Анализ серотип вируса папилломы

На основании обследования 85 женщин репродуктивного возраста с диспластическими изменениями шейки матки I–II степени отражены показатели встречаемости серотипов вируса папилломы человека в Республике Мордовия. Изложена динамика распределения заболеваемост

Based on an examination of 85 women of reproductive age with dysplastic changes in the cervix of I–II degree, the incidence of human papilloma virus serotype types in the Republic of Mordovia is reflected. The dynamics of the distribution of the incidence of cervical cancer according to the stages of development is reported. Epidemiologically significant contingents of risk for development of oncological pathology of the cervix uteri have been established.

Детальный анализ о роли инфекционных агентов в развитии неопластических поражений шейки матки, ведущийся на протяжении многих десятилетий, не ставит под вопрос актуальность изучения этиопатогенетических механизмов в сфере онкогинекологии. Несмотря на сформированную стратегию цитологического скрининга с целью профилактики рака шейки матки, совершенствование и внедрение новых методов диагностики необходимы как для точной и своевременной верификации диагноза, так и для селективного терапевтического пути с минимальными репродуктивными потерями [3].

Как известно, этиологическим фундаментом цервикальных поражений является вирусная природа. Открытием XXI века стало масштабное изучение вируса папилломы человека (ВПЧ) и его роли в канцерогенезе рака шейки матки. Учитывая различия онкогенного потенциала, а также способность к персистенции, дифференцировка серотипов ВПЧ на группы имеет большую клиническую значимость. Широкий спектр вариаций ВПЧ подразделен на две группы: группу высокого онкогенного риска и группу низкого онкогенного риска [2]. Анализ статистических результатов, проведенный Европейским отделением Международного общества по изучению инфекции в акушерстве и гинекологии (International Society for Infectious Diseases in Obstetrics and Gynaecology, I-IDSOG-EUROPE), показал, что высокую степень онкологической агрессивности имеют 16-й, 18-й, 31-й, 33-й, 45-й, 52-й, 58-й, 59-й, 65-й серотипы [5].

Ежегодно в России регистрируется порядка 14 000 новых случаев РШМ, что составляет более 30% от всех злокачественных новообразований женских половых органов. Заболеваемость сохраняет тенденцию к росту. На учете по данной патологии в онкологических учреждениях страны состоит более 160 000 женщин.

В Республике Мордовия на конец 2016 г. зарегистрировано 103 новых случая РШМ. На учете состояла 1131 пациентка, диагноз которых морфологически подтвержден в 100% случаев. Из них 47,3% имели I стадию, 33% — II стадию, 14,6% и 5,1% — III и IV стадии соответственно [4]. Коррелятивная связь между РШМ и ВПЧ высокого онкогенного риска неоспорима. Ранняя стратификация населения на группы риска с доброкачественными и предраковыми заболеваниями шейки матки на основании серотипирования ВПЧ имеет определенную ценность в работе врача акушера-гинеколога.

Целью данного исследования было проанализировать частоту встречаемости серотипов ВПЧ у женщин репродуктивного возраста Республики Мордовия с цервикальными интраэпителиальными неоплазиями I–II стадии.

У всех пациенток, вошедших в исследование, был взят урогенитальный мазок на выявление ДНК ВПЧ методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Немаловажным критерием являлось отсутствие противовирусного лечения и деструктивных манипуляций с целью получения достоверных результатов.

Результаты вирусологического обследования пациенток с CIN I, CIN II свидетельствуют о том, что в 63,7% случаев определялись ВПЧ 16-го типа и в 47% — 18-го типа. Общая частота выявляемости ВПЧ колеблется от 59% до 70%. Филогенетические серотипы низкого онкогенного риска ВПЧ выявлялись в единичных случаях. Сочетание разных генотипов (не более пяти) обнаружено у 12 пациенток с CIN I, что составило 14,1%.

