Серое окно гепатит в

Вирусы гепатитов поражают прежде всего печень, почему болезнь и получила своё название : hepatitis (лат.) - воспаление печени . Путь передачи обоих вирусов - парентеральный , то есть через кровь и половым путём. Если раньше самой распространённой причиной заражения было переливание крови, то в настоящее время инфицирование чаще всего происходит в группах высокого риска (проститутки, наркоманы).

Какой из гепатитов опаснее - В или С? Ответить можно только по-одесски - оба.

Гепатит В встречается гораздо чаще протекает более остро, но чаще всего заканчивается без осложнений. Последнее мало утешает те 10% больных, у которых болезнь переходит в хроническое течение, а при хроническом гепатите, в свою очередь, в 1 % случаев развивается цирроз и первичный рак печени.

Гепатит С называют "убийцей с мягкими лапами". Протекая не столь остро, как гепатит В, он переходит в хронический процесс в 30-70% случаев. Цирроз печени развивается у 10-30% больных, велик процент первичного рака печени.

Рис.1 Расспространенность гепатита С

Специфического лечения гепатитов не существует, терапия интерфероном (при гепатите С), крайне дорогостояща и недостаточно эффективна.

Вирус гепатита С

Вирус гепатита С содержит однонитевую РНК и относится к семейству флавивирусов. Электроннооптических изображений вируса гепатита С не существует, это связано с низким содержанием вируса в крови. По понятным причинам не может быть и фотографий, сделанных с помощью светового микроскопа. Вирус идентифицирован и охарактеризован молекулярно-биологическими методами.

Однонитевая РНК вируса содержит около 10.000 нуклеотидов. Идентифицированы три структурных белка: структурный белок нуклеокапсида (белок C), а также - мембранный (белок М) и поверхностный (белок E). Белки обладают сходными антигенными свойствами, поэтому их общим маркером являются иммуноглобулины анти-HCV-core-Ig . Выделены также 5 неструктурных (NS) белков, принимающие участие в репликации вируса.

Диагностика гепатита C

Динамика специфического маркера вирусного гепатита С (суммарного анти-HCV) по стадиям инфекционного процесса

Обнаружение антигена .

Непосредственное обнаружение антигена в крови не представляется возможным. Это обусловлено малым количеством вирусных частиц в сыворотке больного, не превышающим 10 5 /мл, что ниже предела чувствительности иммунологических методов.

Антитела .

В скрининговых исследованиях используют метод ИФА для определения суммарных (IgM+IgG) анти-HCV или анти-HCV класса IgG . В качестве подтверждающих тестов применяют иммуноблот на основе рекомбинантных и синтетических пептидов. Для уточнения стадии заболевания существуют тест-системы для определения анти-HCV класса IgM , а также анти-NS-IgG (антитела к не-структурным белкам) . В типичных случаях анти-HCV появляются в конце инфекционного процесса, т.е. через 4 - 9 мес. после заражения. Однако, в некоторых случаях антитела обнаруживались уже на 2 - 4 неделе после переливания заражённой крови , а в других случаях сероконверсия происходила через год после заражения . В соответствии с тенденцией гепатита С к хронизации - антитела обнаруживаются в течение длительного периода. Учитывая задержку в выработке антител, отрицательный результат исследования на анти-HCV не исключает инфекционности сыворотки. В то же время, все сыворотки, в которых была обнаружена РНК вируса гепатита С, оказались "заразными".

HCV-RNA (определение РНК вируса гепатита С ) .

РНК вируса гепатита С может быть обнаружена в сыворотке крови или в биоптате печени с помощью ПЦР с обратной транскрипцией. Теоретически чувствительность ПЦР позволяет определить одну (!) вирусную частицу в пробе. Существующие в настоящее время тест-системы ПЦР позволяют не только выявлять наличие вируса гепатита С, но и устанавливать его тип, определяя тем самым тактику и прогноз лечения.

Фазы течения заболевания гепатитом С и результаты лабораторного исследования

Острая фаза

Инкубационный период длится в среднем 6 - 8 нед. (от 2 - 4-х недель до 4 -6 месяцев и более). В этот момент регистрируется первый пик повышения печёночных ферментов. Сероконверсия наступает через 15 - 20 нед. (варьирует от 5 до 50 недель) от момента заражения. Анти-HCV класса IgM обнаруживают на 3 - 4 недели раньше, чем анти-HCV класса IgG. РНК вируса с помощью ПЦР определяется через 1 - 3 недели после инфицирования.

