Частота обнаружения вируса папилломы человека

На основании обследования 85 женщин репродуктивного возраста с диспластическими изменениями шейки матки I–II степени отражены показатели встречаемости серотипов вируса папилломы человека в Республике Мордовия. Изложена динамика распределения заболеваемост

Based on an examination of 85 women of reproductive age with dysplastic changes in the cervix of I–II degree, the incidence of human papilloma virus serotype types in the Republic of Mordovia is reflected. The dynamics of the distribution of the incidence of cervical cancer according to the stages of development is reported. Epidemiologically significant contingents of risk for development of oncological pathology of the cervix uteri have been established.

Детальный анализ о роли инфекционных агентов в развитии неопластических поражений шейки матки, ведущийся на протяжении многих десятилетий, не ставит под вопрос актуальность изучения этиопатогенетических механизмов в сфере онкогинекологии. Несмотря на сформированную стратегию цитологического скрининга с целью профилактики рака шейки матки, совершенствование и внедрение новых методов диагностики необходимы как для точной и своевременной верификации диагноза, так и для селективного терапевтического пути с минимальными репродуктивными потерями [3].

Как известно, этиологическим фундаментом цервикальных поражений является вирусная природа. Открытием XXI века стало масштабное изучение вируса папилломы человека (ВПЧ) и его роли в канцерогенезе рака шейки матки. Учитывая различия онкогенного потенциала, а также способность к персистенции, дифференцировка серотипов ВПЧ на группы имеет большую клиническую значимость. Широкий спектр вариаций ВПЧ подразделен на две группы: группу высокого онкогенного риска и группу низкого онкогенного риска [2]. Анализ статистических результатов, проведенный Европейским отделением Международного общества по изучению инфекции в акушерстве и гинекологии (International Society for Infectious Diseases in Obstetrics and Gynaecology, I-IDSOG-EUROPE), показал, что высокую степень онкологической агрессивности имеют 16-й, 18-й, 31-й, 33-й, 45-й, 52-й, 58-й, 59-й, 65-й серотипы [5].

Ежегодно в России регистрируется порядка 14 000 новых случаев РШМ, что составляет более 30% от всех злокачественных новообразований женских половых органов. Заболеваемость сохраняет тенденцию к росту. На учете по данной патологии в онкологических учреждениях страны состоит более 160 000 женщин.

В Республике Мордовия на конец 2016 г. зарегистрировано 103 новых случая РШМ. На учете состояла 1131 пациентка, диагноз которых морфологически подтвержден в 100% случаев. Из них 47,3% имели I стадию, 33% — II стадию, 14,6% и 5,1% — III и IV стадии соответственно [4]. Коррелятивная связь между РШМ и ВПЧ высокого онкогенного риска неоспорима. Ранняя стратификация населения на группы риска с доброкачественными и предраковыми заболеваниями шейки матки на основании серотипирования ВПЧ имеет определенную ценность в работе врача акушера-гинеколога.

Целью данного исследования было проанализировать частоту встречаемости серотипов ВПЧ у женщин репродуктивного возраста Республики Мордовия с цервикальными интраэпителиальными неоплазиями I–II стадии.

У всех пациенток, вошедших в исследование, был взят урогенитальный мазок на выявление ДНК ВПЧ методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Немаловажным критерием являлось отсутствие противовирусного лечения и деструктивных манипуляций с целью получения достоверных результатов.

Результаты вирусологического обследования пациенток с CIN I, CIN II свидетельствуют о том, что в 63,7% случаев определялись ВПЧ 16-го типа и в 47% — 18-го типа. Общая частота выявляемости ВПЧ колеблется от 59% до 70%. Филогенетические серотипы низкого онкогенного риска ВПЧ выявлялись в единичных случаях. Сочетание разных генотипов (не более пяти) обнаружено у 12 пациенток с CIN I, что составило 14,1%.

При этом частота выявления ВПЧ увеличивается прямо пропорционально степени неопластических изменений эпителия шейки матки. Так, при CIN II ДНК ВПЧ выявился почти у 80% женщин, тогда как при CIN I у 54%. Интересен факт, что 5 пациенток с CIN I по данным цитологического анализа соскоба шейки матки были вируснегативны. Однако в данном случае не отрицается проявление неспецифического экзоцервицита.

