Анализы на грипп в хеликсе

Типирование Influenza virus A (H1N1, H3N2) – идентификация субтипов вируса гриппа типа А путем качественного выявления в исследуемом материале вирусной нуклеиновой кислоты (РНК).

Идентификация субтипов H1N1 и H3N2 вируса гриппа А методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР).

Influenza virus A RT-PCR subtyping, Influenza virus reverse transcription PCR test.

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок из зева (ротоглотки) и носа, мокрота.

Общая информация об исследовании

Вирус гриппа относится к РНК-содержащим вирусам. Род вирусов гриппа включает три типа вирусов: А, В и С. Вирусная частица имеет сферическую форму, в центре которой находится генетический материал вируса – РНК, а в оболочке присутствуют сложные белки – гемагглютинин (Н) и нейраминидаза (N). Для вирусов гриппа типа А характерна постоянная изменчивость этих поверхностных белков: на данный момент известно 15 вариантов гемагглютинина и 9 вариантов нейраминидазы. Их сочетание в определенной комбинации определяет субтип вируса. Вирусы субтипов H1N1 и H3N2 вызывают сезонный грипп человека.

Попадая в организм человека, вирус гриппа проникает в клетки эпителия слизистой оболочки дыхательных путей и размножается в них. Пораженные вирусом клетки дегенерируют, погибают и отторгаются. Таким образом, в отделяемом дыхательных путей (слизь, мокрота и т.п.) присутствуют погибшие эпителиальные клетки вместе с вирусными частицами.

Идентификация субтипа вируса проводится методом полимеразной цепной реакции. Принцип метода основан на обнаружении в материале специфичных фрагментов вирусной РНК, их избирательном синтезе с образованием огромного числа копий, что позволяет их легко детектировать, в том числе визуально. К преимуществам метода ПЦР можно отнести:

прямое определение наличия возбудителя – выявление специфического участка РНК возбудителя дает прямое указание на присутствие вируса;

высокую специфичность – в исследуемом материале идентифицируется уникальный, характерный только для данного вируса фрагмент РНК;

высокую чувствительность – ПЦР позволяет обнаружить возбудитель, даже если его исходная концентрация в исследуемом материале чрезвычайно мала.

Однако стоит отметить, что обнаружение вирусной РНК методом ПЦР не обязательно указывает на обнаружение жизнеспособного вируса или продолжающееся его размножение.

Для чего используется исследование?

Для идентификации субтипа вируса гриппа.

Когда назначается исследование?

При нетипичных проявлениях заболевания;

при высоком риске осложнений от гриппа (возраст более 65 и менее 2 лет, беременные, а также женщины в период первых двух недель после родов, лица с хроническими заболеваниями легких, сердца, почек, пациенты с иммунодефицитом или гематологическими заболеваниями);

при идентификации возбудителя у пациентов, заболевших вне эпидемиологического сезона.

Что означают результаты?

Референсные значения: не обнаружено.

Положительный результат – если искомый фрагмент вирусной РНК обнаружен - инфицирование вирусом гриппа А определенного субтипа.

Отрицательный результат – если искомый фрагмент вирусной РНК не обнаружен – отсутствие инфекции.

Что может влиять на результат?

Количество дней, прошедшее от начала болезни (после 4 дней возрастает вероятность необнаружения вируса).

Исследуемый образец – при инфекции нижних дыхательных путей вирус может не выявляться в образце, полученном из верхних дыхательных путей (мазки из носа, ротоглотки). В таких случаях необходимо повторить анализ с исследованием отделяемого нижних дыхательных путей.

У иммунокомпетентных лиц с неосложненным гриппом вирусовыделение в верхних дыхательных путях, как правило, значительно уменьшается после 4 дней болезни, соответственно, снижается вероятность выделения возбудителя. Поэтому образцы для исследования у таких пациентов должны быть получены в первые четыре дня заболевания, когда выделение вируса максимально. И напротив, у пациентов с ослабленным иммунитетом и при инфекции нижних дыхательных путей (вирусная пневмония) выделение вируса в бронхиальный секрет сохраняется дольше.
Ожидание результата исследования или отрицательный результат при очевидной клинической картине не должны быть препятствием для назначения противовирусной терапии.

