Пробирки для крови на вирусную нагрузку

Взятие, доставку и оформление материалов для проведения лабораторных исследований методом ИФА на ВИЧ-инфекцию и СПИД - индикаторные заболевания, для проведения лабораторных исследований методом ПЦР на ВИЧ - инфекцию, вирусные гепатиты В и С, а также для иммунологических исследований в КДЛ ГБУЗ РЦПБ СПИД и ИЗ производить строго в соответствии с правилами (приложение 1, 2, 3).

Наиболее частыми нарушениями указанных правил являются следующие:

1) при оформлении сопроводительной документации не указывается наименование диагностической тест-системы, ее серия, срок годности

2) не полностью указываются паспортные данные обследуемых, а также дата и место взятия материала

3) зачастую в лабораторию ГБУЗ РЦПБ СПИД и ИЗ доставляется материал, уже непригодный для исследования: сыворотки, хранившиеся дольше установленного срока хранения (для разных методов исследования сроки хранения составляют от 3 до 48 часов); проросшие, гемолизированные сыворотки, в недостаточном для исследования количестве (в зависимости от метода минимально необходимый объем материала составляет от 2 до 5 мл);

4) номера, проставленные на флаконах, не соответствуют указанным в направлении; количество проб крови не соответствует количеству, указанному в направлении;

5) неправильно производится взятие материала, в пробах крови, доставляемых для исследований методом ПЦР и для иммунологические исследований, обнаруживаются сгустки,

6) при заборе материала не всегда медицинский персонал ЛПУ обращает внимание на сроки годности пробирок.

Правила взятия и доставки крови для проведения лабораторных исследований методом ИФА на ВИЧ-инфекцию и СПИД-индикаторные заболевания.

Взятие крови производится из локтевой вены в чистую сухую пробирку в количестве 3-5 мл. У новорожденных можно брать пуповинную кровь с указанием об этом в направлении. Полученный материал не рекомендуется хранить более 12 часов при комнатной температуре и более 1 суток в холодильнике при +4-8 0С. Наступающий гемолиз может повлиять на результаты анализа. В случае невозможности доставки материала в течение суток следует сразу после взятия крови отобрать из нее сыворотку. Сыворотка отделяется центрифугированием. Отделенная сыворотка переносится в чистую (лучше стерильную) пробирку, флакон или пластиковый контейнер, и в таком виде она может храниться до 7 дней при температуре +4-8 0С. На пробирке следует указать порядковый номер, фамилию и инициалы пациента, в строгом соответствии с направлением. Для транспортировки в КДЛ диагностики ВИЧ штативы с пробирками помещают в термоконтейнер, легко подвергающийся дезинфекции. Полученный материал в КДЛ диагностики ВИЧ доставляет медицинский персонал, прошедший специальный инструктаж в установленном порядке.

Утв. МЗ СССР от 05.09.1988 г. №690

Направление №__________________

на исследование образца крови в ИФА на ВИЧ-инфекцию

В_________________________________________________________
(наименование учреждения)

Должность лица, направляющего материал___________________________________

Взятие материала для исследования производить только при предъявлении пациентами паспорта или иного документа, удостоверяющего его личность (кроме анонимного обследования).

Коды контингентов

Наименование кода

код

Доноры (крови, биологических жидкостей, органов и тканей)

Медицинский персонал, работающий с ВИЧ - инфицированными лицами и инфицированным материалом

Гомо- и бисексуалисты

Больные заболеваниями, передающимися половым путем

Лица, находящиеся в местах лишения свободы

Обследованные по клиническим показаниям

Беременные (доноры плацентарной и абортной крови)

Обследованные при эпидемиологическом расследовании

Для лабораторий диагностики ВИЧ-инфекции в обменном журнале и направлении обязательно дополнительно указываются результаты исследования (ОП сыворотки, ОП критическое), а также дата постановки, название, серия, срок годности используемой тест-системы.

