Что такое вируса блютанга


(только для пользования студентами при подготовке к экзамену. )

Определение болезни. Блютанг (англ. Bluetongue disease; синонимы:

блутанг, катаральная лихорадка овец) – вирусная инфекция жвачных животных, в первую очередь овец, передающаяся насекомыми, которая характеризуется поражением слизистой оболочки ротовой и носовой полостей, отеком и цианозом языка.

Характеристика вируса. Возбудителем болезни является вирус из семейства Reoviridae, рода Orbivirus, вид - Bluetongue virus (BTV).

Семейство Reoviridae является одним из самых обширных, включая вирусы человека, позвоночных животных, насекомых и растений. Род

Orbivirus , включающий также возбудителей африканской чумы лошадей

(African horse sickness –AHSV) и эпизоотической геморрагической болезни лосей (epizootic hemorrhagic disease of deer - EHDV) отличается от других реовирусов тем, что передается позвоночным животным через укусы насекомых и способностью репродуцироваться во всех типах хозяев

(основных и переносчиков).

Вирус BTV способен инфицировать овец, а также коз, крупный рогатый скот, а также других жвачных животных, однако в первую очередь

Болезнь впервые описана в конце 18 века и первоначально относилась только к Африканскому континенту, однако в настоящее время регистрируется практически на всем европейском континенте.

До настоящего времени обнаружено 25 серотипа возбудителя. Вирусы значительно отличаются по вирулентности даже в пределах одного серотипа.

Вирус BTV является одним из самых хорошо изученных вирусов

вследствие значительной эпизоотологической опасности и представляет собой РНК-содержащий вирус, геном которого представлен двунитчатой,

фрагментированной на 10 сегментов молекулой РНК . В отличие от других вирусов семейства (реовирусы, ротавирусы и др.) вирус BTV мало устойчив во внешней среде и быстро инактивируется в кислых значениях рН. Вирион

(кафедра микробиологии и вирусологии, УО ВГАВМ, 2010)


(только для пользования студентами при подготовке к экзамену. )

формируется из структурных белков 7 разновидностей, формирующих два слоя – внутренний и наружный. Белки наружного слоя (VP2 и VP5)

участвуют в прикреплении к клетке, а внутреннего слоя (VP1, VP3, VP4 VP6, VP7)- в процессах репродукции. Неструктурные белки (NS1-NS3)

синтезируются в инфицированной клетке.

Характеристика болезни. Болезнь зарегистрирована в Австралии,

США, странах Африки, Ближнего Востока, Азии и Европы. В появлении болезни отмечают сезонную динамику со значительным снижением в условиях низких температур. С октября 1998 года отмечается распространение болезни в северном направлении как результат всеобщего потепления и повышения зимних температур, что в свою очередь способствовало сохранению вируса и распространению по Европейскому континенту новых переносчиков возбудителя - Culicoides obsoletus and C.pulicaris. В августе 2006 г. случаи болезни были зарегистрированы в Нидерландах, Бельгии, Германии и Люксембурге, в 2007 г.– в Чехии,

Великобритании, Дании, в 2008 г. – в Швеции, в 2009 г. серопозитивные коровы были выявлены в Норвегии. Экономический ущерб в основном складывается из потерь от ограничений экспорта животных и продуктов животного происхождения, проведения диагностических мероприятий.

Переносчиком возбудителя в природе являются мокрецы рода

Culicoides – С. imicola, С. obsoletus и C.pulicaris, непосредственная передача

от животного к животному не установлена (поэтому болезнь считается незаразной). Вирус патогенен только для жвачных животных - как диких, так и домашних; передача вируса человеку не установлена. Инкубационный период болезни составляет 5-20 дней. Летальность в обычных условиях низкая, но может быть высокой для чувствительных пород овец. В Африке летальность среди местных пород овец может быть нулевой, а среди импортированных – до 90%. У крупного рогатого скота и коз инфекция обычно бессимптомная, несмотря на высокий уровень вирусемии.

(кафедра микробиологии и вирусологии, УО ВГАВМ, 2010)


(только для пользования студентами при подготовке к экзамену. )

Исключением являются благородные олени, для которых летальность сравнима с таковой у овец.