Общий анализ крови с лейкоцитарной формулой

Influenza virus A/H1, РНК [реал-тайм ПЦР]

Mycoplasma pneumoniae, ДНК [ПЦР]

Adenovirus, ДНК [реал-тайм ПЦР]

Streptococcus pneumoniae, ДНК [реал-тайм ПЦР]

Кто назначает исследование?

Инфекционист, терапевт, врач общей практики, педиатр, эпидемиолог.

Литература

Инфекционные болезни: национальное руководство / Под ред. Н. Д. Ющука, Ю. Я. Венгерова. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. С. 701-710.

Клиническая лабораторная диагностика: национальное руководство: в 2 т. – T. II / Под ред. В. В. Долгова, В. В. Меньшикова. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. С. 649-653.

Guidance for Clinicians on the Use of RT-PCR and Other Molecular Assays for Diagnosis of Influenza Virus Infection by Centers of Disease Control and Prevention, U.S. Department of Health and Human Services, 2016.

Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, 23e by Richard A. McPherson MD MSc (Author), Matthew R. Pincus MD PhD (Author). St. Louis, Missouri : Elsevier, 2016. Page 1316.

Выявление вируса гриппа серотипов А и В (Influenza virus A/B), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (РНК) вируса в образце биоматериала.

Синонимы английские

Influenza serotypes A/B, RNA [real-time polymerase chain reaction, RT-PCR, quantitative RT-PCR, qPCR, qRT-PCR].

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок из зева (ротоглотки) и носа, мокроту.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Рекомендуется употребить большой объем жидкости (воды) за 8-12 часов до сбора мокроты.
Не принимать пищу, не пить и не полоскать горло в течение 2-3 часов до исследования.
За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) и носа не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не закапывать капли/спреи в нос, не жевать жевательную резинку, не курить. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.

Общая информация об исследовании

Influenza virus – это оболочечный вирус, характеризующийся наличием сегментированного негативного РНК-генома и нуклеокапсида в форме спирали. Он относится к семейству Orthomixoviridae. На основании структурных различий нуклеопротеида выделяют 3 серотипа Influenza: A, B и С. Серотип A встречается как людей, так и у животных, в то время как варианты B и C поражают преимущественно людей. Именно серотип А ответственен за подавляющее большинство случаев сезонных (эпидемических) и пандемических вспышек гриппа.

Идентификация вируса гриппа должна быть осуществлена в кратчайшие сроки, что связано с высокой заразностью этого заболевания. Кроме того, эффективность противовирусных препаратов максимальна при их назначении в первые 48 часов после инфицирования, что также диктует необходимость своевременной постановки окончательного диагноза. Среди многих "быстрых" диагностических тестов особое место занимает полимеразная цепная реакция в режиме реального времени (РТ-ПЦР). Полимеразная цепная реакция в реальном времени (РТ-ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в мокроте) фрагменты генетического материала (РНК) возбудителя инфекции. Благодаря высокой чувствительности и специфичности метода, а также возможности получить результат в наболее короткие сроки, РТ-ПЦР заменила другие, применяемые ранее, методы диагностики гриппа: выделение вируса в культуре клеток, а также серологические исследования и иммуноферментный анализ.

Многие прямые лабораторные тесты, разработанные для идентификации Influenza, основаны на выявлении белковых компонентов наружной оболочки вируса: гемагглютинина (H) и нейраминидазы (N). Эти белки являются основными факторами, определяющими степень болезнетворности вируса, а также используются для диагностики и классификации выявляемого вируса гриппа. Они обладают выраженной изменчивостью (известно 16 разновидностей N и 9 разновидностей H серотипа Influenza A) (чем вызваны ежегодные сезонные вспышки гриппа), а также создает определенные трудности при идентификации вируса гриппа с помощью этих методов. Структурное разнообразие антигенов H и N приводит к тому, что чувствительность большинства прямых лабораторных тестов (таких как прямая иммунофлюоресценция и ELISA) составляет около 65-75 %. Исследование РТ-ПЦР основано на выявлении консервативной последовательности ДНК, общей для разных штаммов вируса гриппа серотипов А и В, что обуславливает максимальную чувствительность этого теста (98-100 %).