Правила взятия, хранения и доставки материала для проведения исследований методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

В направлении должны быть четко указаны: учреждение, направившее материал, Ф.И.О. (полностью), год рождения, код контингента, домашний адрес, дата, точное время и место взятия материала, фамилия и подпись ответственного лица с указанием номера контактного телефона.

Правила взятия и доставки материала для проведения иммунологических исследований.

Материал должен быть доставлен в лабораторию сразу после взятия. Недопустимо замораживание биологического материала. Флаконы должны быть четко промаркированы с указанием фамилии пациента, даты и времени взятия. Маркировка флаконов должна строго соответствовать данным, указанным в направлении.

В направлении должны быть четко указаны: учреждение, направившее материал, Ф.И.О. (полностью), год рождения, код контингента, домашний адрес, дата, время и место взятия материала, фамилия и подпись ответственного лица с указанием номера контактного телефона.

Пластиковые стерильные вакуумные пробирки для получения плазмы и проведения анализов методами молекулярной диагностики используются для взятия проб крови, пробоподготовки, транспортировки и хранения образца неразбавленной плазмы.

Вакуумные пробирки для получения плазмы и проведения анализов методами молекулярной диагностики имеют крышку жемчужно-белого цвета и применяются для определения вирусной нагрузки при ВИЧ-инфекции и вирусных гепатитах. Они также используются для проведения анализов методами молекулярной диагностики, например, ПЦР. Такие пробирки идеально подходят в случае необходимости хранения и транспортировки плазмы. Вакуумные пробирки для получения плазмы и проведения анализов методами молекулярной диагностики содержат антикоагулянт К₂ ЭДТА в виде порошка, распыленного на стенках пробирки. Концентрация антикоагулянта в образце — 1.8 мг/мл при полном заполнении кровью объема, указанного на этикетке. В пробирках также содержится полиэстерный гель, позволяющий отделить плазму от клеток крови во время центрифугирования. Супернатант (плазма) практически свободен от эритроцитов и гранулоцитов, концентрация лимфоцитов и моноцитов в нем незначительна. Следует отметить, что в плазме, приготовленной в таких пробирках, концентрация тромбоцитов может быть выше, чем в цельной крови.

Преимущества использования вакуумных пробирок для получения плазмы и проведения анализов методами молекулярной диагностики:

возможность хранения образца в первичной пробирке;
повышается качество образца за счет более полного осаждения клеток крови;
повышается воспроизводимость результатов анализов РНК вирусов СПИД и гепатита;
снижается риск контаминации образца в стерильных закрытых пробирках;
повышается безопасность медицинских работников за счет исключения контакта с кровью пациента.

Взятие образца и пробоподготовка.

Кровь в вакуумные пробирки для получения плазмы и проведения анализов методами молекулярной диагностики берется из вены с помощью вакуумной системы.
Сразу же после заполнения пробирки и извлечения ее из держателя кровь необходимо тщательно перемешать с антикоагулянтом во избежание образования микросгустков. Для этого пробирку следует аккуратно перевернуть 8-10 раз. Нельзя встряхивать пробирку, так как это может вызвать пенообразование и гемолиз.
Образец до центрифугирования следует хранить при комнатной температуре не более 2-х часов, вдали от солнечного света и отопительных приборов.
Центрифугировать образец крови в вакуумных пробирках для получения плазмы и проведения анализов методами молекулярной диагностики нужно в течение 10 минут при относительной центробежной силе 1100 g при комнатной температуре. Если до центрифугирования пробирка хранилась в холодильнике, ее следует нагреть до комнатной температуры, поскольку динамические свойства геля ухудшаются при низких температурах. Во время центрифугирования формируется устойчивый гелевый барьер между слоем клеток и плазмой. Эритроциты и лимфоциты остаются под слоем геля, а плазма с тромбоцитами над ним.
Для дальнейшего исследования неразбавленной плазмы необходимо снять с пробирки крышку и осторожно перелить плазму во вторичную пробирку или перенести ее с помощью пипетки, не нарушая целостности гелевого барьера.

При использовании вакуумных пробирок для получения плазмы и проведения анализов методами молекулярной диагностики плазму после центрифугирования можно транспортировать непосредственно в первичной пробирке. Важно помнить, что поскольку при центрифугировании не все форменные элементы осаждаются полностью и часть их остается в плазме, продукты продолжающегося метаболизма клеток крови могут оказать влияние на показатели и свойства исследуемых аналитов. Поэтому при выборе условий хранения и транспортировки плазмы в вакуумных пробирках для получения плазмы и проведения анализов методами молекулярной диагностики следует придерживаться международных и российских рекомендаций для конкретных аналитов.

Плазму в вакуумных пробирках для получения плазмы и проведения анализов методами молекулярной диагностики можно хранить в замороженном виде при -70°C. В пробирках стабильность РНК вируса СПИД и вируса гепатита С сохраняется в течение 72 часов при комнатной температуре.

Чтобы результаты тестирования на ВИЧ получились достоверными, важна правильная подготовка к исследованию. Иногда анализ показывает наличие вируса, хотя на самом деле его нет. Это называется ложноположительным результатом. Количество ошибочных результатов зависит от точности применяемого метода тестирования. Для иммунохроматографического метода (тест-полоски) количество ложноположительных результатов доходит до 5%, для ИФА — менее 1%. Иммуноблот выполняется только для подтверждения ИФА или при сомнительных результатах ИФА.

При неправильной подготовке количество ложноположительных результатов увеличивается. Чтобы избежать ошибочного результата, важно знать, как подготовиться к сдаче теста на ВИЧ.

Процедура сдачи крови для анализа на ВИЧ

Сбор крови для теста на ВИЧ ничем не отличается от обычного. Для проведения исследования необходима венозная кровь. Кожа обрабатывается антисептиком, затем медсестра вводит иглу в вену. Обычно забор крови из вены производится в локтевой ямке, реже — из вены на предплечье. В обоих случаях это не больно.

В современных системах шприц с поршнем не нужен: кровь поступает из иглы непосредственно в пробирку за счет вакуума. После того, как набралось необходимое количество крови, медсестра убирает пробирку и вынимает иглу из вены. Место зажимают стерильной повязкой. На этом процедура сдачи крови для анализа заканчивается.

Причины ложноположительных результатов

При ИФА исследуются антитела, вырабатывающиеся в организме в ответ на антигены ВИЧ.

Чувствительность метода – способность определить антиген при его наличии – составляет до 99,5%
Специфичность метода – способность определить именно искомый антиген – до 99,9%.

В некоторых ситуациях частота ложноположительных результатов возрастает. Это происходит, если в организме есть антитела, похожие на антитела к ВИЧ. Такое может случиться:

при наличии аутоиммунных заболеваний;
в состояниях после трансплантации органа;
при острых вирусных инфекциях;
во время беременности;
после вакцинации от вирусных инфекций;
после участия в испытаниях вакцины против ВИЧ.

Также к ложноположительному результату могут привести технические ошибки при выполнении анализа в лаборатории, несоблюдения рекомендаций по подготовке к тестированию. Поэтому каждый положительный результат исследования на ВИЧ требует дополнительной проверки!

Подготовка к сдаче анализа на ВИЧ

Результаты исследования во многом зависят от правильной подготовки к нему. Информация о том, что можно и нельзя делать перед анализом, поможет повысить достоверность результатов и избежать нервотрепки от повторного исследования.

