Цитомегаловирус igg 1 1600 что это значит

Аннотация научной статьи по клинической медицине, автор научной работы — Гориков Игорь Николаевич

Цель исследования дать характеристику воспалительного процесса носа и глотки при цитомегаловирусной инфекции у женщин во втором триместре беременности . Проведен ретроспективный анализ клинических, риноскопических и фарингоскопических признаков воспаления слизистой носа и глотки у 268 женщин во втором триместре гестации. Первую группу составили 30 серонегативных женщин с физиологическим течением беременности (отсутствуют антитела IgM к цитомегаловирусу (ЦМВ) и антитела IgG к ЦМВ). Во вторую группу вошли 64 пациентки с латентным течением хронической цитомегаловирусной инфекции (ЦМВИ) (отсутствуют антитела IgM к ЦМВ, антитела IgG к ЦМВ 1:200-1:400). Третья группа была представлена 60 больными с реактивацией хронической ЦМВИ (антитела IgM к ЦМВ 1:200-1:400, антитела IgG к ЦМВ 1:200-1:400). Четвертая группа состояла из 58 женщин с реактивацией хронической ЦМВИ (антитела IgM к ЦМВ 1:200-1:400, антитела IgG к ЦМВ 1:200-1:800). В пятую группу вошли 56 пациенток с реактивацией хронической ЦМВИ (антитела IgM к ЦМВ 1:200-1:400, антитела IgG к ЦМВ 1:400-1:1600). Установлено, что у пациенток третьей и четвертой групп по сравнению со второй не наблюдалось достоверного изменения частоты развития заболеваний носа и глотки. В пятой группе по сравнению со второй реже отмечались признаки острого назофарингита (р тонзиллофарингит (р научных работ по клинической медицине , автор научной работы — Гориков Игорь Николаевич

CHARECTERISTIC OF INFLAMMATORY PROCESS OF NOSE AND THROAT AT CYTOMEGALOVIRUS INFECTION IN WOMEN IN THE SECOND TRIMESTER OF PREGNANCY

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПРОЦЕССА НОСА И ГЛОТКИ ПРИ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ У ЖЕНЩИН ВО ВТОРОМ ТРИМЕСТРЕ БЕРЕМЕННОСТИ

Цель исследования - дать характеристику воспалительного процесса носа и глотки при цитоме-галовирусной инфекции у женщин во втором триместре беременности. Проведен ретроспективный анализ клинических, риноскопических и фарингоскопических признаков воспаления слизистой носа и глотки у 268 женщин во втором триместре гестации. Первую группу составили 30 серонегативных женщин с физиологическим течением беременности (отсутствуют антитела IgM к цитомегаловирусу (ЦМВ) и антитела IgG к ЦМВ). Во вторую группу вошли 64 пациентки с латентным течением хронической цитомегаловирусной инфекции (ЦМВИ) (отсутствуют антитела IgM к ЦМВ, антитела IgG к ЦМВ 1:200-1:400). Третья группа была представлена 60 больными с реактивацией хронической ЦМВИ (антитела IgM к ЦМВ 1:2001:400, антитела IgG к ЦМВ 1:200-1:400). Четвертая группа состояла из 58 женщин с реактивацией хронической ЦМВИ (антитела IgM к ЦМВ 1:200-1:400, антитела IgG к ЦМВ 1:200-1:800). В пятую группу вошли 56 пациенток с реактивацией хронической ЦМВИ (антитела IgM к ЦМВ 1:200-1:400, антитела IgG к ЦМВ 1:400-1:1600). Установлено, что у пациенток третьей и четвертой групп по сравнению со второй не наблюдалось достоверного изменения частоты развития заболеваний носа и глотки. В пятой группе по сравнению со второй реже отмечались признаки острого назофарингита (р Не можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Проведенные нами исследования показали, что у женщин в первой группе не выявлялись острые и хронические заболевания носа и глотки, а во второй, третьей, четвертой и пятой группах изменялась частота развития острых воспалительных процессов и обострения хронических заболеваний носа и глотки во втором триместре беременности. У пациенток второй группы по сравнению с первой регистрировались клинические и рино-фарингоскопические признаки острого назофарингита с длительностью течения до 10 дней, затяжного течения острого назофарингита (более 10 дней), обострения хронического катарального и гипертрофического назофарингита, а также острого тон-зиллофарингита, обострения хронического компенсированного и декомпенсированного тонзил-

лита. При сопоставлении заболеваемости женщин в четвертой, третьей и второй группах нами не обнаруживались достоверные различия острой и обострения хронической патологии носа и глотки. В пятой группе по сравнению со второй реже встречались признаки острого назофарингита с длительностью течения заболевания до 10 дней и чаще обнаруживалось затяжное течение острого назофарингита (более 10 дней), обострение хронического катарального и гипертрофического назофарингита, а также тонзиллофарингита и обостре-

Частота обнаружения заболеваний носа и ]

ния хронического декомпенсированного тонзиллита. Среди больных пятой группы по сравнению с третьей и четвертой в нозологической структуре снижалась частота встречаемости острого назофарингита (до 10 дней) и обострения хронического катарального назо-фарингита. В то же время в пятой группе по сравнению с третьей чаще встречалось обострение хронического декомпенсированного тонзиллита, а при сопоставлении с четвертой группой диагностировались симптомы острого тонзиллофарингита (табл. 1).