Клинические признаки включают высокую лихорадку, повышенную саливацию, отеки в области головы, языка и его сильный цианоз (синий язык,

по-английски bluetongue), интенсивное выделение носового экссудата,

затрудненное дыхание. У некоторых животных отмечают поражение копыт,

хромоту, возникающую вследствие нее характерную походку. У животных с тяжелой формой болезни возможно возникновение изгибов шеи.

Выздоровление животных обычно длительное, в течение нескольких месяцев.

Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных,

клинических признаков, патологоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований.

Лабораторная диагностика блютанга имела свои сложности из-за наличия значительного количества серовариантов, а также перекрестных реакций с другими орбивирусами, в особенности с вирусом EHDV (см.

Лабораторная диагностика болезни проводится по следующим направлениям:

1. Выделение вируса BTV из патматериала. Предпочтительным является изоляция возбудителя из крови больных животных. Выделение проводят на 10-12-ти дневных куриных эмбрионах (РКЭ), культурах клеток иди организме подопытных овец. Также в качестве мониторингового метода осуществляют изоляцию вируса из гомогенатов насекомых в эндемических регионах. Тем не менее, этот метод изоляции чрезвычайно трудоемко,

поэтому прибегают к (см. пункт 2)

2. Идентификацию нуклеиновой кислоты вируса из материала (по пункту 1) в ПЦР. Более быстрый и надежный метод диагностики болезни.

3. Серологическая диагностика – обнаружение антител в сыворотке крови. Традиционно проводилось в РИД, РСК или ИФА, однако были не способны отличать антитела к вирусам BTV и некоторым другим.

(кафедра микробиологии и вирусологии, УО ВГАВМ, 2010)


(только для пользования студентами при подготовке к экзамену. )

Предложенный и широко используемый вариант конкурентного ИФА позволил решить эту задачу

Специфическая профилактика . Для профилактики болезни используют различные вакцины, эффективность применения которых зависит от сероварианта эпизоотического штамма. Вспышки болезни в южных частях Европы были вызваны серовариантами 2 и 4, в то время как в северных европейских странах изолируют серовариант 8.

(кафедра микробиологии и вирусологии, УО ВГАВМ, 2010)


(только для пользования студентами при подготовке к экзамену. )

Поражение слизистой оболочки ротовой полости при блютанге

Поражение слизистой оболочки носовой полости при блютанге

(кафедра микробиологии и вирусологии, УО ВГАВМ, 2010)

Случаи заражения катаральной лихорадкой начали фиксировать в Германии в прошлом году. Подтвержденный случай заражения привел к расширению области карантина, вирус коснулся Швабии.

Блютанг – вирусное заболевание многих жвачных животных, в том числе крупного рогатого скота. Распространение вируса происходит через кровососущих насекомых, прямой передачи в настоящее время не обнаружено. Болезнь сопровождается воспалительными и некротическими процессами в желудочно-кишечном тракте, отмечается поражение мышечной ткани и венчика копыт. Патология получила широкое распространение в последние годы.
Крупный рогатый скот болеет блютангом, но наиболее восприимчивым видом являются овцы. Коровы (особенно взрослые особи) часто переносят болезнь в легкой форме без ярких клинических изменений. КРС в странах Европы является естественным резервуаром инфекции.

13 декабря 2018 года главный государственный ветеринарный инспектор Германии уведомил Международное эпизоотическое бюро о выявлении вируса блютанга восьмого серотипа у двух голов крупного рогатого скота. Это первый с ноября 2009 года случай обнаружения данного вируса.




Основным вопросом последних недель для участников молочного рынка остается: что дальше? Как изменится рынок, насколько сильно будет падение спроса, вызванное мерами по предотвращению распространения коронавируса, и все ли предприятия переживут нынешний кризис, осложненный пандемией.












The DairyNews - ежедневные новости молочного рынка.

The DairyNews - крупнейшее издание молочного рынка РФ и одно из крупнейших специализированных СМИ мировой молочной отрасли. The DairyNews - является влиятельным, авторитетным и независимым средством массовой информации, ежедневно публикующим десятки новостей о состоянии молочной промышленности России и мира.

Читательская аудитория The DairyNews превышает 1 млн. уникальных посетителей, которые за год делают более 4,5 млн. просмотров. Количество подписчиков, ежедневно получающих новости на русском и английском языках составляет более 7 тыс. человек.