При этом частота выявления ВПЧ увеличивается прямо пропорционально степени неопластических изменений эпителия шейки матки. Так, при CIN II ДНК ВПЧ выявился почти у 80% женщин, тогда как при CIN I у 54%. Интересен факт, что 5 пациенток с CIN I по данным цитологического анализа соскоба шейки матки были вируснегативны. Однако в данном случае не отрицается проявление неспецифического экзоцервицита.

Наличие множественных папилломатозных разрастаний вульвы и слизистой оболочки влагалища отмечено у 11 обследованных.

Основной пик обнаружения ВПЧ генитального типа приходится на возраст 18–27 лет, и как моноинфекция встречаются крайне редко. Так, у 69% обследованных женщин имела место микст-инфекция, а именно вирус простого герпеса 2-го типа диагностирован в 34,4% случаев, микоплазмоз — в 29,8%, хламидиоз — в 19,7%, неспецифическая условно-патогенная флора — в 20,5%. Сравнительный анализ инфекционной нагрузки позволяет косвенно предположить, что некоторые вирусы семейства Herpesviridae играют роль возможных инициаторов канцерогенеза.

Частота выявления ВПЧ у больных интраэпителиальными цервикальными неоплазиями (CIN) I–II степени по данным вирусологического исследования в Республике Мордовия варьирует от 59% до 70%, причем основная когорта обследованных имела ВПЧ высокогоканцерогенного риска (16-й, 18-й типы).

Полученные данные свидетельствуют о том, что проведение цитологического скрининга цервикальных интраэпителиальных неоплазий в настоящее время должно обязательно сочетаться со скринингом инфекции ВПЧ высокого онкогенного риска. При этом генотипирование ВПЧ должно быть включено в массовый цитологический скрининг.

Таким образом, принимая во внимание высококанцерогенные типы ВПЧ при скрининге и профилактических обследованиях, возможно с большей вероятностью определить эпидемиологически значимые контингенты риска по развитию диспластических процессов в шейке матки, оценить прогноз течения заболевания и сориентировать клиницистов в выборе соответствующей терапии.

Литература

Бебнева Т. Н., Муйжнек Е. Л., Роговская С. И., Киселев В. И., Ашрафян Л. А. Патогенетическое лечение неопластических процессов шейки матки: новые подходы // Доктор.Ру. 2016.
Лалианци Э. И. Роль вирусов в возникновении онкологической патологии // Вопр. онкологии: материалы VIII Всероссийского съезда онкологов. СПб, 2013. Т. II.
Роговская С. И. Папилломавирусная инфекция у женщин и патология шейки матки: В помощь практикующему врачу. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2014.
Русакевич П. С., Ерохина О. А., Шелкович С. Е. Роль цитологического метода в исследовании шейки матки: учеб.-метод. пособие. Ч. 1. Минск: БелМАПО, 2013.
Состояние онкологической помощи населению России в 2016 году / Под ред. А. Д. Каприна, В. В. Старинского, Г. В. Петровой. М., 2017.

О. П. Виноградова* , 1 , доктор медицинских наук, профессор
Н. А. Андреева**, кандидат медицинских наук
О. В. Епифанова ***

* ПИУВ — филиал ФГБОУ ДПО РМАНПО МЗ РФ, Пенза
** ФГБОУ ВО НИ МГУ им. Н. П. Огарёва, Саранск
*** ГБУЗ РМ МРКПЦ, Саранск

Сравнительный анализ и частота встречаемости серотипов папилломавирусной инфекции в Республике Мордовия у женщин с цервикальными интраэпителиальными неоплазиями/ О. П. Виноградова, Н. А. Андреева, О. В. Епифанова
Для цитирования: Лечащий врач № 9/2018; Номера страниц в выпуске: 86-87
Теги: женщины, шейка матки, дистпластические изменения, группа риска

Бородавка, или папиллома, — это не только косметический недостаток. Эти новообразования могут быть смертельно опасны. Вызывает их особый вирус — вирус папилломы человека (ВПЧ). И передается он, увы, очень легко. Чтобы узнать наверняка, заражены ли вы, и принять меры, необходимо сдать анализы на ВПЧ.