Наличие множественных папилломатозных разрастаний вульвы и слизистой оболочки влагалища отмечено у 11 обследованных.

Основной пик обнаружения ВПЧ генитального типа приходится на возраст 18–27 лет, и как моноинфекция встречаются крайне редко. Так, у 69% обследованных женщин имела место микст-инфекция, а именно вирус простого герпеса 2-го типа диагностирован в 34,4% случаев, микоплазмоз — в 29,8%, хламидиоз — в 19,7%, неспецифическая условно-патогенная флора — в 20,5%. Сравнительный анализ инфекционной нагрузки позволяет косвенно предположить, что некоторые вирусы семейства Herpesviridae играют роль возможных инициаторов канцерогенеза.

Частота выявления ВПЧ у больных интраэпителиальными цервикальными неоплазиями (CIN) I–II степени по данным вирусологического исследования в Республике Мордовия варьирует от 59% до 70%, причем основная когорта обследованных имела ВПЧ высокогоканцерогенного риска (16-й, 18-й типы).

Полученные данные свидетельствуют о том, что проведение цитологического скрининга цервикальных интраэпителиальных неоплазий в настоящее время должно обязательно сочетаться со скринингом инфекции ВПЧ высокого онкогенного риска. При этом генотипирование ВПЧ должно быть включено в массовый цитологический скрининг.

Таким образом, принимая во внимание высококанцерогенные типы ВПЧ при скрининге и профилактических обследованиях, возможно с большей вероятностью определить эпидемиологически значимые контингенты риска по развитию диспластических процессов в шейке матки, оценить прогноз течения заболевания и сориентировать клиницистов в выборе соответствующей терапии.

Литература

Бебнева Т. Н., Муйжнек Е. Л., Роговская С. И., Киселев В. И., Ашрафян Л. А. Патогенетическое лечение неопластических процессов шейки матки: новые подходы // Доктор.Ру. 2016.
Лалианци Э. И. Роль вирусов в возникновении онкологической патологии // Вопр. онкологии: материалы VIII Всероссийского съезда онкологов. СПб, 2013. Т. II.
Роговская С. И. Папилломавирусная инфекция у женщин и патология шейки матки: В помощь практикующему врачу. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2014.
Русакевич П. С., Ерохина О. А., Шелкович С. Е. Роль цитологического метода в исследовании шейки матки: учеб.-метод. пособие. Ч. 1. Минск: БелМАПО, 2013.
Состояние онкологической помощи населению России в 2016 году / Под ред. А. Д. Каприна, В. В. Старинского, Г. В. Петровой. М., 2017.

О. П. Виноградова* , 1 , доктор медицинских наук, профессор
Н. А. Андреева**, кандидат медицинских наук
О. В. Епифанова ***

* ПИУВ — филиал ФГБОУ ДПО РМАНПО МЗ РФ, Пенза
** ФГБОУ ВО НИ МГУ им. Н. П. Огарёва, Саранск
*** ГБУЗ РМ МРКПЦ, Саранск

Сравнительный анализ и частота встречаемости серотипов папилломавирусной инфекции в Республике Мордовия у женщин с цервикальными интраэпителиальными неоплазиями/ О. П. Виноградова, Н. А. Андреева, О. В. Епифанова
Для цитирования: Лечащий врач № 9/2018; Номера страниц в выпуске: 86-87
Теги: женщины, шейка матки, дистпластические изменения, группа риска

В работе проанализирована частота выявления типов вируса папилломы человека высокого канцерогенного риска среди жителей . Частота проб среди женщин составила 40%, среди мужчин — 21, 5%. Частота обнаружения папилломавируса наибольшая среди молодых лиц до 35 лет. Более 40% лиц имеют среднюю концентрацию вируса, при которой возможна дисплазия клеток.

Ключевые слова: вирус папилломы человека, скрининг, вирусная нагрузка

In this study the detection frequency of human papilloma virus types with high carcinogenic risk among residents of was analyzed. The frequency of samples among women was 40%, among men — 21, 5%. Detection frequency of human papillomavirus was highest among young persons up to 35 years. More than 40% of persons had an average concentration of virus which may cause the cell dysplasia.