Многие люди после визита в лабораторию отправляются на работу или по делам, не имея возможности позавтракать после забора крови. Поэтому самый частый вопрос к врачу перед исследованием — можно ли есть перед анализом на ВИЧ? Дело в том, что после приема пищи питательные вещества всасываются в тонком кишечнике и меняют состав крови. Жиры, всосавшиеся из еды, делают сыворотку мутной. Такая ситуация называется хилез. При нем работа с сывороткой значительно затрудняется. Поэтому от жирной еды необходимо отказаться уже вечером накануне исследования — возможен легкий ужин с пониженным содержанием жиров. Также прием пищи изменяет уровень гормонов, что косвенно влияет на результат. Поэтому сдавать анализ нужно после 8-14 часов полного голода. Чистую воду можно пить как обычно. После забора крови есть можно сразу.

Курение влияет на синтез гормонов стресса и изменяет уровень некоторых веществ в организме. Все это косвенно влияет на исследование. Поэтому курить перед анализом нельзя как минимум час, лучше — 8 часов и дольше.

Алкоголь вносит изменения в метаболизм как немедленно, так и отсрочено. Поэтому употребление алкоголя и напитков, в составе которых он содержится, следует прекратить как минимум за 3 дня до анализа.

Во время острого заражения любым вирусом, например, гриппом или ОРВИ, в организме происходит синтез антител к нему. Если в это время выполнить тестирование, то антитела против безобидного вируса могут быть распознаны как антитела против ВИЧ. Поэтому анализ для обнаружения антител к ВИЧ не рекомендуется в период вирусной нагрузки.

Стресс, переутомление, плохое питание влияют на синтез кортизола и других гормонов, что может исказить результат. Поэтому перед исследованием на ВИЧ рекомендуется снизить влияние этих факторов. Повышенная физическая нагрузка также вызывает синтез гормона стресса, поэтому накануне исследования спорт рекомендуют исключить.

Страх перед тестированием на ВИЧ: как подготовиться морально

Современный мир трактует новые условия нашей жизни. Появление ВИЧ – инфекции ставит перед человеком вопросы, на которые бывает неудобно, либо страшно отвечать. А в общем, сегодня каждый человек должен знать свой ВИЧ – статус.

У нас всегда есть выбор. И подумав, каждый человек должен понять, что безопасность его жизни, в первую очередь, зависит от него, что пойти и сдать анализ на ВИЧ-инфекцию – это поступок взрослого человека. Знать свой ВИЧ-статус – это нормально и важно.

Волнение перед исследованием — нормальное чувство. Паника может заставить отказаться от похода к врачу из-за страха перед результатом, особенно, если накануне был риск заражения ВИЧ. В такой ситуации важно понимать, что лучше провериться и как можно раньше и быть спокойным за свое здоровье и близких. Даже если результат положительный, своевременно выявленное заболевание и принятые меры позволяют жить полноценной жизнью.

Пройди тест на ВИЧ и спи спокойно!

На любом этапе диагностики ВИЧ человеку очень важна поддержка. Недостаточная информированность о проблеме может приводить к принятию неверных решений. Если человек не может получить очную консультацию, на помощь могут прийти специалисты телефона доверия по номеру (343) 310-00-31. Телефон доступен в будни, с 9 до 20 часов. Помощь оказывается анонимно.

Полный текст:

к.м.н., врач-эпидемиолог, врач клинической лабораторной диагностики, КУ ХМАО-Югры Сургутский Центр по профилактике СПИД, г. Сургут, Россия

1. Бышевский А.Ш., Галян С.Л., Терсенев О.А. Биохимические сдвиги и их оценка в диагностике патологических состояний. М.: Медицинская книга, 2002. 318 с. [Byshevskiy A.Sh., Galyan S.L., Tersenev O.A. Biokhimicheskie sdvigi i ikh otsenka v diagnostike patologicheskikh sostoyanii [Biochemical changes and their evaluation in the diagnosis of pathological states]. Moscow: Medical book, 2002, 318 p.]