Редакция The DairyNews следует принципам открытости, доступности и независимости - вся информация о молочном животноводстве и молочной индустрии, а также о деятельности предприятий - игроков молочного рынка всегда является полностью доступной и бесплатной для читателей.

The DairyNews является признанным экспертом на мировом рынке молока и выступает партнером или членом таких международных организаций и мероприятий, как IDF, IFCN, WDS, EuroTier, MilkPoint и другие.

Номер свидетельства о регистрации СМИ: ФС № 77-61920

Россельхознадзор обнаружил вирус блютанга у российского крупного рогатого скота (КРС) в пятикилометровой зоне вокруг хозяйства в Смоленской области, в котором ранее в этом году был выявлен тот же вирус у завезенного скота из Германии, следует из сообщения ведомства.

Блютанг (катаральная лихорадка овец, "синий язык") - вирусная трансмиссивная (в циркуляции возбудителей которой участвуют членистоногие) болезнь жвачных животных, характеризующаяся воспалительно-некротическими поражениями слизистой оболочки ротовой полости, особенно языка, желудочно-кишечного тракта, эпителия венчика и основы кожи копыт, а также дистрофией, изменениями скелетной мускулатуры.

Впервые блютанг был зарегистрирован в Южной Африке в 1876 году, и в начале ХХ века эту проблему считали актуальной только для стран африканского континента. Однако в настоящее время болезнь зарегистрирована на всех континентах. Одни из последних сообщений о вспышках блютанга у овец и крупного рогатого скота получены из Нидерландов, Бельгии и Германии.

Возбудитель болезни - РНК-содержащнй вирус рода Orbivirus семейства Reoviridae.

К блютангу наиболее восприимчивы овцы, особенно ягнята, в меньшей степени - крупный рогатый скот и козы. Болеют и дикие жвачные.

Источник возбудителя инфекции - больные животные. Резервуары вируса в природе не установлены. Болезнь проявляется в виде спорадических (единичных) случаев и в виде эпизоотий (широкомасштабное распространение) с охватом значительного поголовья восприимчивых животных.

Переносчиками вируса блютанга являются мокрецы рода Culicoides, что обусловливает сезонный и стационарный характер болезни. Она появляется в начале лета, достигает пика заболеваемости в жаркие дождливые месяцы и исчезает с наступлением морозов. Болезнь регистрируют в болотистых, низменных местностях, в районах с обильным количеством годовых осадков. На течение болезни отрицательно влияют неполноценное кормление, большая скученность животных, хронические инфекции, гельминтозы, солнечное облучение.

Инкубационный период болезни - 6-9 суток. Различают острое, подострое, хроническое и абортивное течение болезни. При остром течении основной симптом - внезапное или постепенное повышение температуры до 41-42°C, сопровождающееся угнетением. Продолжительность температурной реакции от 2-3 до 11 суток. Через 1-2 суток появляются гиперемия (переполнение кровью сосудов кровеносной системы) слизистых оболочек ротовой и носовой полостей, слюнотечение, серозные или гнойные истечения из носа; развиваются отеки в области головы (ушей, губ, языка), межчелюстного пространства, распространяющиеся на шею и грудь, появляются кровоизлияния, кровоточащие эрозии, язвы на слизистой оболочке ротовой полости и вследствие некроза ткани гнилостный запах изо рта.

Опухший и воспаленный язык приобретает багровый или грязно-синий цвет и свисает из ротовой полости (этот симптом наблюдается очень редко). Развиваются пододерматиты (воспаление основы кожи копыта), хромота, нередко появляются искривление шеи и в тяжелых случаях - понос с примесью крови, резкое истощение и слабость.

При остром течении болезнь продолжается от 6 до 20 дней. Через 2-8 дней после появления первых симптомов болезни может наступить смерть.

При подостром и хроническом течении все симптомы развиваются медленно и выражены слабее. Характерно истощение животных, сухость и выпадение шерсти, поражение конечностей, хромота. Иногда отмечают спадение рогового башмака и бронхопневмонии, вызванные вторичной инфекцией, аборты у суягных овцематок.