Keywords: human papillomavirus, screening

Введение

Вирус папилломы человека (ВПЧ) относится к семейству паповавирусов (Papovaviridae), группе Papillomavirus (HPV). ВПЧ является чисто эпителиотропным вирусом. Актуальность изучения папилломавирусной инфекции (ПВИ) определяется чрезвычайно высоким канцерогенным потенциалом ряда генотипов ВПЧ и является не только медицинской, но социальной демографической проблемой. В настоящее время выделено более 130 различных генотипов вируса, среди которых почти 30 были обнаружены в кондиломатозных, предраковых и раковых поражениях вульвы, влагалища и шейки матки [1]. Если многочисленные эпидемиологические исследования доказали безусловную роль ВПЧ в способности индуцировать неопластические процессы в шейке матки, то у мужчин роль ВПЧ как кофактора в формировании рака полового члена, предстательной железы и яичек дискутируется.

Цель исследования

Целью данной работы было изучение частоты регистрации вируса папилломы человека среди жителей в зависимости от пола.

Материал и методы

Материалом для исследования послужили образцы ДНК, полученные из эпителиальных клеток урогенитального тракта женщин и мужчин. Всего было исследовано 5655 образцов ДНК лиц женского пола и 3291 образец ДНК мужчин.

Результаты и обсуждение

В настоящее время известно, что папилломавирусная инфекция передается преимущественно половым (с инфицированием сексуальных партнеров в 60%) [3] и путем, а также при проведении медицинских исследований, при прохождении плода через инфицированные родовые пути (с этим путем передачи связывают ювенильный папилломатоз гортани и рецидивирующий респираторный папилломатоз с кистозом легких у детей) [4].

По данным литературы инфицированность населения России и мира вирусом папилломы человека в целом составляет от 40 до 80% [3]. Однако инфицированность аногенитальными типами ВПЧ составляет 10–20%, в Москве — 16%, в Нижнем Новгороде — 33, 4% [5; 6].

Папилломавирусная инфекция поражает как женщин, так и мужчин, однако гормональных различий вероятность развития опухолей у мужчин гораздо ниже, чем у женщин. Тем не менее, мужчины в течение длительного времени могут быть носителями ВПЧ и передать вирус женщинам.

Генодиагностика папилломавирусной инфекции позволяет быстро с высокой чувствительностью и специфичностью выявлять этиологический фактор возможной патологии, определять группы риска по онкозаболеваниям урогенитального тракта и вовремя предотвратить не контролируемый рост инфекций в популяции.

Анализ данных скрининга на вирус папилломы человека показал, что частота проб среди женщин составила 40, 0%, среди мужчин — 21, 5%. При этом наибольшая частота инфицированных лиц как женского, так и мужского пола приходится на молодых людей до 35 лет. В этой возрастной группе более половины лиц являются носителями вируса папилломы человека. Наши данные соответствуют данным литературы, согласно которым пик выявления ВПЧ приходится на возрастные группы до 29 лет [5; 7], у которых отмечается наибольшая сексуальная активность и смена половых партнеров. Среди населения США 44, 8% инфицированных папилломавирусом — это лица в возрасте от 20 до 24 лет [8].

Самыми опасными типами ВПЧ являются 16 и 18 типы. Одновременное инфицирование данными типами ВПЧ обусловливает 70% случаев цервикального рака [3]. Частота выявления 16 и 18 типов вируса среди жителей представлена в таблице 1. Как видно из данных таблицы частота выявления вируса папилломы человека 16 и 18 типов среди лиц младше 20 лет составляет около 15%, и с возрастом снижается. Среди лиц старше 30 лет частота выявления самых опасных типов ВПЧ достоверно ниже по сравнению с более молодыми возрастными группами.

Однако в старших группах в силу возрастных изменений иммунитета и гормональных функций организма возможны проявления папилломавирусной инфекции и клеточная трансформация ракового характера. От заражения ВПЧ до развития предрака и рака шейки матки в среднем проходит 20 лет [9]. Более высокий риск () отмечается у женщин старше 30 лет, инфицированных типами ВПЧ высокого онкогенного риска, включая в первую очередь типы 16 и 18 [3].

Таблица 1 — Частота обнаружения вируса папилломы человека 16 и/или 18 типов в зависимости от возраста

Рассказываем об одном из самых распространённых вирусов, передающихся половым путём

Текст: Карина Сембе, Татьяна Румянцева

Вирус папилломы человека (ВПЧ) — чрезвычайно распространённая инфекция, передаваемая половым путём: от 80 до 90 % женщин сталкивается с инфекцией ВПЧ в течение жизни. Особенность вируса в том, что в течение многих лет он может никак себя не проявлять, но в итоге привести к развитию заболеваний половых органов — как доброкачественных, например папилломы, так и злокачественных (среди них и рак шейки матки).

По последним данным Международного агентства по исследованию рака, частота новых случаев заболевания раком шейки матки в России — 15,9 на 100 тысяч человек: это выше, чем в Европейском союзе, где показатель составляет 9,6, и в США (всего 6,6 на 100 тысяч человек). Ежедневно в России от рака шейки матки умирают 17 женщин. Ввиду такой распространённости вируса и всей серьёзности рисков, связанных с ним, мы решили выяснить, что нужно знать о ВПЧ, чтобы себя обезопасить. Что такое папилломавирус человека, когда самое время сдать анализ, почему не стоит паниковать, если у вас обнаружен ВПЧ, и зачем нужна вакцинация — ищем ответы вместе с врачом-гинекологом, кандидатом медицинских наук Татьяной Румянцевой.

Что такое ВПЧ

Папилломы, спровоцированные разными типами ВПЧ, встречаются на коже, слизистой оболочке полости рта, носа, придаточных пазух носа, глотки, голосовых связок, почечных лоханок, мочеточников, мочевого пузыря и гениталий. Клинические проявления папилломавирусной инфекции зависят от локализации: если папилломы кожи лица и шеи вызывают в основном косметический дефект, то папилломы гортани могут привести к охриплости голоса, нарушению дыхания, а папиллома мочеточника — к нарушению оттока мочи из-за его сужения. Что касается образований в области гениталий, о которых преимущественно пойдёт речь, они крайне редко становятся злокачественными, однако приводят к существенным косметическим дефектам.

Насколько велика возможность заражения

Папилломавирус человека передаётся главным образом при половых контактах — орально-генитальных и анальных. В 2003 году группа эпидемиологов из Университета Вашингтона провела масштабное исследование факторов риска ВПЧ среди студенток американских университетов и выяснила, что большинство типов вируса попадает в организм женщин в первые годы половой активности: 40 % пациенток заразились ВПЧ в течение двух лет после первого полового контакта. Рано или поздно папилломавирусом заражаются почти все мужчины и женщины: до 90 % из нас в течение жизни столкнётся с шеечно-вагинальной инфекцией.

Но есть и хорошие новости. Учёные из отделения эпидемиологии Медицинского колледжа имени А. Эйнштейна в Бронксе выяснили, что большинство инфицированных женщин (около 91 %) избавляются от ВПЧ без каких-либо медицинских вмешательств в течение двух лет. Именно столько занимает естественное развитие инфекции, вызванной большей частью типов ВПЧ, и двух лет достаточно для того, чтобы иммунная система человека полностью избавилась от вируса.

Чем опасен ВПЧ

Связь ВПЧ и рака шейки матки уже не вызывает сомнений: в 99,7 % случаев рака шейки матки у пациенток находят один из типов ВПЧ. Два типа ВПЧ наиболее опасны: 16 и 18 типы провоцируют 70 % случаев рака шейки матки и предраковых образований. Рак шейки матки развивается только в том случае, когда вирусу удаётся задержаться в организме на длительное время. У здоровых женщин для развития рака шейки матки вирусу потребуется 15–20 лет пребывания в организме. Процесс может протекать быстрее (за 5–10 лет) у женщин с нарушениями иммунной системы. Говоря о группе риска с такими нарушениями, мы подразумеваем, например, ВИЧ-инфицированных женщин, а не пациенток с так называемым ослабленным иммунитетом.