Критерии острой фазы:

Признаки благоприятного исхода острого гепатита С с выздоровлением

Желтуха является хорошим прогностическим признаком, а длительная циркуляция анти-HCV-IgM (более 2-х мес.) — плохим, свидетельствующим о возможной хронизации процесса.

Соответствует хроническому персистирующему гепатиту при полном или почти полном отсутствии клинических проявлений. Может продолжаться многие годы, в среднем 15-20 лет. Важно отметить существенные отличия хронического носительства вирусного гепатита В (ВГВ) и вирусного гепатита С (ВГС). Латентная (скрытая) стадия ГС является предстадией фазы реактивации инфекционного процесса с развитием клинических проявлений хронического гепатита. В то время как хроническое носительство HBsAg (при отсутствии повторного инфицирования), крайне редко предшествует обострению хронического ГВ.

Критерии латентной фазы:

Важнейшим критерием оценки хронического ВГС является динамический контроль за анти-HCV IgM. Они всегда регистрируются в фазу обострении

Критерии перехода в фазу реактивации:

Типичные сочетания маркеров гепатита C и соответствующее клиническое значение (диагноз)

Интерпретация результатов ИФА

Возможно, острый гепатит С

2. Стадия перехода в ХГС (латентную фазу)

2. Латентная фаза ХГС

1. Обострение в латентную фазу ХГС

2. Фаза реактивации

Критерии разграничения фаз заболевания необходимо рассматривать только в совокупности и в динамике, так как близкие результаты разовых исследований могут соответствовать как острой, так и хронической стадии инфекционного процесса. Важное значение имеет предположительный учёт давности болезни.

Вспомогательные методы диагностики и контроля лечения гепатитов.

Печень выполняет в организме многочисленные задачи, она - "рекордсмен" по количеству выполняемых функций. Инфекционные гепатиты, нарушая функции печени, вызывают изменения практически всех лабораторных показателей состояния организма. Некоторые из этих изменений неспецифичны, т. е. возникают и при других заболеваниях. Есть и признаки, характерные именно для вирусных гепатитов (ВГ). Так, возникающее при ВГ массивное повреждение клеток печени - гепатоцитов - влечёт за собой выход в кровь содержащихся в этих клетках ферментов. Содержание аланиламинотрансферазы ( АлАт ) и аспартатаминотрансферазы ( АсАт ) при остром гепатите возрастает в крови в десятки раз, причём преобладает возрастание АлАт - это характерный признак гепатита. Активность аминотрансфераз увеличивается ещё до возникновения желтухи - пожелтения кожных покровов и слизистых, что делает выявление АлАт и АсАт ценным диагностическим признаком. Нарушается также т.н. пигментный обмен - возрастает количество билирубина (именно его избыток, откладываясь в тканях, и даёт желтушность). Следует отметить, что при вирусных гепатитах возрастает, в основном, содержание т.н. прямого билирубина ; это отличает их от других заболеваний печени. В моче ещё в дожелтушном периоде увеличивается количество уробилиногена (которое легко определяется с помощью тест-полосок, что делает этот метод очень ценным для экспресс-диагностики в очагах вирусного гепатита).

При хронических гепатитах ценным методом является цитологическое исследование материала, полученного при биопсии печени. Этот метод позволяет оценить степень и характер повреждения клеток печени

Вирус гепатита В

Вирус гепатита В является ДНК-содержащим вирусом, относится к семейству гепаднавирусов. Его диаметр- 42 nm.

Центральное положение занимает нуклеокапсид или "ядро" - "core". Нуклеокапсид имеет 27 nm в диаметре, в его состав входит т.н. "серцевинный антиген" HBcAg , а также - антиген HBeAg. Нуклеокапсид окружен оболочкой толщиной около 4 nm, белок которой назван "поверхностным" или HBsAg . Широко распространён синоним его названия - "австралийский антиген".