2. Alireza A., Tahereh S. Hyperhomocysteinemia in HIV-infected individuals: correlation of a frequent prothrombotic factor with CD4+ cell count. Oman. Med. J., 2012, vol. 27, no. 3, pp. 224–227. doi: 10.5001/omj.2012.50

3. Beisel W.R., Sawyer W.D., Ryll E.D., Crozier D. Metabolic effects of intracellular infections in man. Ann. Internal Med., 1967, vol. 67, pp. 744–779. doi:10.7326/0003-4819-67-4-744

4. Everitt E., Sundquist B., Philipson L. Mechanism of the arginine requirement for adenovirus synthesis // I. Synthesis of structural protein. J. Virol., 1971, vol. 8, pp. 742–753.

5. Fafournoux P., Bruhat A., Jousse C. Amino acid regulation of gene expression. Biochem. J., 2000, vol. 351, no. 1, pp. 1–12.

6. Fuchs D., Möller A.A., Reibnegger G., Stöckle E., Werner E.R., Wachter H. Decreased serum tryptophan in patients with HIV-1 infection correlates with increased serum neopterin and with neurologic/psychiatric symptoms. J. Acquir. Immune Defic. Syndr., 1990, vol. 3, no. 9, pp. 873–876.

7. Grunfeld C., Feingold K. Metabolic disturbances and wasting in the acquired immunodeficiency syndrome. N. Engl. J. Med., 1992, vol. 327, no. 5, pp. 329–37. doi:10.1056/neim199207303270506

8. Guo F., Cen S., Niu M., Javanbakht H., Kleiman L. Specific inhibition of the synthesis of human Lysyl-tRNA synthetase results in decreases in tRNALys incorporation, tRNALys annealing to viral RNA, and viral infectivity in human immunodeficiency virus type 1. J. Virol., 2003, vol. 77, no. 18, pp. 9817–9822.

9. Hortin G.L., Landt M., Powderly W.G. Changes in plasma amino acid concentrations in response to HIV-1 infection. Clin. Chem., 1994, vol. 40, no. 5, pp. 785–789.

10. Ikeda K., Yamasaki H., Suzuki Y., Hajime K.A., Arakawa T. Novel strategy with acidic arginine solution for the treatment of influenza a virus infection (Review). Exp. Ther. Med., 2010, vol. 1, no. 2, pp. 251–256. doi: 10.3892/etm_00000039

11. Inglis V.B.M. Requirement of arginine for the replication of herpes virus. J. Gen. Virol., 1968, vol. 3, pp. 9–17. doi: 10.1099/0022-1317-3-1-9

12. The GAP Report. Joint United Nations Programme on HIV/AIDS (UNAIDS), 2014, 422 p.

13. Kilberg M.S., Hutson R.G., Laine R.O. Amino acid-regulated gene expression in eukaryotic cells. FASEB J., 1994, vol. 8, no. 1, pp. 13–19.

14. Kotler D.P., Tierney A.R., Wang J., Pierson R.N. Magnitude of body-cell-mass depletion and the timing of death from wasting in AIDS. Am. J. Clin. Nutr., 1989, vol. 50, pp. 444–447.

15. Laurichesse H., Tauveron I., Gourdon F., Cormerais L., Champredon C., Charrier S., Rochon C., Lamain S., Bayle G., Laveran H., Thieblot P., Beytout J., Grizard J. Threonine and methionine are limiting amino acids for protein synthesis in patients with AIDS.J. Nutr., 1998, vol. 128, no. 8, pp. 1342–1348.

16. Loh P.C., Oie H.K. Role of lysine in the replication of reovirus: I. Synthesis of complete and empty virions. J. Virol., 1969, vol. 4, no. 6, pp. 890–895.

17. Lukasheva E.V., Berezov T.T. L-Lysine alpha-oxidase: physico-chemical and biological properties. Biochemistry, 2002, vol. 67, no. 10, pp. 1394–1402.