В отличие от других тестов, чувствительность исследования РТ-ПЦР практически не изменяется при взятии материала на фоне начатой терапии противовирусными препаратами. Это связано с тем, что в реакции выявляется не сам вирусный агент, а фрагмент вирусной ДНК. По этой же причине положительный результат исследования не всегда указывает на наличие живого вируса (репликацию) и не всегда означает, что пациент остается заразным для окружающих.

В отличие от других лабораторных тестов (в первую очередь, экспресс-тестов для определения антигена вируса гриппа), результат РТ-ПЦР в меньшей степени зависит от распространенности гриппа среди населения. РТ-ПЦР характеризуется редкими ложноположительными и ложноотрицательными результатами как во время эпидемии, так и в период низкой заболеваемости гриппом.

Идентификация вируса гриппа с помощью РТ-ПЦР возможна в течение более длительного времени от начала заболевания по сравнению с большинством других тестов. Тем не менее взятие отделяемого носо/ротоглотки для исследования с помощью РТ-ПЦР должно быть произведено не позднее чем через 72-96 часов (оптимально в первые 48-72 часа). Это связано с тем, что интенсивная репликация Influenza при поражении верхних дыхательных путей происходит в течение первых 4 суток заболевания. У пациентов с вовлечением нижних отделов дыхательных путей вирусная нагрузка сохраняется высокой более длительный период. Исследование отделяемого носоглотки и мокроты дает лучшие результаты по сравнению с исследованием отделяемого ротоглотки.

При обследовании пациента с клиническими признаками Influenza-ассоциированной инфекции верхних дыхательных путей следует выполнить анализ отделяемого носо/ротоглотки. При обследовании пациента с признаками Influenza-ассоциированной инфекции нижних дыхательных путей анализ мазков из зева и носа необходимо дополнить исследованием мокроты. Исследование мокроты также должно быть осуществлено при отрицательном результате, который дал анализ отделяемого верхних дыхательных путей у пациента с клиническими признаками гриппа. Следует повторить РТ-ПЦР при отрицательном результате исследования мокроты у пациента с клиническими признаками Influenza-ассоциированной инфекции нижних дыхательных путей.

Для более точной диагностики Influenza рекомендуется сочетание РТ-ПЦР с дополнительными общеклиническими исследованиями. Кроме того, необходимо исключить бактериальную суперинфекцию.

Для чего используется исследование?

Когда назначается исследование?

острой респираторной вирусной инфекции (внезапное острое начало болезни, лихорадка, боль в горле, боль в мышцах, головная боль, светобоязнь, сухой кашель, боль в грудной клетке, одышка);
острой энцефалопатии в период эпидемии гриппа (судороги, атаксия, нарушение сознания).

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

Причины отрицательного результата:

отсутствие Influenza-ассоциированной инфекции.

Положительный результат исследования не означает, что пациент остается заразным для окружающих.
Анализ не позволяет выявлять Influenza серотипа С.

Кто назначает исследование?

Инфекционист, педиатр, врач общей практики, анестезиолог-реаниматолог.

Литература

Kamps B. S, Hoffmann C, Preiser W. Influenza Report 2006 / B. S. Kamps, С. Hoffmann, W. Preiser W. – Flying Publisher, 2006.
Wang R, Taubenberger JK. Methods for molecular surveillance of influenza. Expert Rev Anti Infect Ther. 2010 May;8(5):517-27.
Schuchat A, Bell BP, Redd SC. The science behind preparing and responding to pandemic influenza: the lessons and limits of science. Clin Infect Dis. 2011 Jan 1;52 Suppl 1:S8-12.
Pregliasco F, Mensi C, Camorali L, Anselmi G. Comparison of RT-PCR with other diagnostic assays for rapid detection of influenza viruses. J Med Virol. 1998 Oct;56(2):168-73.
WHO Global Influenza Surveillance Network. Manual for the laboratory diagnosis and virological surveillance of influenza. – World Health Organization, 2011.

ОРВИ-скрин – метод этиологической диагностики острых респираторных вирусных инфекций, заключающийся в идентификации вирусов, наиболее часто вызывающих инфекции верхних и нижних дыхательных путей, на основе выявления в исследуемом материале генетического материала возбудителя. Определение РНК (ДНК) респираторно-синцитиального вируса, метапневмовируса, вирусов парагриппа 1, 2, 3 и 4 типов, коронавирусов, риновирусов, аденовирусов групп B, C и E и бокавируса.