Иногда оболочка вирусной частицы (она же - поверхностный антиген HBsAg ) простирается в виде длинного "цоколя лампы" по одну сторону от нуклеокапсида (НК) . Поверхностный антиген производится в большом избытке, в крови инфицированных людей его нитевидные и сферические частицы обнаруживаются даже в отсутствие нуклеокапсида. Нитевидные частицы имеют различную длину, их средний диаметр 22nm. Нередко можно различить поперечную регулярную их исчерченность, не имеющую спирального характера.

Группа вирусных частиц гепатита B: "целые" вирионы, имеющие оболочку из поверхностного белка (справа) и два "обнажённых" нуклеокапсида (обозначены стрелками). Концентрация возбудителя гепатита В в крови в разгар болезни крайне высока: 1 мл крови содержит 1.000.000.000.000 вирусов .

Под "обычным" (световым) микроскопом вирусные частицы выглядят точками или небольшими гранулами. Они называются "частицами Дейна" - по имени первооткрывателя.

Диагностика гепатита В

основана на обнаружении описанных выше антигенов гепатита, выявлении специфических антител к этим антигенам и идентификации вирусной ДНК.

Динамика специфических маркеров вирусного гепатита В

Обнаружение антигена* .

HBsAg обнаруживается в крови через 2 - 8 недель после заражения и в большинстве случаев через 4 месяца после заражения исчезает из сыворотки. HBeAg появляется в острый период болезни в течение короткого промежутка времени. Его обнаружение при хроническом гепатите или циррозе печени свидетельствует о продолжающемся развитии и размножении вируса.

Антитела** .

Антитела к HBsAg ( Анти-HBs антитела) обычно появляются сыворотке крови после исчезновения HBsAg. Однако, в ряде случаев HBsAg перестает определяться раньше, чем появляются антитела. В этой ситуации необходимо протестировать сыворотку на наличие анти-НВс антител, которые появляются на ранней стадии заболевания. Диагноз острой инфекции может быть окончательно подтвержден при обнаружении анти-НВс антител класса IgM. Это необходимо для дифференциальной диагностики острой инфекции и хронического активного гепатита, сопровождающегося персистенцией вируса. Обнаружение анти-НВе антител является показателем наличия НВеAg.

HBV-ДНК (ДНК вируса гепатита В) *** :

Определение ДНК в сыворотке или ткани рекомендуется в тех случаях, когда нужно подтвердить наличие остаточного инфекционного процесса. Это бывает важно у больных, положительных по HBsAg, но отрицательных по НВеAg при наличии анти-НВс антител. Такие больные, вопреки существовавшему до недавнего времени мнению - представляют инфекционную угрозу, т.е. заразны.

Основные ссылки

Вы здесь

Чтобы просмотреть текст книги нажмите на нужную главу в оглавлении

Вирус гепатита B (HBV) принадлежит к новому семейству ДНК вирусов Hepadnaviridae . К его особенностям относятся поразительный гепатотропизм и уникальный способ репликации с использованием механизма обратной транскрипции. Собранный вирион или частица Дейна состоит из кольцевой молекулы ДНК, защищенной ядерным капсидом/коровым антигеном (HBcAg). Внешняя оболочка вируса образована поверхностным антигеном (HBsAg). HBsAg также обнаруживается в сыворотке в виде неинфекционных сферических частиц или нитей. Малые компоненты HBV нуклеакапсиды, HBe антиген (HBeAg) также можно обнаружить в крови во время репликативной фазы вируса.

HBV является широко распространенным по всему миру вирусом. Основные пути заражения: горизонтальный - половое и парентеральное заражение, и вертикальный - пренатальная передача от инфицированной матери плоду. Клинические последствия от заражения гепатитом B варьируют от полностью неразличимых (70% случаев) до острых гепатитов. Большинство пациентов полностью выздоравливают в течение 6 месяцев с начала заболевания. У небольшой доли инфицированного населения ( 1:1000) IgM антител на HBcAg появляются во время острой фазы HBV инфекции совпадая с появлением IgG и ростом трансаминазы. Так как уровень анти-HBc IgM быстро уменьшается, высокий титр этих антител является свидетельством острой фазы гепатита B. Поэтому проверка на анти-HBc IgM является полезным инструментом при диагностике острой HBV инфекции позволяющим различать острые и хронические гепатиты B.

Рис. 7. Типичная зависимость от времени концентрации маркеров гепатита B при острой инфекции.