От состояния нормы до рака должны пройти несколько стадий, которые поддаются лечению. Промежуточные стадии называются дисплазией, или цервикальной интраэпителиальной неоплазией (новый термин). Обнаружить эти изменения возможно при цитологическом исследовании (в идеале с помощью упомянутого жидкостного Рap-теста). В случае обнаружения цервикальной интраэпителиальной неоплазии и ВПЧ рекомендуется лечение, которое представляет собой процедуру удаления поражённого участка — чаще с помощью радионожа — с последующим гистологическим исследованием. После успешного лечения в 95 % случаев ВПЧ не обнаруживается, что является своеобразным сигналом о правильно выполненном хирургическом вмешательстве.

В каких ситуациях стоит сдавать анализ на ВПЧ

На сегодня не существует анализа на ВПЧ, рекомендованного мужчинам. Единственный подтверждённый метод анализа — скрининг женщин на предмет рака шейки матки, то есть тестирование всех женщин из группы риска, у большинства из которых симптомы не проявляются. Подобные тесты не работают для выявления рака, связанного с ВПЧ, или генитальных папиллом и кондилом у мужчин. Скрининг анального рака мужчинам также не рекомендуют: требуется больше исследований, чтобы определить его эффективность по части предотвращения развития болезни. Тем не менее некоторые эксперты рекомендуют ежегодный скрининг в качестве анальных Pap-тестов для мужчин, практикующих гомосексуальные контакты, а также для ВИЧ-положительных мужчин, поскольку, по статистике, среди этих групп случаи анального рака встречаются чаще.

Можно ли вылечить ВПЧ

На данный момент не существует эффективного лечения, направленного на уничтожение вируса папилломы в организме человека. Мировая медицина приводит немало аргументов в пользу применения иммуномодуляторов в случае лечения проявлений ВПЧ — плоских папиллом и остроконечных кондилом, а также ВПЧ-ассоциированного рака. Однако стоит отличать это от попыток борьбы с самим вирусом: многие отечественные иммуностимуляторы и иммуномодуляторы, назначаемые в России для этих целей, не известны в других странах. Есть и препараты, которые производятся за границей, но применяются только в России и ряде других стран СНГ. Кроме того, подобных методов лечения нет в руководствах Всемирной организации здравоохранения, а их эффективность ставят под вопрос и российские медики.

А вот лечение состояний, вызванных ВПЧ — как папиллом, так и упомянутой неоплазии, предрака или рака шейки матки, — возможно и должно осуществляться с применением хирургических методов: с помощью лазера, радионожа, жидкого азота (криодеструкции) или слабого электрического тока (диатермокоагуляции). Тактику лечения поражений шейки матки определяют по результатам кольпоскопии и биопсии и в случае обнаружения атипичных клеток (неоплазии) удаляют больший участок с захватом нормальных тканей во избежание риска их поражения. Доброкачественные кондиломы и папилломы с другой локализацией (например, на наружных половых органах) следует удалять не только из косметических соображений, но и для того, чтобы снизить риск заражения партнёра или партнёров.

Если у пациентки, у которой обнаружен ВПЧ, нет жалоб, папиллом или изменений на шейке матки и данные Pap-теста не вызывают вопросов, лечебные процедуры не нужны — необходимо только сдавать анализ раз в год и следить за состоянием шейки матки. Зачастую вирус уходит из организма самостоятельно. Даже если вирус не исчезнет, это вовсе не значит, что он непременно приведёт к развитию неоплазии или рака шейки матки, но контроль всё же необходим. Лечение половых партнёров не требуется, за исключением тех случаев, когда у обоих партнёров есть папилломы половых органов. Что касается профилактики, в помощь презервативы (хотя и они не обеспечивают стопроцентной защиты), а также более надёжный метод — вакцинация.

Как проходит ВПЧ-вакцинация в мире и в России

На сегодняшний день существуют вакцины, защищающие от 16 и 18 типов ВПЧ, одна из них также защищает от 6 и 11 типов. Типы 16 и 18 отвечают за 70 % случаев рака шейки матки, потому защита от них особенно важна. Бостонские врачи-гинекологи, кандидаты медицинских наук Кэри П. Браатен и Марк Р. Лауфер отмечают необходимость вакцинации и утверждают следующее: учитывая то, что большинство из нас заражаются ВПЧ при первых половых контактах, идеальное время для вакцинации — до начала половой жизни.