Респираторно-синцитиальный вирус (hRSv), РНК
Метапневмовирус (hMpv), РНК
Вирус парагриппа 1 (hPiv-1), РНК
Вирус парагриппа 2 (hPiv-2), РНК
Вирус парагриппа 3 (hPiv-3), РНК
Вирус парагриппа 4 (hPiv-4), РНК
Коронавирусы (hCov NL-63, 229E), РНК
Коронавирусы (hCov HKU-1,ОС 43), РНК
Риновирус (hRv), РНК
Аденовирусы гр. В, С, Е (hAdv), ДНК
Бокавирус (hBov), ДНК

Диагностика ОРВИ, скрининг на вирусные инфекции.

Синонимы английские

Respiratory Virus PCR, multiplex PCR test for respiratory viruses.

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Бронхоальвеолярный лаваж, мазок из зева (ротоглотки) и носа, мокроту.

как правильно подготовиться к исследованию?

Рекомендуется употребить большой объем жидкости (чистой негазированной воды) за 8-12 часов до сбора мокроты.
За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.
Не принимать пищу, не пить и не полоскать горло в течение 2-3 часов до исследования.

Общая информация об исследовании

Ведущее место в этиологии острых респираторных заболеваний занимают вирусы. Основная доля ОРВИ приходится на возбудителей, имеющих тропность к определенным отделам дыхательных путей, к которым относятся в том числе вирусы парагриппа, аденовирусы, риновирусы, коронавирусы, респираторно-синцитиальный вирус, а также не так давно открытые метапневмовирусы и бокавирусы.

Респираторно-синцитиальный вирус – это РНК-содержащий вирус семейства парамиксовирусов, распространен повсеместно, вспышки заболеваемости происходят преимущественно в зимние месяцы. РС-вирус является частой причиной бронхиолита и пневмонии у детей. Приобретенный иммунитет к вирусу неполный, и, хотя благодаря ему у большинства взрослых повторные инфекции протекают значительно мягче, у пожилых людей и пациентов с иммунодефицитом заболевание может проявляться тяжело. Вирус достаточно устойчив во внешней среде – около часа способен сохранять жизнеспособность на поверхностях, окружающих больного, что обуславливает высокую вероятность заражения контактирующих с пациентом лиц. Лечение симптоматическое, для детей из групп риска возможно ингаляционное введение рибавирина (рекомендовано в США), но его эффективность не доказана. С профилактической целью детям с высоким риском заражения РСВ-инфекцией (дети до 6 лет, рождённые на сроке беременности до 35 недель, дети до 2 лет с заболеваниями легких и сердца) проводится терапия моноклональным анти-РСВ-антителом паливизумабом.

Метапневмовирус – РНК-содержащий вирус семейства парамиксовирусов, открытый в 2001 году. Распространен повсеместно, вспышки заболеваемости встречаются зимой и весной в умеренном климате. Период циркуляции метапневмовируса совпадает с другими сезонными вирусами, в частности вирусом гриппа и респираторно-синцитиальным вирусом. Клинические проявления инфекции включают симптомы обычной простуды, но у определенных лиц (дети, пожилые и люди с иммунодефицитом) метапневмовирусы способны вызывать поражение нижних дыхательных путей в виде бронхита, бронхиолита и пневмонии, а также гриппоподобного синдрома. Высока частота смешанных инфекций, например с РСВ. Терапия симптоматическая, специфическое лечение не разработано, эффективность рибавирина, применяющегося при РСВ-инфекции, в отношении метапневмовируса сомнительна.

Вирусы парагриппа - РНК-содержащие вирусы семейства парамиксовирусов, включают в себя четыре типа. Вирусы первого типа вызывают сезонные эпидемии осенью, при этом вспышки происходят не каждый год. Клинически инфицирования вирусами 1-го и 2-го типа проявляются воспалением слизистой оболочки гортани (ларингит) и верхних отделов трахеи, часто осложняются развитием крупа (стеноз гортани). Вирус 3-го типа вызывает ежегодные вспышки весной, они активнее и дольше в годы, когда не циркулирует вирус -го типа. Он чаще вызывает поражение нижних дыхательных путей (бронхиолит и пневмония), особенно у детей и взрослых людей с ослабленным иммунитетом. Вирус 4-го типа выявляется редко, характеризуется поражением верхних дыхательных путей и мягким течением инфекции. Терапия симптоматическая, эффективность рибавирина не доказана. Ряд новых противовирусных препаратов на стадии создания.