Во время активной фазы болезни в организме появляются как IgM, так и IgG антитела на вирусный коровый антиген. В то время как анти-HBc IgM быстро исчезает, анти-HBc IgG сохраняется на годы. Поэтому анти-HBc IgG является удобным индикатором для определения предшествующих контактов с HBV. Более того, анти-HBc IgG является единственным маркером, который можно обнаружить во время так называемого серологического окна острого гепатита B, периода после исчезновения специфических IgM и когда анти-HBs антитела, указывающие на элиминацию вируса, еще не обнаруживаются (Рис. 7).

Антитела к HBsAg (анти-HBs) являются основными нейтрализующими HBV антителами, которые защищают против повторного инфицирования и сохраняются в течение всей жизни. Поэтому обнаружение анти-HBs служит индикатором выздоровления от гепатита B или успеха вакцинации с использованием HBsAg частиц. Концентрация антител ³ 10 IU/L указывает на иммунитет к HBV.

Таблица 5. Использование тестов ИммуноКомб для более точной постановки диагноза гепатита B.

Основные ссылки

Вы здесь

Чтобы просмотреть текст книги нажмите на нужную главу в оглавлении

Вирус гепатита B (HBV) принадлежит к новому семейству ДНК вирусов Hepadnaviridae. К его особенностям относятся поразительный гепатотропизм и уникальный способ репликации с использованием механизма обратной транскрипции. Собранный вирион или частица Дейна состоит из кольцевой молекулы ДНК, защищенной ядерным капсидом/коровым антигеном (HBcAg). Внешняя оболочка вируса образована поверхностным антигеном (HBsAg). HBsAg также обнаруживается в сыворотке в виде неинфекционных сферических частиц или нитей. Малые компоненты HBV- нуклеакапсиды, HBe антиген (HBeAg) также можно обнаружить в крови во время репликативной фазы вируса.

HBV является широко распространенным по всему миру вирусом. В Москве, как и в целом по России, в последние годы отмечается рост заболеваемости парентеральными вирусными гепатитами [158].

Основные пути заражения: горизонтальный - половое и парентеральное заражение, и вертикальный - перинатальная передача от инфицированной матери плоду. Клинические последствия от заражения гепатитом B варьируют от полностью неразличимых (70% случаев) до острых гепатитов. Большинство пациентов полностью выздоравливают в течение 6 месяцев с начала заболевания. У небольшой доли инфицированного населения ( 1:1000) IgM антител на HBcAg появляются во время острой фазы HBV инфекции, совпадая с появлением IgG и ростом аминотрансфераз. Так как уровень анти-HBc IgM быстро уменьшается, высокий титр этих антител является свидетельством острой фазы гепатита B. Поэтому тестирование на анти-HBc IgM является полезным инструментом при диагностике острой HBV инфекции, позволяющим различать острые и хронические гепатиты B.

Во время активной фазы болезни в организме появляются как IgM, так и IgG антитела к вирусному коровому антигену. В то время как анти-HBc IgM быстро исчезает, анти-HBc IgG сохраняются годы. Поэтому анти-HBc IgG являются удобным индикатором для подтверждения предшествующих контактов с HBV. Более того, анти-HBc IgG является единственным маркером, который можно обнаружить во время так называемого серологического окна острого гепатита B, периода, когда анти-HBs антитела, указывающие на элиминацию вируса, еще не обнаруживаются, а специфические IgM уже исчезли (Рис. 11).

Рисунок 11. Относительная концентрации маркеров гепатита B при острой инфекции в зависимости от времени инфицирования

Антитела к HBsAg (анти-HBs) являются основными нейтрализующими HBV антителами, которые защищают против повторного инфицирования и сохраняются в течение всей жизни. Поэтому обнаружение анти-HBs служит индикатором выздоровления от гепатита B или успеха вакцинации с использованием HBsAg частиц. Концентрация антител ? 10 IU/L указывает на иммунитет к HBV.

В 1999-2001 гг. ВОЗ провела сравнительные испытания быстрых простых тестов 10 производителей (Determine HBsAg, DoubleCheck HBs Antigen, ImmunoComb II HBs Ag 90’, Serodia-HBs.PA, GLD Rapid HBsAg, Hepacard, AQ One HBsAg Test, Uni-Cold HBsAg, Genedia HBsAg, Hep B Stark-Pack) для обнаружения поверхностного антигена вирусного гепатита B [160]. При этом оценивалась не только чувствительность и специфичность, но и результаты, полученные на сероконверсионных и низкотитражных панелях. В качестве образцов сравнения, референс-тестов, выступали ELISA тест-системы MonolisaAgHBs Plus и Hepanostika HBsAg. Результаты испытаний представлены на рисунке. Столбцы диаграммы характеризуют количество выявленных положительных образцов низкотитражной и сероконверсионных панелей. Как видно из диаграммы (Рис.12), тесты ИммуноКомб продемонстрировали результаты, близкие или превосходящие результаты ИФА референс-тестов на сероконверсионных и низкотитражных панелях.

Рисунок 12. Сравнительная характеристика тестов при диагностике образцов сероконверсионных и низкотитражных панелей

Количество образцов низкотитражной панели, идентифицированных тестом ИммуноКомб как содержащие HBsAg, совпадает с количеством образцов, выявленных референс-тестом Hepanostika и на один образец меньше, чем референс-тестом Monolisa. Количество образцов сероконверсионной панели, диагностированых тест-системами ИммуноКомб, превышает показатель референс-тестов. Все остальные тесты отставали от референс-тестов в определении положительных образцов этих панелей. Как видно из данных, представленных на рисунке 13 ИммуноКомб HBsAg 90’ диагностирует HBsAg в среднем на 1 сутки раньше, чем референс-тест Monolisa Ag HBs Plus. Все остальные тесты обнаруживают HBsAg, отставая от референс-теста, по крайней мере, на 2 суток.

Рисунок 13. Образцы сероконверсионной панели, определяемые каждым из тестов относительно референс-теста Monolisa Ag HBs Plus (0 соответсует первому образцу, определяемому референс-тестом)

Эффективность быстрых простых тестов по выявлению поверхностного антигена вируса Гепатита В не уступает аналогичным характеристикам ELISA тестов. ИммуноКомб диагностирует HBsAg на более ранних стадиях и в более низких концентрациях, чем другие участвующие в испытаниях тесты.

Данный диагностический препарат позволяет диагностировать антиген различных субтипов в концентрации 0,25 нг/мл и проводить индивидуальное и групповое тестирование.

В таблице 24 представлены результаты международных испытаний БПТ ИммуноКомб HBS AG 90' [13].

Таблица 24. Качество тестов ИммуноКомб HBS AG 90'

Автореферат диссертации по медицине на тему Алгоритм лабораторной диагностики вирусного гепатита C у доноров крови

На правах рукописи

ШУБИНА ЮЛИЯ ФЕДОРОВНА

АЛГОРИТМ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА

С У ДОНОРОВ КРОВИ

14.00.46 - клиническая лабораторная диагностика

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении выс: профессионального образования «Российский государственный медицин университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развит

доктор медицинских наук, профессор

Научно-исследовательский институт скорой помощи им. Н.В. Склифосов« Департамента здравоохранения г. Москвы.

диссертационного совета Д 208.072.08 при ГОУ ВПО РГМУ Росздрава по ад 117997, Москва, ул. Островитянова, д.1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО России! государственного медицинского университета по адресу: 117997, Москва, Островитянова, д.1.

Тогузов Руслан Тимофеевич

Семененко Татьяна Анатольевна

Кафарская Людмила Ивановна

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор

Вирусный гепатит С - кровяная вирусная инфекционная болезнь с контактным механизмом передачи. Она характеризуется преимущественным поражением печени и является социальнозначимой инфекционной патологией. На долю вирусного гепатита С в структуре вирусных гепатитов в нашей стране приходится от 5 до 15 % случаев [Онищенко Г .И., 2008].

Возбудитель заболевания - РНК-содержащий вирус. Источником инфекции являются люди, больные острым и хроническим гепатитом С, и вирусоносители. Вирус гепатита С (HCV) передается парентеральным путем. Один из способов передачи - трансмиссивное заражение при проведении гемотрансфузий.

Частота носительства возбудителя гепатита С у доноров крови достигает 7% [Дашкова Н.Г., Расницын С.П., и др., 2005]. Это обуславливает необходимость лабораторного тестирования крови доноров для выявления возможных вирусоносителей гепатита С и выбраковки гемопродукции, заготовленной от этих доноров.