ки у женщин в исследуемых группах (абс.)

Показатели Исследуемые группы

Первая (п=30) Вторая (п=64) Третья (п=60) Четвертая (п=58) Пятая (п=56)

Отсутствие заболеваний носа и глотки 30 - - - -

Острый назофарингит - 36 20 р>0,05 18 р>0,05; р1>0,05 1 р 0,05 9 р>0,05; р1>0,05 11 р 0,05 р2>0,05

Обострение хронического катарального назофарингита - 16 15 р>0,05 9 р>0,05; р1>0,05 1 р 0,05 11 р>0,05; р1>0,05 14 р 0,05 р2>0,05

Острый тонзиллофарингит - 2 3 р>0,05 2 р>0,05; р1>0,05 10 р 0,05 р2 0,05 5 р>0,05; р1>0,05 7 р>0,05; р1>0,05 р2>0,05

Обострение хронического декомпенсированного тонзиллита - 1 3 р>0,05 4 р>0,05; р1>0,05 12 р 0,05

Примечание: здесь и в следующей таблице р - уровень значимости различий по сравнению с показателями второй группы; р1 - то же с показателями третьей группы; р2 - то же с показателями четвертой группы.

При проведении передней риноскопии и фарингоскопии, а также осмотре регионарных лимфоузлов, у женщин второй группы по сравнению с первой чаще

обнаруживались выраженные отек и гиперемия слизистой носа и глотки, а также увеличение поднижнече-люстных и поверхностных передних шейных лимфатических узлов (табл. 2). Сопоставление состояния слизистой оболочки носа и глотки у пациенток третьей, четвертой групп со второй группой не выявило достоверных изменений риноскопической и фарингоскопической картины. В тоже время отмечалась четко выраженная тенденция к росту числа больных с

выраженным отеком и гиперемией слизистой задней стенки глотки, а также с увеличением регионарных лимфатических узлов в зависимости от роста антител IgG к ЦМВ. У женщин пятой группы по сравнению со второй наблюдалось значительное увеличение выраженного отека и гиперемии слизистой носа и глотки, а также лимфаденопатии. При осмотре пациенток третьей, четвертой группы в сравнении со второй не отмечалось достоверного изменения частоты обнаружения гиперемии, склероза и казеозных масс в миндалинах. В то же время в пятой группе по сравнению со второй возрастало количество больных с гиперемией

миндалин, а также с казеозом в лакунах и склерозом менением уровня половых гормонов и повышением лимфоидной ткани органа (табл. 2). Эта структурная концентрации провоспалительных цитокинов [1, 5, 6, перестройка лимфоидных органов была связана с из- 9].

Состояние слизистой оболочки носа и глотки, лимфатических узлов у женщин в исследуемых группах

Показатели Исследуемые группы

Первая (п=30) Вторая (п=64) Третья (п=60) Четвертая (п=58) Пятая (п=56)

Выраженный отек слизистой носа - 6 13 р>0,05 15 р>0,05; р1>0,05 21 р 0,05 р2>0,05

Выраженный отек слизистой задней стенки глотки - 7 10 р>0,05 13 р>0,05; р1>0,05 20 р 0,05 р2>0,05

Выраженная гиперемия слизистой носа - 11 12 р>0,05 14 р>0,05; р1>0,05 26 р 0,05

Выраженная гиперемия слизистой задней стенки глотки - 10 15 р>0,05 18 р>0,05; р1>0,05 23 р 0,05 р2>0,05

Выраженная гиперемия миндалин - 2 2 р>0,05 5 р>0,05; р1>0,05 16 р 0,05

Казеозные массы в лакунах - 1 3 р>0,05 3 р>0,05; р1>0,05 9 р 0,05 р2>0,05

Склероз миндалин - 1 3 р>0,05 4 р>0,05; р1>0,05 10 р 0,05 р2>0,05

Увеличение поднижнечелюстных лимфоузлов - 2 3 р>0,05 6 р>0,05; р1>0,05 11 р 0,05

Увеличение поверхностных передних шейных лимфоузлов - 1 2 р>0,05 5 р>0,05; р1>0,05 9 р 0,05 р2>0,05

менению структурно-функционального состояния миндалин. При этом выраженный тропизм герпесвирусов (ЦМВ, ВПГ и вируса Эпштейна-Барр) к лимфоидным клеточным элементам ротоглотки, в которых наблюдается их персистенция и репликация, приводит к апоп-тозу лимфоцитов, а также к снижению местного и общего иммунитета [2, 6]. Вышеизложенная концепция подтверждается частым развитием острого тонзилло-фарингита, декомпенсированной формы хронического тонзиллита, а также реакцией лимфатических узлов у беременных при реактивации хронической ЦМВИ с высокими титрами противовирусных антител.