Длительность болезни при подостром течении 30-40 дней, при хроническом - до года. Выздоравливают животные медленно. Иногда после кажущегося выздоровления наступает смерть.

Абортивное течение характеризуется незначительным повышением температуры тела, быстро проходящей гиперемией слизистых оболочек ротовой полости, незначительным угнетением. Такое течение болезни наблюдают у овец более устойчивых пород, у крупного рогатого скота и коз после вакцинации. У крупного рогатого скота болезнь иногда сопровождается некрозом слизистой оболочки ротовой полости и снижением удоев при удовлетворительном общем состоянии организма.

Переболевшие животные приобретают пожизненный иммунитет к тому типу вируса, который вызвал заболевание. Возможна реинфекция другим типом вируса в течение того же сезона или на следующий год. Ягнята, родившиеся от иммунных овцематок, приобретают пассивный колостральный иммунитет (передающийся с материнским молоком) продолжительностью до 3 месяцев. Для иммунизации используются поливалентные живые и инактивированные вакцины.

Специфических методов лечения не разработано.

Профилактика и меры борьбы

В благополучных по заболеванию странах профилактические мероприятия ограничиваются запрещением ввоза восприимчивых животных из стран, неблагополучных по блютангу, карантинированием домашних и диких жвачных в местах ввоза.

В угрожаемых зонах и стационарных очагах болезни проводят систематическую борьбу с переносчиками, запрещают пастьбу вечером; в период массового лета насекомых перегоняют животных с заболоченных пастбищ на более сухие, высокорасположенные; проводят ежегодную вакцинацию животных.

Материал подготовлен на основе информации открытых источников

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии. От племенной нетели выделен штамм вируса блютанга 14 серотипа, депонированный в коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии под № 3032. Штамм является новым, ранее неизвестным, выделенным на территории РФ. Изобретение может быть использовано в научно-исследовательских институтах и предприятиях биологической промышленности при конструировании биопрепаратов, в частности вакцин против блютанга 14 серотипа и контроля их иммуногенности, а также изготовления антигенов для диагностических наборов. 2 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и представляет собой штамм Г244/11 вируса блютанга (БТ), используемый в научно-исследовательских институтах и предприятиях биологической промышленности при конструировании биопрепаратов, в частности вакцин против блютанга 14 серотипа и контроля их иммуногенности, а также изготовления антигенов для диагностических наборов.

Вирус блютанга (катаральной лихорадки овец) относится к сем. Reoviridae, род Orbivirus, содержит линейную двуспиральную РНК, состоящую из 10 сегментов, диаметром 70-80 нм.

При экспедиционных эпизоотологических обследованиях южных приграничных территорий в отобранных пробах сывороток крови овец были обнаружены специфические антитела к вирусу блютанга, однако клинических признаков болезни не было обнаружено (1). В республике Бурятия, в местности Тапхар у овец была установлена болезнь с симптомами и признаками, характерными для БТ и высокими уровнями заболеваемости и летальности (2). Тогда же был выделен вирус, который размножался в перевиваемой культуре клеток почки сибирского горного козерога (ПСГК-60) в титре 6,5-7,0 lg ЦПД 50/мл, почки зеленой мартышки (VERO) в титре 5,0-6,0 lg ЦПД 50/мл, почки овцы (ПО) в титре 5,0-6,0 lg ЦПД 50/мл. При типировании в реакции нейтрализации (РН) этот штамм отнесли к 16-му серотипу (прототип). В России разработана инактивированная гидроокисьалюминиевая вакцина на основе 16-го серотипа вируса блютанга, которая была успешно применена в Бурятии при ликвидации вспышки блютанга (4). Однако эта вакцина не может защитить животных от заражения вирусом блютанга 14 серотипа, так как нейтрализующие антитела вырабатываются в организме и защищают только от заражения гомологичным серотипом вируса блютанга, поэтому вирус-вакцину изготавливают только из тех серотипов, которые циркулируют в данной местности (3).

Целью настоящего изобретения является получение нового производственного вирулентного штамма вируса блютанга, выделенного в Российской Федерации и обладающего стабильными культуральными свойствами и высокой биологической и антигенной активностью, для конструирования биопрепаратов, в частности вакцин против блютанга 14 серотипа и контроля их иммуногенности, а также изготовления антигенов для диагностических наборов.

Штамм является новым, ранее неизвестным, выделенным на территории РФ, обозначен как штамм Г244/11 и депонирован в коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии под № 3032.

Новый штамм Г244/11 характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические свойства. При электронно-микроскопическом исследовании в вируссодержащем материале обнаруживают округлые частицы, имеющие икосаэдрический тип симметрии, размером от 68 до 70 нм.

Культуральные свойства. Штамм размножается в перевиваемых линиях клеток гомологичного и гетерологичного происхождения: ПО, ПС, почки сирийского хомячка (ВНК-21/13), ПСГК-60, VERO, и др. Репродукция вируса сопровождается цитопатическим действием, приводящим к полной деструкции монослоя на 3-5 сутки культивирования.

Инфекционная активность. Накопление вируса в зависимости от культуральной системы, множественности заражения и длительности культивирования составляет 5,5-7,5 lg ТЦД 50 /мл.

Патогенность для лабораторных животных. Штамм вызывает гибель 11-12 дневных КЭ на 2-5 сутки после внутривенного заражения.

Антигенные свойства. Вирусоспецифические антигены, общие для всех серотипов вируса блютанга, выявляются в реакции преципитации, связывания комплемента, иммунофлуоресценции и др.

Типовая принадлежность. Типирование выделенного вируса проводили в РН с постоянной дозой сыворотки (5). Использовали 96-луночные микропланшеты Costar с односуточной культурой клеток VERO, нормальную и специфическую к 25 серотипам вируса БТ сыворотку овец, а также сыворотки, специфичные к антигенно-родственным заболеваниям, вызываемым вирусами эпизоотической геморрагической болезни оленей (ЭГБО) и болезни Ибараки (БИ). В таблице 1 приведены результаты типирования выделенного изолята в РН на уровне 3 пассажа на культуре клеток VERO с постоянной дозой сыворотки. При этом определяли индекс нейтрализации (ИН), который выражает максимальное количество инфекционных доз, которое нейтрализуется данной сывороткой, по сравнению с контрольной (отрицательной) сывороткой. Логарифм индекса нейтрализации вычисляют по разности логарифмических показателей титра вируса в контроле (с отрицательной сывороткой) и в присутствии сыворотки.

Классы МПК: C12N7/00 Вирусы, например бактериофаги; их композиции; приготовление или очистка их
A61K39/12 вирусные антигены
Автор(ы): Новикова Марина Борисовна (RU) , Вялых Иван Владимирович (RU) , Балышева Вера Ивановна (RU) , Куриннов Виктор Васильевич (RU) , Сидлик Марина Валерьевна (RU) , Горшкова Татьяна Федоровна (RU) , Живодеров Сергей Петрович (RU)
Патентообладатель(и): Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии (RU)
Приоритеты:
Таблица 1
Результаты типирования выделенного изолята по индексу нейтрализации
№ п/п Наименование сывороток Титр вируса (lg ТЦД 50 /мл) Индекс нейтр (ИН)
1 CC* против вируса блютанга 1 серотипа 4,25 0,25
2 CC против вируса блютанга 2 серотипа 4,50 0
3 CC против вируса блютанга 3 серотипа 4,25 0,25
4 CC против вируса блютанга 4 серотипа 4,50 0
5 CC против вируса блютанга 5 серотипа 4,75 0
6 CC против вируса блютанга 6 серотипа 4,50 0
7 CC против вируса блютанга 7 серотипа 4,75 0
8 CC против вируса блютанга 8 серотипа 4,75 0
9 CC против вируса блютанга 9 серотипа 4,00 0,50
10 CC против вируса блютанга 10 серотипа 4,25 0,25
11 CC против вируса блютанга 11 серотипа 4,75 0
12 CC против вируса блютанга 12 серотипа 4,50 0
13 CC против вируса блютанга 13 серотипа 4,50 0
14 CC против вируса блютанга 14 серотипа 1,50 3,0
15 CC против вируса блютанга 15 серотипа 4,75 0
16 CC против вируса блютанга 16 серотипа 4,75 0
17 CC против вируса блютанга 17 серотипа 4,75 0
18 CC против вируса блютанга 18 серотипа 4,50 0
19 CC против вируса блютанга 19 серотипа 4,50 0
20 CC против вируса блютанга 20 серотипа 4,25 0,25
21 CC против вируса блютанга 21 серотипа 3,75 0,75
22 CC против вируса блютанга 22 серотипа 4,50 0
23 CC против вируса блютанга 23 серотипа 4,25 0,25
24 CC против вируса блютанга 24 серотипа 4,25 0,25
25 CC против вируса блютанга 25 серотипа (нет)** - -
26 CC против вируса блютанга 26 серотипа 4,50 0
27 CC против вируса болезни Ибараки 4,50 0
28 CC против вируса ЭГБО 1 серотипа 4,50 0
29 CC против вируса ЭГБО 2 серотипа 4,50 0
30 HC*** овцы 4,50 0
31 HC фетальная плода КРС 4,50 0
* - CC - специфическая сыворотка
** - Вирус выделен и идентифицирован только у коз, нет сыворотки
*** - HC - нормальная сыворотка