18. Maeda J., Higashiyama M., Imaizumi A., Nakayama T., Yamamoto H., Daimon T., Yamakado M., Imamura F., Kodama K. Possibility of multivariate function composed of plasma amino acid profiles as a novel screening index for non-small cell lung cancer: a case control study. BMC Cancer, 2010, vol. 10, p. 690. doi: 10.1186/1471-2407-10-690

19. Naito T., Irie H., Tsujimoto K., Ikeda K., Arakawa T., Koyama A.H. Antiviral effect of arginine against herpes simplex virus type 1. Int. J. Mol. Med., 2009, vol. 23, no. 4, pp. 495–499. doi: 10.3892/ijmm_00000156

20. Pisters P.W., Brennan M.F. Amino acid metabolism in human cancer cachexia. Review. Annu. Rev. Nutr., 1990, vol. 10, pp. 107–132. doi: 10.1146/annurev.nu.10.070190.000543

21. Schneider R.J., Shenk T. Impact of virus infection on host cell protein synthesis. Annu. Rev. Biochem., 1987, vol. 56, pp. 317–332. doi: 10.1146/annurev.bi.56.070187.001533

22. Sherman I.W. Amino acid metabolism and protein synthesis in malarial parasites. Bull. World Health Organ., 1977, vol. 55, no. 2–3, pp. 265–276.

23. Tankersley R.W. Amino acid requirements of herpes simplex virus in human cells. J. Bacteriol., 1964, vol. 87, pp. 609–613.

24. Tisne C., Roques B.P., Dardel F. The annealing mechanism of HIV-1 reverse transcription primer onto the viral genome. J. Biol. Chem., 2004, vol. 279, no. 5, pp. 3588–3595.

25. Wannemacher R.W.Jr. Key role of various individual amino acids in host response to infection. Am. J. Clin. Nutr., 1977, vol. 30, no. 8, pp. 1269–1280.

26. Wannemacher R.W.Jr., Pekarek J.R., Bartelloni P.J., Vollmer R.T., Beisel W.R. Changes in individual plasma amino acids following experimentally induced sand fly fever virus infection. Metabolism, 1972, vol. 21, no. 1, pp. 67–76. doi: 10.1016/0026-0495(72)90021-2

27. Wheeler D.A., Gibert C.L., Launer C.A., Muurahainen N., Elion R.A., Abrams D.I., Bartsch G.E. Weight loss as a predictor of survival and disease progression in HIV infection. J. Acquir. Immune Defic. Syndr. Hum. Retrovirol., 1998, vol. 18, pp. 80–85.

28. Wigand R., Kümel G. Amino acid requirement of adenovirus multiplication. J. Gen. Virol., 1978, vol. 39, pp. 281–292. doi:10.1099/0022-1317-39-2-281

29. Yamasaki H., Tsujimoto K., Koyama A.H., Ejima D., Arakawa T. Arginine facilitates inactivation of enveloped viruses. J. Pharm. Sci., 2008, vol. 97, no. 8, pp. 3067–3073. doi: 10.1002/jps.21224

Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.

Для чего в пробирке гель?

Сашков В. А., к. биол. наук, доцент МПГУ им. В. И. Ленина

Ковалевская С. Н., ассистент СПб ГМУ им ак. И. П. Павлова

Непременным условием, гарантирующим получение достоверных результатов лабораторных анализов, является сохранение первичных аналитических характеристик взятых для исследования образцов венозной крови. Исключить влияние преаналитических факторов возможно, используя стандартизованные методы взятия, транспортировки и хранения проб. Одним из современных вариантов повышения качества лабораторных анализов является использование закрытого способа взятия венозной крови в вакуумные пробирки с разделительным гелем.

Гелевые технологии впервые были использованы в вакуумных пробирках Бектон Дикинсон для взятия крови еще в 1970 году и позволяют значительно сократить количество ошибок на преаналитическом этапе. Кроме того, образцы крови в таких пробирках легко транспортировать и хранить длительное время, что особенно актуально в условиях централизации лабораторных исследований.

Важным преимуществом геля является тот факт, что при центрифугировании он формирует стабильный барьер между супернатантом и остальными компонентами крови (сгусток, клетки). Это позволяет не только сохранить стабильность аналитов в пробе без необходимости использования вторичных пробирок, но также существенно увеличить срок хранения образцов.

Важным аспектом при работе с гелевыми пробирками является соблюдение рекомендуемой скорости, времени и температурного режима (25°С) при центрифугировании, использование центрифуг с нефиксированным углом ротора, а также не позднее чем через 2 часа после взятия крови. Соблюдение этих простых правил обеспечит формирование качественного гелевого барьера между супернатантом и клетками крови. После центрифугирования пробы крови в пробирках с гелем могут быть заморожены для последующего архивного хранения. Для этих целей пробирки охлаждаются до +4°С в течение 2 ч и после этого производится замораживание со скоростью −0,5°С/мин до -20°С или -70°С.

Для получения образца сыворотки высокого качества с возможностью удобной и безопасной транспортировки образца, была создана пробирка с активатором свертывания и разделительным гелем. Кремнезем (активатор свертывания крови) нанесен напылением на внутренние стенки пробирки и обеспечивает ускоренное формирования сгустка за 30 минут, а также и увеличивает выход сыворотки, по сравнению с обычными пробирками для сыворотки с красной крышкой. Инертный разделительный гель на основе акрила может быть расположен под углом ко дну пробирки, что существенно повышает эффективность сепарации. Получаемая в таких пробирках сыворотка отличается более продолжительной стабильностью аналитов, снижением вероятности образования фибринового сгустка в сыворотке, а также частоты возникновения гемолиза в процессе транспортировки.

Для лабораторий экспресс-диагностики особенно важным является скорость получения результата. Однако при попытке ускорить процедуру обработки проб у лаборантов может возникнуть искушение пренебречь рекомендуемым минимальным временем свертывания крови.

В таком случае, после центрифугирования пробирок с не полностью свернувшейся кровью в сыворотке могут образовываться нити или даже сгустки фибрина, которые могут исказить результаты анализов. Это ведет к необходимости повторного взятия крови, а нередко и к дорогостоящему ремонту лабораторного оборудования. Для решения этих задач были разработаны пробирки для ускоренного получения сыворотки, в которых в качестве активатора свертывания используется тромбин. Время свертывания крови в этих пробирках составляет рекордные 5 минут, а сыворотка получается более чистой и качественной.

Помимо лабораторий экспресс-диагностики, высокая потребность использования пробирок с тромбином и гелем может иметься у пациентов, находящихся на терапии антикоагулянтами. Получение качественной сыворотки для биохимических анализов у таких пациентов является непростой задачей ввиду присутствия в крови экзогенных антикоагулянтов и “желирования” получаемых образцов крови. Использование тромбина в качестве активатора свертывания крови позволяет получить качественный образец крови и избежать повторных взятий крови и связанных с этим дополнительных расходов на анализы.

При проведении биохимических и других видов анализов в ЛПУ зачастую также возникает необходимость проведения экспресс-анализов плазмы, с возможным последующим архивным хранением проб. Для этих целей были разработаны пробирки с гепарином лития и гелем. Использование плазмы для рутинных биохимических тестов позволяет также уменьшить время ожидания образования сгустка при использовании сыворотки. Дополнительным преимуществом использования плазмы перед сывороткой является ее больший выход из одного и того же объема крови и меньший риск образования нитей фибрина в образце. Плазма также может являться предпочтительным видом образца для проведения биохимических исследований крови у пациентов, находящихся на антикоагулянтной терапии.

Обработка проб крови при проведении анализов на вирусную нагрузку зачастую требует получение образцов неразведенной плазмы высокого качества, пригодной для сверхчувствительных методов анализа. При проведении анализов на ВИЧ, сифилис, гепатит, при исследовании крови доноров в банках крови на инфекции немаловажным является не только возможность транспортировки и кратковременного хранения плазмы после центрифугирования, но также ее длительное хранение в замороженном виде. Для этих целей была разработана пробирка с К2ЭДТА и разделительным гелем. Плазма, полученная в этих пробирках практически свободна от эритроцитов и гранулоцитов, концентрация моноцитов и лимфоцитов в ней незначительна, а концентрация тромбоцитов может быть выше, чем в цельной крови. После центрифугирования эритроциты и лимфоциты остаются под слоем геля, а плазма с тромбоцитами сверху над ним. При использовании таких пробирок плазму после центрифугирования можно транспортировать непосредственно в первичной пробирке. При этом важно помнить, что замораживание плазмы недопустимо при проведении некоторых видов анализов (для определения вирусной нагрузки при ВИЧ-инфекции вследствие повреждения РНК вирусов в ходе замораживания/оттаивания пробы).

Таким образом, можно с уверенностью констатировать, что гелевые технологии значительно сокращают время на получение качественных образцов крови для различных лабораторных анализов, позволяют получить высококачественные пробы и решить проблему их транспортировки и длительного хранения пробы, сократить ТАТ, что особенно актуально в условиях централизации лабораторных исследований.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — экспериментальный метод молекулярной биологии, способ значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе).

В основе метода ПЦР лежит многократное удвоение определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). В результате нарабатываются количества ДНК, достаточные для визуальной детекции. При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце.

Кроме простого увеличения числа копий ДНК (этот процесс называется амплификацией), ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с генетическим материалом (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК), и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов.

ПЦР позволяет диагностировать наличие долго растущих возбудителей, не прибегая к трудоёмким микробиологическим методам, что особенно актуально в гинекологии и урологии при диагностике урогенитальных инфекций, передающихся половым путем (ИППП).

Также, этим методом проводят диагностику вирусных инфекций, таких как гепатиты, ВИЧ и др. Чувствительность метода значительно превосходит таковую у иммунохомических и микробиологических методов, а принцип метода позволяет диагностировать наличие инфекций со значительной антигенной изменчивостью.

Специфичность ПЦР при использовании технологии PCR даже для всех вирусных, хламидийных, микоплазменных, уреаплазменных и большинства других бактериальных инфекций достигает 100%. Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР-диагностика обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно.

Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях.

Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т. д.). В урологической и гинекологической практике - для выявления хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, герпеса, гарднереллёза, микоплазменной инфекции, ВПЧ - вирусов папилломы человека; в пульмонологии - для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, туберкулёза; в гастроэнтерологии - для выявления хеликобактериоза; в клинике инфекционных заболеваний - в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллёза, дифтерии, вирусных гепатитов В, С и G; в гематологии - для выявления цитомегаловирусной инфекции, онковирусов.

Специфичность ПЦР основана на образовании комплементарных комплексов между матрицей и праймерами - короткими синтетическими олигонуклеотидами длиной 18 - 30 букв. Каждый из праймеров сопоставим (комплементарен) с одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка.

После соединения (гибридизации) матрицы с праймером (отжиг), последний служит затравкой для ДНК-полимеразы при синтезе комплементарной цепи матрицы.

ПЦР-исследования выполняют на амплификаторе CFX-96 Touch – это многофункциональный высокоскоростной Real Time амплификатор, позволяющий проводить мультиплексный анализ до 5 мишеней в 96 пробах одновременно. Амплификатор CFX-96 создан на основе амплификатора С1000 Touch и шестиканального оптического реакционного модуля CFX-96.

Вид биологического материала

ДНК Бордетелла пертуссис (Bordetella pertussis)

Мазки с задней стенки глотки

ДНК Вируса Эпштейна-Барр (EBV)

Слюна, моча, соскобы из уретры, цервикального канала, заднего свода влагалища, мононуклеарная фракция клеток периферической крови

ДНК Цитомегаловируса (CMV)

РНК Энтеровирусов (Enterovirus)

Спинномозговая жидкость(ликвор), фекалии

РНК Вирусного гепатита А (HAV) качественное исследование