Что такое ВПЧ и когда назначают анализы на его выявление

ВПЧ считается одним из самых распространенных вирусов, которые передаются половым путем. Заразиться им легко — врачи отмечают, что за последние десятилетия количество зараженных возросло практически в десять раз.

Известно более сотни разновидностей вируса. Из них примерно 40 вызывают новообразования (кондиломы) на слизистой оболочке половых органов. Некоторые виды не несут почти никакого вреда организму, однако определенные подтипы являются онкогенными и могут спровоцировать развитие рака.

Проявления деятельности этих вирусов различны. ВПЧ типа 1–4 вызывают бородавки на подошвенной части ступней, эти новообразования напоминают мозоли. ВПЧ типа 10, 28 и 49 виновны в появлении плоских бородавок. ВПЧ 27 вызывает рост обычных бородавок. ВПЧ 6, 11, 13, 16, 18, 31, 33, 35 провоцируют появление на половых органах остроконечных кондилом и папиллом. Самые опасные типы ВПЧ — 30, 39, 40, 42, 43, 52, 55, 57–59, 61, 62, 67–70. Они вызывают новообразования, которые классифицируются как предраковые.

Нужно ли вам сдавать анализ на ВПЧ? Скорее всего, да. Особенно если вы входите в группу риска. Вирус папилломы человека передается разными путями:

при незащищенном половом акте. Он может передаться и при поцелуе, если во рту или на губах есть ранки;
при родах — от матери к ребенку;
бытовым путем. Заразиться вирусом папилломы возможно при несоблюдении правил гигиены в сауне, бассейне, в туалете, при использовании чужой зубной щетки, бритвенного станка, посуды, полотенца, особенно если есть повреждения слизистых оболочек и кожных покровов. Вне тела этот вирус живет недолго, однако достаточно, чтобы заразить человека.

Генетической предрасположенности к этому вирусу нет. Риск заразиться возрастает при несоблюдении правил гигиены, игнорировании средств защиты при сексе, а также при пониженном иммунитете. Вредные привычки также ослабляют организм и делают его более уязвимым.

Обычно направление на анализ на ВПЧ выдает гинеколог, уролог или дерматолог. Сегодня существует много точных способов выяснить не только сам факт наличия вируса папилломы человека в крови, но и определить, к какому типу он принадлежит — безвредному или опасному.

Кольпоскопия
Это визуальное исследование шейки матки при помощи специального прибора — кольпоскопа. Он позволяет детально рассмотреть слизистые оболочки, увеличив картинку в несколько раз и заметить папилломы, если они есть.
Цитологический метод
Исследование мазка при помощи микроскопа. Результаты 1–2 классов означают, что все в порядке, при результатах 3 класса назначают дополнительное обследование (как правило, гистологическое), а результаты 4–5 классов указывают на наличие злокачественных клеток. Критерием наличия папилломавирусной инфекции при цитологическом исследовании является наличие в мазках особых видоизмененных клеток — койлоцитов и дискератоцитов.
Гистологическое исследование биоптатов
Для такого исследования врач берет очень маленький образец ткани и исследует его при помощи микроскопа на наличие видоизмененных клеток, пораженных вирусом.
Обнаружение антител к вирусу папилломы человека
Метод ранней диагностики, так как антитела появляются намного раньше, чем собственно проявления деятельности вируса. Однако этот тест не показывает концентрацию и не позволяет со 100-процентной точностью определить тип вируса. Материалом для исследования служит кровь.
Digene-тест (амплификационный)
Новый и очень точный метод анализа на ВПЧ, который показывает концентрацию вируса, его тип и онкогенность. В качестве материала используется соскоб со слизистой влагалища или уретры. Digene-тест часто назначают вместе с цитологическим исследованием для получения определенных результатов.
ПЦР (неамплификационный)
Это широко распространенный анализ на ВПЧ онкогенных типов. Материал для анализа — мазок со слизистой, иногда — кровь, моча, околоплодные воды. Метод основывается на обнаружении ДНК вируса и позволяет с большой точностью определить, заражен пациент или нет. Проводить это исследование должен опытный и ответственный специалист, так как при несоблюдении технологии результат может быть ложноотрицательным или ложноположительным.