480 руб. | 150 грн. | 7,5 долл. ', MOUSEOFF, FGCOLOR, '#FFFFCC',BGCOLOR, '#393939');" onMouseOut="return nd();"> Диссертация, - 480 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

Автореферат - бесплатно , доставка 10 минут , круглосуточно, без выходных и праздников

Головина, Дарья Андреевна. Вирусы папиллом человека при раке мочевого пузыря: методы детекции, частота обнаружения, морфологические и клинические особенности заболевания : диссертация . кандидата биологических наук : 14.01.12 / Головина Дарья Андреевна; [Место защиты: Рос. онкол. науч. центр им. Н.Н. Блохина РАМН].- Москва, 2013.- 128 с.: ил. РГБ ОД, 61 14-3/131

Введение к работе

доктор медицинских наук профессор Ю. В. Шишкин

Актуальность проблемы.

По последним оценкам, каждый пятый случай злокачественного новообразования человека возникает с участием инфекционного агента – вируса, бактерии, паразитического гельминта. Около 70 % таких случаев ассоциировано с вирусами. Согласно прогнозам, квота онкологических заболеваний, причинно связанных с инфекционными агентами, может в будущем достигнуть

Вирусы папиллом человека (ВПЧ) определенных типов, т.н. типов высокого риска, являются этиологическими агентами рака шейки матки (РШМ), а также рака влагалища, полового члена, ротовой полости и некоторых других форм злокачественных опухолей. Перечень форм рака, в возникновении которых доказано участие ВПЧ, постоянно пополняется. Вопрос о роли ВПЧ в возникновении инвазивных карциномам нескольких локализаций остается открытым; именно к этой категории международные группы экспертов относят и рак мочевого пузыря (РМП).

ВПЧ двух типов высокого онкогенного риска, 16-го и 18-го, обнаруживаются в

70% образцов РШМ; помимо них признаны канцерогенами для человека ВПЧ одиннадцати типов: 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 и 66; еще для восьми типов ВПЧ получены ограниченные свидетельства их канцерогенности. Для превращения нормальной клетки, зараженной ВПЧ высокого риска, в раковую необходима экспрессия вирусных генов Е6 и Е7. Кодируемые ими белки взаимодействуют со многими белками клетки, участвующими в контроле пролиферации, апоптоза, репарации генома и других важнейших процессов жизнедеятельности; в результате нарушается нормальное функционирование этих клеточных белков.

Для онкологической клиники в этой связи важно следующее. Все формы рака, в возникновении которых доказана роль ВПЧ типов высокого риска, этиологически гетерогенны: только определенная часть карцином ротовой полости, вульвы, полового члена возникает с участием ВПЧ, другая же часть опухолей той же локализации ВПЧ-негативна. В каждом из этих органов, включая шейку матки, ВПЧ-позитивный рак отличается от ВПЧ-негативного по молекулярно-биологическим, гистологическим и клиническим характеристикам.

Несмотря на сравнительно невысокую заболеваемость РМП в России (ниже средних европейских показателей), Россия отнесена экспертами ВОЗ к группе стран с высокой смертностью от РМП, причем высокие показатели смертности обусловлены всецело высокой смертностью среди мужчин, - в большинстве регионов она выше максимальных показателей смертности в странах, представленных в статистике ВОЗ.

Известно много факторов, повышающих риск развития РМП. К их числу относятся: географическое положение, профессиональная деятельность, курение, характер питания, применение определенных лекарств, паразитарное заболевание, вызываемое гельминтами из рода Schistosoma.

Вопрос о том, принимают ли участие ВПЧ типов высокого риска в уротелиальном онкогенезе, длительное время остается предметом дискуссий. Отсутствие единого мнения - результат систематического несовпадения данных, получаемых разными исследовательскими группами при детекции ВПЧ в раковом уротелии. Так, Международная группа экспертов отобрала более двадцати работ, выполненных в 1991-2001г.г. в разных лабораториях мира; доля ВПЧ-позитивных образцов РМП в этих сообщениях варьировала в пределах от 0 до 83%. В качестве вероятных причины такой неоднородности данных исследователи обычно упоминают объективную этно-географическую неоднородность РМП и методические особенности работ.

Изучение участия ВПЧ в генезе РМП актуально и в теоретическом, и практическом плане. В настоящем комплексном исследовании впервые на группе российских больных РМП получены ответы на следующие вопросы: способны ли известные биологические канцерогены, ВПЧ, участвовать в канцерогенезе эпителия особого типа, - уротелия, и, если да, то влияет ли ВПЧ на клинические особенности РМП? Результаты исследования представляют практический интерес: они важны для совершенствования способов профилактики РМП (например, с помощью профилактических прививок мальчиков вакцинами, разработанными для профилактики РШМ), для обоснования поиска новых молекулярных маркёров, а также для индивидуализации методов лечения РМП.

Цель и задачи исследования.

Цель работы состояла в проверке гипотезы о возможной ассоциации ВПЧ типов высокого риска с возникновением РМП.

Исходя из цели работы, были поставлены следующие задачи:

Провести скрининг образцов уротелия на присутствие ДНК ВПЧ, определить тип вируса в позитивных образцах (в случае обнаружения таковых).

Исследовать экспрессию онкогенов Е6 и Е7 ВПЧ в ДНК-ВПЧ-позитивных образцах на уровне мРНК и белка.

Исследовать экспрессию клеточного белка p16 INK4a в образцах уротелия мочевого пузыря. Оценить возможную ассоциацию между гиперэкспрессией белка p16 INK4a , являющегося ранним диагностическим маркёром папилломавирусного канцерогенеза в эпителии шейки матки, и ВПЧ-позитивностью РМП.

Сопоставить особенности клинического течения ВПЧ-позитивного и ВПЧ-негативного РМП.

Нуачная новизна, теоретическая и практическая значимость работы.

Впервые на значительной выборке (101 образец РМП) проведена проверка гипотезы, согласно которой вирусы папиллом человека могут быть причастны к злокачественному превращению уротелия мочевого пузыря. Впервые для изучения данной проблемы использован комплексный подход: присутствие вирусного материала оценивали на трех уровнях: ДНК ВПЧ (в полимеразной цепной реакции), РНК, соответствующей онкогенам ВПЧ (методом ПЦР с обратной транскрипцией) и онкобелка Е7 ВПЧ (иммуногистохимическим методом).

В результате проведённой работы получены подтверждения участия ВПЧ16 (основной тип вируса, вызывающий РШМ) в злокачественном перерождении эпителия мочевого пузыря. Впервые проведена проверка применимости клеточного белка p16 INK4a в качестве маркера ВПЧ-позитивного РМП.

Вопрос о том, являются ли такие сильные канцерогены как ВПЧ типов высокого риска (в первую очередь – по отношению к клеткам эпителия шейки матки) также канцерогенами для уротелия мочевого пузыря, представляет фундаментальный интерес. Результаты работы должны учитываться и в практической онкоурологии: они позволят усовершенствовать методы профилактики, диагностики и лечения РМП.

Апробация результатов работы.

Материалы работы были представлены в виде стендовых докладов на Съезде Вавиловского общества генетиков и селекционеров (Москва, 2009), а также на нескольких международных конференциях и съездах, в т.ч. на Международном противораковом конгрессе (Швейцария, Женева, 2008) и на 25-й Международной конференции по папилломавирусам (Швеция, Мальмё, 2009).

Общепризнано, что этиологической причиной рака шейки матки (РШМ) являются вирусы папилломы человека (ВПЧ) группы высокого канцерогенного риска, которые, по данным широких международных исследований, обнаруживаются практически в 100% случаев РШМ. Однако, существуют также и данные о встречаемости ВПЧ-негативных РШМ, доля которых составляет не более 10% - для плоскоклеточных карцином и более 10% - для аденокарцином. Действительно ли ВПЧ может отсутствовать в раковой ткани, или просто не выявляется по причине низкой чувствительности ВПЧ-тестов пока до конца не выяснено.

В пользу существования ВПЧ-негативных РШМ выдвигают два различных объяснения. Первое из них основано на предположении, что канцерогенез в этих раках происходит без участия вируса, а инициируется другими индукторами канцерогенеза. Другое объяснение предусматривает трансформирующее воздействие вируса на клетки. Вирусная ДНК интегрируется в геном клетки, вызывая его дестабилизацию, но при неконтролируемом делении трансформированных клеток, происходит делеция интегрированной вирусной ДНК, что приводит к появлению опухолевых клонов, не содержащих последовательностей вирусной ДНК.