Логарифм ИН до 1 считают отрицательным, от 1 до 2 - сомнительным, равным и более 2 - положительным. Полученные результаты однозначно подтверждают как принадлежность выделенного изолята к вирусу блютанга, так и его чистоту от антигенно-родственных вирусов ЭГБО и болезни Ибараки. Наибольший индекс нейтрализации (3,0 lg) наблюдали с сывороткой, специфичной к 14-му серотипу вируса блютанга. Индексы нейтрализации выделенного штамма сыворотками, специфичными к остальным двадцати четырем серотипам вируса блютанга, и гетерологичными сыворотками не превышал 0,75 lg. Следовательно, выделенный штамм вируса блютанга идентифицирован и типирован как вирус блютанга 14 серотипа.

Контаминация бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами. Лиофилизированный штамм не контаминирован бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами.

Сущность изобретения поясняется следующими примерами.

Пример 1. Накопление вируса в культуре клеток VERO и ПС.

Таблица 2
Наименование культуры клеток Накопление вируса блютанга штамма Г244/11 (lg ЦПД 50/мл )
1 пассаж 2 пассаж 3 пассаж 4 пассаж 5 пассаж
VERO 1,5 4,0 4,5-5,5 5,5-6,0 5,5-6,0
ПС (после 2 пассажей на VERO) 5,5-6,0 6,0-6,5 6,5-7,0 6,5-7,5 6,5-7,5
ВПК-21/13 (после 2 пассажей на VERO) 5,0-5,5 6,0-6,25 6,5-7,0 6,5-7,5 6,5-7,5

Как следует из табл.2, титры выделенного вируса в культуре клеток VERO на уровне пятого пассажа составили 5,5-6,0 lg ЦПД 50/мл, в культуре клеток ПС на уровне пятого пассажа 6,5-7,5 lg ЦПД 50/мл, в культуре клеток ВПК-21/13 на уровне пятого пассажа 6,5-7,5 lg ЦПД 50/мл, что обеспечивает возможность приготовления сырья для инактивированной вакцины.

Пример 2. Приготовление культурального специфического антигена вируса блютанга штамм Г244/11.

Пример 3. Получение инактивированного культурального вируссодержащего сырья из вируса блютанга штамм Г244/11 с применением суспензионного метода культивирования.

Для получения производственного вируса суспензионные клетки ВПК 21/13 (посевная концентрация клеток 300-500 тыс/мл) в среде 0,25 ФГМ-С на солевом растворе Эрла помещают в реактор (10-50 л) и выращивают при (37,0±0,5)°C и постоянном перемешивании в течение 2-3 сут до увеличения клеточной концентрации в до (1-2)×10 6 кл/мл. Затем суспензию клеток указанной концентрации заражают вирусом блютанга 14 серотипа и инкубируют при температуре (37,0±0,5)°C. В течение 48-72 ч отбирают пробы на определение жизнеспособности клеток в суспензии, затем производят подсчет в камере Горяева после окрашивания 0,5% водным раствором трипанового синего по общепринятой методике. При обнаружении (80±10,0)% нежизнеспособных клеток, культивирование прекращают и отбирают пробы вируса для определения инфекционной активности и отсутствия контаминации бактериальной и грибной микрофлорой.

Полученное таким образом культуральное вируссодержащее сырье вируса блютанга 14 серотипа с исходной биологической активностью 5,5-7,0 lg ТЦД 50 /см 3 , инактивируют препаратом A-24, добавляют масляный адъювант - остальное до 100 мас.%, тщательно перемешивают и получают вакцину при следующем соотношении компонентов, масс.%:

Приготовленная таким образом вакцина представляет собой эмульсию бледно-розового цвета. Содержание антигена в вакцине составляет 30%.

Пример 4. Получение инактивированного культурального вируссодержащего сырья из вируса блютанга штамм Г244/11 с применением роллерного метода культивирования.

Для получения культурального вируссодержащего сырья вирусом блютанга (штамм Г244/11) заражают элективную клеточную культуру ПС или Vero, выращенную в роллерных бутылях, с множественностью 0,01-0,001 ТЦД 50 /клетка, и инкубируют при (37,0±0,5)°C в течение 48-72 часов до проявления характерных цитопатических изменений и поражении 90-100% клеточного монослоя. Затем содержимое бутылей объединяют и определяют инфекционность вирусного материала титрованием в культуре клеток. Затем к вируссодержащей культуральной суспензии с исходной активностью не менее 6,5 lg ТЦД 50 /мл вносят препарат A-24, растворяют его путем тщательного перемешивания и инкубируют при 37°C 48 ч.

К полученному таким образом инактивированному сырью добавляют масляный адъювант - остальное до 100%, тщательно перемешивают, пропускают через коллоидную мельницу для эмульгирования и получают вакцину при следующем соотношении компонентов, масс %:

Культуральное инактивированное сырье

14 серотипа вируса блютанга 50,00
A-24 0,02
Масляный адъювант остальное

Приготовленная таким образом вакцина представляет собой эмульсию бледно-розового цвета. Содержание антигена в вакцине составляет 50%.

Вакцину вводят по 1,5 см 3 подкожно 4 овцам или по 3 см 3 2 нетелям в область внутренней поверхности бедра, дважды с интервалом 14 сут. До иммунизации и через 21 день после второй вакцинации от животных отбирают кровь и сыворотку исследуют на наличие вируснейтрализующих антител в реакции нейтрализации. РН проводят по стандартной методике со 100-300 ТЦД 50 вируса гомологичного серотипа в пробирках или микрометодом в планшетах (разведение сывороток с 1:2 до 1:128), использование культуры клеток Vero или ВНК-21/13. Вакцина вызывала образование BH-антител у испытуемых животных в титрах 1:8-1:16. Вакцину считают иммуногенной, если она индуцирует образование вируснейтрализующих антител в исследуемых сыворотках крови вакцинированных животных в титре не ниже 1:4 против гомологичного серотипа вируса, включенного в состав вакцины.

1. Серологический мониторинг катаральной лихорадки овец / А.Ю. Чичикин, А.Л. Семенихин, А.А. Коломыцев, А.А. Стрижаков, М.Б. Новикова, А.В. Луницин, А.В. Книзе // Вирусные болезни сельскохозяйственных животных. - Тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции. Владимир: ОПИиНИ ВНИИЗЖ. - 1995. - С.167.

2. Идентификация и типирование вируса катаральной лихорадки овец / И.Ф. Вишняков, А.А. Стрижаков, М.Б. Новикова, А.В. Луницин, В.В. Куриннов, Г.М. Карпов, В.И. Балышева, К.С. Волокитина // Ветеринария. - 1995. - № 4. - С.20-25.

3. Катаральная лихорадка овец (КЛО, блютанг, синий язык) // Пятьдесят лет борьбы с особо опасными болезнями животных / Рос. акад. с.-х. наук; ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии; ред. кол.: Д.В. Колбасов (гл. ред.) [и др.] - Владимир: Атлас. - 2008. - С.52-54.

4. Серологическое обследование жвачных в Бурятии через семь лет после вспышки блютанга / Стрижаков А.А., Новикова М.Б., Цыбанов С.Ж., Муруева Г.Б. // Междунар. науч.-практ. конф. "Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными, экзот. зооантропоноз. болезнями животных": Сб. ст. - Покров, 2000, - С.63-64.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Читайте также:

Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!
При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.

Copyright © Иммунитет и инфекции