Существовавший до последнего времени алгоритм лабораторной диагностики вирусного гепатита С в крови доноров включал определение антител к вирусу гепатита С путем иммуноферментного анализа и проведение подтверждающего теста - иммунологического блотинга, метода выявления антител к отдельным антигенам возбудителя. Проведенные в последнее время исследования [Дашкова Н.Г., 2006; Карслян JI.C., 2007] указывают на недостаточность использования данных методов. Они не обеспечивают максимальную безопасность реципиентов от заражения вирусным гепатитом С и не позволяют с высокой степенью надежности оценить возможность сохранения заготовленной гемопродукции от лиц, сомнительные результаты первичного обследования которых не связаны с указанным выше вирусом.

Поэтому разработка усовершенствованного алгоритма лабораторной диагностики вирусного гепатита С у доноров крови и ее компонентов является актуальной, так как адекватная схема диагностики снижает риск развития посттрансфузионного вирусного гепатита С у реципиентов, по результатам

лабораторных исследований решается вопрос о возможности использования заготовленной от донора гемопродукции, и способствует сохранению кадровых доноров.

Разработать рациональный алгоритм лабораторной диагностики вирусного гепатита С у доноров крови и ее компонентов в соответствии с современными достижениями в области лабораторных исследований для снижения риска его трансфузионно-трансмиссивной передачи.

1. Обобщить данные о риске развития посттрансфузионного вирусного гепатита С.

2. Провести мониторинг выявления вирусного гепатита С у доноров крови и ее компонентов в зависимости от используемых методов лабораторной диагностики.

3. Усовершенствовать алгоритм лабораторной диагностики вирусного гепатита С в крови доноров в соответствии с использованием современных доступных методов.

4. Разработать алгоритм выбраковки гемопродукции по результатам лабораторного обследования донорской крови на наличие маркеров вирусного гепатита С.

5. Оценить медико-экономическую эффективность внедрения разработанного алгоритма лабораторной диагностики вирусного гепатита С у доноров крови и ее компонентов.

Разработан алгоритм лабораторной диагностики вирусного гепатита С у доноров крови, впервые включающий процедуру повторного серологического контроля крови доноров с неоднозначными значениями по результатам первичного лабораторного скрининга и процедуру тестирования всех серонегативных на антитела к вирусу гепатита С образцов на наличие РНК вируса гепатита С (ПСУ). Разработан алгоритм выбраковки и использования заготовленной от доноров гемопродукции по итогам лабораторного

тестирования на наличие маркеров вирусного гепатита С. Рассчитаны уровни выявляемое™ вирусного гепатита С среди доноров крови г. Москвы за 20002008 гг. Рассчитан остаточный риск трансфузионно-трансмиссивной передачи вирусного гепатита С в г. Москве.

Практическая значимость исследования

Алгоритм лабораторной диагностики вирусного гепатита С у доноров крови, включающий повторное обследование доноров через 1-3 месяца и РНК-тестирование серонегативных на антитела к вирусу гепатита С (апй-НСУ) образцов сыворотки крови, снижает риск инфицирования реципиентов при переливании компонентов крови.

Предложенный алгоритм лабораторной диагностики вирусного гепатита С у доноров крови позволяет сократить количество ложноположительных результатов исследования и использовать гемопродукцию, заготовленную от неинфицированных доноров.

Разработанные методические основы вычисления остаточного риска трансфузионно-трансмиссивной передачи вирусного гепатита С могут быть использованы на станциях переливания крови.

Положения, выносимые на защиту

1. Введение повторного серологического контроля через 1-3 месяца крови доноров с неопределенными или сомнительными результатами скринингового лабораторного исследования на наличие маркеров вирусного гепатита С позволяет снизить риск инфицирования реципиентов при применении компонентов крови.

2. Внедрение тестирования крови доноров на наличие РНК вируса гепатита С позволяет уменьшить остаточный риск инфицирования гепатитом С потенциальных реципиентов.

3. Алгоритм лабораторной диагностики вирусного гепатита С в крови доноров, включающий повторное обследование доноров через 1-3 месяца и РНК-тестирование, позволяет увеличить безопасность гемотрансфузий и минимизировать получение ложноположительных результатов.

4. Разработанный алгоритм выбраковки гемопродукции по результатам лабораторного обследования донорской крови на наличие маркеров вирусного гепатита С позволяет сохранить пригодные к использованию компоненты крови.

5. Медико-экономическая эффективность внедрения разработанного алгоритма лабораторной диагностики вирусного гепатита С у доноров крови и ее компонентов заключается в снижении остаточного риска посттрансфузионного инфицирования ВГС, уменьшении заболеваемости в данном спектре патологии и сокращении затрат на лечение.

Внедрение результатов исследования

Методика расчета относительного риска развития трансфузионно-трансмиссивной передачи ВГС используется централизованной клинико-диагностической лабораторией станции переливания крови ДЗ. г. Москвы для оценки качества заготовленной гемопродукции.

Результаты полученные в ходе диссертационного исследования используются в процессе обучения врачей и биологов клинико-диагностических лабораторий на циклах усовершенствования и профессиональной переподготовки на кафедре клинической лабораторной диагностики ФУВ ГОУ ВПО РГМУ Росздрава.

Апробация состоялась 23 марта 2009 г. на совместном заседании кафедры клинической лабораторной диагностики ФУВ, ПНИЛ нуклеинового и белкового обмена ГОУ ВПО РГМУ Росздрава и централизованной клинико-диагностической лаборатории (ЦКДЛ) станции переливания крови Департамента здравоохранения г. Москвы.

По материалам диссертации опубликовано 9 печатных работ.

Личный вклад автора

Автор провел повторное серологическое обследование 99 доноров. При этом выполнил 256 исследований методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) и 58 методом линейного иммунологического блотинга. В период с 2005 по 2008 г выполнил 3250 исследований методом ИФА, 4826 методом хемилюминесцентного иммунохимического анализа на микрочастицах, 568 методом линейного иммунологического блотинга. Внедрил метод тестировании РНК HCV на анализаторе Cobas Amplicor, проанализировав при этом 4248 образцов сыворотки крови доноров. Провел мониторинг выявляемое™ вирусного гепатита С у доноров крови СПК ДЗ г. Москвы за 2000-2008 гг. Рассчитал остаточный риск трансфузионно-трансмиссивной передачи вирусного гепатита С в период до и после внедрения исследования крови доноров на наличие РНК HCV. Автором проведена статистическая обработка и анализ полученных результатов.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 113 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и библиографического списка, включающего 113 отечественных и 63 иностранных источника. Работа иллюстрирована И таблицами и 10 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена на кафедре КЛД ФУВ ГОУ ВПО РГМУ Росздрава (зав. кафедрой, д.м.н., проф. Р.Т. Тогузов). Практическая часть работы проводилась на базе централизованной клинико-диагностической лаборатории станции переливания крови ДЗ г. Москвы (главный врач - д.м.н., проф. Майорова О. А., зав. ЦКДЛ- к.м.н. Тарасенко О. А.).

В исследование включены образцы крови, полученные при аллогенных донациях цельной крови, процедурах тромбоцит- и плазмафереза, проведенных на станции переливания крови и в 15 отделениях переливания крови лечебно-профилактических учреждений ДЗ г. Москвы.

Всего исследовано 164522 образца от 84396 доноров.

Из исследования были исключены гемолизированные и хилезные образцы сыворотки крови. Всего исключено 74 образца.

Лабораторные исследования выполнены с соблюдением действующего законодательства по обеспечению контроля качества лабораторных исследований с использованием тест-систем и контрольных материалов, разрешенных к применению на территории РФ.

Выявление маркеров вирусного гепатита С проводилось с использованием следующих методов:

Ретроспективный анализа выявляемое™ вирусного гепатита С у доноров проведен с использованием базы данных единого донорского центра СПК ДЗ г. Москвы. Проанализированы 341952 карты доноров за период с 01.01.2000 по 31.12.2008 г.

Оригинальные данные для повторного анализа могут быть получены в информационной базе единого донорского центра г. Москвы и архиве ЦКДЛ станции переливания крови ДЗ г. Москвы.

Статистическая обработка результатов при оценке полученных данных проводилась общепринятыми методами математической статистики с использованием программы Statistica 6.0 (Statsoft, США) и статистического пакета программы Excel 2003 (Microsoft, США).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Лабораторная диагностика ВГС у доноров крови ее компонентов регламентирована Российским законодательством и направлена на обеспечение безопасности гемотрансфузии.

В 1996 году в систему скрининга донорской крови на наличие трансфузионно-трансмиссивных инфекций было внедрено исследование на антитела к вирусу гепатита С. С этого момента произошло значительное совершенствование методов и алгоритмов лабораторной диагностики, усовершенствование методик и переход на автоматические методы анализа.

К началу данного исследования алгоритм лабораторной диагностики ВГС у доноров крови включал две постановки ИФА на наличие anti-HCV. Первая постановка проводилась для всех без исключения исследуемых образцов, вторая постановка проводилась в тот же день при получении положительных или сомнительных результатов для исключения технических ошибок анализа и

увеличения надежности полученных данных. Для подтверждения наличия инфекции, все положительные в двух постановках ИФА образцы дополнительно тестировались более чувствительным методом линейного иммунохимического блотинга для определения антител к специфическим белкам НСУ.

Основная задача при обследовании доноров на вирусные инфекции -снижение вероятности инфицирования потенциальных реципиентов. Современное законодательство регламентирует определение в крови доноров уровня АЛТ и антител к вирусу гепатита С, однако они не являются универсальными маркерами заболевания.

На каждом этапе развития инфекционного процесса присутствуют различные маркеры вирусного гепатита С, как неспецифические АЛТ, так и специфические - антитела к НСУ, вирусная РНК (рисунок 1).

Рисунок 1. Маркеры вирусного гепатита С в различные периоды инфекционного процесса.

проводить комплексное исследование маркеров ВГС крови доноров с использованием различных методов, искать новые подходы и алгоритмы лабораторной диагностики.

Процедура повторного серологического контроля

Длительность периода (в среднем 66 дней) сероконверсии, то есть периода от момента заражения до выявления апй-НСУ при вирусном гепатите С и аналитическая ограниченность современных методов лабораторной диагностики привели к необходимости поиска и внедрения новых подходов при скрининге донорской крови на ВГС. В частности, была предложена процедура повторного серологического контроля доноров.

Появление сомнительных результатов может быть связано с недостаточным уровнем антител у инфицированных пациентов на данном этапе заболевания, или наличием перекрестных реакций с другими антигенами при отсутствии выявляемой патологии. Повторное обследование доноров через промежуток времени от 1 до 3 месяцев значительно повышает вероятность появления определяемого уровня апй-НСУ у лиц с наличием инфекции.

которые расценивались как неспецифическая реакция на апИ-НСУ. Эти лица также были отстранены от донорства и направлены на клиническое обследование.

Эффективность внедрения повторного лабораторного обследования доноров на наличие маркеров вирусного гепатита С представлена на рисунке 2.

Неспецифическая реакция на апй'-НСУ 24%

Рисунок 2. Результаты повторного серологического контроля на маркеры ВГС.

После клинического обследования 24 доноров с неспецифической реакцией, двум из них был поставлен диагноз ВГС, у остальных диагноз остался неопределенным.

Результаты лабораторного исследования определяют алгоритм

дальнейшего использования заготовленной гемопродукции. Из всех

компонентов крови наибольший срок годности имеет свежезамороженная

плазма. Она подвергается глубокой заморозке и обязательному хранению

(карантинизации) до 3-х месяцев. По результатам проведенного повторного

серологического контроля плазма 70 доноров с отрицательной серологической

реакцией на ВГС была карантинизирована и впоследствии реализована, плазма

остальных 29 доноров забракована и утилизирована.

Внедрение процедуры повторного серологического контроля позволило в 2007 году возвратить в донорский контингент 70 человек, у которых был получен отрицательный результат в ходе обследования на antí-HCV, что составило 0,19 % от общего числа (37250) доноров плазмы и крови. Плазма крови этих доноров была использована для гемотрансфузии.

В то же время, доноры с положительной реакцией на anti-HCV (5 человек, 0,013%) получили абсолютный отвод от донорства, а все компоненты крови были утилизированы.

Согласно алгоритму, который использовался ранее, и был регламентирован приказами Минздрава РФ, карангинизированные и не подлежащие карантинизации компоненты крови доноров с сомнительными результатами исследований на ВГС могли быть использованы для реципиентов.

Читайте также: