Аденовирусный гидроперикардит у кур

Таймасуков А.А. ОАО "Компания Кубаньптицепром"

Аденовирусный гидроперикардит бройлеров - остропротекающее и высоко контагиозное вирусное заболевание преимущественно бройлеров 3-5-тинедельного возраста, характеризующееся накоплением в перикарде транссудата, гепатитом, асцитом и нефрозо-нефритом. Степень тяжести болезни в естественных условиях зависит от влияния некоторых иммунодепрессивных инфекций, таких как инфекционная бурсальная болезнь (болезнь Гамборо), болезнь Марека и инфекционная анемия цыплят.

В настоящее время, во многих хозяйствах аденовирусный гидроперикардит начинает проявляться у 24-28 - дневных, а иногда у более молодых бройлеров, в свою очередь, провоцируя болезнь Гамборо или ухудшая формирование поствакцинального иммунитета против данного заболевания, а также Ньюкаслской болезни, инфекционного бронхита кур и других болезней. Источником инфекции является больная и переболевшая птица. Вирус передается аэрогенно, алиментарно и трансовариально. Возбудитель распространяется с воздухом, водой, кормом, предметами ухода, контактно, "с помощью" обслуживающего персонала. Переносчиками возбудителя инфекции могут быть дикие и синантропные птицы, насекомые и иксодовые клещи, а также простейшие микроорганизмы, в том числе кокцидии. Птицы родительского стада могут быть инфицированы аденовирусом перед началом или в процессе яйцекладки, что обуславливает интенсивную трансовариальную передачу возбудителя.

Аденовирусы птиц, по данным профессора В.А.Бакулина, условно дифференцированы на 3 группы. В первую группу входят 12 серотипов аденовирусов кур и других птиц, которые имеют общий группоспецифический преципитирующий антиген, например возбудители "CELO - инфекции", бронхита перепелов, панкреатита цесарок гепатита с включениями - гидроперикардита кур. Ко второй группе относятся аденовирусы, обладающие гемаглютинирующим антигеном и имеющие общий с первой группой преципитирующий антиген, в том числе аденовирус "Синдрома снижения яйценоскости-76 (ССЯ-76)". В третью группу включены аденовирусы с группоспецифическим преципитирующим антигеном, отличающимся от таковых первых двух групп - аденовирусы геморрагического энтерита индеек и болезни "мраморной селезенки" фазанов. В промышленных птицеводческих хозяйствах аденовирусы распространены повсеместно. Любые из имеющихся 13 серотипов аденовирусов в различных сочетаниях могут циркулировать в одном хозяйстве, а также в организме одной внешне здоровой птицы [3].

Инкубационный период при заражении аденовирусом составляет 24-72 часа. Наиболее часто аденовирусный гидроперикардит бройлеров связан с застойными явлениями в сердце и с гидремией, приводящих к анемии. При экспериментальном заражении цыплята угнетены, взъерошены, "не держат крылья", возможна анемия, диарея с выделением фекалий с примесью уратов, отсутствие реакции на внешние раздражители. Максимальная смертность птиц на 2-4 день после заражения. Общая смертность цыплят-бройлеров может достигать до 75-85%. При хроническом или субклиническом течении клинические признаки незначительные или отсутствуют. Смертность составляет 1-7%.

При вскрытии трупов павших бройлеров обнаруживают желтоватое окрашивание подкожной клетчатки и внутреннего жира, очаговые кровоизлияния в мышцах, скопления в сердечной сорочке от 5 до 20 мл. серозного транссудата соломенно-желтого цвета водянистой или желеподобной консистенции. У экспериментально зараженных цыплят иногда наблюдается появление небольшого количества асцитной жидкости.

Сердце деформированное и дряблое, с точечными кровоизлияниями в миокарде, особенно на верхушке сердца и в ушках предсердий. Легкие уплотнены и отечны, в некоторых случаях с наличием серозной жидкости. Печень увеличена, с очагами некроза. Почки увеличены, с точечными кровоизлияниями, мозаичные, иногда с канальцами и мочеточниками заполненными уратами. Селезенка может быть увеличена, мраморная, отмечается атрофия фабрициевой бурсы.

Диагноз на аденовирусный гидроперикардит бройлеров ставят на основании эпизоотологических, клинических и патологоанатоми-ческих данных, результатов выделения вируса (из печени) на развивающихся эмбрионах кур, в культуре клеток печени, почек, фиброблас-тов эмбрионов кур, а также результатов заражения восприимчивых цыплят 10 дневного возраста [1]. Завершающим этапом в постановке диагноза является идентификация выделенного вируса в реакции нейтрализации, диффузиозной преципитации в агаровом геле (РДП), ПЦР. Ретроспективная диагностика проводится на основании выявления антител к возбудителю в РДП, РН и ИФА.

В настоящее время РНГА считается более предпочтительной, чем тест диффузной преципитации в агаровом геле, так как дает меньше неспецифических реакций.

Аденовирусный гидроперикардит бройлеров необходимо прежде всего дифференцировать от гидроперикардитов другой этиологии. Так, при пастереллезе, стафиллококкозе и стрептококкозе иногда возникает серозный перикардит. Решающим фактором при постановке диагноза служит выделение чистой культуры бактерий, вызывающих эти заболевания, путем посева материала из внутренних органов больных птиц на искусственные питательные среды. Аденовирусный гидроперикардит бройлеров от гидроперикардита, возникшего при острой форме болезни Марека, дифференцируют по наличию при болезни Марека в начальной стадии единичных, а позднее множественных опухолей в мышцах и во внутренних органах. Необходимо исключить инфекционную бурсальную болезнь (болезнь Гамборо), так как она часто сопутствует аденовирусной инфекции. При инфекционном бурсите поражения фабрициевой сумки постоянны и сопровождаются некрозом и псевдоэозинофильной инфильтрацией лимфоидных фолликулов. Для аденовирусной инфекции изменения фабрициевой сумки не характерны. Точечные кровоизлияния размером со спичечную головку по тонкому отделу кишечника, а особенно в двенадцатиперстной кишке необходимо дифференцировать от Ньюкаслской болезни [4].

Парвовирусную анемию цыплят и геморрагический синдром, обусловленные микотоксинами и применением сульфаниламидов также необходимо дифференцировать от аденовирусного гидроперикардита бройлеров. При парвовирусной анемии цыплят внутриядерные тельца-включения в гепатоцитах отсутствуют. При исключении геморрагического синдрома и апластической анемии принимают во внимание анамнестические сведения и результаты анализа кормов и гистологических исследований печени [2].

Для предотвращения возникновения эпизоотии по аденовирусному гидроперикардиту бройлеров необходимо использовать все доступные методы профилактики, в том числе и организационно-хозяйственного и социально-экономического характера. Они включают в себя раздельное кормление и содержание разновозрастных групп птиц, привлечение к работе не контактирующего с птицей в личных подсобных хозяйствах обслуживающего персонала и многие другие вопросы, направленные на охрану птицеводческих хозяйств от заноса инфекции. Защита птицеводческих предприятий должна осуществляться посредством использования програмных мер безопасности, с обязательным соблюдением принципа "все пусто - все занято".

Распространение инфекции может произойти при диагностических исследованиях птицы, поэтому участники проведения вакцинации и диагностических исследований, особенно при работе с вирусвакцинами, должны строго соблюдать все меры санитарной профилактики.

Аденовирус весьма устойчив к условиям внешней среды и может длительное время сохраняться в помете и подстилке. В качестве более эффективных дезинфектантов рекомендуются йодсодержащие препараты и гипохлорид натрия.

В регионах, неблагополучных по аденовирусному гидроперикардиту, применение только санитарных мер было малоэффективным и в связи с этим возникла необходимость разработки специфических мер профилактики.

В настоящее время в неблагополучных хозяйствах для специфической профилактики аденовирусного гидроперикардита цыплят используются инактивированные гидроокисьалюминиевые или эмульсионные вакцины. Цыплят-бройлеров вакцинируют однократно в 10-17 дневном возрасте, внутримышечно или подкожно. Ремонтный молодняк и кур яйценоских пород вакцинируют дважды: в 10-17 дней и затем при переводе, в удвоенной дозе, не позднее чем за 30 дней до начала яйцекладки. В некоторых хозяйствах, ремонтный молодняк предназначенный для формирования родительских стад, в раннем возрасте вакцинируют дважды с 2-недельным интервалом, а затем третий раз в удвоенной дозе при переводе. Иногда вакцину применяют в суточном возрасте, одновременно с вакциной против болезни Марека. Иммунитет, регистрируемый в РДП, наступает через 14-21 день.

Эффективного специфического лечения и профилактики лекарственными препаратами при аденовирусном гидроперикардите не разработано [1].

Конкретную схему специфической профилактики для каждого птицеводческого хозяйства необходимо выбирать индивидуально, в зависимости от его эпизоотической ситуации.

1. Алиев А.С., Сираждинов Р.С., Джавадов Э.Д., Алиев Г.С. Гидроперикардит (ГИП) птиц || Сборник Трудов ученых Академии менеджмента и агробизнеса нечерноземной зоны Российской Федерации "Пути совершенствования переподготовки руководящих кадров и повышения эффективности аграрного производства". - Санкт-Петербург. - 1996. - С.146-151.
2. Алиев А.С., Никитина Н.В. Диагностика и специфическая профилактика инфекционного гидроперикардита птиц || Мат. научно-производственной конференции, посвященной 190-летию высшего ветеринарного образования в России и 100-летию вет. науки. С-Петербург. - 1998. - Ч.1 - С. 14-15.
3. Бакулин В.А. Патоморфология экспериментального проявления аденовирусного гепатита с тельцами-включениями || Передовой научно-производственный опыт в птицеводстве, рекомендуемый для внедрения. - Загорск. - 1991. - С.33-37.
4. Бакулин В.А., Аксенова Е.Г., Горецкая Т.И. Ассоциированное течение инфекционных болезней респираторного комплекса, аденовирусной инфекции и болезни Гамборо || Мат. Всероссийской научно-производственной конф. "Ветеринарная биологическая наука сельскохозяйственному производству". - Н-Новгород. - 1997. - С.301-303.

В статье изложены распространения аденовирусной инфекции, клинические признаки и патологические изменения у цыплят-бройлеров. Предложены различные методы специфической профилактики аденовирусного гидроперикардита бройлеров.

Ключевые слова : аденовирусная инфекция птиц, аденовирусный гидроперикардит, дифференциальная диагностика болезни Гамборо и Марека, вакцинация бройлеров и ремонтного молодняка.

Сведения об авторe

Ответственный за переписку с редакцией: Таймасуков Адам Азмето-вич, кандидат ветеринарных наук, генеральный директор ОАО "Компания Кубаньптицепром", 350000 г. Краснодар, ул. Северная 324, литер А, тел. 8 918 442 77 84, электронный адрес: kubpticeprom@yandex.ru.

ADENOVIRAL HYDROPERICARDITIS OF BROILER CHICKENS

Article describes distribution of adenoviral infection, its clinical signs and pathological changes in broiler chickens. Various methods of specific prevention of adenoviral hydropericarditis of broilers are offered.

Key words: adenoviral infection of birds, adenoviral hydropericarditis, differential diagnostics of Gumboro and Marek diseases, vaccination of broilers and young growth.

1. Aliev A.S., Sirazhdinov R.S., Dzhavadov Eh.D., Aliev G.S. Gidroperikardit ptits [Hydropericarditis of birds]. St. Petersburg (1996): pp.146 - 151. Print (in Russ.).
2. Aliev A.S., Nikitina N.V. Diagnostika i spetsificheskaya profilaktika infektsionnogo gidroperikardita ptits [Diagnostics and specific prophylaxis of infectious hydropericarditis of birds]. St. Petersburg (1998): pp. 14 - 15. Print (in Russ.).
3. Bakulin V.A. Patomorfologiya eksperimentalnogo proyavleniya adenovirusnogo gepatita s teltsami-vklyucheniyami [Pathomorphology of experimental display of adenoviral hepatitis with corpuscules-inclusions]. (1991): pp.33 - 37. Print (in Russ.).
4. Bakulin V.A., Aksenova E.G., Goretskaja T.I. Assotsiirovannoe techenie infektsionnykh bolezney respiratornogo kompleksa, adenovirusnoy infektsii i bolezni Gamboro [Associated course of infectious diseases of respiratory complex, adenoviral infection and Gumboro disease]. N.Novgorod (1997): pp. 301 - 303. Print (in Russ.).

Responsible for correspondence with the editorial board:

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Панкратов С. В., Придыбайло Н. Д., Крон Н. В.

Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Панкратов С. В., Придыбайло Н. Д., Крон Н. В.

УДК 619:616.98:579.881.11:636.52/58 ВЯКЦИНЗ. ПрОТИВ

синдрома гидроперикардита птиц

Ключевые слова: аденовирус, вакцина, птица, синдром гидроперикардита кур

В странах, где синдром гидроперикардита кур встречается наиболее часто (Пакистан, Индия, Мексика, Чили, РФ и др.), он наносит значительный экономический ущерб. Поэтому для профилактики болезни следует соблюдать, как общие ветери-нарно-санитарные мероприятия (размещать птицу разных возрастов по зонам, обеззараживать корма, проводить дезинфекцию, исключать контаминацию патогенными микроорганизмами вакцин), так и применять специфические средства.

Цель нашей работы состояла в изготовлении и испытании инактивированной эмульсионной вакцины против синдрома гидроперикардита кур.

В одном из птицеводческих хозяйств, неблагополучном по данному заболеванию, взяли материал от павших птиц, имевших типичные для аденов1груснош гепатита с включениями — гидроперикардита патологоанатомические изменения. Изолированный из него вирус использовали для приготовления вакцины.

Накопление производственного штамма вируса вели на серонегативных по данной инфекции цыплятах-бройлерах в возрасте 15, 20 и 30 сут. Их заражали 0,5 см3 вируссодержа-

щего материала в мышцу бедра. С соблюдением всех правил асептики и антисептики из трупов павших птиц извлекали печень. Орган гомогенизировали, а гомогенат осветляли центрифугированием. Надосадочную жидкость сливали и инак-тивировали. Антиген контролировали на полноту инактивации, активность в реакции диффузионной преципитации и стерильность. После такой проверки из него готовили опытные серии инактивированной эмульсионной вакцины.

В результате лабораторных испытаний оптимальной оказалась вакцина на основе масляного адъюванта ISA-70. По внешнему виду препарат представляет собой однородную стерильную эмульсию белого цвета с вязкостью 31 мм2/с и стабильностью 3,0 мм (вязкость определяли на вискозиметре ВСЖ-2, а стабильность 30-минутным центрифугированием при 4000 об/мин).

Безвредность препарата проверили на цыплятах 14 и 50-суточного возраста. Им инокулировали вакцину подкожно в область нижней трети шеи в объеме 2 см3. Клинических нарушений в течение 15-дневного периода наблюдения у привитой птицы не отметили. При вскрытии птиц, убитых по завершении опыта, в месте введения вакцины не обнаружили признаков воспалительной реакции; значительная часть вакцины рассосалась, и в тканях (под кожей шеи и в области зоба) были видны лишь ее единичные вкрапления диаметром 0,1. 1,0 мм.

Для оценки антигенной и иммуногенной активности вакцины сформировали 2 группы бройлеров 14-суточного возраста, серонегативных к синдрому гидроперикардита кур. Цыплят первой группы однократно подкожно (в область нижней трети шеи) иммунизировали эмульсионной вакциной в объеме 0,5 см3/гол. Вторая группа служила интактным контролем. Через 15 дн после вакцинации 50 % птицы каждой группы использовали для определения иммуногенной активности вакцины, а остальных цыплят —для определения ее антигенной активности.

Антигенные свойства опытной серии препарата оценивали по наличию антител в реакции диффузионной преципитации, а его иммуногенность определяли с помощью контрольного заражения подопытной группы патогенным изоля-том возбудителя болезни.

Транссудат в полости перикарда цыпленка, экспериментально зараженного возбудителем синдрома перикардита кур

Съ\воротслтъ\е вируспрецшнпирующие антитела в титре 1:8..Л : 16 обнаружили в реакции диффузионной преципитации у 80 % привитых цыплят на 21-е сут после иммунизации, а через неделю у всей птицы опытной группы. Контрольное внутримышечное заражение патогенным штаммом аденовируса в дозе 1 ЛД50, проведенное через 15 дн после иммунизации, показало, что вакцина надежно защищает птицу от возбудителя: все привитые цыплята остались здоровыми, в то время, как в контрольной группе заболеваемость составила 90 %, а смертность — 43 %. У павших цыплят при вскрытии обнаружили транссудат в перикардиальной полости, а

при гистологическом исследовании — базофилъные тельца-включения в клетках печени.

S.V. Pankratov, N.D. Pridibayio, N.N. Krön. Vaccine against hydropericarditis syndrome of poultry (AVIVAK — ADVG).

Применение в диагностических целях электронной томографии негативно окрашенных вирусов со сложной структурой

Дж. Мает, Л. Демистер, компания Кода-Церва (г. Брюссель, Бельгия)

Ключевые слова: вирусы, диагностика, томография, электронная микроскопия

Сокращения: ВБН — вирус болезни Ньюкасла; ВО — вирус орф (вирус контагиозного пустулезного дерматита овец); НК — негативное контрастирование

Метод НК с успехом применяют для подготовки проб для электронной микроскопии на протяжении почти 50 лет — с тех пор, когда его предложили С. Бреннер и Р.В. Хорн [7]. Этот метод основан на погружении в матрикс тяжелого металла электронно-прозрачных частиц на подложке, что повышает их контрастность. Периодически метод модифицируют и совершенствуют [8]. Благодаря простоте и быстроте осуществления, а также отсутствию необходимости в специальных реактивах НК часто пользуются для обнаружения и идентификации вирусов [9]. Эффективность такого подхода ограничена рядом факторов, связанных с особенностями НК [10] (например, артефактами, возникающими при пересыхании анализируемых проб) и трансмиссивной электронной микроскопии (деструкции потоком электронов и изменения положения выступающих частей объектов, что делает невозможным определение их ультраструктуры). Особенно сложно изучать негативно окрашенные вирусы, имеющие сложную или ассиметричную структуру.

В этой статье мы описываем результаты изучения ультраструктуры негативно-окрашенных парамиксовируса и парапоксвируса, имеющих сложную структуру.

Материалы и методы

Штамм ЛаСота ВБН получили в Международной референтной лаборатории болезни Ньюкасла (Вейбридж, Великобритания). Его репродуцировали на 9. 11-дневных СПВ-куриных эмбрионах посредством инокуляции в аллантоис-ную полость. [12].

Источником ВО служили пустулы слизистой оболочки ротовой полости овцы.

Суспензии этих вирусов окрашивали методом H К по стандартной схеме. Покрытые пиолоформом и углем медные сеточки (Agar Scientific) обрабатывали 1%-м алциановым синим (Fluka, Швеция) для усиления гидрофильное™ и 5 раз промывали водой. Затем на них помещали по капле вирусной суспензии, оставляли на 10 мин при комнатной температуре и 2 раза промывали водой. Сеточки с ВБН дополнительно обрабатывали 1 мин суспензией золотых частиц диаметром 10 нм, покрытых козьей антисывороткой к IgG мыши (Aurion, Нидерланды) — они служили основным маркером центровки изображения. Вслед за этим сеточки окрашивали 10 с каплей 2%-го уранил ацетата (Agar Scientific) или 1%-го фосфорно-вольфрамового калия (рН 7.2). Сеточки помещали в держатель (Model 2020, Fischione instruments) и исследовали в трансмиссивном электронном микроскопе Technai Spirit (FEI Со, Нидерланды).

Серийную микросъемку осуществляли в автоматическом режиме работы томографического модуля Explore 3D под разными углами наклона (с шагом в 1,5°) с помощью соответствующего программного обеспечения; каждый раз при изменении угла наклона корректировали фокусное расстояние. Снимки делали камерой высокого разрешения 4*4 k Eagle с увеличением в 49 000 раз. Их обрабатывали с применением программы Inspect 3D (версии 2,5). Серийные снимки ВО выравнивали по диаметру поперечного сечения изображения, а снимки ВБН — по тому же критерию и величине шести или большего количества частиц золота. Реконструкцию трехмерных изображений осуществляли на основании повторного определения алгоритма SIRTV и визуализировали вирусные частицы с помощью программы AMIRA (Mercury, Франция). На обработку каждой пробы тратили около 12 ч. Карту плотности гликопротеина F ВБН получали на основании кристаллографического анализа 11 ] с применением UCSF специальной компьютерной программы [2].

С.И. Панкратов, Н.Д. Придыбайло, Н.В Крон, НПП АВИВАК

Более 20 лет прошло с того времени, когда в Пакистане вблизи г.г. Карачи и Лахор, где сконцентрировано крупное бройлерное производство, возникла новая болезнь. Она проявлялась чаще всего у бройлеров в возрасте 3-5 недель, но случаи заражения были также и в стадах ремонтного поголовья. При этом признаки болезни следующие: вялость, скученность, взъерошенность оперения, желтоватая слизь в помете и падеж птицы в первые дни до 20%, а в последующий период он мог возрастать до 70-80%. На вскрытии наблюдали скопление прозрачного транссудата в перикардиальной полости, очаги некроза в печени в виде сероватых пятен, перемежающиеся с кровоизлияниями.

Гистологическим методом выявляли базофильные и эозинофильные внутриядерные тельца-включения в гепатоцитах и дегенеративные изменения в тканях поджелудочной железы, почек и миокарда.

Вскоре был идентифицирован возбудитель – аденовирус I группы (в основном серотипы 4 и 8), который выделяли в культуре клеток печени эмбриона, из самого эмбриона и от цыплят. В связи с наличием телец-включений в печеночных клетках и жидкости перикардиальной полости, болезнь получила название аденовирусный гепатит с включениями – гидроперикардит( синдром гидроперикардита, синдром гидроперикардита кур). Следует отметить, что в этиологии заболевания важная роль отводится иммуносупресивным инфекциям – инфекционной бурсальной болезни и инфекционной анемии.

В странах, где синдром гидроперикардита кур регистрируется наиболее часто (Пакистан, Индия, Мексика, Чили, РФ и др.), он наносит значительный экономический ущерб. Поэтому для профилактики болезни следует соблюдать, как общие ветеринарно-санитарные мероприятия (размещать птицу разных возрастов по зонам, обеззараживать корма, осуществлять эффективную дезинфекцию, исключать контаминацию патогенов в применяемых вакцинах), так и проводить специфическую профилактику.

Целью нашей работы было изготовление и испытание в эксперименте вакцины инактивированной эмульсионной против синдрома гидроперикардита кур.

В одном из птицехозяйств РФ, где имел место данное заболевание, был отобран материал от павших птиц с характерными патологоанатомическими признаками, выделен изолят вируса и получена его производственная расплодка.

В качестве биологической модели для накопления производственного штамма вируса использовали цыплят-бройлеров в возрасте 15, 20 и 30 суток, серонегативных по данной инфекции. Их заражали вируссодержащим материалом, в объеме 0,5 см3 в мышцу бедра. От павших птиц с соблюдением всех правил асептики и антисептики получали печень, которую гомогенизировали с последующим центрифугированием. После центрифугирования надосадочную жидкость сливали и инактивировали. Антиген контролировали на полноту инактивации, активность в РДП и стерильность, после чего на его основе были изготовлены опытные серии инактивированных эмульсионных вакцин.

В результате лабораторных испытаний оптимальной оказалась вакцина, изготовленная на основе масляного адъюванта ISA-70. Полученная эмульсионная вакцина по внешнему виду представляет собой однородную эмульсию белого цвета, стерильную, с вязкостью 31 мм2/с, определенной с помощью вискозиметра ВПЖ-2 по ГФ XI вып., стр. 87 и стабильностью 3,0 мм, определенной центрифугированием вакцины при 4000 об/мин в течение 30 минут.

Безвредность вакцины проверяли на цыплятах 14 и 50 суточного возраста, которых вакцинировали в область нижней трети шеи, подкожно, в объеме 2,0 см3. Срок наблюдения – 15 дней. Клинические признаки какой-либо патологии в течение всего периода исследований не отмечались. При вскрытии трупов вынужденно убитых по завершении опыта птиц, установлено, что в месте введения вакцины не было признаков воспалительной реакции, значительная часть вакцины рассосалась и отмечаются в виде единичных вкраплений размером 0,1–1,0 мм под кожей шеи и в области зоба.

С целью определения антигенной и иммуногенной активности вакцины, было сформировано две группы цыплят-бройлеров 14 суточного возраста, серонегативных к синдрому гидроперикардита кур. Цыплят первой группы иммунизировали эмульсионной вакциной подкожно в область нижней трети шеи в объеме 0,5 см3/на голову, однократно. Вторая группа была интактным контролем. Через 15 дней после вакцинации для определения иммуногенности было взято от первой и второй группы по 50% птицы, остальные цыплята остались для определения антигенной активности вакцины. Антигенные свойства опытной серий вакцины оценивали по наличию антител в РДП, а иммуногенность – при контрольном заражении подопытной птиц патогенным изолятом вируса.

Рис. 1. Транссудат в перикардиальной полости цыплят, экспериментально зараженных АДВГГ

Вируспреципитирующие антитела в РДП были установлены в сыворотке крови в титре 1:8– 1:16 у 80% вакцинированных цыплят на 21 сутки и у 100% – на 28 сутки после иммунизации. Контрольное внутримышечное заражение, проведенное патогенным штаммом аденовируса в дозе, составляющей LD50 на цыпленка через 15 дней после иммунизации, показало, что смертность и клиническое проявление болезни у вакцинированных птиц отсутствовали, а в группе контрольных невакцинированных цыплят клинические признаки болезни отмечались в 90% случаев и смертность составила 43%. При патологоанатомическом и гистологическом исследование были обнару жены характерные признаки: транссудат в перикардиальной полости (рис. 1) и базофильные тельца-включения в клетках печени (рис. 2).

Рис. 2. Базофильные включения в гепатоцитах цыплят, экспериментально зараженных АДВГГ

Изобретение относится к области ветеринарии. Задачей, решаемой в рамках данного изобретения, являлось создание профилактического средства против аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита (АДВГГ) кур, обладающего высокой иммуногенной активностью и стабильностью, в сочетании с безвредностью для птицы. Препарат содержит инактивированный теотропином антиген аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита кур штамма “Т-12” с активностью не менее 3,5 Lg ИД₅₀/мл в смеси с масляным адъювантом, взятые в равных объемах. Препарат обладает высокой иммуногенной активностью и стабильностью, безвреден для птицы, 2 з.п. ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к птицеводству, а именно, к вакцинным препаратам против инфекционных заболеваний, а именно, против аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита (АДВГГ) кур.

Имеющиеся научные данные свидетельствуют о том, что аденовивирусная инфекция получила широкое распространение и наносит значительный экономический ущерб птицеводству не только при остром течении заболевания в виде гепатита-гидроперикардита со смертностью от 20 до 70%, но и при субклиническом проявлении болезни, сопровождающемся поражением печени, поджелудочной железы, селезенки и почек.

При заражение птиц возбудителем гепатита с включениями - гидроперикардита происходит внедрение и репликация аденовирусов в иммунокомпетентных клетках лимфоидных органов с последующей их декструкцией. Это отрицательно сказывается на устойчивости инфицированных аденовирусом птиц к возбудителям других заболеваний, на формировании поствакцинального иммунитета, в том числе к ньюкаслской болезни и болезни Гамборо (В.А.Бакулин "Влияние гепатита с включениями - гидроперикардита на вакцинацию цыплят против ньюкаслской болезни." Архив ветеринарных наук, т. 1(48), часть 3).

Вакцинопрофилактика занимает ведущее место в борьбе с этим заболеванием. В последние годы наиболее часто применяют инактивированные вакцины (Afzal M. and Ahmad I. Efficacy of an inactivated vaccine against hydropericardium syndrome. 56//Vet.Rec. - 1990. V.126, p.56).

Известные зарубежные и отечественные средства специфической профилактики гепатита-гидроперикардита, в основном, представляют собой тканевые препараты, изготавливаемые из внутренних органов птиц, зараженных возбудителем гепатита-гидроперикардита. Они достаточно эффективны, но в основном на бройлерах, что связано с особенностями технологии разведения данных кроссов цыплят. На яйценоских птицах их применение часто лишь сдвигает начало проявления болезни на более поздние сроки и изменяет форму ее течения.

Однако в некоторых случаях, при применении сорбированной вакцины на месте инъекции возможно образование небольшой припухлости, исчезающей через 2-3 недели. В связи с чем, убой птицы на мясо разрешается через 20 суток после введения вакцины. При необходимости убоя птицы ранее этого срока тушки подлежат тщательному осмотру, и при обнаружении на месте введения вакцины признаков воспаления или нерассосавшейся вакцины, тушки выбраковывают и утилизируют.

Это может создавать определенные проблемы при специализации хозяйств на разведении цыплят-бройлеров, когда срок выращивания птицы - 40 дней.

Задачей, решаемой в рамках данного изобретения, является создание профилактического средства против аденовирусного гепатита с включениями -гидроперикардита (АДВГГ) кур, обладающего высокой иммуногенной активностью, стабильностью, в сочетании с безвредностью для птицы и не обладающего остаточной реактогенностью.

Указанная задача решается путем создания вакцинного препарата, содержащего инактивированный теотропином антиген аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита (АДВГГ) кур штамма "Т-12" с активностью не менее 3,5 0 Lg ИД₅₀/мл в смеси с масляным адъювантом, взятых в равных объемах, причем в качестве масляного адъюванта указанный препарат содержит жировую эмульсию типа масло в воде, включающую продукты переработки сои, например, инфузолипол, либо его аналоги, и содержит теотропин в конечной его концентрации в вируссодержащем материале не менее - 0,2-0,3%.

Инфузолипол - мелкодисперсная жировая эмульсия, применяемая в качестве лекарственного средства для парентерального питания (ФС-42-3955-00 "Инфузолипол для инъекций"). В состав препарата входят масло соевое, лецитин соевый, сорбент и вода для инъекций. Использование инфузолипола в качестве адъюванта дает преимущество быстрого введения вакцинного препарата птицам и точного соблюдения вводимой дозы, повышает иммуногенные и антигенные свойства препарата.

Инактивация вируса теотропином (Препарат А-24) гарантирует полное отсутствие в вакцинном препарате остаточной инфекционности, невозможность репарации генома вирусной ДНК, а при длительном хранении антигена не снижает его активности.

Производственный штамм "Т-12" хранится и поддерживается во Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте птицеводства (ВНИВИП).

Штамм "Т-12" хранят в лиофилированном состоянии в герметично запаянных ампулах в холодильнике не более 24 месяцев со дня его высушивания.

Производственный штамм "Т-12" должен удовлетворять следующим требованиям

- быть свободным от контаминации посторонними вирусами, бактериальной и грибковой микрофлорой;

- при заражении 25-30 дневных СПФ цыплят вызывать у них клинику и иметь инфекционный титр не ниже, чем 3,5 Lg ИД₅₀/мл. Использование штамма "Т-12" в вакцинном препарате обуславливает его высокую и длительно сохраняющуюся иммуногенную активность.

Приготовление вакцинного препарата проводится внесением в одну объемную часть готового стерильного масляного адъюванта - инфузолипола (или его аналогов) постепенно - по каплям, при интенсивном перемешивании пропеллерной мешалкой или с помощью гомогенизатора с частотой вращения 4000-5000 об/мин, одной объемной части водного вируссодержащего компонента. После этого перемешивание продолжают еще 5 минут.

Вакцинный препарат расфасовывают по 50, 250 или 450 см 3 в стерильные флаконы по ТУ 64-2-100-78, после чего их плотно закрывают стерильными резиновыми пробками по ТУ 38-006-108-84 и закатывают алюминиевыми колпачками по ОСТ 64-009-86.

Молодняк родительских стад иммунизируют дважды: первый раз в возрасте 10-12 суток, а второй раз - в возрасте 100-120 суток в удвоенной дозе. Продукты убоя и мясо от вакцинированной птицы реализуют без ограничений независимо от сроков вакцинации.

Сущность и практическая применимость заявленного изобретения характеризуется следующими примерами.

Контроль на полноту инактивации вируса проводили в трех последовательных пассажах на 30 цыплятах 17-20 дневного возраста, которым первоначально вводили по 0,5 мл испытуемых серий вакцины, с заражением следующей группы гомогенатом печени цыплят предыдущего пассажа, убитых на 3-и сутки после введения инактивированного антигена. Проводили контроль за клиническим состоянием птицы, гистологические исследования печени цыплят на наличие изменений, характерных для аденовирусной инфекции, а также исследования гомогената печени в РДП с заведомо положительной специфической к аденовирусу гепатита с включениями - гидроперикардита сывороткой птиц.

В течение всех трех пассажей цыплята оставались клинически здоровыми, патологоморфологические изменения в печени, характерные для аденовирусной инфекции не отмечены, результаты исследования гомогената печени в РДП с положительной специфической к аденовирусу гепатита с включениями - гидроперикардита птиц были отрицательными.

Контроль вакцины на безвредность проводили на цыплятах 17-дневного возраста, которым внутримышечно, в область бедра вводили 5-кратную иммунизирующую дозу вакцины в объеме 2,5 мл по 10 голов на каждую серию вакцины. В течение 10-дневного периода наблюдения цыплята оставались живыми и клинически здоровыми, реакция на препарат в месте его введения отсутствовала.

Контроль на иммуногенную активность проводили на цыплятах 17- дневного возраста, введением вакцины в дозе 0,5 мл внутримышечно в область бедра. Через 12 дней после вакцинации проводили контрольное заражение подопытных (вакцинированных) и контрольных (невакцинированных) птиц по 20 голов из каждой группы патогенным штаммом “Т-12” вируса гепатита с включениями - гидроперикардита внутримышечно в объеме 0,5 мл, что соответствовало 1000 ЛД 50.

В обеих подопытных группах птиц, привитых вакциной серии № 5 и № 6 гибель цыплят не наблюдалась, клинические признаки болезни отсутствовали в течение срока наблюдения (10 дней).

Результаты исследований представлены в таблице 1

В группе невакцинированных цыплят клинические признаки болезни отмечались у 90% цыплят, зараженных патогенным штаммом аденовируса.

У большинства птиц на 2-3 сутки после заражения наблюдалось угнетение, взъерошенность оперения. Перед гибелью у цыплят крылья были опущены, отсутствовала реакция на внешние раздражители. Птицы стояли, а чаще сидели, уткнувшись клювом.

Антигенную активность проверяли на цыплятах 17-дневного возраста внутримышечно вакцинированных одной иммунизирующей дозой вакцины (по 20 голов на каждую серию вакцины и 20 голов невакцинированных птиц). Через 21 и 28 дней после вакцинации брали кровь, получали сыворотку крови, которую исследовали в РДП с заведомо положительным антигеном гепатита с включениями - гидроперикардита на наличие преципитирующих антител. Преципитирующие антитела в РДП были обнаружены на 21 сутки после вакцинации в 90% исследованных пробах (обе серии вакцины), на 28 сутки - в 100%. Были также проведены исследования на сохранность антигенных свойств штамма “Т-12” аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита инактивированного теотропином.

Результаты исследований представлены в таблице 2.

Как следует из приведенных результатов, предлагаемый вакцинный препарат стерилен, безвреден, обладает высокой антигенной и иммуногенной активностью.

1. В.А.Бакулин “Влияние гепатита с включениями - гидроперикардита на вакцинацию цыплят против ньюкаслской болезни”. Архив ветериных наук, т.1 (48), ч. 3.

2. Afzal M. and Ahmad I. Efficacy of an inactivated against hydropericardium syndrome. 56// Vet.Rec. - 1990. V.126, p.56.

3. Борисов В.В., Борисов А.А., Сурнев Д.С. “Разработка и производственные испытания инактивированной сорбированной вакцины против синдрома перикардита кур. Роль ветеринарной науки в развитии животноводства: материалы международной научно-производственной конференции, посвященной 75-летию Казахского НИВИ. -Алматы. 2000 г., с. 77-79.

4. ФС-42-3955-00 “Инфузолипол для инъекций”.

1. Вакцинный препарат для профилактики аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита кур, содержащий инактивированный вирусный антиген и адъювант, отличающийся тем, что содержит инактивированный теотропином антиген аденовирусного гепатита с включениями - гидроперикардита кур штамма “Т-12” с активностью не менее 3,5 Lg ИД ₅₀/мл в смеси с масляным адъювантом, взятые в равных объемах.

2. Вакцинный препарат по п.1, отличающийся тем, что в качестве масляного адъюванта содержит жировую эмульсию типа масло в воде, включающую продукты переработки сои, например инфузолипол, либо его аналоги.

3. Вакцинный препарат по п.1, отличающийся тем, что содержит теотропин в конечной его концентрации в вируссодержащем материале не менее 0,2-0,3%.