Для пациента практически все анализы на ВПЧ просты, безболезненны и нетравматичны. Если для анализа берется материал из влагалища или уретры, необходима минимальная подготовка. За 3 дня до сдачи биоматериала нужно отказаться от использования любых антибактериальных и противовирусных средств, а также от антибактериальных средств для интимной гигиены. В день сдачи анализа не рекомендуется проводить гигиенических процедур, желательно также не мочиться за 2 часа до забора материала (особенно это касается мужчин). У женщин анализ не берут во время менструации и в течение 2–3 дней после ее окончания. Использование противозачаточных влагалищных мазей, гелей и губок также может исказить результат, поэтому все эти средства нужно отменить за 3 дня до сдачи анализа.

Анализ крови рекомендуется сдавать натощак — это значит, в течение 10–12 часов перед визитом к доктору лучше ничего не есть и пить только воду. Хорошо бы также за 2–3 дня исключить алкоголь и вредную пищу. И мужчины, и женщины должны воздерживаться от половых контактов в течение двух дней перед забором материала.

Расшифровать результаты анализов на ВПЧ может только врач. Некоторое представление о форме результатов и правилах интерпретации стоит знать пациенту. Однако помните, что все найденное в Интернете, предназначено только для ознакомления, но никак не для самостоятельной постановки диагноза.

Вирус папилломы человека особенно опасен для женщин, он может вызывать рак шейки матки и другие онкологические заболевания. И с возрастом этот риск становится только выше. До 30 лет более 70% заболеваний, вызванных вирусом папилломы, спонтанно подлежат обратному развитию. Однако в более старшем возрасте поражения регрессируют гораздо реже. Впрочем, вирус папилломы человека опасен и для мужчин. Разрастаясь в мочеиспускательном канале, папилломы могут полностью перекрыть его просвет и вызвать серьезные проблемы, вплоть до импотенции, бесплодия и онкологических заболеваний.

Анализы на выявление ВПЧ и его подтипа просты в исполнении, не требуют от пациента сложной подготовки и длительного ожидания результатов. Между тем важность ранней диагностики ВПЧ-поражений сложно переоценить. Правильно выбранная терапия позволит значительно снизить риск развития рака.

Вирусы папилломы человека (ВПЧ) – широко распространенная и гетерогенная группа вирусов. В настоящее время идентифицировано 120 генотипов ВПЧ, 40 из которых ассоциированы с аногенитальным трактом человека.

Вирус папилломы относится к семейству паповирусов (Papoviridae). Филогенетически ВПЧ разделяют на роды (a, b, g), роды на виды, которые обозначаются цифрами (1, 2 и т. д.), а каждый вид, в свою очередь, содержит несколько типов вируса. Генитальные серотипы ВПЧ отнесены к роду a, видам a5, a6, a7, a8, a9, a11 (45 серотипов). По степени канцерогенного потенциала ВПЧ подразделяются на генотипы высокого канцерогенного риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68 и др.) и генотипы низкого риска (6, 11, 42, 43, 44 и др.).

Вирусы передаются при тесном контакте с пораженными участками кожи и слизистых оболочек. Основной путь передачи ВПЧ аногенитальной группы – половой. Это было неоднократно показано в эпидемиологических исследованиях по выявлению ВПЧ среди девственниц.

Методы выявления вирусов папилломы человека

Наиболее широко используемые методы выявления инфекционных агентов, в т. ч. вирусных, можно разделить на две группы – косвенные и прямые.