Таким образом, при клинической манифестации реактивации хронической ЦМВИ у женщин во втором триместре беременности в виде острой и хронической патологии носа и глотки отмечается зависимость

между некоторыми формами заболеваний и ростом титров антител IgG к ЦМВ.

1. При реактивации хронической ЦМВИ (антитела IgM к ЦМВ 1:200-1:400, титры антител IgG к ЦМВ 1:400-1:1600, индекс авидности антител IgG к ЦМВ более 65%) с клинической манифестацией в виде поражения ЛОР-органов у женщин во втором триместре беременности, по сравнению с латентным течением заболевания (антитела IgG к ЦМВ 1:200-1:400, индекс авидности антител IgG к ЦМВ более 65%), реже диагностируется острый назофарингит с длительностью течения до 10 дней, обострение хронического катарального назофарингита и чаще встречается затяжное течение острого назофарингита (более 10 дней), обострение хронического гипертрофического назофа-рингита на фоне более интенсивного антителообразо-вания.

2. Реактивация хронической ЦМВИ у больных во втором триместре гестации (антитела IgM к ЦМВ 1:200-1:400, антитела IgG к ЦМВ 1:400-1:1600 с индексом авидности IgG более 65%) в сопоставлении с вирусной инфекцией, при которой не обнаруживаются антитела IgM к ЦМВ, а также определяются антитела IgG к ЦМВ 1:200-1:400 с индексом авидности IgG более 65%, приводит к более выраженному отеку, гиперемии слизистой оболочки носа и задней стенки глотки. Это может быть связано с изменениями местной и общей воспалительной реакциями женского организма при вирусной агрессии.

3. У женщин с реактивацией хронической ЦМВИ во втором триместре беременности (антитела IgM к ЦМВ 1:200-1:400, антитела IgG к ЦМВ 1:400-1:1600 с индексом авидности IgG более 65%) по сравнению с пациентками, имеющими латентное течение инфекционного заболевания (отсутствуют антитела IgM к ЦМВ, антитела IgG к ЦМВ 1:200-1:400, индекс авидности IgG более 65%) возрастает частота острого тон-зиллофарингита, обострения хронического декомпенсированного тонзиллита с гиперемией, склерозом миндалин, в лакунах которых выявляются казе-озные массы, а также наблюдается увеличение поднижнечелюстных и поверхностных передних шейных лимфатических узлов.

1. Авдеева Ж.И., Алпатова Н.А., Акользина С.Е., Медуницын Н.В. Иммуноадъювантный эффект цито-кинов // Тихоокеанский медицинский журнал. 2009. №3. С.19-22.

2. Адеишвили П.С., Шамшиева О.В., Гусева Н.А., Гусева Л.Н., Егорова Н.Ю., Полеско И.В. Современные представления о поражении ротоглотки при инфекционном мононуклеозе // Детские инфекции. 2012. Т.11, №3. С.42-45.

3. Богомолов Б.П. Поражение ротоглотки при инфекционных болезнях // Вестник оториноларингологии. 1998. №3. С.58-63.

4. Веденеева Г.Н., Сельков С.А. Клинико-диагно-

стические аспекты цитомегаловирусной инфекции у беременных и новорожденных // Вестник Российской ассоциации акушеров-гинекологов.1997. №3. С.56-58.

5. Горикова И.А., Гориков И.Н., Барабанова В.Г., Та-рабурова Н.Г., Сорокина Т.С., Рабинович Б.А. Состояние ЛОР-органов у женщин с обострением хронической цитомегаловирусной инфекции во II триместре беременности // Аллергология и иммунология. 2011. Т.12, №1. С.88.

6. Луценко М.Т., Соловьева А.С., Андриевская И.А. Механизмы изменений иммунной системы у беременных с герпес-вирусной инфекцией. Новосибирск-Благовещенск, 2007. 179 с.

7. Матвеев В.А., Аракелов С.А., Сонькина А.А., Стаханова В.М. Частота обнаружения антител к цито-мегаловирусу классов IgG и IgM в сыворотке крови детей различных возрастных групп и беременных женщин // Вопросы охраны материнства и детства. 1991. Т.36, №9. С.30-32.

8. Рахманова А.Г., Неверов В.А., Пригожина В.К. Инфекционные болезни: руководство для врачей общей практики (2-е издание). СПб: Питер, 2001. 576 с.

9. Способ прогнозирования затяжного течения острого ринофарингита у женщин с реактивацией хронической цитомегаловирусной инфекции во втором триместре беременности: пат. 2552326 RU / авторы и заявители И.Н.Гориков, М.Т.Луценко, В.П.Колосов, А.А.Григоренко, Т.В.Заболотских, Л.Г.Нахамчен, И.А.Горикова; патентообладатель ФГБУ ДНЦ ФПД СО РАМН, заявл.03.12.2013; опубл. 10.06.2015.

1. Avdeeva Zh.I., Alpatova N.A., Akol'zina S.E., Medunitsyn N.V. Immunoadjuvant effect of cytokines. Pacific medical journal 2009; 3:19-22 (in Russian)

2. Adeishvili P.S., Shamsheva O.V., Guseva N.A., Guseva L.N., Egorova N.Yu., Polesko I.V. Modern views on oropharyngeal lesions at infectious mononucleosis. Detskie infektsii 2012; 11(3):42-45 (in Russian).

3. Bogomolov B.P. Oropharyngeal defeat in infectious diseases. Vestnik otorinolaringologii 1998; 3:58-63 (in Russian).

4. Vedeneeva G.N., Sel'kov S.A. Clinical and diagnostic aspects of cytomegalovirus infection in pregnant women and newborns. Vestnik Rossiyskoy assotsiatsii akusherov-ginekologov 1997; 3:56-58 (in Russian).

5. Gorikova I.A., Gorikov I.N., Barabanova V.G., Taraburova N.G., Sorokina T.S., Rabinovich B.A. Status of ENT organs in women with acute exacerbation of chronic cytomegalovirus infection in the II trimester of pregnancy. Allergologiya i immunologiya 2011; 12(1):88 (in Russian).

6. Lutsenko M.T., Solovieva A.S., Andrievskaya I.A. Mechanisms behind changes in immune system in pregnant patients with herpes infection. Novosibirsk-Blagoveshchensk, 2007 (in Russian).

7. Matveev V.A., Arakelov S.A., Son'kina A.A., Stakhanova V.M. The frequency of detection of antibodies to cytomegalovirus classes IgG and IgM in serum of chil-

dren of different age groups and pregnant women. Voprosy okhrany materinstva i detstva 1991; 36(9):30-32 (in Russian).

8. Rakhmanova A.G., Neverov V.A., Prigozhina V.K. Infectious diseases: a guide for physicians. St. Petersburg; 2001 (in Russian).

9. Gorikov I.N., Lutsenko M.T., Kolosov V.P., Grig-orenko A.A., Zabolotskih T.V., Nakhamchen L.G., Gorikova I.A. Patent 2552326 RU. A method for predicting a prolonged course of acute nasopharyngitis in women with chronic reactivation of CMV infection in the second trimester of pregnancy; published 10.06.2015 (in Russian).

Контактная информация Игорь Николаевич Гориков,

кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник лаборатории механизмов этиопатогенеза и восстановительных процессов дыхательной системы при неспецифических заболеваниях легких,

Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания,

675000, г. Благовещенск, ул. Калинина, 22.

MD, PhD, Senior staff scientist of Laboratory of Mechanisms of Etiopathogenesis and Recovery

Processes of the Respiratory System at Non-Specific Lung Diseases, Far Eastern Scientific Center of Physiology and Pathology of Respiration, 22 Kalinina Str., Blagoveshchensk, 675000, Russian Federation.

Демографическая ситуация в России продолжает характеризоваться низкой рождаемостью и высокой общей смертностью. К числу наиболее актуальных и важных как в научно-практическом, так и медико-социальном аспектах проблем относится невынашивание беременности, частота которого составляет 18-20% и не имеет тенденции к снижению, несмотря на многочисленные и высокоэффективные методы диагностики и лечения, разработанные в последние годы [1, 5].

Среди причин невынашивания беременности выделяют хронические инфекции (60-70%), генетические изменения эмбриона (кариотипа плода) – 40-50%, тромбофилию (генетические формы) – 30-50% и ряд других факторов [2, 4].

Реактивации хронических инфекций способствуют иммунологические изменения, касающиеся как клеточного, так и гуморального звена иммунитета [3]. Безусловными патогенами являются вирусы краснухи, простого герпеса, цитомегаловируса (ЦМВ), токсоплазмы (TORCH-инфекции) [1, 5, 7]. У 78-85% пациенток с невынашиванием беременности персистируют цитомегаловирусы и вирусы простого герпеса. При определении локализации возбудителя в тканях хориона наиболее часто выявляют экспрессию возбудителя в трофобластическом эпителии и стромальных клетках ворсин, что свидетельствует о проникновении возбудителей за плацентарный барьер [6, 7]. Следует указать и на то, что в России, по сравнению с Западной Европой и Северной Америкой, среди беременных имеет место серопозитивность по отношению к ЦМВ и высокий уровень авидности антител иммуноглобулина (Ig) G (90% от общего числа обследуемых), что указывает на длительную персистенцию вируса [8].

Вместе с тем, исследований по изучению частоты и характера невынашивания при ЦМВ инфекции на первом триместре беременности нет. В ранних наших работах была предпринята попытка анализа влияния показателей специфического иммунного ответа на развитие угрозы прерывания беременности [9].

Цель исследования – анализ зависимости частоты раннего невынашивания от показателей специфического иммунного ответа у ЦМВ-серопозитивных беременных.

Материалы и методы исследования

Проведено проспективное исследование по типу случай-контроль 150 женщин на первом триместре беременности (7-11 недель). Из них 100 женщин были ЦМВ-серопозитивными (основная группа) и 50 ЦМВ-серонегативных (контрольная группа). Все беременные из основной группы на первом этапе исследования были разделены на две подгруппы, соответственно, с обострением ЦМВ инфекции – 1-я подгруппа (50 случаев) и латентным течением заболевания – 2-я подгруппа (50 случаев).

На втором этапе, в зависимости от исхода беременности, женщины основной группы были разделены на подгруппы: начавшийся самопроизвольный выкидыш с прерыванием беременности на сроке до 12 недель (подгруппа 1а) – 15 случаев, и с пролонгированной беременностью (подгруппа 1б) – 85 случаев.

Критериями включения в исследование явились: хроническая ЦМВ-инфекция (обострение в первом триместре беременности или ее латентное течение), стойкая клиническая ремиссия герпесвирусной инфекции.

Критерии исключения из исследования: первичная ЦМВ-инфекция, обострение других воспалительных экстрагенитальных заболеваний, наличие передающихся половым путем инфекций, возраст старше 27 лет, аномалии развития половых органов, один и более самопроизвольных выкидышей при сроке беременности 10 недель и более.

Клинический диагноз первичной ЦМВ устанавливался по наличию в периферической крови антител класса IgM к ЦМВ, низкоавидных IgG (индекс авидности менее 65%), а также ДНК ЦМВ, выявленной методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в крови; обострение хронической ЦМВ инфекции – по наличию IgM к ЦМВ, высокоавидных IgG (индекс авидности более 65%), а также ДНК ЦМВ в соскобах буккального эпителия и слизистой оболочки шейки матки.

Обследование проводили с учетом Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации (World Medical Association Declaration of Helsinki, 2008) и Правил клинической практики в Российской Федерации, утвержденных приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. №266. Все женщины подписали письменное информационное согласие.

У обследуемых взятие крови для ПЦР проводили в стандартные вакуумные пробирки с коагулянтом в количестве 5 мл. Для серологических исследований использовали кровь, не содержащую коагулянты. Выделение мононуклеарных клеток крови для ПЦР проводилось с использованием раствора фиколл-урографина плотностью 1,077 г/мл (НПО ДНК-технология, Россия). Серологические исследования выполняли в парных сыворотках с интервалом 10-14 сут. Утренняя порция мочи для ПЦР-анализа собиралась в стерильный контейнер объемом 60 мл. Забор буккального эпителия и содержимого цервикального канала производили стерильным тупфером в стандартные пластиковые пробирки с физиологическим раствором объемом 0,5 мл. Ворсинчатый хорион для ПЦР-анализа забирали сразу после медицинского вмешательства по случаю начавшегося самопроизвольного аборта.

Определение типоспецифических антител IgМ и IgG (качественный и количественный анализ), авидности антител класса IgG в крови осуществлялось методами иммуноферментного анализа на микропланшетном ридере Stat Fах-2100 с использованием тест-систем ЗАО Вектор-Бест (Россия), выявление ДНК ЦМВ в биологическом материале (кровь, моча, содержимое цервикального канала, соскоб с буккального эпителия, ворсинчатый хорион) – методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО ДНК-технология (Россия).

Эхографическое обследование проводилось на аппарате ультразвуковой диагностики SonoScape S6 в режиме импульсного и цветного допплеровского картирования.

Статистический анализ и обработку данных проводили с использованием пакета прикладных программ Statistica 6.0. Для определения достоверности различий использовали непарный параметрический критерий Стьюдента. Данные представлены как среднее арифметическое и стандартная ошибка среднего арифметического (М±m). Для оценки равенства дисперсий между независимыми выборками применяли критерий Фишера. Различия считали достоверными при уровне значимости p 0,05).

Анализ сероиммунологических показателей специфического иммунного ответа показал, что у всех беременных подгруппы 1а уровень антител IgM к ЦМВ повышался до 2,0±0,7 ЕД/мл (ОПкр=0,210 ЕД/мл), что в 2,85 раза выше, чем в подгруппе 1б (р 0,05). ДНК ЦМВ в биологическом материале выявлен не был, что указывало на латентное течение хронической ЦМВ инфекции.

При оценке характера течения беременности у женщин в данных подгруппах обращало внимание то, что в подгруппе 1а у всех участниц исследования беременность закончилась самопроизвольным прерыванием на сроке до 12 недель, несмотря на проводимую сохраняющую терапию. Клинически это проявлялось тянущими болями внизу живота (у 100%), мажущими кровянистыми выделениями из половых путей (у 100%). По данным ультразвукового исследования выявлены гипертонус миометрия (у 80%), ретрохориальная гематома (у 68%) и предлежание хориона (у 70%).

В подгруппе 1б в 60% случаев диагностирована угроза прерывания с последующей пролонгацией беременности, клинически сопровождавшаяся тянущими болями внизу живота (у 68%), мажущими кровянистыми выделениями из половых путей (у 47%); по данным УЗИ гипертонус миометрия (у 41%), ретрохориальная гематома (у 24%) и предлежание хориона (у 48%).

Клинические признаки угрозы прерывания в подгруппе 2 диагностированы у 18% обследуемых, что сопровождалось тянущими болями внизу живота (у 8%), гипертонусом миометрия (у 8%) и предлежанием хориона (у 5%).

В контрольной группе признаки угрозы прерывания беременности выявлены у 15% женщин, которые клинически проявлялись тянущими болями внизу живота (у 8%), гипертонусом миометрия (у 7%) и предлежанием хориона (у 4%).

1. Ведищев С.И., Прокопов С.Ю., Жабина У.В., Османов Э.М. Современные представления о причинах невынашивания беременности // Вестник ТГУ. 2013. Т.18, Вып.4, С.1309–1312.

2. Доброхотова Ю.Э., Козлов П.В., Мандрыкина Ж.А., Степанян А.В. Угроза прерывания беременности в различные сроки гестации. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2016. 144 с.

3. Дорохова Л.Н. Состояние иммунитета и течение инфекционного процесса у беременных с недифференцированными формами дисплазии соединительной ткани, носителей семейства герпес-вирусов // Медицинская иммунология. 2011. Т.13, №2-3, С.175–180.

4. Жуковец И.В., Целуйко С.С. Особенности формирования хориона у женщин с дисфункцией гипоталамуса // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2013. Вып.47. С.91–97.

5. Ивахнишина Н.М., Кожарская О.В., Островская О.В., Наговицина Е.Б., Власова М.А., Мурая Е.М., Супрун С.В. Инфицированность плаценты при невынашивании беременности // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2015. Вып.56. С.88–93.

6. Луценко М.Т., Андриевская И.А., Довжикова И.В. Морфофункциональная характеристика фетоплацентарного комплекса у беременных, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции, и патоморфологические изменения в органах плода // Архив патологии. 2010. Т.72, №4. С.47–49.

7. Потапов В.П., Пекарев О.Г., Надеев А.П. Факторы риска и цитоморфологическая характеристика хориона в генезе самопроизвольного прерывания беременности в первом триместре // Акушерство, гинекология и репродукция. 2012. Т.6, №3. С.39–44.

8. Смирнова А.И., Россихина Е.В., Дюпина Н.С. Роль цитомегаловирусов в акушерской патологии и неонатологии // Вятский медицинский вестник. 2010. №4. С.41–47.

9. Andrievskaya I.A., Lucenko M.T., Babenko O.P. Specific and non-specific factors of humoral immunity as markers for pregnancy loss in women with cytomegalovirus infection // International Journal of Biomedicine. 2015. Vol.5. №4. P.184–187. doi: 10.21103/Article5(4)_OA2

10. Bonalumi S., Tropanese A., Santamaria A., D’Emidio L., Mobili L. Cytomegalovirus infection in pregnancy: review of the literature // J. Prenat. Med. 2011. Vol.5, №1. Р.1–8.

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической вирусологии, и может быть использовано для более точной оценки результата ИФА при выявлении антител к вирусам, а также для контроля эффективности лечения. Сущность способа состоит в том, что для более точной оценки результата ИФА при выявлении антител к возбудителям вирусных инфекций соответствующие иммуноглобулины, меченные пероксидазой, добавляют только в разведения сыворотки 1: 200 и 1:3200 и далее из сывороток крови больных с высокими значениями титров готовят разведения сыворотки таким образом, чтобы значения показателя оптической плотности (ОП) находились в пределах прямопропорциональной зависимости от концентрации иммуноглобулинов и за титр антител принимают наименьшее разведение сыворотки, после которого ОП остается на одном уровне. Техническим результатом является повышение точности способа оценки результата ИФА. 7 табл., 2 ил.

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической вирусологии, и может найти применение для более точной оценки результата ИФА при выявлении антител к вирусам, а также для контроля эффективности лечения.

В настоящее время определение титров антител методом ИФА является одним из скрининговых тестов для диагностики многих вирусных инфекций.

В литературе приводятся многочисленные данные по оценке гуморального иммунитета с помощью ИФА и конкретные цифры значений титров антител: от 1: 20000 до 1:102400 ("Организацию и проведение мероприятий против Крымской геморрагической лихорадки на территории природных очагов России", методические рекомендации, г. Москва, 2001 г.; авт. свидетельство "Способ диагностики степени тяжести вирусного гепатита В" 4662993/14 от 16.03.89 г.). Однако исследователи, занимающиеся этим вопросом, сталкиваются с рядом трудностей: невозможностью точного установления титра, несовпадением его величины с клиническими симптомами болезни, целесообразностью назначения противовирусного лечения на основании величины показателя титров специфических антител. Значение количественного показателя титра антител играет существенную роль при клинической оценке активности вирусной инфекции, определении тактики ведения пациента, а также при назначении лечения и проведении контроля его эффективности.

Особенно наглядно эти проблемы можно показать на примере инфекций, вызванных цитомегаловирусом (ЦМВ) и вирусом простого герпеса (ВПГ). Диагностика цитомегаловирусной и герпетической инфекций остается до настоящего момента актуальной, подтверждением чего является большое количество методов и тест-систем для их выявления.

Поскольку ЦМВ и ВПГ являются персистирующими в организме человека возбудителями, то у иммунокомпетентных лиц после первичного инфицирования вырабатываются антитела, которые сохраняются в невысоких титрах (от 1:50 до 1: 800) в течение всей жизни и не имеют диагностического значения.

При выявлении у пациента антител в титре более 1:800 необходимо установить причину повышенного значения показателя, особенно при отсутствии клинической симптоматики. Как правило, в этих случаях назначают повторный анализ через определенный срок (2-3 недели), после чего на основании полученных результатов с учетом данных анализа и клинических симптомов ставят окончательный диагноз. Совершенно очевидно, что от качественной точной оценки показателя титра антител зависит тактика назначения лечения специфическими препаратами, которые являются дорогостоящими и обладающими рядом серьезных побочных действий на организм (Руководство по лабораторной диагностике цитомегаловирусной инфекции для врачей. М., 1996).

Основным тестом определения антител является в настоящее время метод ИФА. Однако большинство выпускаемых различными предприятиями тест-систем для ИФА не позволяют дать количественную оценку содержащихся в сыворотке крови человека специфических антител, проследить динамику их роста или снижения в процессе лечения, т.к. предназначены только для определения иммунного статуса: тест-система иммуноферментная для выявления антител к вирусу герпеса простого 1 и 2 типов "Герпес-скрин", ЗАО "Биосервис", г. Москва; тест-система иммуноферментная для выявления антител к цитомегаловирусу "ЦМВ-скрин", ЗАО "Биосервис", г. Москва и другие.

Наиболее близкими аналогами являются: "Инструкция по применению иммуноферментной тест-системы для определения Ig класса G к цитомегаловирусу ЦМВ-IgG" (ЗАО "ИмДи", Кольцово Новосибирской области), "Инструкция к тест-системе Beктo-BПГ-IgG-стрип" (ЗАО "Вектор-Бест", Кольцово Новосибирской области), "Инструкция к тест-системе Цитомега Стрип G" (ЗАО "НИАРМЕДИК ПЛЮС", г. Москва), "Инструкция по применению тест-системы иммуноферментной для выявления антител к вирусу краснухи Краснуха-скрин" (ЗАО "Биосервис", г. Москва), которые предполагают при определении титра антител двукратное разведение сыворотки.

Известно, что титр антител - это максимальное разведение сыворотки, содержащее специфические антитела. При определении иммунного статуса делают одно разведение сыворотки, соответственно прилагаемой к тест-системе инструкции (1: 50, 1: 100) и затем при необходимости рекомендуют ее дальнейшее титрование путем последовательных двукратных разведений. Нами установлено, что при наличии в сыворотке крови антител в титре до величины обратной 1: 600-1:800 существует прямопропорциональная зависимость между значением оптической плотности и показателем титра антител исследуемой сыворотки (фиг.1). Выше этой обратной величины титра прямопропорциональная зависимость нарушается и при дальнейшем двукратном шаге титрования (1:1600, 1:3200, 1:6400 и т. д.) получают ошибку, которая тем больше, чем больше разведение. Это показано прямым титрованием сыворотки, при котором каждое разведение сыворотки делают из цельной сыворотки, при этом установлено, что чем меньше шаг при типировании, тем меньше ошибка.

Такие данные соответствуют основному закону колориметрии Бугера-Ламберта-Бера. В реальных условиях аналитических определений окрашенные вещества при разбавлении или при действии посторонних веществ разрушаются с образованием бесцветных (или иначе окрашенных) продуктов взаимодействия. Вследствие этого наблюдается нарушение прямопропорциональной зависимости между концентрацией и оптической плотностью. Эти нарушения называют положительными или отрицательными отклонениями от закона Бугера-Ламберта-Бера.

Целью настоящего изобретения является повышение точности способа оценки результата ИФА при определении титра антител в сыворотках крови больных при диагностике вирусных инфекций.

Поставленная цель достигается тем, что сыворотку крови, взятой из локтевой вены, в количестве 3-5 мл, получают путем центрифугирования при 2500 об/мин в течение 10-15 мин, инактивируют при 56 o С 30 мин, предварительно готовят из нее ряд последовательных двукратных разведений, добавляют иммунопероксидазные коньюгаты и учитывают результаты реакции на АКИ-Ц-01 при длине волны 492 нм, а затем для более точной оценки результата ИФА при выявлении антител к возбудителям вирусных инфекций соответствующие иммуноглобулины, меченные пероксидазой, добавляют только в разведения сыворотки 1:200 и 1:3200 и далее из сывороток крови больных с высокими значениями титров готовят разведения сыворотки таким образом, чтобы значения показателя ОП находились в пределах прямопропорциональной зависимости от концентрации иммуноглобулинов: если величина ОП сыворотки, полученная при обычном двукратном титровании в разведении 1:200 выше 1,6-2,0 по шкале прибора, а в разведении 1: 3200 - меньше 1,0, то сыворотку 1:200 разводят в 2,5 раза и в дальнейшем титруют с интервалом 1:500, а если величина ОП сыворотки в разведении 1:3200 больше 1,0 по шкале прибора, то сыворотку 1:200 разводят в 5 или 10 раз и готовят последующие разведения с интервалом 1:1000 или 1:2000, и за титр антител принимают наименьшее разведение сыворотки, после которого ОП остается на одном уровне (ОП пробы - ОП контроля не менее 0,21).

Примеры конкретного выполнения.

Пример 1. Больная П. наблюдалась в женской консультации по поводу отягощенного акушерского анамнеза.

При исследовании сыворотки больной в ИФА тест-система производства ЗАО "ИмДи", Кольцово, Новосибирской обл. с титрованием сыворотки путем последовательных двукратных разведений титр антител (IgG) к ЦМВ составил 1:25600.

При прямом разведении сыворотки 1:1000 из 1:200 и далее с шагом 1:2000 титр антител (IgG) в сыворотке составил 1:5000 (см. табл. 1).

Диагноз был подтвержден путем обнаружения антигенов ЦМВ методом флюоресцирующих антител.

Пример 2. Больной К. обратился с жалобами на высыпания в области половых органов.

При обследовании сыворотки крови больного в ИФА (тест-система производства "Биосервис", г. Москва), приготовленной путем последовательных двукратных разведений на наличие антител (IgG) к ВПГ у него были обнаружены антитела в титрах: 1:6400 к ВПГ I типа и 1:3200 к ВПГ II типа (см. табл. 2).

Методом прямого титрования сыворотки шагом 1:500 (с разведения 1:1000) титр антител составил к ВПГ I типа - 1:2000 и 1:1500 к ВПГ II типа (см. табл. 3).

Диагноз был подтвержден путем обнаружения антигенов ВПГ методом флюоресцирующих антител.

Пример 3. Женщина во второй половине беременности обратилась к врачу по поводу контакта с ребенком, которому был поставлен диагноз краснушной инфекции. Беременная не знала, болела ли она краснухой в детстве - при серологическом исследовании в ИФА у нее были обнаружены антитела (IgG) к вирусу краснухи в титре 1:1600 при двукратном разведении сыворотки.

Через две недели был проведен повторный забор крови и исследованы парные сыворотки при аналогичном способе титрования. Титр антител остался прежним (см. табл. 4).

При анализе парных сывороток с шагом разведения 1:500 (из исходных 1: 200) титр антител составил 1:1000 (см. табл. 5).

Пример 4. Больной Е. обратился в глазное отделение с жалобами со стороны органов зрения и ему был поставлен диагноз вирусное заболевание глаз.

При исследовании в ИФА (тест-система производства ЗАО "НИАРМЕДИК ПЛЮС", г. Москва) сыворотки больного, приготовленные путем последовательных двукратных разведений, были выявлены иммуноглобулины класса G к ЦМВ в титре 1:3200 (см.фиг.2), (см. табл. 6).

Исследование той же сыворотки титрованием с шагом 1:200, начиная с разведения 1:1000 показало, что в сыворотке больного Е, титр антител к ЦМВ составил 1:1200. (см. табл. 7).

Диагноз был подтвержден путем обнаружения антигенов ЦМВ методом иммунофлюоресцентного анализа.

Таким образом, предлагаемый способ определения титров антител методом ИФА позволяет более точно оценивать величины титров антител в пределах прямопропорциональной зависимости ОП от их концентрации в сыворотке крови, контролировать их изменения как в ходе заболевания, так и в процессе лечения. Данный способ может быть рекомендован для определения титров специфических антител и при других инфекциях.

Способ определения титров антител методом иммуноферментного анализа при диагностике вирусных инфекций путем приготовления ряда последовательных двукратных разведений сыворотки, добавления иммуно-пероксидазных конъюгатов и учетом результатов реакции на АКИ-Ц-01 при длине волны 492 нм, отличающийся тем, что для более точной оценки результата ИФА при выявлении антител к возбудителям вирусных инфекций соответствующие иммуноглобулины, меченные пероксидазой, добавляют только в разведения сыворотки 1: 200 и 1: 3200 и далее из сывороток крови больных с высокими значениями титров готовят разведения сыворотки таким образом, чтобы значения показателя оптической плотности (ОП) находились в пределах прямопропорциональной зависимости от концентрации иммуноглобулинов: если величина ОП сыворотки в разведении 1: 200 выше 1,6-2,0 по шкале прибора, а в разведении 1: 3200 - меньше 1,0, то сыворотку 1: 200 разводят в 2,5 раза и в дальнейшем титруют с интервалом 1: 500, а если величина ОП сыворотки в разведении 1: 3200 больше 1,0 по шкале прибора, то сыворотку 1: 200 разводят в 5 или 10 раз и готовят последующие разведения с интервалом 1: 1000 или 1: 2000 и за титр антител принимают наименьшее разведение сыворотки, после которого ОП остается на одном уровне (ОП пробы - ОП контроля не менее 0,21).