Набор для определения антигенов вирусов гриппа а и в

При малейшем подозрении на инфекции быстрота, высокая чувствительность и специфичность экспресс-тестов позволяет получить быстрый ответ и принять срочные меры. Тесты основаны на иммунохроматографической идентификации антител, вырабатываемых в ответ на присутствие возбудителя или на непосредственном определении антигенов бактерий и вирусов.

VEDALAB, Франция

Регистрационное удостоверение № ФСЗ 2009/05725.

Аденовирус тест
(Adenovirus Test
(Adeno-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения антигена аденовируса в фекалиях. 100% корреляция результатов с MERIDIAN ИФА тестом. Время анализа 15 мин

Грипп В тест
(Influenza B Test
(Influenza B-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения вируса гриппа В в носоглоточных выделениях. Чувствительность 25 нг/мл для штамма B/Hong Kong 5/72, 50 нг/мл для штамма B/Qingdao/102/91, 500 нг/мл для штамма B/Victiria/504/00 и 25 нг/мл для штамма B/Tokio/53/99. Специфичность 100%. Время анализа 15 мин

Грипп А + В двойной тест
(Duo Influenza A + B Test
(Duo Influenza A+B-Check-1))

Двойной экспресс-тест для качественного одновременного определения вирусов гриппа А и гриппа В в носоглоточных выделениях. Чувствительность и специфичность соответствуют индивидуальным тестам. Время анализа 15 мин

Инфекционный мононуклеоз тест
(Infectious Mononucleosis Test
(IM-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения гетерофильных антител (IgМ) при ИМ в сыворотке, плазме и цельной крови. Чувствительность 12,5 Ед/мл, или 88,2%, и специфичность 75,7%. Время анализа 5–10 мин

Ротавирус тест
(Rotavirus Test
(Rota-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения антигена ротавируса
в фекалиях. 100% чувствительность и специфичность. Время анализа 10 мин

Ротавирус / Аденовирус двойной тест
(Duo Rota / Adenovirus Test
(Duo Rota-Adenovirus-Check-1))

Двойной экспресс-тест для одновременного качественного опреде-
ления антигенов ротавируса и аденовируса в фекалиях. Чувстви-
тельность и специфичность соответствуют индивидуальным тестам. Время анализа 10 мин

Столбнячный тест
(Tetanus Test
(Tetanus-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения антистолбнячных
антител в пробах сыворотки, плазмы или цельной крови. Пороговая чувствительность 0,1 МЕ/мл. Специфичность 100%. Время анализа 10–15 мин. Тест для оценки необходимости вакцинации

Стрептококк А тест
(Strep A Test
(Strep A-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения антигенов стрептококка А в мазках из зева. Чувствительность 91,80%, специфичность 97,70% от культурального метода. Время анализа 5–10 мин

Стрептококк В тест
(Strep B Test
(Strep B-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения антигенов стрептококка В в вагинальных мазках. Чувствительность 88,4%, специфичность 97,9% от культурального метода. Время анализа 5–10 мин

Токсин А тест
(Toxin A Test
(Toxin A-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения токсина А Clostridium difficile в фекалиях. Чувствительность 4 нг/мл (86,7%), специ-
фичность 91,7% по отношению к цитотоксическому методу. Время анализа 15 мин

Токсин В тест
(Toxin B Test
(Toxin B-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения токсина В Clostridium difficile в фекалиях. Чувствительность 5 нг/мл. Специфичность 100%. Время анализа 15 мин

Токсин А + В двойной тест
(Duo Toxin A + B Test
(Duo Toxin A+B-Check-1))

Двойной экспресс-тест для одновременного качественного определения токсинов А и В Clostridium difficile в фекалиях. Чувствительность и специфичность соответствуют индивидуальным тестам. Время анализа 15 мин

Туберкулез тест
(Tuberculosis Test
(TB-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения антител (IgG, IgA, IgM) к Mycobacterium tuberculosis в сыворотке, плазме и цельной крови. Чувствительность 350 МЕ/мл (IgG, IgA). Время анализа 10–15 мин.

Хеликобактер пилори тест
(Helicobacter Pylori Test
(H.Pylori-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения IgG против белков H.Pylori в сыворотке, плазме и цельной крови. Чувствительность 10–
15 АЕ/мл. Специфичность 89,7% от Вестерн-блоттинга и 83% от культурального высева. Время анализа 10–15 мин

VEDALAB, Франция

Регистрационное удостоверение № ФСЗ 2009/05844.

Наименование Характеристика Упаковка, кол-во тестов

Сифилис тест
(Syphilis Test
(Syph-Check-1))

Экспресс-тест для качественного определения антител (IgG, IgA, IgM) к Treponema pallidum в сыворотке, плазме и цельной крови. 100% чувствительность и специфичность по сравнению с RPR, TPI и FTA-ABS тестами. Время анализа 10–15 мин


  • Форма выпуска: вариант 1: индивидуальная упаковка / 1 исследование; вариант 2: набор / 10 исследований
  • Назначение: тест иммунохроматографический для выявления вирусов гриппа А и В в респираторных выделениях

Инструкция по применению

Регистрационное удостоверение: №ФСР 2012/13624 от 29.06.2012

Возбудителем гриппа является вирус, который поражает, главным образом, верхние дыхательные пути – нос, горло, бронхи, реже – лёгкие. Заболевание обычно длится одну-две недели и характеризуется высокой температурой, миалгией, головной болью, недомоганием, сухим кашлем, болью в горле и ринитом.

Для детей, пожилых людей и людей, страдающих заболеваниями лёгких, почек, сердца, диабетом, раком, грипп представляет серьёзную опасность. Эта инфекция может вызвать осложнения основных заболеваний, пневмонию и смерть.

Заболевание человека вызывают, как правило, два типа гриппа – тип А (подтипы H3N2 и H1N1) и тип В. Причиной смертей от гриппа чаще всего является вирус А подтипа H3N2.

Определение основано на принципе иммунохроматографического анализа. Анализируемый образец жидкого биологического материала абсорбируется поглощающим участком тест-полоски. При наличии в образце вируса гриппа А и/или вируса гриппа В они вступают в реакцию с нанесенными на стартовую зону специфическими моноклональными антителами против вируса гриппа А и специфическими моноклональными антителами против вируса гриппа B, меченными окрашенными частицами, и продолжают движение с током жидкости. В соответствующих аналитических зонах тест-полоски происходит взаимодействие со специфическими моноклональными антителами против вируса гриппа А и/или вируса гриппа В, иммобилизованными на поверхности мембраны, с образованием окрашенных иммунных комплексов.

В контрольной зоне тест-полоски специфический окрашенный иммунный комплекс образуется независимо от наличия в тестируемом биологическом материале вируса гриппа А и/или вируса гриппа В.

В том случае, если в анализируемом образце присутствует вирус гриппа А и вирус гриппа В, на тест-полоске образуются три параллельные окрашенные линии (красная и синяя аналитические, обозначенные буквой Т, и зеленая контрольная, обозначенная буквой С), что указывает на положительный результат анализа по вирусам обоих типов. В случае отсутствия в анализируемом образце вируса гриппа А и вируса гриппа В на тест-полоске образуется одна зелёная контрольная линия (С), что указывает на отрицательный результат анализа по вирусам обоих типов.

Кассеты с тест-полосками и одноразовые пластиковые пипетки упакованы в индивидуальные вакуумные упаковки из фольги алюминиевой, содержащие пакетики с силика-гелем.

  • одноразовые резиновые или пластиковые перчатки;
  • часы или таймер.

Использованные тесты и остатки биологического материала должны быть помещены в специальный контейнер для санитарных отходов.

Свежесобранный биологический материал (респираторные выделения из носовой полости человека), не содержащий консерванты.

Образцы респираторных выделений до определения можно хранить при температуре 2–4°С не более 8 ч.

Перед анализом образцы респираторных выделений должны быть доведены до комнатной температуры.

1. Ввести стерильный ватный тампон на зонде приблизительно на 3 см в одну ноздрю и, вращая его, взять мазок со стенок носового хода (рис. 1-1).

2. Внести в одноразовую пластиковую пробирку из флакона с крышкой-капельницей 15 капель буфера для растворения образца (рис. 1-2).

Наименование Характеристика Упаковка, кол-во тестов



1. Взять мазок со стенок носового хода 2. Внести 15 капель раствора для образца 3. Вращать тампон в пробирке, выжать жидкость

3. Поместить тампон с образцом в пробирку, смыть образец, вращая тампон по стенкам пробирки минимум 10 раз. Выдавить жидкость из тампона, сдавливая его стенками пробирки (рис. 1-3). Выбросить тампон.



1 2

6. Через 10 мин визуально оценить результат реакции.

Выявление в тестовом окошке кассеты одной зеленой контрольной линии (С) свидетельствует об отрицательном результате анализа по обоим типам вируса, т.е. указывает на отсутствие в анализируемом образце респираторных выделений вирусов гриппа А и В (рис. 3-1).



Выявление в тестовом окошке кассеты трёх параллельных окрашенных линий (зеленой, красной и синей) свидетельствует о положительном результате анализа по обоим типам вируса, т.е. указывает на наличие в анализируемом образце респираторных выделений вирусов гриппа А и В (рис. 3-2). Выявление в тестовом окошке кассеты двух параллельных окрашенных линий (зеленой и красной) свидетельствует о положительном результате анализа по вирусу гриппа А, т.е. указывает на наличие в анализируемом образце респираторных выделений вируса гриппа А и отсутствие вируса гриппа В (рис. 3-3). Выявление в тестовом окошке кассеты двух параллельных окрашенных линий (зеленой и синей) свидетельствует о положительном результате анализа по вирусу гриппа В, т.е. указывает на наличие в анализируемом образце респираторных выделений вируса гриппа В и отсутствие вируса гриппа А (рис. 3-4). Интенсивность окраски красной и синей аналитических линии может меняться в зависимости от концентраций, соответственно, вируса гриппа А и вируса гриппа В в образце.



ОРВИ и грипп имеют респираторные симптомы и общие. Их можно распознать по катаральным признакам со стороны дыхательных путей и общей симптоматике, характерной для большинства заболеваний.

Современные методы диагностики данной группы заболеваний

Различают несколько видов диагностики, которые различаются по особенностям проведения и методу выявления возбудителя. Это:

  • экспресс-методы;
  • серологическая диагностика;
  • вирусологическая диагностика.

Первая группа - экспресс-методики. Это быстрый способ подтвердить или исключить наличие болезни. Используется метод флюоресценции и ПЦР. Рассмотрим их подробнее.

Изучение флюоресцирующих антител - МФА. Способ основан на определении антигенов к вирусу в эпителиальных клетках носовой слизистой, на конъюнктиве (если есть глазные поражения). Антитела при действии антигена реагируют специфическим свечением, которое легко заметить при микроскопическом исследовании. Этот параметр считается маркером диагностики и является основой для подтверждения результата. Способ имеет диагностическую ценность начиная с 3 и заканчивая 5 днем заболевания. Чувствителен к таким антигенам: вирус гриппа типа А, В, вирус парагриппа, аденовирусы и возбудитель РС-инфекции. Это удобный и быстрый метод, не требующий особых ресурсов, который часто применяется в ходе диагностики.


Метод полимеразно-цепной реакции базируется на основе обнаружения участков нуклеиновых кислот генетического материала вируса и определении их групповой принадлежности по этому критерию. Методика имеет высокую диагностическую ценность, является современным и качественным способом подтверждения заболевания. Считается “золотым стандартом” диагностики, так как не дает ложных результатов и является специфическим для определения конкретных патогенов, широко применяется в стационарных и амбулаторных условиях.

Вирусологические методики основаны на чистом выделении вирусных микроорганизмов и их конкретных штаммов, за чем следует их прикрепление к клеточным культурам в лабораторных условиях. Далее следует определение вида вируса с помощью ПЦР или других реакций. Метод требует значительных ресурсов, довольно длительный и трудоемкий. Его ценность заключается в получении эпидемиологических данных и основе для научных работ. То есть, детальное изучение вируса, частоты его распространения позволяет прогнозировать эпидемическую картину, создавать вакцины. Для исследования берется мазок из носа и носоглотки. Материал пригоден в течении 3-5 дня заболевания. С помощью вирусологических методов можно определить такие возбудители:

Серологические методы диагностики - это ретроспективное исследование, которое дает точные данные относительно стадии процесса, степени активности и типа возбудителя. Используется для эпидемиологических целей.

Для анализа используется сыворотка крови, в которой необходимо определить количество и виды антител. Используется известный антиген вируса. При возникновении реакции с материалом пациента формируются иммунные комплексы антиген-антитело, что подтверждает диагноз. Для диагностики также важен прирост титра антител, для чего используются парные сыворотки.

Результат имеет высокую точность и может определиться даже если все другие методы не дали результата, так как имеет высокую чувствительность. особенно важно использование метода для стертых форм с минимальными клиническими проявлениями. Сыворотки для анализа берутся в начале болезни, а также через 10-14 дней после её завершения. Используется метод для подтверждения наличия в организме таких возбудителей: вирусы гриппа А, В, возбудители парагриппа, аденовирусы и РС-вирусы.


Наличие вируса гриппа можно подтвердить с помощью РТГА - реакции торможения геммааглютинации. Метод основан на свойстве снижения гемагглютинирующих способностях вируса, если в крови есть антитела к нему. Для этого используется кровь с эритроцитами, антиген. Препараты крови берутся парными, в начале болезни, и в период выздоровления. Метод имеет высокую диагностическую ценность, точный и чувствительный.

Виды исследуемого материала и особенности сдачи

Для диагностики используются смывы из носа, мазки из носовых ходов, носоглотки, а также препараты крови.

Забор мазка и смыва проводит медицинский персонал. Он следит за тем, чтобы препараты строго соответствовали должной локализации. Забор проходит в чистых условиях, стерильными инструментами и в стерильную тару. До того, как взять мазки пациента просят высморкаться, чтобы очистить носовые ходы от слизи. Зонд вводится легко, на глубину 2-3 см. Проводится стандартное движение по нижней части носового хода и под раковиной носа. Необходимо, чтобы забор происходит в современной клинике, где есть возможность правильно хранить и транспортировать собранный материал в короткий срок до лаборатории.

Мазок из глотки берется по похожей методике, чтобы затронуть те участки слизистой, на которой скапливается возбудитель. Перед забором необходимо легко прополоскать рот, чтобы взятый материал был чистым. Желательно забирать материал на 3-й день после начал болезни.

Нормы и отклонения от них, расшифровка результатов

Экспресс-тест дает результаты сразу после диагностики, его расшифровка не вызывает трудностей, так как определяет наличие вируса или его отсутствие в организме.

Серологические реакции более сложные и могут расшифровываться по разному: наличие антител класса М говорит об острой стадии процесса, антитела G формируются при хроническом течении.

Сроки готовности результатов

Результаты исследования готовы на 1-2 день после сдачи. Экспресс-тест дает результат сразу. Серологические методы требуют больше затрат времени для сравнения титров антител. Более быстрые методы важны для диагностического процесса, а те, что более затратны - для эпидемиологического и научного исследования.


Скорость диагностики зависит от правильности сдачи препаратов, условий лаборатории, качества реактивов.

Вовремя сданный анализ позволяет точно и быстро определить диагноз. Это - залог правильного и эффективного лечения. Если болезнь запустить, она грозит осложнениями, которые особенно опасны, если у человека грипп. Это актуально для детей, пожилых людей, беременных женщин и лиц с дефицитом иммунной системы, ведь осложнения чаще всего проявляются у них.

Лаборатория АО "СЗЦДМ" предлагает услуги, обеспечивающие комплексное и преемственное лабораторное обследование пациента

Диагностика В медицинских центрах АО "СЗЦДМ" проводят качественные диагностические исследования всего организма

Лечение Наши медицинские центры ориентированы на обслуживание пациентов в амбулаторном режиме и объединены единым подходом к обследованию и лечению пациентов.

Реабилитация Реабилитация - это действия, направленные на всестороннюю помощь больному человеку или инвалиду для достижения им максимально возможной полноценности, в том числе и социальной или экономической.

Выезд на дом Внимание! Действует акция "Выезд на дом - 0 рублей"

Профосмотры АО "СЗЦДМ" проводит профилактические осмотры работников, которые включают в себя - комплексы лечебных и профилактических мероприятий, проводимых для выявления отклонений в состоянии здоровья, профилактики развития и распространения заболеваний.

Будние: 9:00–18:00

Сб., вс.: выходной





Тест Wondfo® для выявления вирусов гриппа А и В - это качественный экспресс-анализ, который определяет вирус гриппа типа A (включая подтип H1N1) и нуклеопротеиновые антигены вируса гриппа типа B, извлеченные из мазка из носовой полости. Устройство используют как средство дифференциальной диагностики инфекции гриппа типов A и B.

Только для диагностики in vitro. Только для применения медицинскими работниками.

Грипп (известный как ОРВИ) представляет собой высококонтагиозную острую вирусную инфекцию дыхательных путей. Это инфекционное заболевание, которое легко передается через кашель или чихание с помощью распыленных капель, содержащих живой вирус. Вспышки гриппа возникают ежегодно в осенние и зимние месяцы. Существует три типа вирусов гриппа: A, B, и C. Только вирусы гриппа типа A классифицируются по подтипами на основе двух поверхностных гликопротеинов, а именно гемагглютинина (HA) и нейраминидазы (NA). Подтипы вирусов гриппа A и B, в свою очередь, классифицируются по штаммам.

Люди могут быть инфицированы вирусами гриппа типа A, B, и C. Подтипы вируса гриппа A, которые в настоящее время распространены среди людей во всем мире, включают вирусы H1N1, H1N2 и H3N2. Тип B вируса гриппа может вызвать заболеваемость и смертность среди людей, но в целом он ассоциируется с менее тяжелыми эпидемиями, чем вирусы гриппа типа А. Несмотря на то, что вирусы гриппа типа В могут вызвать эпидемии среди людей, они не вызывают пандемий. Вирус гриппа типа С у людей вызывает заболевание легкой степени и не вызывает эпидемий или пандемий.

1. Этот набор предназначен только для применения in vitro. Не глотать.

2. Не смешивать компоненты из разных партий наборов.

3. Не использовать тестовый набор после истечения срока годности.

4. Не использовать набор, если упаковка имеет повреждения или плохо запаяна.

5. Хранить в недоступном для детей месте.

6. После применения утилизировать. Нельзя использовать тест более одного раза.

7. Пробирка для экстракции и тампон для взятия мазка из носовой полости являются одноразовыми материалами - не применять для нескольких образцов.

8. Все образцы должны рассматриваться как потенциально инфицированный материал. Во время работы с образцом необходимо надевать защитные перчатки. После проведения теста тщательно помойте руки.

9. Избегайте разбрызгивания или распыления вещества.

ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ

1. Хранить при температуре 2ºC - 30ºC в закрытой упаковке до истечения срока годности.

2. Хранить в месте, защищенном от света, влаги и высокой температуры.

3. Не замораживать.

СБОР И ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ

1. Вытяните тампон для взятия мазка из носовой полости, предоставляется. Отклоните голову пациента назад под углом 70 ° и осторожно вставьте тампон для взятия мазка из носовой полости в ноздрю, в которой количество секреторных выделений наибольшее.

2. Очень осторожно вращайте и проталкивайте тампон, пока не почувствуете сопротивление на уровне носовой раковины. Осторожно вращайте тампон, прикасаясь стенок носа, несколько раз.

3. Образцы от пациентов наиболее информативные при условии проведения теста сразу после их сбора. Если провести тест немедленно невозможно, мазки необходимо поместить в сухую стерильную пластиковую пробирку (не входит в комплект поставки) и хранить при температуре 2ºC - 4ºC до 8 часов.

ПРОЦЕДУРА ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

Перед проведением теста доведите тестовое устройство, образец и буфер для экстракции до комнатной температуры (18 ° С - 30 ° С).

1. Используйте пробирку для экстракции для каждого образца для проведения теста и соответствующим образом обозначьте каждую пробирку.

2. Удерживайте флакон с буфером для экстракции перевернутым в вертикальном положении и добавьте 8 капель (около 400 мкл) буфера для экстракции в пробирку для экстракции.

3. Поместите тампон с образцом в пробирку и вращайте тампон 10 раз, прижимая головку тампона к внутренней стенке пробирки для высвобождения образца с тампона.

4. Извлеките тампон, прижимая головку тампона к внутренней поверхности пробирки для сбора образцов в ходе вытягивания, чтобы высвободить как можно больше жидкости с тампона. Утилизируйте тампон. Закройте пробирку колпачком и перемешайте содержимое, осторожно вращая пробирку.

5. Выньте тестовое устройство из герметичной упаковки, разрывая пакет по линии отрыва. Внесите 3

4 капли (около 80-100 мкл) экстрагированного образца из пробирки для экстракции в лунку для образца тестового устройства, вращая и сжимая пробирку как показано на рисунке.

6. Считывайте результаты теста через 15 - 20 минут. Не считывает результаты через 30 минут.

Визуализируется окрашена полоска в контрольной области и одна или две полоски в соответствующей тестовой области. Это указывает на положительный результат для вируса гриппа типа А / В в определенной тестовой области.

1. Положительный на тип А:

2. Положительный на тип B:

3. Положительный на типы A и B:

Окрашенная полоска визуализируется в контрольном участке. Окрашенная полоска не является в соответствующей тестовой области. Это указывает на то, что концентрация антигена вируса гриппа типов А / В в определенной тестовой области является нулевой или ниже предела чувствительности теста.

Полоски отсутствуют вообще, либо полоска появляется только в тестовой области, а в контрольном участке отсутствует. Повторите тестирование образца с использованием другого тестового набора. Если провести тест снова не удается, обратитесь пожалуйста, в службу технической поддержки в компании Wondfo или к дистрибьютору.

1. Данный тест был разработан только для тестирования мазков из носовой полости.

2. Как и для любых диагностических процедур, подтверждения диагноза можно сделать только после проверки всех клинических и лабораторных результатов исследования.

3. Отрицательный результат теста может быть получен, если уровень антигена в образце ниже предела чувствительности теста, или если сбора образцов был проведен неправильно.

4. Негативные результаты теста не предназначены для исключения других вирусных инфекций, не связанных с вирусом гриппа.

5. Положительные результаты теста не исключают ко-инфекции с другими возбудителями и не предназначены для определения специфического подтипа вируса гриппа типа А.

Т.В. Гребенникова, Д.Е. Киреев, А.Д. Забережный, Т.И. Алипер

Грипп А – контагиозное вирусное заболевание, которое вызывает сезонные эпидемии, пандемии и эпизоотии с различным уровнем смертности в зависимости от вирулентности вирусных штаммов, вызвавших эпидемию (1).

Вирус гриппа А широко распространен в природе, инфицирует многие виды млекопитающих и птиц, в основном водного и околоводного комплекса. От диких птиц выделены вирусы со всеми известными сочетаниями поверхностных белков, при этом инфекция у диких птиц протекает в виде энтерита, без видимых признаков заболевания (3, 4). Это указывает на высокую степень адаптации вирусов гриппа А к диким птицам, которые являются естественными хозяевами вирусов гриппа. Вирус сохраняется в воде в течение длительного времени (6-8 месяцев), а водно-фекальный путь инфицирования является основным механизмом поддержания персистенции вируса гриппа в природе, откуда вирус проникает в популяции домашних животных.

Вирус гриппа А отличается высокой степенью вариабельности, особенно это касается поверхностных гликопротеинов вириона: гемагглютинина (НА) и нейраминидазы (NA). Известно 16 антигенных подтипов НА (Н1-Н16) и 9 подтипов NA (N1-N9). Вирус гриппа обладает сегментированным геномом, состоящим из 8 сегментов, которые обладают высокой способностью к реассортации. Различные комбинации НА и NА способны привести к появлению высоковирулентных вирусов, вызывающих высокий процент смертности.

В 20 веке отмечены четыре пандемии: 1918 (H1N1), 1957 (H2N2), 1968 (H3N2) и 1977 (H1N1), причем две (1957 и 1968 гг.) были обусловлены новыми реассортантными вирусами, которые появились в результате реассортации генов вирусов гриппа птиц и человека. Свиньи могут служить промежуточным хозяином, обеспечивающим появление новых вирусов путем адаптации птичьих вирусов и/или реассортации между птичьими и человеческими вирусами (2). В результате этих процессов вирусы птиц смогут репродуцироваться в организме человека, а вирусы человека – в организме птиц. Существует гипотеза, что печально знаменитая "испанка" была вызвана вирусом гриппа свиней А H1N1 (5). За последние 45 лет описано свыше 30 эпизоотий среди домашних животных в ряде случаев сопровождающихся заболеванием людей, подчас с высокой смертностью.

Начиная с 1996 г. и до настоящего времени были отмечены случаи заражения человека подтипами H5 and H7 (3, 4). Наблюдается распространение гриппа птиц, вызванного вирусом H5N1, в странах Азии. С середины декабря 2003 года вспышки этого заболевания были подтверждены в Южной Корее, Вьетнаме, Лаосе, Таиланде, Японии, Камбодже, Филиппинах, Малайзии и Китае (7). При этом отмечался высокий уровень смертности среди людей, до 50% в случае заражения человека подтипом Н5. С января 2004 года во Вьетнаме и Тайланде зарегистрированы случаи с летальностью более 70%. В 2005 г. были зарегистрированы эпизоотии на территории Российской Федерации, вызванные вирусом гриппа H5N1. Считается, что подтипы Н5 и Н7 вируса гриппа А являются наиболее опасными с точки зрения возникновения пандемий.

Угроза возникновения новой пандемии, предупреждение заноса и распространения высоко патогенных вирусов гриппа на территории нашей страны требует проведения мониторинга среди людей, домашних и диких животных с использованием современных средств диагностики. Диагностика гриппа осуществляется вирусологическими, иммунологическими методами и молекулярными методами. Молекулярные методы диагностики являются чувствительными и специфичными для определения вируса гриппа А. Кроме того, сравнительно в короткий срок, можно получить информацию о возбудителе без предварительного культивирования. Молекулярные методы рекомендованы Всемирной Организации Здравоохранения и Международным Эпизоотическим Бюро как лабораторные тесты для определения вируса гриппа в биологических образцах и постановки диагноза (8, 9 ).

В НПО НАРВАК и лаборатории молекулярной диагностики института вирусологии им. Д. И. Ивановского РАМН разработан комплекс молекулярных методов для индикации и идентификации вируса гриппа А, а также дифференцирования его подтипов. Разработки основаны на современных молекулярных методах и подходах и мегут с успехом использоваться ветеринарными специалистами.

Тест-система для определения РНК вируса гриппа А методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Разработана тест-система для определения РНК вируса гриппа А методом ПЦР. Тест-система является универсальной для млекопитающих и птиц и позволяет определять РНК вируса гриппа А в различных биологических образцах (сыворотках крови, клоакальных смывах и органах) методом ПЦР. С использованием данной тест-системы можно определять РНК, а следовательно наличие вируса гриппа А 16 подтипов. Праймеры, разработанные для тест-системы, специфичны к гену белка нуклеокапсида вируса гриппа А всех известных подтипов и проверены с использованием компьютерных программ "Amplify 1.0", "Oligo 4.0". C использованием программы "ВioEdit" и BLASTN 2.2.3, на 300-400 вирусных геномах каждого подтипа было показано, что праймеры являются универсальными. Тест-система способна выявлять возбудитель гриппа А даже в случае множественных мутаций и реассортации генетического материала.

Тест-система может быть использована для скрининга биологических образцов у млекопитающих и птиц, которые предположительно могут являться носителями вируса гриппа А.

Тест-система для определения и дифференциации РНК вируса гриппа А подтипов Н5 и Н7 методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Тест-система определения РНК двух подтипов вируса гриппа А – Н5 и Н7 в биологических образцах. Следовательно, тест-система позволяет не только определять два данных подтипа, но и дифференцировать их от других подтипов вируса гриппа А. Праймеры подобраны к различным участкам гена гемагглютинина и проверены с использованием компьютерных программ "Amplify 1.0", "Oligo 4.0". C использованием программы "ВioEdit" и BLASTN 2.2.3, на 300-400 вирусных геномах для каждого подтипа вируса гриппа А было показано, что даже в случае антигенного дрейфа внутри подтипа Н5 и Н7, или в случае штаммов с множественными мутациями, праймеры работают специфично. Тест-система способна выявлять возбудитель гриппа А подтипов Н5 и Н7 даже в случае множественных мутаций и реассортации генетического материала.

Тест-система для определения РНК вируса гриппа А подтипа Н5 методом ПЦР в реальном времени

Разработана тест-система ПЦР в реальном времени для определения РНК подтипа Н5 вируса гриппа А, а , следовательно наличие вируса гриппа А подтипа Н5. ПЦР в реальном времени является самой современной модификацией ПЦР. Это чувствительный, быстрый и более технологичный метод, который может быть использован для массового анализа образцов от млекопитающих и птиц на наличие РНК разных подтипов вируса гриппа А. Тест-система с успехом апробировалась при скрининге полевого материала, что позволяет рекомендовать ее для массового изучения образцов, полученных от животных и человека. Данный анализ был адаптирован к отечественным реагентам, что существенно для проведения массовых исследований.

С использованием разработанных тест-систем в 2005 г. было проведено исследование более 400 образцов клоакальных смывов, полученных от диких птиц Приморского края. Кроме того, тест-система была проверена на 350 образцах, полученных от диких птиц из Астрахани. Были проверены 150 проб от диких птиц в районе озера Чаны. Были также проверены 78 образцов, полученные из Новосибирской области во время эпизоотии. Исследовали образцы из Астрахани, Кургана, Калмыкии, Китайской Народной Республики, Сибири и других областей. Всего исследовано около 4000 образцов. Описанные тест-системы успешно прошли Государственные контрольные испытания и имеют сертификационные документы.

Разработка технологии микрочипов для диагностики гриппа.

Одной из современных технологий является создание микрочипов (биочипов), основанных на гибридизации нуклеиновых кислот. Данная технология разработана совместно НПО НАРВАК, НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского РАМН, НИИ молекулярной биологии им. Энгельгарда РАН для определения и дифференциации вируса гриппа А подтипов Н1-Н15, N1-N2 (6). Микрочип позволяет в короткое время (несколько часов) не только определить наличие вируса гриппа А, но и дифференцировать подтипы вируса гриппа. Технологически, анализ происходить следующим образом: с использованием разработанных универсальных праймеров, специфичных гену гемагглютинина вируса гриппа А, и гену нейраминидазы, получают амплификаты методом ПЦР с использованием РНК, выделенной из биологических образцов. После этого, проводится гибридизации на микрочипе, который содержит набор зондов, специфичных к каждому из подтипов и меченых флюоресцентным красителем. Если гибридизации не произошло, цвет нанесенного зонда не меняется. Если гибридизация произошла – изменяется цвет зонда. Считывание и документирование происходит с использованием специального прибора, который сравнивает каждый зонд с положительным и отрицательным контролем.

По затратам средств и времени один микрочип эквивалентен 17 реакциям (ПЦР). В результате применения микрочипа для анализа образцов из Новосибирской области в 2005 г. сразу было установлено, что это H5N1. Разработанные микрочипы проходят лабораторные испытания. Внедрение нового метода требует дополнительных испытаний, комиссионных испытаний и получения сертификационных документов.

Анализ первичной структуры генома вирусов гриппа (секвенирование)

Вирус гриппа генетически чрезвычайно изменчив и этим опасен. Изменения свойств вируса могут происходить как из-за изменения генов (мутации), так и в ходе обмена генами (реассортация). Поэтому всегда есть угроза появления опасных гибридов: в 1918 г. это был Н1N1, а сегодня это может быть Н5N1. Для лучшего понимания и прогнозирования ситуации, для изучения происхождения и эволюции штаммов вируса гриппа применяют метод секвенирования. Сегодня секвенирование фрагментов вирусного генома является уже обязательным требованием при возникновении новых или спорных вирусных вариантов. Для вируса гриппа установлено, что его патогенность связана с последовательностью аминокислотных остатков в т.н. "сайте протеолитического разрезания" гемагглютинина. Поэтому сегодня этот сайт всегда определяют у выделяемых вирусов гриппа. Раньше у птиц на территории России находили вирус подтипа Н5 с "сайтом протеолитического разрезания" как у низко патогенных штаммов. Сегодняшний вирус Н5N1 имеет "сайт протеолитического разрезания" такой же как у высоко патогенных штаммов и поэтому высоко патогенный для птиц.

Грипп остается непредсказуемой инфекцией в настоящее время. Мир может оказаться беззащитным перед новым высоко патогенным пандемическим вариантом, вероятность возникновения которого довольно велика. Поэтому только постоянный мониторинг с использованием современных средств диагностики позволит своевременно выявить, локализовать и обезвредить очаги инфекции.

В отделе молекулярной биологии НПО НАРВАК и в лаборатории молекулярной диагностики Института вирусологии им. Д. И. Ивановского постоянно проводятся молекулярные исследования вируса гриппа с использованием самых современных методик. Данные исследования могут существенно помочь практическим ветеринарным специалистам. Разработаны две тест-системы на основе ПЦР для определения РНК вируса гриппа А и дифференцирования двух подтипов Н5 и Н7 и тест-система для определения РНК вируса гриппа А подтипа Н5 методом ПЦР в реальном времени. Тест-системы успешно прошли комиссионные испытания в 2005 г., имеют все сертификационные документы и могут быть использованы в региональных ветлабораториях.

1. ЛьвовД.К. Жданов В. М. // Вопр. Вирусол. – 1982. –N 4. – С. 17-20

2. Brown, I. H., Harris P.A., McCauley J.W, Alexander D.J. .// J. Gen. Virol. – 1998. - Vol. 79. - Р. 2947–2955.

3. Capua I, Alexander DJ. // Acta Trop. - 2002 –Vol. 83. N° 1. – P. 1-6. Review.

4. Capua I, Mutinelli F, Pozza MD, Donatelli I, Puzelli S, Cancellotti FM . // Acta Trop. - 2002. – Vol. 83. - N 1. – P.7-11.

5. Fanning T.G., Slemons R.D., Red A.H., Janczewski T.A., Dean J., Taubenberg J.K. 1917 // Journal of Virology. – 2002. - Vol. 76. - No 15. - P. 7860-7862.

6. Fesenko Е. Е, D.Kireev, D.A. Gryadunov, D.A.Khodakov, A.I. Myznikova, V.M. Mikhailovich, T.V.Grebennikova, A.S. Zasedatelev.// Международный конгресс "Современные проблемы генетики". –Минск. – 2005

7. Li, Wang J. Smith G. J. D. // Nature. - 2004. – Vol. 430. - P. 209-213.

9. Recommended laboratory tests to identify avian influenza A virus in specimens from humans • WHO Geneva • June 2005.

Читайте также:

Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!
При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.

Copyright © Иммунитет и инфекции