Культивирование вируса клещевого энцефалита

Сайт СТУДОПЕДИЯ проводит ОПРОС! Прими участие :) - нам важно ваше мнение.

ЕСНО.

Вирус Коксака.

Выделяют 2 группы вирусов: А и В. Тип А имеет 24 серотипов, тип В имеет 6 серотипов.

Вирус выделен в 1948 году Долдорфом и Силпсом в США из кишечника детей с полиомиелитоподобным заболеванием.

Вызывают разные формы болезней: асептический менингит, мио- и перикардит, респираторные заболевания.

Обладают свойствами энтеровирусов. Диаметр 28нм. Простоустроены.

Известно 30 серотипов (24+6). Имеют общий комплемент-связывающий антиген. Отличаются по типоспецифическим антигена в РН (с сыворотками). Вирусы не растут на питательных средах. Некоторые штаммы обладают гемагглютинирующей активностью в отношении эритроцитов человека с О(I) группой крови.

Идентификация в РТГА.

Слабая патогенная активность. Не репродуцируются в перевиваемых культурах клеток. У новорожденных мышей вызывают вялые параличи.

Выраженная цитопатическая активность. Вызывают спастические параличи, тремор, исхудание и новорожденных мышей (при их инфицировании). Не растут на куриных эмбрионах. К типу чувствительны новорожденные мыши и хомяки.

См. вирус полиомиелита.

Проявляют патогенность для людей разного возраста (но чаще – дети). Поражаются: сердце, ЦНС, дыхательные пути, печень, почки, поджелудочная железа. Чаще протекает в форме лёгкого гриппа (3-хдневная лихорадка).

Источник инфекции: больной человек.

Возбудитель внедряется во внутреннюю стенку тонкого кишечника и в лимфатические узлы. Там осуществляется первичное размножение и накопление вируса. Далее вирус по лимфатической системе проникает в кровь и с током крови в различные органы и ткани.

Иммунитет типоспецифический гуморальный. Связан с выработкой вируснейтрализующих, комплемент-связывающих и преципитирующих антител.

Создание вакцины невозможно, т.к. антигены типоспуцифические.

Материал для исследования: испражнения, смывы с носоглотки, кровь, ликвор.

Индикация в РН, РТГА (если обладает гемагглютинирующей активностью) с помощью ЦПД.

Кишечный цитопатогенный серотовирус. Выделен в 1951 – 1953 гг. Себеном и Эндерсом.

Таксономия: см. вирус Коксаки.

Морфология: см. полиомиелит.

Включает 31 серотип (идентификация в РН). Есть общий комплемент-связывающий антиген, который не даёт перекрёстных реакций. Некоторые серотипы способны агглютинировать эритроциты людей с О(I) группой крови.

Вирус не патогенен для лабораторных животных. Выращивают на первичных и перевиваемых культурах клеток человеческого происхождения (в них вирус активно размножается). Обладает ЦПД.

Резистентность: см. полиомиелит.

Эпидемиология: см. полиомиелит.

Источник инфекции: больной человек. Механизм передачи: фекально-оральный, у детей – воздушно-капельный.

Симптоматика: может быть сыпь на коже, общее лихорадочное состояние. Может склоняться к эпидемическому распространению.

Патогенез: см. вирус Коксаки.

Иммунитет гуморальный, типоспецифический. Продолжительность не установлена.

Основная роль – вируснейтрализующие антитела.

Разработана вакцина против энтеровируса 71.

Лечение и диагностика см. полиомиелит, см. вирус Коксаки.

Лекция №16.

Бешенство.

Hydrophobia – острая вирусная болезнь, возникающая после укуса человека инфицированным животным. Характеризуется развитием тяжёлого энцефалита, вызванного необратимым поражением нейронов ЦНС. Летальность почти 100%.

Бешенство – одна из самых древних болезней. Регистрируются упоминания о нём 3000 лет до н.э.

Признаки бешенства (у животных):

3) осиплый голос

5) хвост поджат между ногами

Л.Пастер предположил, что возбудитель находится в головном мозге. Он взял суспензию с микроорганизмами и ввёл в субдуральное пространство кролику.

Уличный вирус бешенства высокозаразный (заболевают 6 из 7 собак). Аттенуированный вирус – заболевает 1 собака из 7.

Сильно аттенуированный вирус Пастер использовал в качестве вакцины.

В 1886 году открыта первая пастеровская станция в России (в Одессе, далее в Санкт-Петербурге и Самаре).

В конце XIX века открыты тельца Бабеша-Негри (1892 – 1903гг.).

Размер вириона 70 – 170нм. Имеет пулевидную форму. Тип симметрии спиральный.

Имеет суперкапсидную наружную оболочку (следовательно – это сложноустроенный вирус). Это оболочка повышает инфекционность вируса от 3 до 5 порядков. Состоит из липидного слоя, снаружи усеяна глколипидными и гликопротеидными шипами.

Семейство: Rabdoviridae (палочковидный, прут).

Имеер 2 антигена: групп- и типоспецифический.

Группоспецифический связан с сердцевиной вируса. Выявляется в ИФА, РСК, РИФ, в реакции преципитации в геле.

Типоспецифический антиген – это антиген наружной оболочки. Отвечает за адсорбцию и гемагглютинацию. Выявляется в РТГА.

Представлен однонитевой линейной нефрагментированной РНК (“-”-нить). Для её синтеза требуется _ИРНК. Содержит РНК-зависимую вирус-специфическую РНК-полимеразу (транскриптазу).

Состав: 2% - РНК, 20% - липиды, 78% - белки.

Устойчив к низким температурам. Относительная чувствительность к спирту, эфиру, дезоксихалатам. Инактивируется под действием УФ. При температуре 56˚С гибнет через 2 – 5 минут. Чувствителен к лизолу, хлорамину, карболовой кислоте. В трупах сохраняется до 4 месяцев.

Вирус адгезируется к клеткам за счёт шипов. Путём эндоцитоза проникает в клетку. Далее происходит “раздевание” вируса (процесс происходит в цитоплазме, вблизи лизосом). Сначала синтезируется _ИРНК. Т.к. фермент уже в вирусе, то транскрипция начинается сразу после проникновения в клетку. Готовый вирион окончательно формируется на ядерной оболочке. Образует капсидную оболочку, подходит к внешней оболочке, “выстригает” кусок и выходит наружу. Быстро убивает заражённую клетку.

1) в курином эмбрионе

2) в культуре клеток новорожденных хомяков

3) в диплоидных клетках человека

4) введение материала в мозг мышеё-сосунков.

Зооноз. Человек – тупиковое звено. Резервуар – плотоядные животные (лисы, волки, кошки, енотовидные собаки, шакалы и т.д.). В отдельных странах существуют природные очаги.

Заражение происходит при укусе и последующем ослюнении раны. Вирус выделяется со слюной (в последние 7 – 10 дней инкубационного периода и дальше). Отмечается подъем заболеваемости в летне-осеннее времы. Наиболее опасны укусы в лицо, шею и руки. Чем дальше место укуса от головного мозга, тем больше инкубационный период.

Входные ворота: повреждённая кожа, реже слизистые оболочки.

Первичное размножение вируса происходит в мышцах (на месте укуса). Вирус обладает выраженным нейротропизмом (т.е. из места укуса движется по периневральным пространствам нервных волокон к двигательным нейронам головного и спинного мозга), где дальше размножается.

Поражаются нейроны гипокампа, продолговатый мозг, симпатические ганглии, черепные нервы. В результате происходят некротические, дистрофические, воспалительные изменения в клетках нервной системы.

В цитоплазме клеток обнаруживаются тельца Бабеша-Негри. Отмечаются поражения в области основания головного мозга, что приводит к рефлекторной возбудимости с развитием (в дальнейшем) паралича.

Могут наблюдаться судороги дыхательной мускулатуры (т.к. поражается n. vagus), поражается подъязычный и языкоглоточный нервы.

Нарушается деятельность сердечно-сосудистой системы. Отмечается обильное слюнотечение, гипергидроз (т.е. поражение симпатических нервов). Ведущий симптом – гидрофобия.

После того, как вирус размножился, он направляется в слюнные железы (где вторично размножается и выделяется в окружающую среду).

Инкубационный период: 1 – 3 месяца (может укорачиваться до 2 недель и удлиняться до 1 года). Инфицируются 90 % укушенных. Наиболее частые места укусов – нижние конечности.

1) стадия депрессии (предвестников).

3) Параличи (успокоение).

Ведущий признак 1-го периода – нарушение психики и рефлекторная возбудимость (страхи, ночные кошмары, тревога, головная боль, могут быть боли и жжение в ране) – 1-3 дня.

Гидрофобия (больные отталкивают от себя воду и приходят в состояние агрессии при одной только мысли о воде). Характерный симптом: гиперсаливация (слюна жидкая, течёт безудержно), профузное потоотделение. Больной сильно худеет. Гипертермия (38 - 40˚С), нет аппетита.

Прекращаются судороги, появляется аппетит, снижается температура. Снижается деятельность дыхательной и сердечно-сосудистой системы, развивается паралич языка и дыхания. Смерть через 12 – 20 часов.

Продолжительность болезни: 3 – 7 дней.

Иммунитет: не изучен, т.к. болезнь быстро заканчивается.

Поствакцинальный иммунитет до 1 года.

Симптоматическое. Прогноз неблагоприятный. При наличии клиники, летальность 100%.

Уничтожение бешеных животных. Иммунизация домашних животных. ПХО. Промывание раны мыльным раствором и йодной настойкой.

1) пассивная иммунизация:

●антирабический Ig из плазмы человека, вакцинированного антирабической вакциной;

● Антирабический γ-глобулин из гипериммунизированной лошадиной сыворотки.

2) активная иммунизация:

● вакцина антирабическая культуральная инактивированная сухая (Рабивак-2-Внуково-32) – ослабленный вирус, выращенный в культуре почечных клеток хомяка, инактивированная ультрафиолетом. Вводится п/к 3 мл в переднюю брюшную стенку.

● вакцина антирабическая культуральная инактивированная очищенная концентрированная сухая (имеет более высокую активность). Сокращает инъекции с 24 до 6. вводится 1 мл в/м.

С первой дозой вакцины нужно ввести антирабический γ-глобулин.

Материал для исследования: головной и спинной мозг. Тельца Бабеша-Негри обнаруживаются через 2 – 4 часа после заражения в клетках гипокампа, продолговатого и спинного мозга.

Тельца похожи на овальные (или круглые) образования (0,5 – 25 мкм, у крупного рогатого скота размер телец больше). Имеют гомогенную субстанцию с зернистостью. Зернистость окрашивается в синий цвет, гомогенная субстанция в красный.

Вирус обнаруживают в РИФ (прямой и непрямой).

Существуют тест-системы для ИФА (поиск антигенов).

Биологическая проба даёт результат через 6 – 7 дней. Новорожденных животных заражают. После их гибели, обнаруживаются тельца.

Серодиагностика: РН, РИА, РСК, ИФА.

1) alphavirus (включает 25 вирусов). Передаётся комарами. В состав входят 3 вируса энцефалита (западный, восточный и венесуэльский). При тяжёлых формах возникаеи литаргия. Летальность до 10%. Так же род включает вирус Никуньчунья (“болезнь складывания пополам”) и вирус лихорадки Синбис.

- вирус клещевого энцефалита (восточный и западный);

- вирус японского энцефалита;

- вирус жёлтой лихорадки (геморрагическая лихорадка с желтухой);

- вирус болезни Данге.

3) Rubivirus (включает вирус краснухи).

4) Pestivirus (чума животных).

Alphavirus и Flavivirus – арбовирусы. Передаются членистоногими (продуцируются у них же).

Если вирус передаётся переносчиком и не размножается в нём, то это не арбовирус.

Арбовирусов насчитывается около 450. они относятся к разным семействам. Для человека патогенны около 100.

Вирус передаётся посредством укуса инфицированных членистоногих. Человек включается в эпид. процесс, когда он сам попадает в эпидемический район.

Клещевой энцефалит (таёжный, русский, дальневосточный) – острая вирусная болезнь, которая характеризуется интоксикацией, поражением серого вещества головного и спинного мозга, что приводит к развитию вялых параличей и парезов.

Лекция №17.

Гепатиты.

Это группа болезней, вызываемых гепатотропными вирусами. Протекают с поражением гепатоцитов. Бывают: A, B, C, D, E, G, TTV.

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

Методическая разработка для преподавателей

Практическое занятие № 16 по микробиологии

для студентов 3 курса лечебного и педиатрического факультетов.

Цель: способствовать формированию умений по изучению вирусных инфекций, освоению принципов их лабораторной диагностики.

рассмотреть биологические свойства вирусов – возбудителей клещевого энцефалита, краснухи, бешенства;

изучить эпидемиологию, патогенез, клинические особенности, вызываемых ими заболеваний, принципы их профилактики и лечения;

обучить методам лабораторной диагностики вирусных инфекций.

Студент должен знать:

1) до изучения темы – морфологию, строение, способы репродукции вирусов, методы лабораторной диагностики вирусных заболеваний;

2) после изучения темы – свойства возбудителей клещевого энцефалита, краснухи, бешенства, методы культивирования, эпидемиологию, патогенез и клинические проявления, специфическое лечение и профилактику вызываемых ими заболеваний.

Студент должен уметь:

отбирать патологический материал от больных для вирусологического исследования;

проводить исследования по изучению биологических свойств вирусов;

осуществлять серологические методы диагностики вирусных инфекций;

выполнять профилактические мероприятия.

Что Вам известно об истории изучения возбудителей клещевого энцефалита, краснухи, бешенства?

Каковы основные биологические свойства характерны для этих вирусов?

Какую роль они играют в патологии человека?

Опишите эпидемиологию, патогенез, клинические проявления, иммунитет краснухи, бешенства.

Какие методы применяются для лабораторной диагностики этих вирусных заболеваний?

Охарактеризуйте основные принципы их профилактики и лечения.

План практического занятия

Время на перерыв

Время на перерыв

Изучение демонстрационного материала

Уборка рабочего места

2. Содержание занятия:

2.1. Контроль исходного уровня знаний. Способ – программированный контроль.

2.2. Ориентировочные основы самостоятельной работы студентов:

- выполнение практической работы;

- оформление и защита протоколов.

3. Тезисы изучаемого материала

3.1. Вирусы клещевого энцефалита.

Клещевой энцефалит (син.: таежный энцефалит, дальневосточный менингоэнцефалит, клещевой энцефаломиелит, русский весенне-летний менингоэнцефалит, tick-borne encepalitis) – это острое вирусное заболевание, характеризующееся поражением серого вещества головного и спинного мозга, приводящих к развитию параличей и парезов.

История изучения заболевания.

Как нозологическая единица КЭ был выделен в 1937 г. в результате работы комплексной экспедиции, возглавляемой Л.А.Зильбером (в составе экспедиции работали видные вирусологи М.П.Чумаков, В.Д.Соловьев). Были установлены закономерности, природная очаговость, сезонность, связь с активностью клещей. Описаны особенности клиники и патоморфологии КЭ, разработаны методы профилактики и лечения.

Вторая экспедиция под руководством Е.Н.Павловского выявила роль и значение клещей, как переносчиков и естественного резервуара вируса в природе. Результаты послужили основой теории о природной очаговости КЭ.

Во время третьей экспедиции, возглавляемой И.О.Рогозиным, изучались подходы к разработке специфической профилактике КЭ.

Семейство – Flaviviridae (в 1984г. выделено в качестве самостоятельного из семейства Togaviridae). Название семейство и род получили по названию желтой лихорадки (лат.–flava–желтый), являющейся типичным представителем этой группы.

Род – Flavivirus, включает 63 представителя, сгруппированных в 10 антигенных комплекса. Различают два типа вируса клещевого энцефалита – западный (переносчики — клещи Ixodes persulcatus) и восточный (переносчики — клещи Ixodes ricinus), которые отличаются по тяжести клинического течения и антигенному составу вирусов возбудителя. В последние годы выделен третий тип вируса, изолированный в Греции из клещей Rhipicephalus bursa.

Форма вирусов сферическая. Размер – 40-45 нм. Тип симметрии – кубический. Организация – сложная, на поверхности расположены шипики гликопротеиновой природы. Молекулярная масса – 46*10 4 кД. Коэффициент седиментации – 175-218 С.

Геном представляет собой одноцепочечную, инфекционную, плюснитевая РНК с молекулярной массой 4,2х10 3 кД, константой седиментации 45 С, содержит около 14 пар нуклеотидов.

РНК – 5,5 - 6,3%, Белки – 57-60%, Липиды – 27-30%, Углеводы – 6,5%

Комплементсвязывающий, групповой; выявляется в РСК;

Гемагглютинин, типовой; выявляется в РН, РТГА.

Адсорбция при помощи фосфолипидных и гликопротеидных рецепторов.

Проникновение путем рецепторного эндоцитоза (виропексис), при слиянии вирусной оболочки со стенкой вакуоли вирусная РНК выходит в цитоплазму.

РНК выполняет функцию иРНК. Репликация идёт медленно (40- 60 ч).

Сборка: образование нуклеокапсида на ЭПС клетки.

Выход путем почкования (присоединение суперкапсида при выходе из клетки).

В мозговой ткани белых мышей (3-4 недельного возраста).

В культуре клеток – куриных фибробластов, почек обезьян, перевиваемых клеток. В КК наблюдается ЦПД.

На овокультурах – в желточном мешке и хорионалантоисной оболочке.

Вирус разрушается при действии эфира, детергентов, формалина, при кипячении — через 2 минуты. При нагревании до 56-60 о С в течении 10-30 мин., в молоке сохраняется до 2-х мес. Устойчив к УФО, длительно сохраняется в глицерине.

Трансмиссивное природно-очаговое заболевание с весенне-летней сезонностью.

Механизм заражения – трансмиссивный.

трансмиссивный (при укусе клеща);

алиментарный (при употреблении в пищу инфицированного сырого козьего, коровьего молока и молочных продуктов);

контаминация (при раздавливании и втирании присосавшегося клеща);

трансплацентарный (плоду от матери).

Переносчики — клещи Ixodes persulcatus и Ixodes ricinus.

Клещи не могут летать или прыгать, они могут только зацепиться за проходящую мимо и задевающую их жертву или же упасть на нее. Как и в случае других кровососущих насекомых, укус клеща может остаться незамеченным довольно долгое время, благодаря присутствию в его слюне особых разжижающих кровь (антикоагулянтов) и обезболивающих веществ. Именно по этой причине, простой, но очень эффективной мерой по обнаружению присосавшегося клеща являются само- и взаимоосмотры по выходе из леса и на привалах. Самцы клеща, в отличие от самок, присасываются на очень короткое время, что является еще одной причиной того, что многие заболевшие не помнят факта укуса.

Не исключено и заражение людей, не посещавших лес. Это может произойти при заносе клещей животными (собаками, кошками) или людьми — на одежде, с цветами, ветками и т. д.

Наибольшему риску подвержены лица, деятельность которых связана с пребыванием в лесу: работники леспромхозов, геологоразведочных партий, строители автомобильных и железных дорог, нефте- и газопроводов, линии электропередач, топографы, охотники, туристы. В последние годы в числе больных до 75% составляют жители города, заразившиеся в пригородных лесах, на садовых и огородных участках.

Вирус попадает через кожу или слизистые в клетки мононуклеарно-фагоцитарной системы, где происходит первичная репродукция вируса. Затем выходит в кровь (вирусемия), вызывая интоксикацию. С током крови попадает в клетки ЦНС, размножается, вызывая дегенеративные изменения в сером веществе спинного и головного мозга (особенно тяжелые поражения отмечают в нервных клетках передних рогов шейного отдела СМ, ядрах мозжечка и продолговатого мозга). В оболочках мозга, спинномозговых корешках, периферических нервах развивается экссудативное воспаление.

Инкубационный период в среднем составляет 1,5—2 недели, иногда затягиваясь до 3 недель. Разную длительность инкубационного периода можно объяснить характером укуса — чем дольше присасывался клещ, тем больше вирусов проникло в организм и тем быстрее будет развиваться заболевание.

Заболевание развивается остро, в течение нескольких дней.

Основные формы КЭ.

Вирус поражает мягкую мозговую оболочку, серое вещество (кору) головного мозга, двигательные нейроны спинного мозга и периферические нервы, что клинически выражается в судорогах, параличах отдельных групп мышц или целых конечностей и нарушении чувствительности кожи.

Позже, когда вирусное воспаление охватывает весь головной мозг, отмечаются общемозговые симптомы— постоянные головные боли, упорная рвота, потеря сознания, вплоть до коматозного состояния или, наоборот, развивается психомоторное возбуждение с утратой ориентации во времени и пространстве.

Могут отмечаться нарушения сердечно-сосудистой системы (миокардит, сердечно­сосудистая недостаточность, аритмия), пищеварительной системы — задержка стула, увеличение печени и селезенки.

Все перечисленные симптомы отмечаются на фоне токсического поражения организма — повышение температуры тела до 39—40°С.

Тяжесть заболевания зависит от возраста — вероятность выраженного поражения головного мозга резко повышается с возраста 40 лет, при возрасте старше 60 регистрируется максимальная летальность.

Осложнения клещевого энцефалита отмечаются у 30 — 80% переболевших клинически выраженной формой и в основном представлены вялыми параличами преимущественно верхних конечностей.

Летальность колеблется в пределах от 2% при европейской форме до 20% при дальневосточной (более тяжелой и опасной) форме. Смерть наступает в течение 1 недели от начала заболевания.

Реже встречаются нетипичные варианты заболевания — стертые, гриппоподобные формы; полиомиелитоподобная форма. Возможно длительное хроническое носительство вируса.

После перенесенной инфекции формируется стойкий пожизненный иммунитет в результате выработки вируснейтрализующих, комплементсвязывающих и гемагглютинирующих антител. Развивается ГЗТ.

Исследуемый материал – кровь, СМЖ, клещи, секционный материал.

Вирусологический метод – выделение и идентификация;

Серологический метод – РН, РСК, РТГА, ИФА, РЗГА, РНГА с парными сыворотками (нарастание в 4 и более раз);

Экспресс-метод – РИФ, РПГА, ИФА,РИА;

Иммунохимический и молекулярно-биологический методы – ИФА, РНГА

Общие меры по профилактике укусов клещей включают:

ношение в лесу специальной одежды — сапоги, куртки с плотно застегнутыми рукавами; платок или сетка, закрывающая шею; головной убор, закрывающий волосы; само- и взаимоосмотры на выходе из леса и на привалах; скашивание травы и низкорослого кустарника, рубка сухостоя, освобождение от завалов и пней; применение жидких и аэрозольных репеллентов (специальных химических веществ для борьбы с насекомыми); кипячение сырого козьего и коровьего молока на территориях, где регистрируется клещевой энцефалит.

Специфическая (для клещевого энцефалита) профилактика осуществляется с помощью инактивированных вакцин. Быструю (через 24 часа от момента введения) профилактику также можно осуществлять с помощью однократного введения иммуноглобулина, который защищает на срок до 1 месяца.

Первая помощь при укусе клеща. Для удаления присосавшегося клеща его предварительно смазывают каким-нибудь жиром (вазелином, кремом, подсолнечным маслом), а через 15—20 минут осторожно вытягивают нитяной петлей или пинцетом, покачивая из стороны в сторону. Следует избегать разрушения клеща. Снятое насекомое следует сжечь или залить кипятком, однако его также можно принести с собой в медицинский пункт для установления инфицированности клеща вирусом. Место укуса рекомендуется обработать йодом, перекисью водорода или спирт-содержащим препаратом и тщательно вымыть руки.

Ни в коем случае не следует раздавливать клеща, поскольку в этом случае также может произойти заражение вирусом, содержащимся во внутренних органах клеща.

Вакцины. Принципиально все вакцины для профилактики клещевого энцефалита представляют собой выращенные на куриных эмбрионах, инактивированные формалином вирусы, адсорбированные на адъюванте (вещество для усиления иммунного ответа) — гидроокиси алюминия. В качестве дополнительных, стабилизирующих компонентов применяют желатин или альбумин.

На настоящий момент в России применяются четыре вакцины.

Культуралъная вакцина (пр-во НПО Вирион, Томск). Показана для вакцинации детей с 4 лет и взрослых до 65 лет. Курс вакцинации состоит из трех доз по схеме: 0—1—4. Альтернативная схема для быстрой защиты состоит из двух доз с интервалом 1—2 месяца, причем последняя доза вводится не позднее, чем за 2 недели до входа в природный очаг инфекции.

Концентрированная культуральная вакцина (пр-во Института полиомиелита и вирусных энцефалитов, Москва, Россия; штамм Софьин). От первой отличается тем, что может применяться с 18 лет. Курс вакцинации состоит из двух доз с интервалом 5—7 месяцев. Первую ревакцинацию делают одной дозой вакцины через 1—2 года, вторую и последующие — через три года.

От предыдущей отличается наличием дополнительной схемы вакцинации — три дозы по схеме 0—1—3 недель. Второе отличие — несколько большее число побочных реакций в связи с присутствием в составе вакцины желатина.

Все перечисленные вакцины обладают высокой иммуногенной активностью. Через две недели после введения последней дозы первичного курса вакцинации иммунитетом обладают от 90 до 97% привитых.

Экстренная профилактика, т.е. профилактика после укуса клеща, может быть проведена с помощью иммуноглобулинов. Срок для проведения такой профилактики ограничен тремя днями, после этого срока она теряет смысл.

В России доступны:

Иммуноглобулин против клещевого энцефалита человеческий жидкий (пр-во Биомед-Пермь, Россия). Вводят внутримышечно, однократно в возрасте до 12 лет — 1 мл, 12—16 лет — 2 мл, 16 лет и старше — 3 мл.

Иммуноглобулин против клещевого энцефалита (из лошадиной сыворотки), пр-во Россия.

FSME-Bulin (Immuno AG, Австрия).

Выпускают во флаконах по 1, 2, 5 и 10 мл. В целях профилактики (до укуса клеща) вводят в дозе 0,05 мл на кг массы тела. Действие начинается через 24 часа и продолжается в течение 1 месяца. Возможно повторное введение для более длительной защиты.

Среди переносчиков инфекционных заболеваний человека клещи занимают второе место после комаров: на сегодня выявлено не менее трех вирусных, 22 бактериальные и несколько протозойных инфекций, которые переносятся иксодовыми клещами. Ситуация зачастую осложняется тем, что при укусах клещи способны передавать человеку одновременно разные виды бактерий, вирусов и простейших, вызывая смешанные инфекции, часто протекающие в более тяжелых формах. Дополнительный риск заражения возникает из-за возможной циркуляции патогенов в сельскохозяйственных и домашних животных (например, инфекционные агенты могут сохраняться в молочных продуктах), а также при переливаниях крови и трансплантации органов.

Наиболее опасными среди инфекций, переносимых клещами, считаются клещевой энцефалит, иксодовый клещевой боррелиоз, эрлихиоз, риккетсиоз и бабезиоз. Для России наиболее социально значимыми инфекционными агентами являются боррелии и, конечно же, вирус клещевого энцефалита, о котором пойдет речь ниже.

В 30-е годы XX века шло интенсивное освоение Дальнего Востока: строились дороги, вырубались леса, из-за напряженных отношений с Японией в тайге дислоцировались крупные военные части. Врачи, работавшие в то время в Приморском крае, стали регулярно сообщать о неизвестной тяжелой болезни, поражающей как местных жителей, так и военных. Заболевание, считавшееся новой разновидностью тяжелого гриппа, сопровождалось резким повышением температуры и часто приводило к параличам и даже гибели заболевших.

Правильно диагностировать неизвестную болезнь удалось лишь в 1935 году местному врачу А. Г. Панову. Заболевание оказалось воспалением мозга, то есть энцефалитом, похожим по симптомам на описанный ранее японский энцефалит. В 1936 году врачи дальневосточной пастеровской станции пытались выделить возбудителя заболевания, вводя мышам в мозг эмульсию мозга людей, погибших от энцефалита. Но, несмотря на то, что у мышей появлялись признаки заболевания, исследования не увенчались успехом.

В январе 1937 года военные медики обратились в Наркомздрав СССР, где и было принято решение об организации на Дальний Восток научной экспедиции под руководством Л. А. Зильбера. В тяжелых полевых условиях была развернута настоящая вирусологическая лаборатория. Ученые свою задачу выполнили: патоген, вызывающий тяжелые заболевания центральной нервной системы, был успешно выделен и описан. Кроме того, была четко установлена определяющая роль иксодовых клещей в передаче инфекционного агента. Выяснилось, что источником заражения клещей служили дикие позвоночные животные, на основе чего были разработаны рекомендации по необходимым профилактическим мерам.

Лев Александрович Зильбер (1894–1966) — один из основоположников медицинской науки в СССР. С его именем связаны фундаментальные исследования изменчивости у бактерий и природы иммунитета, организация первых в стране вирусологических центров, создание и экспериментальная разработка вирусо-генетической теории происхождения опухолей, а также совершенно нового направления — иммунологии рака.

За работу по выявлению возбудителя и переносчика весенне-летнего энцефалита в 1937 г. был награжден премией Наркомздрава СССР, но в том же году арестован по ложному обвинению, что экспедиция, которую возглавлял Зильбер, тайно распространяла японский энцефалит на Дальнем Востоке, и освобожден лишь через полтора года. В короткий промежуток времени между освобождением и новым арестом работал над монографией об эпидемических энцефалитах, подготовил несколько статей.

К сожалению, это поистине блестящее открытие, ставшее важной вехой в истории вирусологии, не обошлось без жертв среди самих участников научной экспедиции. Так, М. П. Чумаков — будущий академик и создатель Института по изучению полиомиелита — перенес тяжелейшую форму инфекции, перешедшую у него в хроническую пожизненную форму; последствием заболевания у В.Д. Соловьева стала шестимесячная слепота.

Что на сегодня известно о вирусе клещевого энцефалита (ВКЭ)? Вирус относится к достаточно старому в эволюционном плане семейству флавивирусов (Flaviviridae), включающему более 70 вирусов животных и человека, в том числе такие опасные, как вирус желтой лихорадки, японского энцефалита, вирус лихорадки Денге и вирус гепатита C.

Основным природным резервуаром ВКЭ служат мелкие млекопитающие (полевки, мыши, насекомоядные). Вирус способен заражать животных и размножаться в их организме, однако заболевание протекает у них зачастую без видимого вреда для здоровья. Переносчиками вируса являются клещи, питающиеся кровью лесных зверьков, — европейский лесной клещ, таежный, луговой клещи, а также ряд других, более редко встречающихся видов. ВКЭ может размножаться и в их организме. Точно не известно, был ли вирус первоначально связан только с клещами, или только с позвоночными животными, но в процессе эволюции он приспособился к существованию в организмах как тех, так и других.

В настоящее время вирус клещевого энцефалита встречается в лесных регионах по всей территории Евразии от Атлантического океана до Тихого, причем в целом область его распространения совпадает с ареалами европейского лесного и таежного клещей. В последние десятилетия ареал ВКЭ неуклонно расширяется, что связано с усилением хозяйственной деятельности человека. Так, заброшенные лесные вырубки зарастают мелкими кустарниками и заболачиваются, что создает идеальные условия для обитания мелких млекопитающих и связанных с ними клещей.

В Сибирь вирус клещевого энцефалита мог попасть с Дальнего Востока; не исключено также, что природные очаги заболевания существовали здесь задолго до появления человека.

В Институте химической биологии и фундаментальной медицины были исследованы 95 штаммов вируса клещевого энцефалита из коллекции Института систематики и экологии животных СО РАН, выделенных от взрослых особей таежного клеща, собранных с растительности в восточной части Новосибирской области в 1980–2001 гг.

Анализ нуклеотидных последовательностей фрагмента гена Е, кодирующего белок оболочки вируса, показал, что все штаммы соответствуют сибирскому генетическому типу. С другой стороны, в крови людей, госпитализированных с подозрением на клещевые инфекции, в совместных исследованиях с новосибирскими медиками были обнаружены изоляты ВКЭ, относящиеся к дальневосточному генетическому типу.

Ранее считалось, что этот тип вызывает только тяжелые формы заболевания, тогда как сибирский — преимущественно хронические. Наши исследования, подтвержденные данными других авторов, показали, что вирус дальневосточного генетического типа способен вызывать различные формы клещевого энцефалита, начиная от самых тяжелых и заканчивая стертыми, никак не проявляющимися.

Кроме того, всё большее число людей предпочитает проводить свободное время на природе, отдыхая или работая на приусадебных участках. В той же Новосибирской области около 75% населения проживает на территории, условия которой благоприятны для жизни клещей, здесь же сосредоточена и основная масса летних оздоровительных учреждений, зон массового отдыха, садово-дачных участков.

Геном вируса клещевого энцефалита был расшифрован практически одновременно в нашей стране (в том числе и в Институте химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН; Pletnev et al., 1990) и за рубежом (Mandl et al., 1989). На сегодня выделено три генетических типа вируса, различающихся по своим свойствам: дальневосточный, сибирский и западноевропейский. Такая привязка генетического типа к географическому местоположению достаточно условна, поскольку в одном регионе могут встречаться штаммы, относящиеся к разным типам.

Для вируса клещевого энцефалита, как и для большинства других вирусных инфекций, не существует высокоспецифических методов лечения — в этом заключается его опасность. Лечение всех вирусных заболеваний направлено в основном на стимуляцию иммунитета и устранение внешних симптомов заболевания, а дальше организм должен сам справляться с инфекцией. ВКЭ опасен еще и тем, что способен вызывать хронические формы заболевания, а его последствиями могут быть параличи и инвалидность. Поэтому важнейшим делом в исследовании этого инфекционного агента является разработка методов диагностики и профилактики заболевания.

В клинической диагностике вируса клещевого энцефалита наиболее распространены серологические методы, с помощью которых в крови пациента определяют наличие антител, специфических защитных белков, или наличие самого агента. Однако чувствительность этих методов не слишком высока, к тому же существует вероятность ошибки из-за возможных перекрестных реакций с другими патогенами. Кроме того, с их помощью невозможно получить подробную характеристику самого возбудителя (например, определить его генетический тип).

Молекулярно-генетические методы, направленные на специфическое распознавание генетического материала вируса, обладают более высокой чувствительностью. Особенно это относится к методу полимеразной цепной реакции ** (ПЦР), благодаря которой можно размножить, а потом идентифицировать ничтожное количество наследственного материала вируса, что позволяет провести диагностику в течение первых дней после заражения. Однако при некоторых обстоятельствах достоинства могут переходить в недостатки: генодиагностика ВКЭ молекулярно-генетическими методами благодаря высокой чувствительности может также приводить к ошибкам, обусловленным многочисленными новыми мутациями вирусных геномов, а кроме того, предъявляет высокие требования к чистоте экспериментов.

Живые вакцины — способ стимуляции иммунитета введением в организм ослабленных вирусов, открытый еще в 1796 году английским врачом Э. Дженнером. С тех пор была получена живая вакцина против вируса желтой лихорадки, отличающаяся от высокопатогенных штаммов многочисленными заменами нуклеотидов в геноме; продолжаются поиски ослабленных штаммов флавивирусов Денге, Западного Нила и Лангат для разработки на их основе живых вакцин.

Были предприняты попытки создания живой вакцины и против вируса клещевого энцефалита. В 1957 году в качестве такой живой вакцины было решено использовать ослабленный штамм флавивируса Лангат, вызывающий в организме выработку антител, подобных антителам к ВКЭ. Однако выяснилось, что при внутримозговом введении этот штамм сам становится патогенным и вызывает энцефалиты и атрофию участков мозга без внешних клинических проявлений. В дальнейшем были обнаружены ослабленные штаммы самого ВКЭ, но, к сожалению, все они оказались генетически нестабильными.

Вот трагический пример использования живых вакцин против ВКЭ. В 1969 году от больного, у которого после укуса клеща в течение 4 лет не было клинических проявлений заболевания, но в крови сохранялись высокие титры антител, был выделен ослабленный штамм вируса клещевого энцефалита. Лабораторные исследования выявили его низкую нейровирулентность, после чего были проведены клинические испытания на добровольцах, давшие положительные результаты. В конечном счете ослабленным штаммом ВКЭ было иммунизировано около 650 тыс. человек. Однако 35 вакцинированных получили тяжелые осложнения в виде менингитов и менингоэнцефалитов, причем у 22 из них тяжелые последствия заболевания остались на всю жизнь, а один человек умер. Использование этого штамма в качестве живой вакцины было прекращено (Timofeev, Karganova, 2003).

Ослабленные штаммы вирусов раньше получали путем отбора после длительного культивирования, сейчас же широкое распространение получил метод так называемого сайт-направленного мутагенеза.

В 1993 году появился новый подход к профилактике инфекционных заболеваний — генная иммунизация, основанная на прямом введении в организм генно-инженерной ДНК, рекомбинантных плазмид (векторов-переносчиков), содержащих не весь геном, но отдельные гены возбудителя заболевания.

С помощью подобных манипуляций были созданы живые химерные вакцины, содержащие, например, часть генов вируса желтой лихорадки и часть генов других флавивирусов. При этом в функционально важные участки их геномов были введены точечные мутации, вызывающие ослабление патогенности (Pletnev et al., 2006).

Тем не менее в настоящее время применение ослабленных живых вакцин, в том числе и против ВКЭ, ограничено, поскольку существует вероятность превращения ослабленных штаммов в высокопатогенные штаммы дикого типа. Это происходит потому, что в клетке-хозяине отсутствуют системы коррекции мутаций, которые могут возникнуть в вирусной РНК. Гарантией безопасности таких вакцин могла бы служить утрата больших фрагментов вирусных геномов, однако это приводит к значительному снижению жизнеспособности самих вирусов-мутантов.

Нужно отметить, что исследования флавивирусов, как и многих других патогенов, осложняются их высокой инфекционностью, следствием которой являются строгие требования безопасности, а также дороговизной самих вирусных препаратов. И в этом смысле использование неинфекционных ДНК-копий генома ВКЭ является очень перспективным направлением.

В ИХБФМ был получен ряд генно-инженерных ДНК, содержащих в том числе и полноразмерную ДНК-копию генома вируса клещевого энцефалита (Dobrikova et al., 1996). Конструирование подобных стабильных ДНК-копий вирусных геномов открывает широкие возможности для исследования хода размножения вируса в клетках, изучения функций отдельных вирусных белков и их комплексов.

Учеными из ИХБФМ были сконструированы четыре таких плазмиды, содержащие различные гены одного из штаммов вируса клещевого энцефалита. Для оценки эффекта генной иммунизации привитых мышей заражали летальными дозами того же штамма ВКЭ. В результате оказалось, что некоторые плазмиды обладают определенным защитным эффектом.

Чтобы изучить возможные нежелательные эффекты этих вакцин, плазмиды вводили в различные клеточные культуры. В результате выяснилось, что при увеличении времени культивирования клеток до нескольких месяцев наблюдалась существенная модификация плазмид и встраивание их в хозяйский геном.

Таким образом, несмотря на положительные результаты генной вакцинации, вопрос о применении ДНК-вакцин в настоящее время остается открытым, поскольку препятствием к их использованию также является проблема безопасности. Возможно, преодолеть это препятствие удастся созданием РНК-вакцин с аналогичным принципом действия, для которых не существует риска интеграции в ДНК-геном хозяйской клетки. Но это уже задачи будущих исследований.

Возможно ли полностью избавиться от ВКЭ, например, уничтожив его основных переносчиков, иксодовых клещей? В свое время такая попытка была сделана с использованием печально известного ДДТ, но последствия массовой обработки лесов сильнейшим ядом были поистине ужасающими.