К косвенным относятся методы, позволяющие оценить эффект, который оказывает вирус на организм (клетки, ткани), – серологические, цитологические и гистологические методы. Серологические методы, направленные на выявление антител различных классов к антигенами вируса, в силу особенностей течения ВПЧ-инфекции и разнообразия вирусов, для рутинной диагностики не используются. Цитологические и гистологические методы, направленные на выявление клеток, измененных воздействием активного вируса (койлоциты) или трансформированных вирусом (раковые клетки), используются для установления степени изменения клеток, но не способны достоверно показать наличие или отсутствие вируса у обследуемого.

Прямые методы направлены на выявление самого вируса или его компонентов – белков, ДНК, РНК. Поскольку ВПЧ не может быть изолирован в культуре чувствительных клеток, основной подход, который широко применяют в настоящее время для обнаружения и изучения вируса, – выявление его нуклеиновых кислот (ДНК, РНК) методами гибридизации, амплификации, секвенирования.

Выявление ВПЧ подгруппы низкого канцерогенного риска

Низкая степень опасности вируса для его носителей, невысокий процент клинических проявлений инфекции (не более 10% остроконечных кондилом в группе инфицированных вирусом), высокая доля спонтанной элиминации вируса в течение года, отсутствие специфической противовирусной терапии ставят под сомнение необходимость использования скринингового обследования для выявления ВПЧ у этой подгруппы лиц. Основным диагностическим признаком папилломавирусной инфекции низкого риска является выявление остроконечных кондилом при осмотре. Прямые методы лабораторной диагностики (обнаружение ДНК) могут служить вспомогательным инструментом для дифференциальной диагностики, например, от сифилитических перианальных кондилом или от злокачественной опухоли. В этом случае также значение имеет проведение биопсии и гистологического исследования. В случае использования молекулярно-биологических методов достаточно выявлять 6-й и 11-й генотипы ВПЧ, т. к. они ответственны более чем за 95% случаев остроконечных кондилом. Дополнительное выявление других типов (42–44) незначительно повысит чувствительность выявления, но удорожит исследования. Следует заметить, что для этой задачи необходимо брать соскоб эпителия именно с места поражения, иначе велик шанс “пропустить” вирус.

Выявление ВПЧ подгруппы высокого канцерогенного риска

Основная опасность, которую несет инфицирование вирусами данной подруппы, является риск развития рака шейки матки (РШМ). Этиологическая роль ВПЧ в развитии РШМ на сегодняшний день не вызывает сомнений. Эпидемиологические и вирусологические исследования показали, что ВПЧ является причиной РШМ в 100% случаев, рака заднего прохода – в 90%, рака вульвы и влагалища – в 40%, и только в 12% случаев – орофарингеального рака.

РШМ является значимой проблемой для здравоохранения России. В нашей стране ежегодно регистрируют около 12 тыс. новых случаев, а примерно 6 тыс. заболевших умирает. Заболеваемость составляет в среднем по стране 12 случаев на 100 тыс. женщин, что соответствует 5-му ранговому месту в структуре онкологических заболеваний у женщин. При этом прирост заболеваемости в возрастной группе до 29 лет за 10 лет составил более 150%.

Поскольку основной причиной РШМ является ВПЧ, первичная профилактика должна быть направлена на снижение распространения инфекции в популяции. Эффективный метод первичной профилактики – вакцинация. Вторичная профилактика предполагает раннее выявление и лечение лиц, имеющих предраковые изменения. Несмотря на успехи в разработке и внедрении вакцин против наиболее часто встречающихся канцерогенных типов ВПЧ, на сегодняшний день наиболее важным методом профилактики РШМ является скрининговое обследование женского населения на наличие маркера предраковой стадии папилломавирусной инфекции – цервикальной интраэпителиальной неоплазии (ЦИН, SIL). Хорошо известно, что в большинстве экономически развитых стран Европы и Северной Америки внедрение программ скрининга позволило значительно снизить заболеваемость РШМ. Однако в развивающихся странах, на долю которых приходится наибольшее количество случаев заболевания в мире, традиционные программы скрининга оказались неэффективными.

Следует отметить, что основное требование, которому должны отвечать программы скрининга, – высокая эффективность и низкая стоимость. Эффективность выявления женщин группы риска развития РШМ зависит от нескольких параметров: охват женского населения, чувствительность используемого метода и периодичность проведения исследований. При использовании цитологического метода скринингово исследования женщин с возраста 25–30 лет, с 3–5-летним интервалом и не менее чем 75%-ном охвате женского населения удается достичь снижения заболеваемости РШМ на 70–80%, при условии достаточно высокой чувствительности цитологического метода. Однако основным недостатком этого метода как раз является его низкая чувствительность, варьирующая в пределах 40–70%, составляя в среднем 50%. Причины такой низкой чувствительности метода обсуждаются. По одним данным, в 70– 90% случаев причиной ложноотрицательных цитологических ответов является некачественный забор материала для исследования и в 10–30% – ошибочная интерпретация цитологических данных. По другим данным, наоборот, отмечается низкая сопоставимость между лабораториями при тестировании одних и тех же препаратов – от 11 до 80%. Кроме того, высока доля сомнительных результатов (до 15% атипичных плоских клеток неясного значения – ASCUS), требующих повторных и подтверждающих исследований. Таким образом, предсказательная ценность отрицательного результата оказывается низкой, что требует более частого проведения исследований и приводит к удорожанию программы скрининга. В связи с этим в последние годы в скрининге все больше стали использоваться тесты, позволяющие выявлять ДНК ВПЧ (ВПЧ-тесты).

Многочисленные международные исследования продемонстрировали более высокую чувствительность ВПЧ-тестов в выявлении ЦИН в сравнении с цитологическими. Доказано, что получение отрицательного результата ВПЧ- теста позволяет значительно увеличить интервал между повторными тестированиями. На основании данных крупных международных исследований, ведущими специалистами международных организаций (ASCCP, EUROGIN, ESIDOG и др.) предложены алгоритмы диагностики с использованием ВПЧ- тестирования, сформулированы рекомендации по применению ВПЧ-теста в программах скрининга:

на первом этапе скрининга у женщин старше 30 лет в дополнение к цитологическому исследованию;
для разрешения сомнительных результатов цитологического исследования (ASCUS)на первом этапе скрининга для стран, где плохо организованы программы цервикального цитологического скрининга;
для мониторинга терапии цервикальных поражений высокой степени (ЦИН 2/3, рак in situ, инвазивный рак).

Рис. 1. Алгоритм использования ВПЧ-теста на первом этапе скрининга

Во многих странах совместное применение ВПЧ-теста и цитологического ПАП-теста (рис. 1) позволило увеличить чувствительность выявления ЦИН до 99–100%, удлинить интервалы исследований до 5–7 лет, что, несмотря на использование дополнительного метода исследования, в конечном итоге привело к снижению затрат на программу скрининга. Разработан принципиально новый способ забора клеток цервикального эпителия в транспортно-фиксирующую среду для одновременного проведения цитологического исследования (жидкостная цитология) и ВПЧ-теста. Такой подход позволил, с одной стороны, повысить эффективность цитологического метода, а с другой – разрешать сомнительные результаты цитологического анализа без повторного забора клинического образца (рис. 2).

Рис. 2. Алгоритм использования ВПЧ-теста при сомнительных результатах цитологического исследования (ASCUS)

Диагностическая чувствительность рекомендованного для скрининга ВПЧ- теста, в среднем составляющая 88–100%, значительно превышает чувствительность цитологического исследования, а диагностическая специфичность скринингового ВПЧ-теста при использовании его в возрастной группе женщин старше 30 лет лишь немного уступает специфичности цитологического метода (78–99%). Прогностическая значимость отрицательного результата выявления ДНК ВПЧ приближается к 100%. Это является основанием для использования ВПЧ-теста на первом этапе скрининга. Алгоритмы применения ВПЧ-теста, как самостоятельного исследования на первом этапе скрининга были предложены еще в 2003 г. (рис. 3), но широкое применение в программах скрининга они нашли позднее.

Рис. 3. Алгоритм использования ВПЧ-теста как самостоятельного исследования на первом этапе скрининга

Главное условие эффективного цервикального скрининга – оптимальный баланс между диагностической чувствительностью и специфичностью в выявлении предраковых поражений шейки матки (ЦИН 2/3) и рака. На основании многолетнего мирового опыта применения молекулярно-биологических методов для выявления ДНК ВПЧ в скрининговых программах к настоящему времени сформулированы четкие требования к ВПЧ-тестам, которые могут быть использованы в скрининге.

Требования к аналитическим характеристикам теста

Во-первых, ВПЧ-тест должен выявлять только типы вируса, которые относятся к группе высокого канцерогенного риска, т. к. выявление всех типов вируса, включая группу низкого онкогенного риска, которые не вызывают трансформации эпителиальных клеток, будет приводить к значительному снижению специфичности теста. В то же время, ВПЧ-тест должен выявлять широкий спектр типов вируса высокого канцерогенного риска – не менее 10–13 (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68 типы), т. к. это обеспечивает не менее чем 90% чувствительность теста. Выявление ВПЧ только 16-го и 18-го типов будет приводить к значительному снижению чувствительности скрининга, поскольку эти два типа ответственны не более чем за 70% случаев предраковых поражений (ЦИН 2/3).

Во-вторых, ВПЧ-тест должен обладать высокой диагностической чувствительностью и специфичностью выявления ЦИН 2/3. Это обеспечивается способностью теста выявлять только клинически значимую концентрацию вируса или дифференцировать клинически значимую концентрацию и клинически незначимую. Исследования голландских ученых показали, что критическое значение вирусной нагрузки, при которой может развиться дисплазия тяжелой степени, находится в интервале 104–105 копий ДНК ВПЧ в 1 мл клинического образца (в соскобе клеток цервикального канала, взятом в 1 мл транспортной среды). Стандартные общепринятые ВПЧ-тесты, используемые для скрининга, откалиброваны на выявление клинически значимой концентрации ВПЧ.

Клиническая валидация теста

Новый ВПЧ-тест должен быть валидирован в клинических испытаниях относительно стандартного ВПЧ-теста, уже прошедшего клиническую валидацию. Таким тестом на сегодняшний день считается Hybrid Capture 2 High Risk HPV DNA Test, разработанный компанией Digene (США). Этот тест был одобрен FDA в 2003 г., а затем, после проведения широких испытаний в разных странах мира, рекомендован для скрининга. В основе теста лежит методика гибридизации ДНК ВПЧ со специфическими РНК-пробами в растворе с последующим захватом ДНК-РНК гибридов с помощью моноклональных антител.

Новый ВПЧ-тест должен быть валидирован в клинических испытаниях на гистологически верифицированных образцах. Диагностическая чувствительность ВПЧ-теста определяется как способность выявлять образцы с дисплазией тяжелой степени (ЦИН 2/3), а диагностическая специфичность – как способность не выявлять образцы с гистологической нормой.

ВПЧ-тесты в России

Тесты для выявления и генотипирования ВПЧ, основанные на методах гибридизации и/или методах амплификации нуклеиновых кислот, к которым относится полимеразная цепная реакция (ПЦР), начали применять еще более 10 лет назад. В настоящее время в литературе описано достаточно большое число методов выявления и генотипирования ВПЧ. Однако очевидно, что в программах скрининга могут быть использованы только стандартизованные тесты, удовлетворяющие заданным требованиям по чувствительности и специфичности и прошедшие клиническую апробацию. Общепринятый международный стандарт Hybrid Capture 2 High Risk HPV test в настоящее время разрешен для применения в России. Но высокая стоимость теста ограничивает возможность использовать его в российских программах скрининга. Тем не менее, поскольку этот тест удовлетворяет практически всем требованиям ВПЧ-теста, он в обязательном порядке должен использоваться для валидации вновь разработанных отечественных ВПЧ-тестов.

Российскими производителями в настоящее время разработано и выпуска- ется большое количество тестов для выявления ВПЧ как низкого, так и высокого канцерогенного риска. Но, несмотря на то, что многие выпускаемые тесты зарегистрированы и разрешены к применению, большинство из них не удовлетворяют требованиям, предъявляемым к ВПЧ-тестам для скрининга. Спектр выявляемых генотипов вируса, аналитическая чувствительность и специфичность отечественных ВПЧ-тестов сильно варьируют в широком диапазоне. И, несмотря на повсеместное применение российских ПЦР-тестов, используемых для диагностики ВПЧ-инфекции, нельзя признать, что все они стандартизованы и прошли должную клиническую апробацию.

Учитывая, что международный стандартный ВПЧ-тест недоступен многим российским производителям тест-систем для валидации собственных разработок, назрела необходимость создания стандартной панели контрольных образцов как для оценки качества работы самих тестов, так и лабораторий, использующих эти тесты. Согласно международному опыту создания панелей контрольных образцов, необходимо, чтобы разработанные панели удовлетворяли условиям работы всех тест-систем, представленных на рынке, и были валидированы с помощью стандартного международного теста (www.QCMD.org). Поскольку ВПЧ невозможно вырастить в культуре клеток, контрольная панель может состоять из рекомбинантных ДНК, содержащих полные геномы различных типов ВПЧ. Необходимость использования полноразмерных ДНК ВПЧ продиктована тем, что в разных тест-системах используются разные гены вируса в качестве мишени для амплификации. Таким образом, контрольные панели количественно охарактеризованных образцов могут служить для контроля выпускаемых серий тест-систем, а также для проведения контроля качества лабораторных исследований.

Особенности преаналитического этапа

Важным условием эффективного применения ВПЧ-тестов является стандартизация всех этапов исследования, прежде всего – процедуры получения клинического материала и сбора данных. Необходимо четко представлять, кому, как и зачем проводить исследование. Согласно международным рекомендациям по ВПЧ-тестированию, исследование по выявлению ВПЧ высокого канцерогенного риска проводят только у женщин. Материалом для исследования служит соскоб цервикального канала и/или зоны трансформации, выполненный цервикальной цитологической щеточкой. При взятии материала щетку обламывают и сохраняют рабочую часть щетки в транспортной среде до доставки в лабораторию.

ВПЧ-тесты, разработанные на основе ПЦР, позволяют контролировать адекватность клинического образца по наличию в нем ДНК человека.ВПЧ-тестирование мужчин с целью скрининга или выявления носи- тельства не рекомендуется. Инфицированность мужчин ВПЧ сходна с инфицированностью женщин, но при этом рак полового члена – крайне редкое заболевание. Поэтому мужчины являются бессимптомными носителями инфекции. С учетом того, что опасность развития ассоциированной с ВПЧ онкологической патологии у мужчин невелика, а существующие формы рака не имеют 100% ассоциации с ВПЧ, проводить скрининговое выявление папилломавирусной инфекции у мужчин не следует. Исследование возможно лишь по эпидемиологическим показаниям и при проведении дифференциальной диагностики клинической формы папилломавирусной инфекции с другими патологиями.

В заключение следует отметить, что в нашей стране на сегодняшний день созданы все условия для стандартизации и масштабного использования ВПЧ- тестов в лабораторной службе, т. к. доступны тест-системы, удовлетворяющие международным требованиям, создана сеть лабораторий для работы с этими тест-системами, налажена система обучения специалистов и разработаны панели для контроля качества работы лабораторий.

Читайте также: