ученый Альберт Сейбин создал вакцину от полиомиелита на основе ослабленного вируса. В СССР его идею развили вирусологи Михаил Чумаков и Анатолий Смородинцев, которые разработали собственную вакцину. Вакцинация их препаратом, который передавали в развивающиеся страны, привела к резкому снижению заболеваемости полиомиелитом как в СССР, так и во всем мире.

Рецепт вакцины

Раз вирус гриппа быстро меняется, то и вакцины не должны отставать от него.

Как правило, на создание живой вакцины против нового штамма гриппа уходит 8−10 недель, а все производство идет в России. Ответственным за изготовление штаммов живой вакцины в России Минздрав назначил отдел вирусологии Института экспериментальной медицины.

В то же время для изготовления инактивированной вакцины компании заказывают вакцинный штамм за рубежом, после чего начинают производство вакцин.

Коллективный иммунитет

Основным различием между вакцинами Руденко называет создание коллективного иммунитета благодаря использованию живой вакцины.

«Живая вакцина создает иммунитет в верхних воротах инфекции. Вирус попадает туда, не размножается и не передается в общество. А инактивированная создает иммунитет у привитого человека, но в верхних дыхательных путях нет иммунитета, только в крови. В результате вирус попадает туда, размножается. Он может не вызвать заболевание у этого человека, но может распространяться на других людей, особенно не привитых.

Из-за антигенного дрейфа или постепенных мутаций вируса появляются новые штаммы. И в отличие от инактивированной, живая вакцина способна защитить от них.

Сила в разнообразии

Самым надежным средством от гриппа Руденко называет правильную тактику вакцинации. Так, если учащимся, молодежи и военнослужащим, которые относятся к наиболее социально мобильным слоям населения, стоит использовать ЖГВ, то пенсионерам, беременным и людям с хроническими заболеваниями — инактивированные вакцины.

По словам главы Минздрава Вероники Скворцовой, в 2016 году в России от гриппа были привиты 56 млн человек, или 38% населения страны. Это значительно больше, чем 20 лет назад: в 1996 году, по данным Роспотребнадзора, прививки от гриппа сделали лишь 4,9 млн человек. Но большая часть россиян до сих пор отказывается от вакцинации.

Три мутации до пандемии

В 2009 году свиной грипп H1N1 вызвал первую за 41 год пандемию. Кроме того, с 2003 по 2013 год специалисты отмечали вспышки птичьего гриппа (H5N1 и H7N9), жертвами которого стали более 380 человек. По словам Руденко, самыми вероятными источниками новых пандемий могут стать птичьи вирусы гриппа.

Эксперт отмечает, что у обоих птичьих вирусов сейчас накопилось высокое количество мутаций, которое может привести к высокой патогенности.

В марте 2017 года ВОЗ обратилась в отдел вирусологии с просьбой подготовить вакцины против двух штаммов, появившихся в Китае. Ученые выполнили эту работу и в настоящее время проводят доклинические испытания вакцины.

КАРТОЧКА ПРОЕКТА,
ПОДДЕРЖАННОГО РОССИЙСКИМ НАУЧНЫМ ФОНДОМ

Информация подготовлена на основании данных из Информационно-аналитической системы РНФ, содержательная часть представлена в авторской редакции. Все права принадлежат авторам, использование или перепечатка материалов допустима только с предварительного согласия авторов.

Название КОНСТРУИРОВАНИЕ УНИВЕРСАЛЬНОЙ ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ВАКЦИНЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ НОВЫХ ГЕННО–ИНЖЕНЕРНЫХ И ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКИХ ПОДХОДОВ

Руководитель Руденко Лариса Георгиевна, Доктор медицинских наук

Организация финансирования, регион федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины", г Санкт-Петербург

Года выполнения при поддержке РНФ 2014 - 2016

Область знания, основной код классификатора 05 - Фундаментальные исследования для медицины, 05-403 - Медицинская микробиология и вирусология

Ключевые слова грипп, пандемии, иммунитет, обратная генетика, структура генома, профилактика гриппа, универсальная живая гриппозная вакцина

Код ГРНТИ 62.37.35

Статус Успешно завершен

ИНФОРМАЦИЯ ИЗ ЗАЯВКИ

Ожидаемые результаты
ОЖИДАЕМЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ. В рамках представленного проекта будет сконструирована экспериментальная модель универсальной живой гриппозной вакцины для защиты населения от широкого спектра вирусов гриппа типа А, как эпидемических, так и потенциально пандемических, будут проведены ее лабораторные и доклинические испытания и подготовлена документация для получения разрешения Минздрава РФ на проведение I фазы клинических испытаний. НАУЧНАЯ И ОБЩЕСТВЕННАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ОЖИДАЕМЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ. Живая гриппозная вакцина является приоритетом российской науки. Ее использование в качестве основы для конструирования универсальной гриппозной вакцины является пионерским направлением. Проектом предусматривается использование самых современных молекулярно–генетических подходов и методов. Впервые фундаментальные знания о влиянии генетических характеристик вируса гриппа на индукцию различных звеньев иммунного ответа планируется использовать для целенаправленного конструирования препарата широкого спектра действия. Важно отметить, эти же принципы могут быть использованы и для конструирования вакцин против других социально–значимых заболеваний. Кроме фундаментальных аспектов работа значима и с практической точки зрения, будучи направлена на сохранение здоровья населения, снижение заболеваемости и смертности от гриппа и его осложнений. Социально–экономический эффект от реализации проекта связан с возможностью быстрого реагирования на начало эпидемии/пандемии, быстрого производства вакцины и отменой ежегодной замены входящих в состав живой гриппозной вакцины штаммов. КОНКРЕТНЫЕ ПЛАНИРУЕМЫЕ СПОСОБЫ ОБНАРОДОВАНИЯ ОЖИДАЕМЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ: Будет подготовлена серия статей (не меньше 9) в зарубежных и отечественных журналах, и планируется одна заявка в Роспатент на патент РФ. Полученные результаты будут представлены на международных и российских научных конференциях и cимпозиумах.

Аннотация результатов, полученных в 2014 году
В первый год выполнения проекта начата разработка подходов к конструированию универсальной живой гриппозной вакцины (ЖГВ), индуцирующей перекрестно–реагирующие защитные факторы иммунного ответа, направленные на высококонсервативные участки вирусных белков. Был проведен иммуноэпитопный анализ in silico нуклеопротеинов (NP белков) современных штаммов вируса гриппа А подтипов H1N1 и H3N2, выделенных в 2009–2014 гг., в сравнении с донором аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (Лен/17), который показал, что большая часть предсказанных нами иммунодоминантных эпитопов NP белка вируса Лен/17 отсутствует у подавляющего большинства циркулирующих вирусов гриппа. Полученные данные указывают на необходимость включения в вакцинные штаммы ЖГВ NP гена от актуальных вирусов гриппа. В связи с этим методами обратной генетики были сконструированы два вакцинных штамма подтипов H3N2 и H7N9, содержащие NP ген от эпидемического родителя, и проведено изучение их ростовых характеристик в сравнении с аналогичными вакцинными штаммами, унаследовавшими NP ген от донора аттенуации. Показано, что включение NP гена от эпидемического вируса не влияет на фенотипические свойства вакцинного штамма, однако может приводить к незначительному снижению инфекционной активности вируса, особенно при малых заражающих дозах. На следующих этапах работы будет проводиться изучение безвредности, иммуногенности и защитной эффективности сконструированных вакцинных штаммов на модели лабораторных животных. Другим направлением настоящего исследования являлось изучение влияния кодонной оптимизации гемагглютинина (НА) вакцинных штаммов ЖГВ на индукцию гуморального иммунного ответа. Для этого на начальном этапе работы была проведена оптимизация кодонного состава гемагглютинина двух штаммов подтипов H1N1 и H5N1, и были сконструированы реассортантные штаммы на их основе, с использованием модельного вируса A/PR/8/34. Было показано, что кодонная оптимизация приводит к усиленной экспрессии белка НА in vitro, при этом инфекционная активность вирусов с кодон-оптимизированным НА была несколько ниже, чем у аналогичных штаммов с интактным НА, как в системе in vitro, так и для лабораторных животных. Кроме того, была проведена работа по обнаружению адаптационных изменений в поверхностных антигенах вакцинных штаммов ЖГВ после их пассирования в культуре клеток или после репликации в верхних дыхательных путях людей. Детальное изучение влияния данных мутаций на свойства ЖГВ будет проводиться на следующих этапах работы.

1. Larisa Rudenko, Irina Isakova-Sivak PANDEMIC PREPAREDNESS WITH LIVE ATTENUATED INFLUENZA VACCINES BASED ON A/LENINGRAD/134/17/57 (H2N2) MASTER DONOR VIRUS Expert Review of Vaccines, - (год публикации - 2015).

2. А.Н. Найхин, И.В. Лосев РОЛЬ КОНСЕРВАТИВНЫХ И ГИПЕРВАРИАБЕЛЬНЫХ ИММУНОДОМИНАНТНЫХ ЭПИТОПОВ ВНУТРЕННИХ БЕЛКОВ ВИРУСОВ ГРИППА А В ФОРМИРОВАНИИ ЦИТОТОКСИЧЕСКОГО Т-КЛЕТОЧНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА Вопросы Вирусологии, - (год публикации - 2015).

3. Киселева И.В., Дубровина И.А., Ларионова Н.В., Исакова-Сивак И.Н., Федорова Е.А., Баженова Е.А., Стукова М.А., Ерофеева М.К., Руденко Л.Г. ОЦЕНКА ГЕНЕТИЧЕСКОЙ И ФЕНОТИПИЧЕСКОЙ СТАБИЛЬНОСТИ ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ПОТЕНЦИАЛЬНО ПАНДЕМИЧЕСКОГО ВИРУСА ГРИППА ПТИЦ Фундаментальные исследования, №11 (часть 6), C.1301-1305 (год публикации - 2014).

4. Кореньков Д.А., Исакова-Сивак И.Н., Кузнецова В.А., Лосев И.В., Руденко Л.Г., Найхин А.Н. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ ИММУНОЭПИТОПНЫЙ АНАЛИЗ НУКЛЕОПРОТЕИНОВ СОВРЕМЕННЫХ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ВИРУСОВ ГРИППА А И ДОНОРА АТТЕНУАЦИИ А/ЛЕНИНГРАД/134/17/57 (H2N2) ДЛЯ ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ВАКЦИНЫ Фундаментальные исследования, №10 (часть 5), С.908-912 (год публикации - 2014).

5. Федорова Е.А., Киселева И.В., Исакова-Сивак И.Н., Дубровина И.А., Руденко Л.Г. ОДИНОЧНЫЕ АМИНОКИСЛОТНЫЕ ЗАМЕНЫ В МОЛЕКУЛЕ ГЕМАГГЛЮТИНИНА ШТАММОВ ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ВАКЦИНЫ, ПОДГОТОВЛЕННЫХ В РАЗНЫХ СУБСТРАТАХ, И ИХ ВЛИЯНИЕ НА ИММУНОГЕННОСТЬ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ДАННЫЕ) Фундаментальные исследования, №11 (часть 6), C.1311-1315 (год публикации - 2014).

1. Desheva Y, Smolonogina T, Donina S, Rudenko L. Serum strain-specific or cross-reactive neuraminidase inhibiting antibodies against pandemic А/California/07/2009(H1N1) influenza in healthy volunteers BMC Research Notes, 8:136. P.1-7. (год публикации - 2015).

2. Isakova-Sivak I, Rudenko L. Safety, immunogenicity and infectivity of new live attenuated influenza vaccines. Expert Review of Vaccines, 14(10):1313-29. (год публикации - 2015).

3. Kiseleva I, Dubrovina I, Fedorova E, Larionova N, Isakova-Sivak I, Bazhenova E, Pisareva M, Kuznetsova V, Flores J, Rudenko L. Genetic stability of live attenuated vaccines against potentially pandemic influenza viruses Vaccine, Vaccine 33 (2015) 7008–7014 (год публикации - 2015).

4. Kiseleva I, Larionova N, Isakova-Sivak I, Fedorova E, Rudenko L. New methodological approaches in the development of Russian live attenuated vaccine for pandemic influenza Translational Biomedicine, Vol. 6 No. 2:13 P.1-9 (год публикации - 2015).

5. Кузнецова В.А., Смолоногина Т.А., Третяк Т.С. Ростовые характеристики эпидемического вируса гриппа A(H3N2) и реассортантного штамма для живой гриппозной вакцины на его основе, адаптированных к культуре клеток MDCK Интер-Медикал, Том 4, №10, С.99-103 (год публикации - 2015).

6. Смолоногина Т.А., Дешева Ю.А., Рекстин А.Р., Руденко Л.Г. Реассортантный штамм вируса гриппа RN9/13-human A(H6N9) для определения антител к нейраминидазе при гриппозной инфекции и вакцинации -, - (год публикации - ).

Аннотация результатов, полученных в 2016 году
В 2016 году были проведены комплексные сравнительные исследования иммуногенности и защитной эффективности сконструированных вакцинных кандидатов живой гриппозной вакцины (ЖГВ), содержащих ген нуклеопротеина от донора аттенуации Лен/17 (формула генома 6:2) или эпидемического вируса (формула генома 5:3), на модели C57BL/6 мышей. Детальный анализ эпитоп-специфичного Т-клеточного иммунного ответа показал, что вакцинные штаммы ЖГВ с классической формулой генома 6:2 (как сезонные, так и потенциально-пандемические) могут индуцировать избыточный Т-клеточный иммунный ответ к нерелевантным эпитопам NP, которые уже не встречаются среди циркулирующих вирусов гриппа, излишне нагружая иммунную систему привитых. Реассортанты 5:3 при этом обладали преимуществом перед классическими 6:2 штаммами в плане индукции кросс-реактивного ЦТЛ-иммунного ответа и, как следствие – в способности защищать животных от гетерологичных вирусов гриппа. Полученные результаты указывают на необходимость актуализации NP гена в составе вакцинных штаммов ЖГВ для улучшения кросс-протективных свойств. Необходимость актуализации NP гена в вакцинных штаммах ЖГВ была также продемонстрирована в экспериментах с мононуклеарами периферической крови волонтеров, иммунизированных моновалентными ЖГВ подтипов H7N3 и H5N2, содержащими устаревший NP ген донора Лен/17. В настоящей работе впервые проведена оценка иммуногенности и кросс-протективности живых гриппозных вакцин, содержащих химерные молекулы гемагглютинина. Показано, что наличие идентичного stalk-домена у вакцинных штаммов ЖГВ значительно усиливает защитный эффект вакцин в отношении вируса-источника stalk-домена. Это указывает на повышенную индукцию анти-stalk антител при последовательном введении мышам ЖГВ с химерными молекулами НА, по сравнению с классическими штаммами ЖГВ, имеющими схожие (но не идентичные) stalk-домены. Модификация вакцинных штаммов ЖГВ путем введения дополнительного гена от эпидемического родителя, а также химерной молекулы гемагглютинина, не сказывается на индукции анти-NA антител, поэтому разработанный метод оценки NA антител при помощи твердофазной реакции ингибирования нейраминидазной активности может быть использован для оценки данного фактора иммунного ответа при введении универсальной живой гриппозной вакцины. Показана возможность культивирования прототипов универсальной ЖГВ в культуре клеток MDCK, при этом адаптационные мутации, возникающие в молекуле гемагглютинина, не нарушают антигенность, иммуногенность и рецепторную специфичность вакцинных штаммов. Объединяя наиболее перспективные подходы конструирования универсальной ЖГВ, такие как повышение кросс-реактивности вирус-специфического Т-клеточного ответа, а также индукцию антител к консервативному участку молекулы гемагглютинина (stalk-домену), мы сконструировали ряд экспериментальных вакцинных штаммов-кандидатов в универсальную ЖГВ. Использование различных схем иммунизации мышей, а также хорьков (которые являются наиболее приближенной к человеку моделью гриппозной инфекции) полученными вакцинными кандидатами позволит в будущем выявить наиболее перспективные режимы вакцинации, индуцирующие образование кросс-реактивных ЦТЛ, а также анти-stalk антител, способных эффективно защищать животных от широкого спектра вирусов гриппа типа А.

1. Исакова-Сивак И.Н., Кореньков Д.А., Руденко Л.Г. Reassortant viruses for influenza vaccines: is it time to reconsider their genome structures? Expert Review of Vaccines, 15(5):565-657 (год публикации - 2016).

2. Исакова-Сивак И.Н., Кореньков Д.А., Смолоногина Т.А., Третяк Т.С., Донона С.А., Рекстин А.Р., Найхин А.Н., Щербик С.А., Пирс Н., Чен Л.М., Буссе Т.Л., Руденко Л.Г. Comparative studies of infectivity, immunogenicity and cross-protective efficacy of live attenuated influenza vaccines containing nucleoprotein from cold-adapted or wild-type influenza virus in a mouse model Virology, 500 (2017) 209–217 (год публикации - 2017).

3. Исакова-Сивак И.Н., Матюшенко В.А., Котомина Т.С., Киселева И.В., Крутикова Е.В., Донина С.А., Рекстин А.Р., Ларионова Н.В., Меженская Д.А., Сивак К.В., Мужикян А.М., Кательникова А.М., Руденко Л.Г. Sequential Immunization with Universal Live Attenuated Influenza Vaccine Candidates Protects Ferrets against a High-Dose Heterologous Virus Challenge. Vaccines (Basel), 7(3), 61 (год публикации - 2019).

4. Киселева И.В., Руденко Л.Г. Potentially Pandemic Live Influenza Vaccines Based on Russian Master Donor Virus are Genetically Stable after Replication in Humans Journal of Vaccines & Vaccination, Volume 7 • Issue 3 • 1000317 (год публикации - 2016).

5. Матюшенко В.А., Исакова-Сивак И.Н., Смолоногина Т.А., Дубровина И.А., Третяк Т.С., Руденко Л.Г. Genotyping Assay for Differentiation of Wild-Type and Vaccine Viruses in Subjects Immunized with Live Attenuated Influenza Vaccine PLoS One, - (год публикации - 2016).

6. Рекстин А.Р., Исакова-Сивак И.Н., Петухова Г.Д., Кореньков Д.А., Лосев И.В., Смолоногина Т.А., Третяк Т.С., Донина С.А., Щербик С.А., Буссе Т.Л., Руденко Л.Г. Immunogenicity and cross-protection in mice afforded by pandemic H1N1 live attenuated influenza vaccine containing wild-type nucleoprotein BioMed Research International, - (год публикации - 2016).

7. Хайрушева Э.А., Исакова-Сивак И.Н., Смолоногина Т.А., Третяк Т.С., Руденко Л.Г. Фенотипические характеристики вакцинных штаммов живой гриппозной вакцины, содержащих нуклеопротеин эпидемического вируса гриппа Медицинский Академический Журнал, Т.16, №4 (год публикации - 2016).