Коронавирусы – семейство РНК-содержащих вирусов. Распространены повсеместно, пиковый сезон заболеваемости – зима. Клинически инфекция проявляется в основном поражением верхних дыхательных путей, гораздо реже – бронхиолитом и пневмонией. Такие заболевания, как ТОРС (тяжелый острый респираторный синдром, известный как "атипичная пневмония", вспышка которого началась в 2003 году в Китае) и MERS (англ. Middle East respiratory syndrome – ближневосточный респираторный синдром, вспышка в 2015 году в Южной Корее), вызывались ранее неизвестными разновидностями коронавирусов, протекали с развитием тяжелой пневмонии с респираторным дистресс-синдромом. Ученые связывают появление новых типов коронавирусов с их высокой способностью к мутациям. Средств специфической терапии, эффективность которых подтверждена методами доказательной медицины, не существует.

Риновирусы – РНК-содержащие вирусы семейства пикорнавирусов. Инфекция распространена повсеместно, с сезонными вспышками весной и осенью. Для риновирусной инфекции характерные типичные симптомы простуды, однако у маленьких детей они могут вызывать бронхиолит. Также обострение течения бронхиальной астмы у детей часто ассоциировано с риновирусной инфекцией. Специфическая противовирусная терапия не разработана.

Аденовирусы – семейство ДНК-содержащих вирусов, по различиям в антигенной структуре разделенных на шесть видов, обозначаемых английскими буквами от A до G. Сезонность не имеет решающего значения, но в холодное время частота заболеваний аденовирусными инфекциями возрастает. Аденовирусная инфекция характеризуется широким спектром клинических проявлений, включающих в себя поражения респираторного тракта, глаз, желудочно-кишечного тракта и мочевыводящих путей. Клиника заболевания зависит от вида вируса, так, вирусы видов В, С и Е преимущественно вызывают поражение дыхательных путей, которое проявляется симптомами ринофарингита и трахеита (кашель, лихорадка, першение в горле, выделения из носа). Менее типично развитие бронхиолита и пневмонии, которые встречаются чаще у детей. Также вспышки аденовирусных пневмоний часто происходят среди военнослужащих и других групп людей, живущих в условиях скученности. У людей с иммунодефицитом, а также реципиентов органов и тканей, находящихся на иммуносупрессивной терапии, аденовирусы вызывают генерализованные инфекции, с вовлечением гастроинтестинального тракта, легких и нервной системы. Лечение симптоматическое, есть отдельные исследования по эффективности цидофовира у пациентов после трансплантации костного мозга и солидных органов, однако его применение сопровождалось высокой токсичностью. Аденовирусная вакцина применяется в армии США и недоступна для общего использования.

Бокавирус – вирус семейства парвовирусов, открыт в 2005 году. Может вызывать инфекции верхних и нижних отделов респираторного тракта и гастроэнтериты, чаще всего у детей. Для бокавирусной инфекции типична коинфекция с другими возбудителями. Лечение симптоматическое.

Таким образом, практически все эти возбудители вызывают заболевания, сопровождающиеся симптомами воспаления слизистой оболочки дыхательных путей и выраженной интоксикацией. Обязательным патогенетическим этапом развития и течения ОРВИ является внедрение вируса в клетки эпителия дыхательных путей и его размножение в них, что неминуемо приводит к гибели эпителиоцитов, выходу вирусов в межклеточное пространство и заражению ими новых клеток.

Несмотря на то что в целом клиническая картина ОРВИ имеет сходные проявления, некоторые возбудители, такие как вирусы парагриппа, респираторно-синцитиальный вирус и аденовирусы, способны вызывать заболевания с тяжелым течением, нередко сопровождающиеся развитием осложнений, а у пациентов из группы риска (дети, пожилые люди, пациенты с иммунодефицитами) могут приводить даже к летальному исходу. С учетом этого, а также принимая во внимание эффективность существующих противовирусных препаратов против определенных возбудителей, большую важность приобретает этиологическая диагностика ОРВИ.

В связи со сходной клинической картиной респираторных вирусных инфекций достоверное выявление возбудителя возможно исключительно лабораторными методами. При этом традиционные методы диагностики (иммунологические, серологические, микробиологические исследования) имеют существенные недостатки в виде недостаточной чувствительности, неуниверсальности методик, плохой воспроизводимости результатов и большой длительности получения ответа. Данные проблемы во многом позволило решить внедрение в практику диагностики ОРВИ молекулярно-биологических исследований, в частности полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.

В отделяемом дыхательных путей (слизь, мокрота и т. д.), которое используется в качестве исследуемого материала, присутствуют погибшие эпителиальные клетки вместе с вирусными частицами. Принцип метода ПЦР основан на обнаружении в материале специфичных фрагментов генетического материала вируса (РНК или ДНК), его избирательном синтезе с образованием огромного числа копий, что позволяет их легко детектировать, в том числе визуально. К преимуществам метода ПЦР можно отнести:

прямое определение наличия возбудителя – выявление специфического участка РНК или ДНК возбудителя дает прямое указание на присутствие вируса;

высокую специфичность – в исследуемом материале идентифицируется уникальный, характерный только для данного вируса фрагмент РНК или ДНК;

Для чего используется исследование?

Для этиологической диагностики острых респираторных вирусных инфекций, особенно у детей, людей пожилого возраста и лиц с иммунодефицитом.

Когда назначается исследование?

При наличии у пациента симптомов инфекции верхних и/или нижних дыхательных путей, сопровождающейся проявлениями интоксикационного синдрома, в целях дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных острых респираторных заболеваний, определения показаний для назначения специфической противовирусной терапии.

Что означают результаты?

Респираторно-синцитиальный вирус (hRSv), РНК

Свиной грипп – это несколько подтипов вируса гриппа А, способных вызывать заболевание у свиней. Наиболее актуальным в плане эпидемиологической настороженности в настоящее время является подтип А/H1N1.

Вирус гриппа H1/N1 (свиной грипп) [полимеразная цепная реакция в режиме реального времени].

Синонимы английские

Swine influenza virus, SIV, pH1/N1, pndH1/N1, H1N1v, (swine flu, swine influenza, 2009 flu pandemic), RNA [real-time polymerase chain reaction, RT-PCR, quantitative RT-PCR, qPCR, qRT-PCR].

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок из зева (ротоглотки) и носа, мокроту.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Рекомендуется употребить большой объем жидкости (воды) за 8-12 часов до сбора мокроты.
Не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.

Общая информация об исследовании

Influenza virus A/H1 – один из подтипов вируса гриппа, характеризующийся особой вирулентностью и приводящий к тяжелым формам заболевания и пандемиям. Грипп, вызванный Influenza virus A/H1 (грипп свиней, свиной грипп), отличается от сезонного (эпидемического) гриппа по нескольким характеристикам. Во-первых, возбудитель гриппа свиней – это новый вариант вируса гриппа, возникший в организме свиней в результате мутаций его генетического материала и затем распространившийся в популяции человека. Большинство людей не имеют иммунитета к нему, поэтому заболевание характеризуется очень высокой заразностью. Кроме того, оно чаще протекает в более тяжелой форме с вовлечением нижних отделов респираторного тракта и с осложнениями (в виде пневмонии, дыхательной и почечной недостаточности, энцефалопатии и др.), что обуславливает необходимость раннего и интенсивного лечения. Поэтому диагностика гриппа свиней должна быть произведена в кратчайшие сроки. На основании опыта борьбы с пандемией гриппа Influenza A H1/N1 в 2009 году был сделан вывод, что "золотым стандартом" идентификации этого подтипа вируса является полимеразная цепная реакция в режиме реального времени – метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в отделяемом носоглотки) фрагменты генетического материала (РНК) возбудителя инфекции. Такое исследование позволяет получить максимально точный результат в кратчайшие сроки.

РТ-ПЦР относится к так называемым быстрым методам диагностики гриппа, обеспечивающим возможность постановки окончательного, лабораторно подтвержденного диагноза еще до начала лечения. Это преимущество отличает РТ-ПЦР от выделения вируса в культуре клеток (требует 7-10 дней) и большинства серологических методов (требуют нарастания титра антител, 10-14 дней).

Так как серотипы и подтипы вируса гриппа отличаются друг от друга по некоторым генетическим последовательностям (например, по гену белка гемагглютинина, H1), с помощью исследования РТ-ПЦР возможно идентифицировать конкретный подтип вируса (Influenza A/H1). Специфичность этого анализа составляет 98-100 %. Среди "быстрых" тестов только РТ-ПЦР способна дифференцировать подтип вируса гриппа свиней от других подтипов Influenza A. Положительный результат исследования указывает на наличие генетического материала Influenza A/H1 в образце, однако не всегда означает продолжающуюся репликацию вируса, так как в реакции определяется не сам вирус, а фрагменты его РНК. По этой же причине положительный результат исследования биоматериала, взятого на фоне начатого противовирусного лечения, не означает его неэффективность.

Чувствительность исследования составляет 86-100 %. Это самый высокий показатель среди других "быстрых" диагностических тестов. Например, чувствительность экспресс-тестов для определения антигена вируса гриппа в отношении Influenza H1/N1 составляет 10-70 %, а чувствительность прямого и непрямого метода иммунофлюоресценции – 47-93 %. Важно отметить, что несмотря на это возможность ложноотрицательного результата все же существует. В отличие от большинства других лабораторных методов, результат РТ-ПЦР в меньшей степени зависит от распространенности гриппа среди населения, однако необходимо помнить, что частота ложноотрицательных результатов выше в период эпидемии. Для более точной постановки диагноза рекомендуется повторное (многократное) исследование образцов разных биоматериалов (отделяемого носоглотки, ротоглотки, мокроты) с интервалом 48-72 часа. Причем отрицательный результат РТ-ПЦР полностью не исключает диагноза "грипп Influenza A/H1" и не препятствует назначению противовирусной терапии.

Для чего используется исследование?

Для диагностики Influenza A/H1-гриппа.

Когда назначается исследование?

При постановке диагноза "грипп, среднетяжелая/тяжелая форма" и при осложнениях гриппа (пневмония, дыхательная недостаточность, энцефалопатия и др.).
При постановке диагноза "грипп" у пациента с факторами риска гриппа Influenza A/H1: возраст до 2 лет и старше 65 лет, беременность, хроническая обструктивная болезнь легких, хронические заболевания сердца, почек, печени, сахарный диабет, иммуносупрессия.
При отсутствии улучшения или при ухудшении состояния в течение 72 часов после постановки диагноза "грипп, легкая форма" у пациента без факторов риска Influenza A/H1.
При обследовании пациента, контактировавшего с больным с установленной Influenza A/H1-инфекцией.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

Причины отрицательного результата:

отсутствие Influenza A/H1-инфекции.

Оптимально брать биоматериал через 48-72 часа после начала заболевания. Несмотря на то что идентификация вируса гриппа с помощью РТ-ПЦР возможна в течение более длительного времени от начала заболевания по сравнению с большинством других тестов, биоматериал должен быть получен как можно раньше. У детей, а также при вовлечении нижних отделов респираторного тракта этот период более длительный.
Отрицательный результат не препятствует назначению противовирусной терапии.
Положительный результат исследования биоматериала, взятого на фоне начатого противовирусного лечения, не означает его неэффективность.

Кто назначает исследование?

Инфекционист, эпидемиолог, педиатр, врач общей практики, анестезиолог-реаниматолог.

Литература

Li K, Xiao L, Liu C, Zhang J, Sirois P. Transforming viral sequences to A (H1N1) flu diagnosis: the current status and future prospects of rtPCR based assays. Curr Pharm Biotechnol. 2010 Jan;11(1):113-6.
Kamps B. S, Hoffmann C, Preiser W. Influenza Report 2006 / B. S. Kamps, С. Hoffmann, W. Preiser W. – Flying Publisher, 2006.
WHO Global Influenza Surveillance Network. Manual for the laboratory diagnosis and virological surveillance of influenza. – World Health Organization, 2011.
WHO World Health Organization. Clinical management of human infection with pandemic (H1N1) 2009: revised guidance. – World Health Organization, 2009.

Читайте также: