Вакцина от вируса марека

Вакцину изготавливают из штаммов аттенуированного вируса болезни Марека (ВБМ), авирулентных герпесвируса кур (ГВК) и герпесвируса индеек (ВГИ) в моно-, би- и поливалентном вариантах. Вакцина выпускается в жидком и лиофилизированном виде:

Жидкая вакцина представляет собой столбик замороженной гомогенной массы с горизонтальным мениском, при оттаивании – однородную суспензию желто-розового цвета.

Сухая вакцина представляет собой однородную мелкопористую массу цилиндрической формы бело-желтого цвета.

При соблюдении правил транспортирования, хранения, применения препарата, а также ветеринарно-санитарных и зоотехнических норм содержания и кормления птиц, вакцина обеспечивает не менее 90% защиту цыплят против вируса болезни Марека.

Вакцина не вызывает у цыплят клинически выраженной реакции и поствакцинальных осложнений. Лечебными свойствами вакцина не обладает.

Применение:

Вакцину применяют для профилактики болезни Марека в неблагополучных по этому заболеванию птицехозяйствах.

Вакцинируют цыплят в первые часы жизни, однократно, непосредственно в инкубатории в специально приспособленном помещении.

Ампулы с жидкой вакциной осторожно извлекают из сосуда Дьюара непосредственно перед применением в количестве, необходимом для работы в течение 30 минут и быстро размораживают, погружая их в воду с температурой 27°С. Лицо и руки вакцинатора в момент извлечения ампулы из азота и ее размораживания должны быть защищены от попадания стекла.

Флаконы с разбавителем выдерживают в течение 8-12 часов перед применением при температуре от 20 до 22°С.

Немедленно после размораживания ампулы с вакциной вскрывают и их содержимое переносят шприцем во флаконы с разбавителем. Затем ампулы ополаскивают 2-3 раза разбавителем, который также переносят во флакон с разведенной вакциной.

В одном флаконе разбавителя, содержащем 200 см3, разводят 1 ампулу вакцины с активностью 1000 доз или 2 ампулы по 500 доз.

В одном флаконе разбавителя, содержащем 400 см3, разводят 2 ампулы вакцины с активностью 1000 доз или 4 ампулы по 500 доз.

Флаконы с разведенной вакциной предохраняют от воздействия прямых солнечных лучей и нагрева. Во время проведения вакцинации флаконы периодически взбалтывают, не допуская осаждения клеток.

Непосредственно перед вакцинацией флаконы с сухой вакциной вскрывают, содержимое растворяют в 2 см3 разбавителя для сухой вакцины против болезни Марека. Соблюдая правила асептики, вакцину переносят во флакон с разбавителем для сухих вакцин против болезни Марека. Флакон из-под вакцины 2-3 раза ополаскивают разбавителем, который переносят во флакон с разбавленной вакциной.

Флакон с содержанием 1000 доз разводят в 200 см3, 500 доз – в 100 см3. Дистиллированную воду для концентрированного разбавителя стерилизуют путем автоклавирования или кипячением в течение 30 мин и используют охлажденной.

Вакцину вводят внутримышечно в область внутренней поверхности бедра или подкожно в верхнюю треть шеи в объеме 0,2 см3 с помощью шприцов или автоматических инъекторов.

Вакцинированных цыплят в течение первых 3-х недель содержат изолировано от птицы других возрастных групп.

Наряду с профилактической вакцинацией в неблагополучных по болезни Марека хозяйствах проводят комплекс ветеринарно-санитарных мероприятий, направленных на уничтожение возбудителя во внешней среде, предотвращение раннего инфицирования цыплят, повышение их резистентности.

Иммунитет:

У вакцинированных цыплят вырабатывается на 14 сутки и сохраняется пожизненно.

Форма выпуска:

Жидкую вакцину расфасовывают в ампулы по 1,0-3,0 см3, сухую – во флаконы по 1-2 см3.

Ампулы с замороженной жидкой вакциной упаковывают в картонные перфорированные коробочки, металлические штативы (держатели) или марлевые мешочки с грузиками и помещают в сосуды Дьюара с жидким азотом при температуре -196°С.

Флаконы с сухой вакциной по 10-100 штук упаковывают в картонные или полиэтиленовые коробки с наличием гнезд или перегородок, обеспечивающих их неподвижность и целостность.

Этикетированные флаконы с разбавителем упаковывают вертикально в тару, обеспечивающую неподвижность и целостность их содержимого.

Срок годности и условия хранения:

Жидкую вакцину хранят только в сосудах Дьюара или биологических хранилищах (ампулы должны быть полностью погружены в жидкий азот). Хранение вакцины в парах азота не допускается!

Срок годности жидкой вакцины 24 месяца со дня изготовления при условии регулярной дозаправки сосудов Дьюара жидким азотом (не реже 1 раза в 5 дней).

Сухую вакцину хранят и транспортируют при температуре от 2 до 6°С.

Срок годности сухой вакцины 12 месяцев со дня изготовления. Разбавитель хранят в сухом темном месте при температуре от 8 до 12°С в течение 12 месяцев.

Болезнь Марека относится к вирусным высококонтагиозным заболеваниям, поражающим представителей отряда курообразных

Недуг представляет серьезную угрозу для птицеводства, особенно в условиях промышленного разведения птицы и высокой плотности ее содержания.
Впервые болезнь под названием полиневрита описал ученый из Венгрии по фамилии Марек. Несмотря на то, что заболевание было описано в 1907 году, серьезное его изучение началось лишь ближе к 30-м годам прошлого столетия, а в 1960 году было принято переименовать полиневрит в болезнь Марека в честь ее первооткрывателя.

Причиной заболевания является вирус из семейства герпесвирусов. Широчайшее распространение герпесвирусов в природе и достаточно высокая их патогенность определяет большое количество заболеваний животных, рыб, птицы и человека, вызываемых представителями семейства герпесвирусов, которых на данный момент вирусологам известно более 100. Вот только некоторые из заболеваний, помимо болезни Марека, вызываемых вирусами семейства:

ветряная оспа;
инфекционный мононуклеоз;
болезнь Ауески;
чума уток;
вирусный ринотрахеит кошек;
инфекционный энцефалит крупного рогатого скота.

Список герпесвирусных болезней можно продолжать очень долго, причем многие из данных недугов являются смертельно опасными, как для человека, так и для сельскохозяйственных животных.

К особенностям этого семейства вирусов можно отнести способность возбудителя болезни длительное время находиться в организме, не вызывая при этом клинических признаков заболевания. При этом, инфицированный активно выделяет вирус во внешнюю среду, представляя серьезную опасность для окружающих.
По оценкам американской статистики до введения вакцинации болезнь Марека наносила национальному птицеводству убытки в размере не менее 150 миллионов долларов ежегодно.

К болезни Марека восприимчивы практически все представители курообразных. В большей степени заболеванию подвержены куры, в меньшей индейки, цесарки и фазаны. Случаи вспышек болезни Марека регистрируются во всем мире, по крайней мере в странах с развитым птицеводством.
Как правило, заболевание возникает у кур в возрасте от 2 месяцев до полугода. Вместе с тем, заболеть способны и старшие возрастные группы птицы. Заражение происходит в подавляющем большинстве случаев аэрогенно, однако алиментарное заражение тоже не исключается.
От больной птицы и птиц-вирусоносителей вирус выделяется в окружающую среду с выделениями респираторной и пищеварительной систем, слущенным эпителием. Считается доказанной передача вируса через слюну некоторых насекомых-гематофагов. Болезнь осложняется тем, что вирусоносительство при латентных формах болезни Марека сохраняется пожизненно. При этом возбудитель болезни выделяется во внешнюю среду, создавая опасность вспышки болезни среди благополучного поголовья.

В загрязненном вирусом болезни Марека помете птиц возбудитель сохраняется до 4 месяцев, а эпителии перьевых фолликулов, при его отторжении, до 7-9 месяцев. При повышенных температурах вирус инактивируется в течение 10 мин при 60°С и практически моментально при кипячении.
Пониженные температуры приводят к консервации вируса. Так при экспериментальном глубоком замораживании в жидком азоте (около -296°С) вирус болезни Марека сохраняется годами.

Патогенез и симптомы

Попав в организм птицы вирус болезни Марека в первую очередь атакует лимфоциты. Внедрившись в них, вирус реплицируется и с током крови разносится по различным органам и тканям. В первую очередь поражаются:

Фабрициева сумка;
селезенка;
миндалины слепой кишки;
тимус.

В дальнейшем вирус проникает в эпителий перьевых фолликулов. В результате пораженными оказываются лимфатическая система, что приводит к иммуносупрессивному воздействию возбудителя на организм и периферическая нервная система, что и проявляется в нервном компоненте заболевания.
Период инкубации при данном заболевании составляет от 2 недель до 150 дней. Считается, что вирусом болезни Марека цыплята заражаются спонтанно уже в первые несколько суток жизни. Учитывая, что вирус не проходит трансовариальный барьер исключается возможность заболевания новорожденных цыплят при содержании их в условиях стерильности. Вместе с тем, антитела к вирусу болезни Марека частично передаются цыплятам от инфицированных матерей. Однако наличие антител, хотя и способно снизить процент падежа и привести к более легким формам заболевания, не дают стопроцентной защиты от последующего заражения.

В течении болезни Марека принято выделять несколько форм:

Острая форма характеризуется быстрым распространением среди восприимчивого поголовья и высоким процентом падежа. Чаще болеют птицы в возрасте от 1 до 5 месяцев. Клинические признаки при этой форме очень похожи на лейкоз птиц. Именно поэтому данную форму называют лейкозоподобной либо опухолевидной. Основными симптомами при данной форме болезни Марека являются:

нарушения пищеварения;
поносы;
общая слабость;
искривление и непривычная постановка конечностей, крыльев, головы;
возможны парезы и параличи;

При острой форме болезни смерть наступает через 1-2 месяца после появления первых клинических признаков заболевания, при хронической через 2,5-5 месяцев. Классическая форма отличается меньшим количеством павшей птицы.

Ученые считают, что вирусы вообще, а герпесвирусы особенно, склонны к мутированию, образованию новых штаммов, изменению поражаемых при вирусных заболеваниях органов и систем. Так, помимо описанных форм болезни Марека, в отдельных случаях встречается болезнь, протекающая с преимущественным поражением перьевых фолликулов. С некоторых пор в отдельных источниках ее начали выделять, как отдельную, кожную форму болезни Марека.
Основными признаками при кожной форме является утолщение и увеличение перьевых фолликулов за счет пролиферации клеток. При этом кожа птицы напоминает рыбью чешую.

При диагностике болезни Марека учитывают симптомы заболевания, результаты патологоанатомического вскрытия, эпизоотологическую ситуацию в регионе. Для подтверждения диагноза проводят лабораторные исследования по выявлению антигена в патологическом материале или специфических антител к вирусу в сыворотке крови больной и подозрительной по заболеванию птицы.

Эффективное лечение болезни Марека, как впрочем и множества вирусных заболеваний, не разработано. Потому меры борьбы с болезнью направлены прежде всего на ее профилактику и оздоровление хозяйства в случае возникновения болезни.
При подтверждении диагноза на болезнь Марека на птицеводческое хозяйство накладывают карантинные ограничения запрещающие:

перемещение поголовья;
инкубацию яиц;
прием молодняка на выращивание;
реализацию яиц для инкубации и прочее.

Клинически больную и подозрительную птицу уничтожают. Для специфической профилактики применяют вакцины из штамма вируса герпеса индеек и живые вакцины против болезни Марека.
Вакцинации подвергают птицу начиная с суточных цыплят. При этом наилучшие результаты получают именно при вакцинации цыплят, которая хотя и не гарантирует стопроцентной защиты от заболевания, однако значительно снижает инфицируемость поголовья и сокращает падеж при вспышке заболевания.

На правах рукописи

Абдуллоева Елена Юрьевна

БИВАЛЕНТНАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ БОЛЕЗНИ МАРЕКА ИЗ ВИРУСА 1 И 3 СЕРОТИПОВ

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук Камалова

Официальные оппоненты: Еремец Владимир Иванович - доктор

радиобиологии и вирусологии имени академиков А.Д. Белова и В.Н. Сюрина

Ученый секретарь диссертационного

биологических наук у^'К^^ТХ'МС Жбанова Татьяна Валентиновна

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1 Актуальность темы. Птицеводство в Российской Федерации (РФ) является одной из важнейших отраслей сельскохозяйственного производства. Значительное влияние на экономические показатели хозяйств птицеводческой индустрии оказывают иммунодепрессивные вирусные заболевания, приводяшие к гибели птицы. Одной из таких инфекций является болезнь Марека (БМ) — неопластическое заболевание, характеризующееся различным проявлением клинической картины - от параличей до образования лимфоидных опухолей внутренних органов и кожи. Вместе с тем снижается общая резистентность инфицированной птицы к другим инфекциям. Вакцинопрофилактика является неотъемлемой мерой борьбы с БМ. Однако, несмотря на повсеместное применение вирусвакцин против БМ, в РФ на сегодняшний день процент гибели от заболевания фиксируется в пределах 5-35%, представляя серьезную проблему и принося убытки птицехозяйствам. Одной из причин инцидентности заболевания является появление более вирулентных штаммов вируса болезни Марека (ВБМ), против которых существующие в РФ моновалентные и бивалентные вирусвакцины недостаточно эффективны.

Конструирование поливалентных вирусвакцин основано на комбинации апатогенного для кур вируса герпеса индеек (ВГИ, ВБМ 3 серотипа) и двух других серотипов ВБМ. Однако бивалентная вирусвакцина из вируса 2 и 3 серотипов способна защитить против действия патотипа средней вирулентности и малоэффективна для птицеводческих хозяйств с высоким уровнем заболеваемости, а вирусвакцины на основе комбинации вируса серотипов 1+2+3 не рекомендуют применять на птице родительского стада, так как в этом случае невозможна ротация вакцинации.

Для профилактики инфекции за рубежом применяют вирусвакцины на основе ВБМ 1 и 3 серотипов, которые не уступают по эффективности вирусвакцине из ВБМ 2 и 3 серотипов и способны защитить против действия высоко- и особовирулентных изолятов ВБМ. Вследствие отсутствия отечественного аналога руководители птицеводческих хозяйств вынуждены закупать вирусвакцину на основе ВБМ серотипов 1+3 у зарубежных фирм по достаточно высоким ценам. Таким образом, разработка отечественной высокоэффективной клеточно-ассоциированной бивалентной вирусвакцины против БМ из штаммов вируса 1 и 3 серотипов и оценка ее иммуногенности является актуальной для обеспечения ветеринарного благополучия по БМ в птицеводческих хозяйствах страны.

За рубежом разработаны и активно применяются бивалентные вирусвакцины из ВБМ 1 и 3 серотипов. Публикаций, посвященных исследованиям по разработке бивалентной вирусвакцины из ВБМ 1 и 3 серотипов в РФ, в доступной научной литературе не было. Поэтому для ветеринарии РФ вопрос о разработке клеточно-ассоциированной бивалентной вирусвакцины против БМ из эффективных отечественных штаммов вируса является актуальным.

1.4 Научная новизна исследований:

- изучены параметры роллерного культивирования вирусов с использованием среды ОМЕМЛМ2;

1.5 Теоретическая и практическая значимость исследований. Полученные результаты исследований были использованы при составлении нормативной документации:

1.6 Методология и методы исследований. Методология исследований включает стандартные процедуры с использованием различных материалов и естественно-восприимчивых животных. В работе были использованы вирусологические (культивирование и индикация вирусов), молекулярно-биологические (ПЦР), серологические и иммунологические (ИФА, PH, РТМЛ) методы исследований со статистической обработкой данных.

1.7 Положения, выносимые на защиту:

1.9 Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность полученных результатов опытов подтверждена их статистической обработкой. Результаты исследований по теме диссертации доложены и обсуждены на

1.10 Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ, в том числе 4 в изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ для кандидатских и докторских диссертаций.

1.12 Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 138 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение, выводы, практические предложения и список литературы, который состоит из 191 источников, в том числе 130 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 13 таблицами, 6 рисунками и дополнена приложением аннотаций документов.

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1 Материалы

Лабораторные животные. Суточные SPF-цыплята, цыплята-бройлеры.

2.2 Методы исследований

Культивирование вируса. Культивирование вирусов проводили в первичной культуре клеток (КК) ФЭК при температуре (38,5±1)°С.

Определение инфекционной активности. Инфекционный титр вируса определяли по числу фокусообразующих единиц (ФОЕ) в монослое клеток ФЭК. Использовали метод последовательных десятикратных разведений вируссодержащей суспензии. Величину титра определяли по формуле (1):

T=<[(b1+b2+. +bn)/n]xl0a>/V, (1) где Т - титр вируса, ФОЕ/см3; Ьь Ьг. Ь„ - количество фокусов во флаконе; п -количество используемых флаконов; V - объем суспензии вируса, внесенный во флакон, ем3; а - показатель степени разведения вируесодержащего материала.

Иммунологические и серологические методы исследований. Для

определения вируснейтрализующих антител (ВНА) в сыворотке крови вакцинированных цыплят был применен а-вариант РН, описанный в руководстве по вирусологии [8, 9]. Индекс нейтрализации (ИН) определяли методом редукции бляшек по формуле (2):

где Ts- - титр вируса с отрицательной сывороткой; Tsi - титр вируса с исследуемой сывороткой.

где Lo - зона протяженности миграции лейкоцитов в смеси со средой 199 (контроль); L - зона протяженности миграции лейкоцитов в смеси со специфическим антигеном.

Обнаружение генома вируса в эпителии перьевых фолликул.

Определение эффективности вакцинации. Эффективность вакцинации (Э) определяли методом контрольного заражения по формуле (4):

где К - количество цыплят с патологией БМ в контрольной группе; В - количество цыплят с патологией БМ в вакцинированной группе.

Статистическая обработка данных. Использовали общепринятые методы обработки результатов и вычисления средних значений и стандартных ошибок выборок [1,4].

2.3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Для этого культивирование вирусов проводили в КК ФЭК с посевной концентрацией 800 тыс. кл./см3 в пластиковых культуральных флаконах с площадью рабочей поверхности 75 см2. В качестве ростовых и поддерживающих сред использовали контрольную среду 199+Игла+ГЛАХ и опытные коммерческие среды. Доза заражения вирусом составляла Ю3ФОЕ на флакон. По окончании культивирования производили сбор вируссодержащих материалов в равных объемах (V=10 см3). Определяли концентрацию клеток и инфекционный титр вирусов. Оценивали количественные показатели концентрации инфицированных клеток относительно значений, полученных при использовании среды 199+Игла+ГЛАХ. Результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Накопление вирусов в культуре клеток ФЭК при стационарном культивировании (п=4)

концентрация инфицированных клеток, млн.кл./см3 инфекционный титр, lgOOE/ем3 концентрация инфицированных клеток, млн.кл./см3 инфекционный титр, IgOOE/cM3

DMEM/F-12 7,42±0,36* 5,37±0,07 6,14±0,18 5,07±0,04

Маккоя-5А 6,74±0,27 5,21 ±0,05 5,29±0,49 4,95±0,06

L-15 5,38±0,24 4,66±0,08 4,57±0,49 4,63±0,05

199+Игла+ГЛАХ 5,8±0,29 4,99±0,09 4,89±0,52 4,92±0,06

- жирным шрифтом выделены значимые оценки.

Таблица 2 - Наконление вируса в культуре клеток ФЭК при разных посевных концентрациях (гГ=4)

№ варианта Посевная концентрация клеток, млн. кл./см3 Концентрация инфицированных клеток, млн. кл./см3 Инфекционная активность, \% ФОЕ/см3

1 1,3±0,08 20,43±0,30 6,83±0,05

2 1,0±0,02 18,87±0,39 6,90±0,07

3 0,8±0,03 16,23±0,29 6,46±0,05

4 0,65±0,03 13,68±0,28 5,80±0,07

Данные, представленные в таблице 2, иллюстрируют, что при использовании посевной концентрации клеток ФЭК, равной 1,0 млн. кл./см3, накопление вируса было максимальным. Однако, при испытании посевной концентрации 1,3 млн. кл./см3, выход инфицированных клеток был выше относительно применения других вариантов посевной концентрации клеток.

В связи с этим изучили влияние времени заражения интактной КК ФЭК на последующее накопление вирусов для двух посевных концентраций: 1,3 и 1,0 млн. кл./см3. Заражающая доза вирусов для всех вариантов была одинаковой.

При распространении ЦПД вируса на 70-80% монослоя осуществляли сбор вируссодержащего материала в равном объеме среды и приводили к одинаковому значению концентрации инфицированных клеток (8,0 млн. кл./см3). Полученные результаты отражены в таблице 3.

Таблица 3 - Влияние времени заражения интактной культуры клеток ФЭК на последующее накопление вирусов (п=4)

Посевная концентрация клеток ФЭК, млн. кл./см3 Время заражения интактной Инфекционная активность вируса, 1ё ФОЕ/см3

24 6,62+0,09 6,16±0,11

1,3±0,07 48 6,59±0,11 6,12±0,07

72 6,45±0,08 5,27+0,10

24 6,18±0,06 5,98+0,07

72 6,65±0,09 6,21+0,04

96 6,59±0,06 6,16+0,08

Представленные результаты (таблица 3) демонстрируют, что при использовании посевной концентрации 1,3 и 1,0 млн. кл./см3 максимальное накопление вирусов наблюдали при заражении интактной культуры через 24 и 72 ч после начала культивирования клеток, соответственно.

Изучение иммуногенности образцов бивалентной вирусвакцины. Под

Оценка напряженности клеточного иммунитета была основана на определении активности Т-лимфоцитов к антигенам ВБМ и ВГИ в динамике в РТМЛ по формуле (3). Затем вычисляли оценки контраста ((1МЬ) между индексами миграции лейкоцитов, полученными для групп птиц №5 и №6 (МЬШ) и таковыми показателями групп №1-4 (МЬ,), по формуле: (1МЬ; = МЬт - МЬ;. Результаты в виде средних оценок представлены в таблице 4.

Таблица 4 - Результаты оценки активности иммунокомпетентных клеток (п=5)

Сутки Показатель контраста с!МЦ соответственно опытных групп МЬ„ в группе 5 (1000 ФОЕ ВБМ)

группа 1 (500 ФОЕ ВБМ + 1000 ФОЕ ВГИ) группа 2 (1000 ФОЕ ВБМ + 500 ФОЕ ВГИ) группа 3 (1000 ФОЕ ВБМ + 1000 ФОЕ ВГИ) группа 4 (2000 ФОЕ ВБМ + 2000 ФОЕ ВГИ)

14 -0,068±0,048 -0,532±0,052* -0,548±0,039 -0,600±0,028 0,140±0,020

28 0,098±0,057 -0,202±0,048 -0,106±0,027 -0,126±0,056 0,412±0,026

42 0Г306±0,048 -0,180±0,035 -0,02±0,022 0,116±0,026 0,464±0,026

Сутки Показатель контраста с!МЬ| соответственно опытных групп МЬщ в группе 6 (1000 ФОЕ ВГИ)

14 -0,194±0,035 -0,554±0,049 -0,508±0,078 -0,590±0,050 0,184±0,066

28 0,086±0,041 -0,226±0,072 -0,210±0,062 -0,140±0,078 0,374±0,023

42 -0,072±0,025 -0,324±0,049 -0,164±0,067 0,030±0,065 0,346±0,021

* - жирным шрифтом выделены позиции с достоверностью различий (р 0,95), где: 'с! -ожидаемая величина относительного снижения титра соответственно времени экспозиции в разбавителе 0).

На рисунке 3 видно, что скорость инактивации вируса возрастала по мере повышения температуры экспозиции. При сопоставлении оценок контраста, полученных для трех температурных режимов, относительно исходного значения инфекционного титра вируса установили существенность различий уже спустя 30 минут. Снижение титра произошло в среднем на 9%, 11% и 17% при температуре экспозиции 4, 22 и 37°С, соответственно, что следует учитывать при проведении процедуры вакцинации.

Птицефабрика Кол-во вакцинированных птиц Период наблюдений Пало голов Сохранность поголовья в среднем по хозяйству, % Сохранность поголовья, привитого вирусвакциной, %

всего с признаками БМ при вскрытии

3.2 Практические предложения. Полученные результаты исследований использованы при составлении нормативной документации на новый вакцинный препарат:

3.3 Перспективы дальнейшей разработки темы. Одним из основных направлений разработки данной темы является массовое производство отечественной вакцины из вируса 1 и 3 серотипов с целью обеспечения эпизоотического благополучия птицеводческих хозяйств и расширения ассортимента средств специфической профилактики БМ в РФ.

Вторым аспектом является использование синтетической коммерческой питательной среды ОМЕМЛМ2 с целью снижения трудозатрат при производстве вирусвакцин против БМ и стандартизации производственного процесса.

4 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВБМ - вирус болезни Марека

ВГИ - вирус герпеса индеек

SPF - свободные от патогенной флоры

КК ФЭК - культура клеток фибробластов эмбрионов кур

РН - реакция нейтрализации

PTMJI - реакция торможения миграции лимфоцитов ИФА - иммуноферментный анализ

ПЦР-РВ - полимеразно-цепная реакция в режиме реального времени

5 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Закс JI. Статистическое оценивание / Л. Закс - М.: Статистика, 1976. -598 с.

3. Методические указания по выявлению и оценке титра антител к вирусу болезни Марека в сыворотках крови кур в непрямом иммуноферментном тесте / A.A. Пяткина, А.Э. Меныцикова, В.Н. Ирза, Ш.К. Куляшбекова; ФГУ "ВНИИЗЖ". - Владимир, 2008. - 19 с.

4. Мисюк, Н.С. Корреляционно-регрессионный анализ / Н.С. Мисюк, A.C. Мастыкин, Г.П. Кузнецов. - М.: Медицина, 1975. - 192 с.

5. Оценка способности миграции лейкоцитов in vitro и продукции фактора, ингибирующего миграцию лейкоцитов крови у человека: Метод, рекомендации / Т.Н. Крымкина, Л.В. Ганковская, Е.В. Соколова [и др.]. - М., 1983. - 43 с.

8. Троценко, Н.И. Практикум по ветеринарной вирусологии / Н.И. Троценко, Р.В. Белоусова, Э.А. Преображенская. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Колос, 1999. - 272с.

9. Melchior, Jr.F. Neutralization studies with marek's disease virus and turkey herpesvirus / Jr.F. Melchior, T.N. Fredrickson, R.E. Luginbuhl // Appl. Microbiol. -1973. - Vol. 26, №6. - P. 925-933.

6 СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Влияние срока хранения на инфекционную активность клеточно-ассоциированного вируса болезни Марека / Е.Ю. Ханюкова, М.А. Шустова,

A.A. Пяткина, В.П. Мельников // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. -2015.-№1.-С. 13-15.

2. Гуморальный иммунный ответ цыплят, привитых бивалентными вакцинами против болезни Марека / Е.Ю. Ханюкова, М.А. Шустова,

B.Ю. Кулаков, A.A. Пяткина // Международный научный институт "Educatio": материалы X Междунар. науч.-практ. конф. "Научные перспективы XXI века. Достижения и перспективы нового столетия". - Новосибирск, 2015. - №3(10). -

3. Ханюкова, Е.Ю. Влияние питательной среды на репродукцию вируса герпеса индеек в культуре клеток фибробластов эмбрионов кур / Е.Ю. Ханюкова, М.А. Шустова, A.A. Пяткина // Ветеринария. - 2015. - №3. -С. 60-62.

4. Ханюкова, Е.Ю. Гуморальный иммунный ответ цыплят, привитых бивалентной и моновалентными вакцинами против болезни Марека / Е.Ю. Ханюкова, М.А. Шустова, В.Ю. Кулаков // Ветеринария и кормление. -2015.-№1,-С. 26-28.

5. Ханюкова, Е.Ю. Применение питательной среды Дульбекко DMEM/F12 Ham для культивирования вируса болезни Марека в культуре клеток фибробластов эмбрионов кур / Е.Ю. Ханюкова, М.А. Шустова, Н.Е. Камалова // Ветеринария сегодня. - 2015. - №3. - С. 59-61.

6. Шустова, М.А. Изучение способов дезагрегации клеточного монослоя, инфицированного вирусом герпеса индеек / М.А. Шустова, Е.Ю. Ханюкова, A.A. Пяткина // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. - 2015. - №2. -С. 17-20.

Болезнь Марека (БМ) — высококонтагиозное, лимфопролиферативное, злокачественное вирусное заболевание птиц, возбудителем которого является ДНК-содержащий вирус, отнесенный к семейству герпесвирусов. БМ характеризуется образованием единичных и множественных опухолей во внутренних органах, коже, мышцах, а также изменениями центральной и периферической нервной системы. Заболеваемость у невакцинированных птиц составляет 25–30% и может достигать 60%. Вирус болезни Марека (ВБМ) повреждает иммунокомпетентные органы (селезенку, тимус, клоакальную сумку) и обладает, таким образом, иммунодепрессивной активностью, что приводит к снижению общей резистентности птиц и повышению их чувствительности к другим болезням.

В настоящее время болезнь Марека регистрируется практически во всех странах мира. Экономический ущерб от болезни Марека складывается из падежа, вынужденного убоя птицы, снижения показателей продуктивности, а также из затрат на ветеринарно-санитарные мероприятия.

Вакцинопрофилактика болезни Марека занимает ведущее место в борьбе с этим заболеванием. Долгие годы болезнь Марека успешно контролировалась вакцинами на основе вируса герпеса индеек (третий серотип) в моновалентном варианте или на основе вируса герпеса индеек с добавлением вируса герпеса кур (бивалентная вакцина из второго и третьего серотипов).

За рубежом для специфической профилактики заболевания активно применяют нативные вакцины из 1 серотипа вируса болезни Марека (ВБМ) и бивалентную вакцину из 1 и 3 серотипов. Последнюю вакцину рекомендуют использовать в птицехозяйствах с циркуляцией высоковирулентных штаммов ВБМ. Известно, что 3 серотип обеспечивает более раннюю защиту против БМ, а 1 серотип обеспечивает продолжительный иммунный ответ.

В России до недавнего времени отсутствовала отечественная нативная бивалентная вакцина на основе 1 и 3 серотипов вируса БМ. Поэтому руководители птицеводческих хозяйств закупали вакцину 1+3 у зарубежных фирм по высоким ценам.

Таким образом, нестабильная эпизоотическая ситуация и отсутствие конкуренции на рынке требовали разработки отечественной высокоэффективной и технологичной клеточно-ассоциированной вакцины из 1 и 3 серотипов вируса БМ.

Вирусвакцина МАРИВАК 1+3 обладает целым рядом преимуществ по сравнению с аналогами:

ü для изготовления вакцин против болезни Марека используются высококачественные СПФ-яйца фирмы VALO BioMedia (Германия);

ü вакцинация предотвращает заболеваемость и смертность птицы от болезни Марека;

ü улучшение производственных показателей (сохранность, продуктивность) после применения вакцины;

ü уменьшение потерь птицеводства от вторичных инфекций благодаря профилактике вирусиндуцированной иммуносупрессии;

ü повышение показателей иммунного ответа на профилактические прививки против заболеваний птиц благодаря профилактике вирусиндуцированной иммуносупрессии;

ü вакцинация уменьшает выделение вирулентного вируса во внешнюю среду, что улучшает эпизоотическую обстановку;

ü вакцина безопасна и безвредна;

ü вакцина создает пожизненный иммунитет к болезни Марека через 14–21 день после вакцинации;

ü стоимость вакцины в несколько раз меньше стоимости зарубежных аналогов.

Вирусвакцина против болезни Марека МАРИВАК 1+3 по основным характеристикам соответствует требованиям, изложенным в “Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals”.

Вакцина МАРИВАК 1+3 зарегистрирована, сертифицирована и разрешена к применению в Российской Федерации. Регистрационное удостоверение лекарственного препарата для ветеринарного применения № 003269. Номер регистрационного удостоверения: 12-1-11.15 -2904 №ПВР-1-11.15/03202.

Вакцина МАРИВАК 1+3 способна конкурировать на отечественном рынке с аналогичными продуктами зарубежных производителей.

Опухоли в сердце и легких

Опухоли в печени

Опухоль в селезенке

Одностороннее увеличение седалищного нерва

Характерная для классической формы болезни Марека поза.

Читайте также: