Гепатит в степени ифа

Аннотация научной статьи по клинической медицине, автор научной работы — В. М. Мицура

С целью оценки значения иммуноферментного анализа ( ИФА ) и полимеразной цепной реакции ( ПЦР ) для диагностики HCV-инфекции, обследовано 500 больных с острыми и хроническими формами HCV-инфекции. В сыворотках крови этих больных определялись РНК HCV с помощью ПЦР и антитела к HCV (анти-HCV tot и у 35 больных анти-HCV IgM). Положительные результаты ПЦР наблюдались у 83% больных и чаще соответствовали повышенным значениям АЛТ (χ2 = 25,01; р = 0,0001). Положительные результаты ПЦР и ИФА наблюдались в 81,8% случаев, отрицательные результаты ПЦР и ИФА наблюдались в 0,4% случаев. В 17,8% случаев результаты ПЦР и ИФА не совпадали. В группе больных с выявленными aнти-HCV IgM, РНК HCV выявлялась достоверно чаще (p = 0,009), чем при их отсутствии. Чувствительность теста aнти-HCV IgM по сравнению с ПЦР 51,9%, специфичность — 100%. Определение антител к HCV класса IgM может применяться для оценки повышенной репликативной активности HCV. Совместное использование методов ПЦР и ИФА позволяет усовершенствовать лабораторную диагностику HCV-инфекции.

Похожие темы научных работ по клинической медицине , автор научной работы — В. М. Мицура

THE USE OF ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY AND POLYMERASE CHAIN REACTION FOR DIAGNOSTICS OF HEPATITIS C VIRUS (HCV-) INFECTION

The aim of this study was to evaluate the significance of enzyme-linked immunosorbent assay ( EIA ) and polymerase chain reaction ( PCR ) in diagnostics of hepatitis C virus (HCV-) infection. The sera samples from 500 of patients with acute and chronic forms of HCV-infection were tested by means of PCR and EIA (anti-HCV total and IgM in 35 of patients). PCR positive results were seen in 83% of patients and more often revealed in those patients with elevated ALT levels (χ2 = 25.01; р = 0.0001). Both PCR and EIA positive results were in 81.8% of patients, both negative — in 0.4%. In 17.8% of cases results of PCR and EIA didn’t agree. In patients with anti-HCV IgM positive, HCV RNA were revealed more often than in those anti-HCV IgM negative (p = 0.009). Sensitivity of the anti-HCV IgM test in comparison with PCR was evaluated 51.9%, specificity – 100%. Detection of antibodies to HCV class IgM can be applied for an estimation of increased replicative activity of HCV. The use of both methods ( EIA and PCR ) allows improving HCV-infection diagnostics.

ПРИМЕНЕНИЕ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА И ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ГЕПАТИТ С- ВИРУСНОЙ (HCV-) ИНФЕКЦИИ

В. М. Мицура, О. В. Пантелеева, С. В. Жаворонок, Е. Л. Красавцев, И.Л. Павлович, А.В. Воропаева, Аль-Ханса Аль-Шаби

Гомельский государственный медицинский университет Гомельская областная инфекционная клиническая больница

С целью оценки значения иммуноферментного анализа (ИФА) и полимеразной цепной реакции (ПЦР) для диагностики HCV-инфекции, обследовано 500 больных с острыми и хроническими формами HCV-инфекции. В сыворотках крови этих больных определялись РНК HCV с помощью ПЦР и антитела к HCV (анти-HCV tot и у 35 больных анти-HCV IgM). Положительные результаты ПЦР наблюдались у 83% больных и чаще соответствовали повышенным значениям АЛТ (х2 = 25,01; р = 0,0001). Положительные результаты ПЦР и ИФА наблюдались в 81,8% случаев, отрицательные результаты ПЦР и ИФА наблюдались в 0,4% случаев. В 17,8% случаев результаты ПЦР и ИФА не совпадали. В группе больных с выявленными анти-HCV IgM, РНК HCV выявлялась достоверно чаще (p = 0,009), чем при их отсутствии. Чувствительность теста анти-HCV IgM по сравнению с ПЦР 51,9%, специфичность — 100%. Определение антител к HCV класса IgM может применяться для оценки повышенной репликативной активности HCV. Совместное использование методов ПЦР и ИФА позволяет усовершенствовать лабораторную диагностику HCV-инфекции.

Ключевые слова: хронический гепатит С, РНК HCV, ПЦР, ИФА, антитела к HCV общие и класса IgM.

THE USE OF ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY AND POLYMERASE CHAIN REACTION FOR DIAGNOSTICS OF HEPATITIS C VIRUS (HCV-) INFECTION

V. M. Mitsura, O. V. Panteleeva, S. V. Zhavoronok, E. L. Krasavtsev, I. L. Pavlovich, A. V. Voropaeva, Al-Khansa Al-Shabi A.

Gomel State Medical University Gomel Regional Infectious Clinical Hospital

The aim of this study was to evaluate the significance of enzyme-linked immunosorbent assay (EIA) and polymerase chain reaction (PCR) in diagnostics of hepatitis C virus (HCV-) infection. The sera samples from 500 of patients with acute and chronic forms of HCV-infection were tested by means of PCR and EIA (anti-HCV total and IgM in 35 of patients). PCR positive results were seen in 83% of patients and more often revealed in those patients with elevated ALT levels (х2 = 25.01; р = 0.0001). Both PCR and EIA positive results were in 81.8% of patients, both negative — in 0.4%. In 17.8% of cases results of PCR and EIA didn't agree. In patients with anti-HCV IgM positive, HCV RNA were revealed more often than in those anti-HCV IgM negative (p = 0.009). Sensitivity of the anti-HCV IgM test in comparison with PCR was evaluated 51.9%, specificity - 100%. Detection of antibodies to HCV class IgM can be applied for an estimation of increased replicative activity of HCV. The use of both methods (EIA and PCR) allows improving HCV-infection diagnostics.

Key words: chronic hepatitis C, HCV RNA, PCR, EIA, antibodies to HCV total and IgM.

Актуальность инфекции вирусом гепатита С (ИСУ-инфекции) в настоящее время не вызывает сомнений. Так, в Республике Бела-

русь насчитывается около 100 000 лиц, инфицированных ИСУ, что составляет 1% населения страны, из которых 10% имеют манифестные формы инфекции [1]. Для ИСУ-

инфекции характерно длительное бессимптомное течение с отсутствием характерных клинических симптомов. При этом заболевание чаще всего выявляется на стадии хронического гепатита или даже цирроза печени. Поэтому лабораторная диагностика ИСУ-инфек-ции имеет очень большое значение [2, 3].

За последние годы лабораторная диагностика ИСУ-инфекции значительно улучшилась. Для скрининга ИСУ-инфекции применяется, в основном, иммуноферментный анализ (ИФА). На смену иммунофермент-ным тест-системам 1-го и 2-го поколений в практику пришли тест-системы 3-го поколения, позволяющие выявить 97% инфицированных ИСУ [3,4,5]. Однако антитела реже выявляются у больных с иммуноде-фицитами, включая ВИЧ-инфекцию, — лишь у 50-95% [4]. Антитела класса 1§М могут выявляться не только при остром вирусном гепатите С (ОВГС), но и при хроническом гепатите С (ХГС) в период обострения заболевания и свидетельствуют об активной репликации вируса [6].

Выявление РНК ИСУ в сыворотке крови с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) характеризует вирусемию, свидетельствующую о продолжающейся активной репликации ИСУ. Метод ПЦР имеет высокую специфичность и чувствительность, с его помощью можно также определять концентрацию вируса в исследуемом материале. Также ПЦР используется для мониторинга терапии, поскольку исчезновение вирусемии — один из критериев эффективности терапии. Однако полностью не исключается возможность получения как лож-ноотрицательных, так и ложноположитель-ных результатов [4]. Уровень виремии, выявляемый с помощью ПЦР, не всегда коррелирует с активностью процесса и значениями аланинаминотрансферазы (АЛТ) [7].

Цель исследования: оценить значение иммуноферментного анализа (ИФА) и полимеразной цепной реакции (ПЦР) для диагностики ИСУ-инфекции.

Материалы и методы

Обследовано 500 больных с острыми и хроническими формами ИСУ-инфекции, находившихся на лечении и консультации в Гомельской областной инфекционной клинической больнице в 2003-2005 годах. Среди обследованных 500 больных — 180

(36%) женщин и 320 (64%) мужчин, средний возраст — 35,4±1,8 лет. В возрасте до 20 лет было 73 больных (14,6%), 21-40 лет — 262 (52,4%), старше 40 лет — 165 (33%).

Биохимическая активность ХГС (оценивалась у 470 чел.) на момент обследования в стационаре отсутствовала у 97 больных (20,6%), была минимальной (повышение АЛТ от 1 до 3 норм) — у 179 (37,7%), умеренной (повышение АЛТ от 3 до 10 норм) — у 154 (33,2%), высокой (АЛТ свыше 10 норм) — у 40 человек (8,5%).

Результаты и обсуждение

Из 500 обследованных больных положительные результаты ПЦР наблюдались у 415 (83%), отрицательные — у 85 (17%).

Проведено сравнение частоты выявления РНК HCV в зависимости от биохимической активности: у больных с нормальными значениями АЛТ (до 0,20 мккат/л) и повышенным уровнем АЛТ (более 0,20 мккат/л) (табл. 1).

Результаты ПЦР-анализа в зависимости от биохимической активности HCV-инфекции

Биохимическая активность РНК+ РНК-

Вне активности (n=97) 64 (66%) 33 (34%)

Повышенная (n=373) 326 (87,4%) 47 (12,6%)

X2 = 25,01; р = 0,0001

В группе больных с повышенной биохимической активностью (АЛТ более 0,20 мккат/л) РНК HCV выявлялась достоверно чаще (по критерию х2 Р = 0,0001), чем при нормальной активности. Однако повышенная биохимическая активность не всегда соответствует вирусологической репликации. Поэтому для более точной оценки активности процесса при HCV-инфекции необходимо использовать совместно определение АЛТ и ПЦР на обнаружение РНК HCV в сыворотке крови.

Сопоставлены результаты, полученные с помощью методов ИФА (анти-HCV tot) и ПЦР (РНК HCV) у 484 больных. Положительные результаты ПЦР и ИФА наблюдались в 396 случаях (81,8%), отрицательные результаты ПЦР и ИФА наблюдались в 2 случаях (0,4%). В 86 (17,8%) случаев результаты ПЦР и ИФА не совпадают.

Отрицательные результаты ПЦР и положительные результаты ИФА наблюдались в 83 случаях (17,2%). Такая картина характерна для ОВГС после прекращения вирусемии (8 случаев), после перенесенного ОВГС (1 случай), после успешной ин-терферонотерапии ХГС (18 случаев). В остальных 56 случаях из 83 (67,5%) такое сочетание отмечалось у больных латентными формами ХГС и у пациентов в стадии цир-

роза печени, когда репликация ИСУ невысока и концентрации РНК вируса в крови ниже порога определения ПЦР. При этом в 38 случаях отсутствие РНК ИСУ сочеталось с наличием повышенного уровня АЛТ. Повышение АЛТ, по нашему мнению, могло не являться следствием активации ИСУ, а возникать в результате потребления алкоголя, обострения сопутствующих хронических заболеваний (холецистит, панкреатит, и др.).

Положительные результаты ПЦР и отрицательные результаты ИФА встречались в 3 случаях (0,6%). Эти эпизоды расценивались как серонегативный период ОВГС (2 случая), а при ХГС (в 1 случае) также, возможно, говорит о слабом антительном ответе вследствие иммунодефицита либо индивидуальных особенностей антителообразования.

Следует учитывать, что несоответствие результатов ИФА и ПЦР могут быть также следствием ложной негативности или ложной позитивности этих лабораторных тестов.

Известно, что обнаружение анти-ИСУ 1§М, как и РНК ИСУ, свидетельствует об активной репликации вируса. Проведено сравнение частоты выявления РНК ИСУ в зависимости от наличия анти-ИСУ 1§М у больных ХГС (табл. 2).

Выявление РНК HCV в зависимости от наличия анти-HCV IgM

Выявление анти-HCV IgM РНК+ РНК-

Анти-HCV IgM+ (n=14) 14 (100%) 0

Анти-HCV IgM- (n=21) 13 (62%) 8 (38%)

р = 0,009 (по точному критерию Фишера)

В группе больных с выявленными сутствии. Выявление анти-ИСУ 1§М в анти-ИСУ 1§М, РНК ИСУ выявлялась дос- 100% случаев соответствует вирусемии. В товерно чаще (р = 0,009), чем при их от- то же время анти-ИСУ 1§М не выявлялись

при обнаружении РНК вируса в крови в 62% случаев, что отражает более высокую чувствительность метода ПЦР по сравнению с обнаружением a-HCV IgM. В 8 случаях отсутствие анти-HCV IgM наблюдалось при отсутствии РНК в крови, что говорит о ремиссии заболевания.

Оценена чувствительность теста на ан-ти-HCV IgM в сравнении с ПЦР. Истинно положительных результатов (ИП) — 14, ложно отрицательных (ЛО) — 13. По формуле [5] чувствительность теста = (ИП/(ИП+ЛО)) х 100% = 51,9%. Специфичность теста на анти-HCV IgM в сравнении с ПЦР также оценивалась по формуле [5]. Истинно отрицательных (ИО) результатов — 8, ложно положительных (ЛП) — 0. Специфичность теста = (ИО/(ИО+ЛП))хЮО% = 100%. Таким образом, при отсутствии возможности выполнения ПЦР-анализа, определение антител к HCV класса IgM может применяться для оценки повышенной реп-ликативной активности HCV.

1. У больных с повышенной биохимической активностью (АЛТ более 0,20 мккат/л) РНК HCV выявлялась (87,4%) достоверно чаще, чем у больных с нормальными значениями АЛТ (до 0,20 мккат/л) (66,0%; р = 0,0001).

2. Результаты методов ИФА (анти-HCV tot) и ПЦР (РНК HCV) совпадают у 82,2% больных, в 17,8% случаев результаты ПЦР и ИФА не совпадают. Отсутствие РНК HCV на фоне позитивного теста на анти-HCV tot в 67,5% случаев наблюдается при текущей хронической HCV-инфекции и зачастую сочетается с повышением АЛТ.

3. Тест на анти-HCV IgM позволяет оценить вирусную репликацию HCV. Обнаружено, что в группе больных с выявленными анти-HCV IgM в 100% выявлялась РНК HCV, что достоверно чаще (p = 0,009),

чем при отсутствии анти-ИСУ 1§М (62%).

4. Чувствительность теста на анти-ИСУ 1§М по сравнению с ПЦР составляет 51,9%, специфичность — 100%, что позволяет рекомендовать определение анти-ИСУ 1£М для оценки повышенной реплика-тивной активности ИСУ при невозможности определения РНК ИСУ методом ПЦР.

5. Совместное использование методов ПЦР и ИФА позволяет усовершенствовать лабораторную диагностику ИСУ-инфекции.

1. Жаворонок, С. В. Система диагностики диффузных паренхиматозных поражений печени у различных групп населения с повышенным риском инфицирования вирусными гепатитами В, С, Б, в: Метод. ре-ком. / С. В. Жаворонок [и др.]. — Мн., 1998. — 52 с.

2. Соринсон, С. Н. Вирусные гепатиты / С. Н. Со-ринсон. — Спб.: ТЕЗА, 1998. — 325 с.

3. Балаян, М. С. Энциклопедический словарь -вирусные гепатиты. / М. С. Балаян, М. И. Михайлов. — Изд. 2-е, перераб. и дополн. — М.: Ами-пресс, 1999. — 304 с.

4. Шахгильдян, И. В. Парентеральные вирусные гепатиты (этиология, диагностика, профилактика) / И. В. Шахгильдян, М. И. Михайлов, Г. Г. Они-щенко. — М.: ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, 2003. — 384 с.

5. Залеских, Н. В. Система внешнего и внутреннего контроля качества в иммуноферментном анализе: Информ. материалы / Н. В. Залеских, М. Н. Кокорева, Т.В. Сивилева. — Н. Новгород: Диагностические системы, 2003. — 42 с.

6. Радченко, В. Г. Хронические заболевания печени (этиология, клиника, диагностика, лечение, эпидемиология и профилактика) / В. Г. Радченко, А. В. Шаб-ров, В. В. Нечаев.-СПб.: Лань, 2000. — 192 с.

7. Является ли репликация вируса гепатита С маркером степени активности инфекционного процесса? По данным полимеразной цепной реакции и морфологического анализа биопсий печени / Г.И. Непомнящих [и др.] // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. — 2003. — Т. 135. № 3. — С. 343-348.

УДК 616.15:616.61-008.64]-053.2 ИНФОРМАЦИОННАЯ ЗНАЧИМОСТЬ НЕКОТОРЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КРОВИ У ДЕТЕЙ С ОСТРОЙ ПОЧЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТЬЮ

Белорусская медицинская академия последипломного образования, Минск

Острая почечная недостаточность (ОПН) вовлекает в патологический процесс многие органы и системы больного, нарушая многочисленные физиологические контакты организма. Это требует тщательного мониторинга системы гомеостаза для получения своевременной информации о неблагоприятных отклонениях в организме и принятия соответствующих мер по их устранению. Однако при этом число исследований крови у детей с

Аннотация научной статьи по клинической медицине, автор научной работы — Матиевская Н.В., Пашковец А.В., Стасюкевич А.К., Малышко Н.Г.

Цель работы: оценить информативность иммуноферментного анализа в диагностике ВГС-инфекции. Изучены показатели оптической плотности (ОП) сывороток крови при определении анти-ВГС методом ИФА 250 пациентов, не получавших противовирусную терапию гепатита С. Всем пациентам было выполнено определение РНК ВГС методом ПЦР. Установлено, что при ОП, равной 2,6 и более, диагностируется репликативная стадия ВГС-инфекции (РНК ВГС +), в то время как при ОП, равной или менее 0,7, исключается наличие репликативной стадия ВГС-инфекции (РНК-). Выводы: показатель ОП суммарных антител к ВГС в сыворотке крови может быть использован как дополнительный критерий диагностики ВГС-инфекции в условиях ограниченных возможностей проведения ПЦР.

Похожие темы научных работ по клинической медицине , автор научной работы — Матиевская Н.В., Пашковец А.В., Стасюкевич А.К., Малышко Н.Г.

DESCRIPTIVENESS OF ENZYME-LINKED IMMUNOADSORBENT ASSAY IN DIAGNOSIS OF HCV-INFECTION

Aim of study: to estimate descriptiveness of enzyme-linked immunoadsorbent assay (ELISA) in diagnosis of HCV-infection. Methods. The optical density (OD) of total antibodies to HCV in the blood serum of 250 blood serum samples of antiHCV-positive patients who did not receive antiviral therapy against HCV . All patients were tested on RNA HCV by PCR. Results are presented as mean ± SD.Results. The OD 2,6 and more are associated with replicative stage of HCV-infection (RNA+), OD 0,7 and less is parameter for exclusion of replicative stage of HCV-infection (RNA-). Conclusions. Parameter of serum OD may be used like additional criteria for diagnosis of HCV-infection especially in setting with limited recourses for PCR

ИНФОРМАТИВНОСТЬ ИММУНОфЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА В ДИАГНОСТИКЕ

Матиевская Н. В.(пЫатаИ@та'11.ги)/ Пашковец А. В.(hannapashkavets@gmaiLcom)/ 2Стасюкевич А. К. (hanna_stasiukevich@list.ru), 3Малышко Н. Г. (natagrd@tut.by)

Цель работы: оценить информативность иммуноферментного анализа в диагностике ВГС-инфекции. Изучены показатели оптической плотности (ОП) сывороток крови при определении анти-ВГС методом ИФА 250 пациентов, не получавших противовирусную терапию гепатита С. Всем пациентам было выполнено определение РНК ВГС методом ПЦР. Установлено, что при ОП, равной 2,6 и более, диагностируется репликативная стадия ВГС-инфекции (РНК ВГС+), в то время как при ОП, равной или менее 0,7, исключается наличие репликативной стадия ВГС-инфекции (РНК-). Выводы: показатель ОП суммарных антител к ВГС в сыворотке крови может быть использован как дополнительный критерий диагностики ВГС-инфекции в условиях ограниченных возможностей проведения ПЦР.

Ключевые слова: ВГС; ИФА; антитела к ВГС, диагностика

В настоящее время вирусный гепатит С (ВГС) является актуальной проблемой здравоохранения во всем мире в связи с его широкой распространенностью среди трудоспособного населения. По мнению экспертов ВОЗ, ежегодно в мире инфицируются ВГС 3-4 млн человек. Общее количество хронически инфицированных ВГС составляет 130-170 млн человек. По прогнозной оценке экспертов CDC, в мире в последующие 5 лет ожидается увеличение количества инфицированных ВГС до 400-450 млн. Ежегодно от связанных с гепатитом С болезней печени умирает примерно 350 000 пациентов [4].

Репликативная стадия ВГС-инфекции свидетельствует о наличии острой или хронической ВГС-ин-фекции и диагностируется при наличии у пациента положительного результата на РНК ВГС. В то время как отсутствие РНК ВГС у анти-ВГС позитивного пациента говорит либо о спонтанной ремиссии ВГС-инфекции, что встречается в 10-15% случаев при естественном течении заболевания, либо о ремиссии в ответ на противовирусную терапию [2, 4].

Определение анти-ВГС проводится при помощи широко распространенного твердофазного иммуноферментного анализа, результат которого представлен антителами общего класса - anti-HCV total, которые содержат иммуноглобулины М и G. Верификация положительного результата ИФА базируется на показателе оптической плотности (ОП) сыворотки крови. ОП отражает уровень концентрации суммарных антител в одной единице объема. Положительный результат на определение антител к ВГС может свидетельствовать о наличии у пациента как репликативной стадии ВГС, так и пер-систировании антител после перенесенной острой или хронической ВГС-инфекции (ремиссия) [2].

Материалы и методы

Результаты и обсуждение

Заболеваемость ГС в по регионам РБ за 2014 и 2015 гг. представлена на рисунке 1.

Таблица 1 - Распределение образцов сывороток в зависимости от уровня оптической плотности и результатов ПЦР

Рисунок 1. - Распространённость впервые установленного хронического ГС и «носительства

Для оценки информативности ИФА в диагностике репликативной стадии ВГС-инфекции был выполнен сравнительный анализ показателей ОП сыворотки крови при положительных результатах ИФА в зависимости от результата качественной ПЦР на РНК ВГС. По результатам ПЦР РНК ВГС не выявлялась в 75 (30%) образцах плазмы крови. РНК ВГС была выявлена у 175 (70%). Уровень ОП у ВГС РНК-негативных был значительно ниже, чем у ВГС РНК-позитивных пациентов: 0,67±0,54(0,007-2,579) и 2,7±0,65 (0,986 - 3,896), соответственно (p 0,3

2,6 и более 104 (59,4%) 0 Не можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Как видно из представленной таблицы 1, среди РНК-ВГС+ пациентов в 59,4% случаев имела место высокая ОП (>2,6). У пациентов с таким уровнем ОП отсутствовали негативные результаты определения РНК. В то время как среди пациентов с негативными результатами на выявление РНК методом ПЦР в 65,3% случаев ОП была менее 0,7. Среди пациентов с РНК-ВГС+ уровень ОП менее 0,7 не был выявлен ни в одном случае, что подтверждает результаты ROC-анализа.

Группа пациентов с ОП более 0,7, но менее 2,6 была неоднородна по своему составу, так как в ней присутствовали пациенты как с наличием репликативной стадии ВГС (РНК-ВГС+) - 71 (40,6%), так и пациенты с отсутствием репликативной стадии ВГС (РНК-ВГС-) - 26 (33,75%). Представленные данные указывают на низкую информативность показателя ОП в пределах более 0,7, но менее 2,6 для диагностики или исключения репликативной стадии ВГС-инфекции.

Приводим клинические примеры, подтверждающие информативность представленных данных. Пациент Б., 43 г., диагноз: Хронический вирусный гепатит С, умеренной степени активности. Показатель ОП при определении анти-ВГС методом ИФА: 4,859 от 03.11.15. РНК-ВГС выделена от 12.11.2015. Таким образом, у данного пациента была диагностирована репликативная стадия ВГС-инфекции как по показателю ОП (уровень ОП >2,6), так и по результатам ПЦР-диагностики. Пациенту назначена противовирусная терапия ВГС-инфекции.

Пациент В., 38 л. Хронический гепатит С, ремиссия. Показатель ОП при определении анти-ВГС методом ИФА: от 07.12.15 составил 0,271. РНК-ВГС не выделена. У данного пациента была исключена репликативная стадия ВГС-инфекции как по показателю ОП (уровень ОП Не можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Aim of study: to estimate descriptiveness of enzyme-linked immunoadsorbent assay (ELISA) in diagnosis of HCV-infection.

Methods. The optical density (OD) of total antibodies to HCV in the blood serum of250 blood serum samples of anti-HCV-positive patients who did not receive antiviral therapy against HCV. All patients were tested on RNA HCV by PCR. Results are presented as mean ± SD.Results. The OD 2,6 and more are associated with replicative stage of HCV-infection (RNA+), OD 0,7 and less is parameter for exclusion of replicative stage of HCV-infection (RNA-).

Conclusions. Parameter of serum OD may be used like additional criteria for diagnosis of HCV-infection especially in setting with limited recourses for PCR

Keywords: HCV; ELISA: Anti-HCV, diagnoses

Поступила: 02.09.2016 Отрецензирована: 06.09.2016

МЕТОД ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА В ИССЛЕДОВАНИЯХ НА ОБНАРУЖЕНИЕ МАРКЕРОВ ПАРЕНТЕРАЛЬНЫХ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ

О.А. Груздева, С.Ф. Астафьева -заслуженный врач РФ., И.И. Пильч,
Т.Э. Ходакова, З.И. Лютых

Филиал ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в городе Москве"
в Центральном АО г. Москвы

Научные достижения в области изучения антигенной структуры вирусов - возбудителей парентеральных гепатитов человека - позволили широко применять в лабораторной практике метод иммуноферментного анализа (1, 2, 3, 4).

Филиал ФГУЗ "ЦГиЭ в г. Москве" в ЦАО продолжает свою деятельность, используя ранее накопленный опыт и развивая новые направления исследований. Микробиологическая лаборатория филиала, имеющая в своем составе вирусологическое отделение, оснащена современным оборудованием. Вирусологические исследования в филиале проводятся с целью диагностики заболеваний, обследования контактных лиц, исследования напряженности иммунитета, с профилактической целью.

Отделение вирусологии микробиологической лаборатории филиала проводит иммуноферментный анализ на выявление маркеров гепатита "В": HBsAg, a-HBs, HBeAg, a-HBc IgM, a-HBc IgG, a-HBe. Ежегодно только на определение поверхностного антигена гепатита "В" (HBsAg) проводится от 14000 до 20000 исследований. Процент положительных от общего числа обследованных лиц находится примерно на одном уровне (от 1,9% до 2,2%). У детей процент положительных лиц невысокий: 2005 - 0,4%; 2006 - 0,9%; у взрослых - 2,3% и 2,5% соответственно.

Количество лиц, обследованных с целью диагностики заболевания, и контактировавших с больными, значительно меньше. Так, в 2003 году с диагностической целью обследовано 435 человек (в т.ч. 12 детей); контактных - 105. Процент положительных результатов среди диагностических анализов составил у взрослых 25%, у детей - 33%. В 2006 году с диагностической целью обследовано 372 человека (22% положительных результатов), по контакту - 59 (положительных не было).

В связи с массовой иммунизацией населения против вирусного гепатита "В" стали плановыми исследования на определение напряженности иммунитета к возбудителю данного вида инфекции. Число лиц с позитивными результатами обследования на a-HBs ежегодно увеличивается: в 2002 году - 30%, в 2004 - 71%, в 2006 - 83%. Таким образом, иммунная прослойка среди населения к вирусному гепатиту "В" увеличивается.

С 1995 года в лаборатории проводятся исследования крови на наличие маркеров вирусного гепатита "С". Как и в случае с гепатитом "В", количество исследований, проводимых на гепатит "С" (определение антител), доходит до 20000 ежегодно. За последние годы изменяется контингент обследуемых лиц на гепатит "С" - увеличивается число анализов от детей.

Процент положительных результатов (обнаружены антитела a-HCV в реакции ИФА) среди всех обследованных из года в год остается на одном уровне (4,7% - 5,2%). Среди взрослых он составил в среднем 5%, среди детей - 4%. Очевидно диагностическое значение данного лабораторного метода - в группе лиц, обследованных с диагностической целью (2245 чел.), положительный результат выявлен в 53% случаев, а в группе обследованных с профилактической целью (73281 чел.) - в 3,5%.

С целью повышения достоверности и подтверждения результатов а-HCV скрининга, с 2002 года с отделении вирусологии проводится спектральный анализ антител к различным белкам гепатита "С" (core-Ag, NS3, NS4, NS5), идентифицируя антитела класса IgM, IgG - на основании приказа МЗ РФ № 322 от 21.10.2002 "О применении в практике здравоохранения иммуноферментных тест-систем для выявления поверхностного антигена вируса гепатита "В" (HВsAg) и антител к вирусу гепатита "С" (анти - ВГС) в сыворотке крови человека". Данные виды исследований дают возможность провести не только дифференциальную диагностику, но и в какой-то степени оценить тяжесть течения и прогноз заболевания. Известно, например, что первыми в течение острого инфекционного процесса появляются антитела к core-Ag и NS3-Ag (4). За 5 лет в лаборатории филиала исследовано 1174 сыворотки крови в реакции определения антител к белкам гепатита "С", что позволило увеличить число положительных (диагностических) результатов, повысить точность выдаваемых ответов.

В ряде случаев у лиц с клиническим проявлениями инфекции, но сомнительными (низкими) титрами антител, при исследовании сывороток крови в реакции идентификации спектра антител были получены результаты, позволяющие диагностировать инфекцию. При обследовании 188 человек в 18% случаев получен положительный результат.

Однако и после исследований в спектральном анализе остаются сыворотки, которые дают "неопределенный" результат. Было выявлено 23 человека с антителами только к NS3-Ag (2%), 39 - c антителами только к NS4-Ag (3%), и 2 - только к NS5-Ag (0,2%). Как правило, лица с такими сыворотками, по сведениям врачей-инфекционистов, не имели выраженных клинических проявлений.

Для выхода из сложных ситуаций на рынке диагностических препаратов предлагаются новые тест-системы. Лаборатории ИЛЦ филиала внедряют в свою номенклатуру различные виды исследований. С 2006 года отделение вирусологии проводит исследования на определение авидности антител к вирусу гепатита "С". Авидность показывает степень прочности связывания молекулы антител с молекулой антигена. Выявление в сыворотке антител с низким индексом авидности указывает на первичную инфекцию. В настоящее время лаборатория филиала накапливает материал по данной теме.

Наряду с отмеченными аспектами применения метода иммуноферментного анализа в области инфекционной гепатологии, необходимо обратить внимание на перспективность его использования в постоянном сероэпидемиологическом контроле населения с целью выявления лиц (в т.ч. детей от матерей-носителей вирусов гепатитов "В" и "С"), представляющих группу риска по возможному развитию в дальнейшем тяжелых заболеваний (хронический гепатит, цирроз печени, гепатокарцинома и др.).

Заключение. Опыт работы отделения вирусологии филиала ФГУЗ "ЦгиЭ в г. Москве" в ЦАО убеждает в том, что метод иммуноферментного анализа на маркеры вирусных гепатитов "В" и "С", включая спектральный анализ на определение антител к белкам гепатита "С", является эффективным методом лабораторной диагностики парентеральных вирусных гепатитов человека.

Метод ИФА продолжает широко применяться для определения напряженности иммунитета к вирусному гепатиту "В" с целью эпидемиологического надзора за инфекцией среди населения Центрального округа Москвы.

Груздева Ольга Александровна
Астафьева Светлана Фроловна
Пильч Инна Иосифовна
Ходакова Татьяна Элионоровна
Лютых Зинаида Ивановна

В медицинском центре "МедЭлит" Вы сможете пройти точную диагностику вирусных гепатитов, дающую надежный и достоверный результат. Это стало возможным благодаря новым принципам ведения гепатитов и достижениям нашей лабораторной системы. Высокое качество лабораторной диагностики является одним из главных врачебных принципов клиники МедЭлит. Анализы, проводимые нами, позволяют ответить на следующие группы вопросов:

• Если вирус гепатита в крови или контакт с ним закончился полным выздоровлением: определение наличия или отсутствия вируса методом ПЦР.
• Если вирус все же есть, то как высока его концентрация (вирусная нагрузка) и насколько легко он поддастся противовирусной терапии (генотип вируса).
• Насколько активен гепатит (ряд биохимических показателей крови)
• Как далеко зашло поражение печени: успел ли сформироваться печеночный фиброз и какова его стадия.
• Генетическое тестирование: определение генотипа Вашего организма в отношении вероятности избавления организма от вируса.

Диагностика состояния печени без биопсии! Неинвазивное обследование печени на аппарате Фиброскан.

ИФА – определение маркеров вирусных гепатитов

Чувствительность этих анализов у нас приближается к 100% поскольку они делаются с использованием самого современного оборудования и высококачественных реактивов. Ниже приводится перечень анализов на различные формы вирусных гепатитов методом ИФА, которые можно сделать в нашем медицинском центре.

Вирус гепатита A (HAV)
Anti-HAV IgM	антитела	Антитела к вирусу гепатита A класса IgM
Anti-HAV IgG	антитела	Антитела к вирусу гепатита A класса IgG
Вирус гепатита B (HBV)
HBs-Ag	антиген	Поверхностный антиген вируса гепатита B Синоним: Австралийский антиген
Anti-HBs	антитела	Суммарные антитела к поверхностному антигену вируса гепатита B
HBe-Ag	антиген	Антиген оболочки вируса гепатита B
Anti-HBe	антитела	Суммарные антитела к антигену оболочки вируса гепатита B
HBc-Ag	антиген	Антиген ядра вируса гепатита B (core-антиген)
Anti-HBc	антитела	Суммарные антитела к антигену ядра вируса гепатита B
Anti-HBc IgM	антитела	Антитела к антигену ядра вируса гепатита В класса IgM
Вирус гепатита C (HCV)
Anti-HCV	антитела	Суммарные антитела к вирусу гепатита C
Anti-HCV IgM	антитела	Антитела к вирусу гепатита C класса IgM
Вирус гепатита D (HDV)
Anti-HDV	антитела	Суммарные антитела к вирусу гепатита D
Anti-HDV IgM	антитела	Антитела к вирусу гепатита D класса IgM
Вирус гепатита E (HEV)
Anti-HEV IgG	антитела	Антитела к вирусу гепатита E класса IgG

ПЦР — выявление возбудителей вирусных гепатитов

Самый чувствительный и специфичный метод на сегодняшний день для диагностики гепатитов (равно как и любой другой инфекции) — это полимеразная цепная реакция (ПЦР). Суть его состоит в выявлении самой чужеродной частицы (это могут быть как вирусы, так и любые другие виды микроорганизмов) даже в ничтожно малых количествах за счет повторного копирования в лабораторных условиях генетического набора микроорганизма. Это копирование состоит из нескольких циклов, которые многократно повторяются. Так за 20-30 циклов количество копий нужного фрагмента ДНК микроорганизма достигает нескольких миллионов, что позволяет обнаружить даже один вирус в одной клетке печени. Точность метода во многом зависит от того, насколько качественны реактивы. В нашем медицинском центре ПЦР диагностика инфекций отвечает самым современным требованиям науки и дает наиболее точные результаты. Кроме установления факта наличия вируса в крови важно определять его количество (так называемая вирусная нагрузка), поскольку от результатов этого анализа во многом зависит схема лечения и прогноз заболевания. Кроме того, важным показателем при выборе противовирусного лечения (в частности, гепатита С), его длительности и прогнозировании успеха, является определение генотипа вируса.

Определение вирусной нагрузки и генотипа вируса гепатита в нашей клинике осуществляется в строгом соответствии с последними мировыми стандартами.

Наименование	Материал	Количество, тип анализа	Время, рабочих дней
РНК вируса гепатита A	биоптат	качественный	7
РНК вируса гепатита A	кровь	качественный	4
ДНК вируса гепатита B	биоптат	качественный	7
ДНК вируса гепатита B	кровь	качественный	4
ДНК вируса гепатита B	кровь	количественный	10
ДНК вируса гепатита B (YMDD мутация устойчивости к лавимудину)	кровь	качественный	10
РНК вируса гепатита С	биоптат	качественный	7
РНК вируса гепатита С	кровь	качественный	4
РНК вируса гепатита С	кровь	количественный	7
РНК вируса гепатита С	кровь	генотипирование	5
РНК вируса гепатита D	биоптат	качественный	7
РНК вируса гепатита D	кровь	качественный	4
РНК вируса гепатита G	биоптат	качественный	7
РНК вируса гепатита G	кровь	качественный	4

Ультрачувствительный тест на вирусы гепатитов В и С

На сегодняшний день наша клиника располагает самым высокоточным методом обнаружения и подтверждения вирусоносительства HCV, HBV. Это - полимеразная цепная реакция (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени. Теперь мы можем точно ответить: есть инфекция или ее нет, причем даже в тех случаях, когда стандартные методы ПЦР-диагностики бессильны.

ПЦР-диагностика гепатита ультрачувствительным методом показана:

• для выявления скрытых (латентных) форм вирусных гепатитов В и С,
• при наличии в крови антител к вирусам гепатита В или С, но неподтвержденном стандартными видами ПЦР-диагностики,
• для оценки эффективности проводимой противовирусной терапии в процессе лечения и через 24 недели после окончания лечения.
• для раннего выявления острых вирусных гепатитов В и С у лиц, контактировавших с зараженным человеком

Биохимические показатели крови

Вирусы гепатитов могут в той или иной степени нарушать функции печени. В зависимости от вида и степени нарушения этих функций может коренным образом изменяться и лечение гепатита .

На основании показателей клинического и биохимического анализов крови мы определяем, есть или нет нарушение функции Вашей печени. Если есть, то каков вид этого нарушения и насколько оно выражено. В нашем центре Вам не придется долго ждать результатов исследований. Сроки выполнения анализов ограничены только технологией их выполнения. Результаты данной группы анализов, как правило, становятся известными либо в день забора крови, либо на следующий день (в зависимости от времени взятия материала). Точность анализов не вызывает сомнений.

Билирубин общий	Сывороточное железо
Билирубин прямой	Общий белок
АСТ (аспартатаминотрансфераза)	Глюкоза
АЛТ (аланинаминотрансфераза)	Креатинин
ГГТП (гаммаглутамилтранспептидаза)	Мочевина
ЩФ (щелочная фосфатаза)	Мочевая кислота
ЛДГ (лактатдегидрогеназа)	Холестерин общий
Амилаза	Триглицериды
Липаза	Определение фракций липопротеинов

Иммунный статус организма

Вирусные гепатиты почти всегда сопровождаются нарушениями в иммунной системе. Своевременная и правильная диагностика и коррекция иммунных нарушений – это тот базис, без которого невозможно полноценное лечение хронических гепатитов. Анализы показателей иммунного статуса в нашей клинике проводятся на самом высоком технологическом уровне, а их сложной трактовкой в совершенстве владеют наши врачи. Показатели Вашего иммунитета будут быстро и точно определены и правильно интерпретированы.

Запишитесь на прием ежедневно с 9 до 21: 8 495 646-07-47

Или оставьте ваш номер телефона, мы вам перезвоним в удобное для вас время