Сторонники точки зрения отсутствия ВПЧ-негативных РШМ придерживаются мнения, что используемые для выявления и определения генотипа ВПЧ-тесты обладают недостаточной чувствительностью, т.к. выявляют не все типы вируса. В международной практике изучении встречаемости различных генотипов ВПЧ в образцах РШМ, используются ВПЧ-тесты на основе полимеразной цепной реакции с универсальными праймерами ( GP5+/GP6+ или SPF), которые находятся в области L 1-гена ВПЧ и узнают большинство генотипов ВПЧ группы α, включая как типы высокого, так и низкого канцерогенного риска. Определение генотипа ВПЧ проводится с помощью гибридизации на фильтрах к которым прикреплены ДНК-пробы, специфичные для отдельных генотипов ВПЧ. Аналитическая чувствительность выявления достаточно высокая, но варьирует в зависимости от типа ВПЧ. При наличии в образце ВПЧ двух генотипов, один из которых в высокой концентрации, а другой – в значительно более низкой, эффективность амплификации ДНК второго типа может быть снижена вследствие конкурентного взаимодействия. Так, например, при наличии в образце ВПЧ высококанцерогенного 18 типа в количестве 10 3 геномов и ВПЧ низкоканцерогенного, например, 73 типа в количестве 10 8 геномов, 18-й тип ВПЧ скорее всего не выявится, а выявленный 73 тип может быть ошибочно признан этиологической причиной РШМ и отнесен в эпидемиологической классификации в группу канцерогенных типов ВПЧ. Во избежание этой ошибки, для выявления и определения генотипов ВПЧ предпочтительней использовать ПЦР с типоспецифическими праймерами. Кроме того, учитывая, что при трансформации клетки вирусом только часть вирусного генома (чаще область генов E6-E 7) может встраиваться в геном человека, а остальные гены ( E1, E2, а иногда и L 1) могут быть утерянными, типоспецифические праймеры для генотипирования ВПЧ следует выбирать в области E6-E7 генов.

С другой стороны, в качестве клинического материала для молекулярно-эпидемиологических исследований чаще всего используют кусочки опухолевой ткани, которые забирают не всегда одноразовыми инструментами. В этой ситуации повышается риск перекрестной контаминации уже на стадии забора клинического материала или впоследствии при проведении различных манипуляций одновременно с несколькими клиническими образцами. Например, если большая часть клинических образцов содержит наиболее распространенный в раке 16 тип ВПЧ в высокой концентрации, то образцы, исходно не содержащие этот тип, могут вследствие контаминации содержать его в фоновых концентрациях. Вследствие этого, при использовании ВПЧ тестов с высокой аналитической чувствительностью, будет выявляться тип-контаминант, что может приводить к ошибочному заключению о ведущей роли этого генотипа как причины рака. Во избежание этой ошибки, необходимо использовать тесты для генотипирования, позволяющие оценивать количество ДНК ВПЧ обнаруженных типов, чтобы отделить значимый тип ВПЧ от незначимого типа, который может присутствовать вследствие фоновой контаминации образцов.

Цель исследования – используя разработанную тест-систему, оценить частоту встречаемости различных генотипов ВПЧ высокого канцерогенного риска в образцах эпителия шейки матки с наличием дисплазии высокой степени тяжести и при первичном раке на разных стадиях его развития в клинических образцах от пациенток Москвы и Московской области.

Материал и методы

Результаты выявления ДНК ВПЧ 12-ти генотипов ВПЧ высокого канцерогенного риска (ВКР) в исследуемых клинических образцах представлены в таблице 1 и на диаграмме 1. Результаты определения в каждой группе клинических образцов процентной доли образцов с 16, 18 и 45 генотипами по отношению к образцам, содержащим другие генотипы, представлены на диаграмме 2.

Таблица 1. Количество образцов, в которых выявлены ДНК различных типов ВПЧ ВКР в значимой концентрации и распределение генотипов по группам.

Читайте также: