Яйца и личинки гельминтов патогенные простейшие

Исследование, направленное на выявление паразитов, обитающих в нижних отделах желудочно-кишечного тракта, с помощью системы Parasep, предназначенной для концентрирования яиц и личинок гельминтов, цист и ооцист простейших.

Анализ кала методом Parasep, анализ кала на простейшие, исследование кала на простейшие и яйца гельминтов, парасеп

Амебиаз, амебиаз кишечника, кишечная амеба, энтамеба коли

Балантидий, кишечный балантидиаз, инфузорная дизентерия, балантидиоз

Бластоцисты, бластоциста хомини, бластоцитоз

Карликовая амеба, эндолимакс нана, непатогенная амеба, амебиаз

Карликовый цепень, крысиный цепень, гименолепидоз, гименолепис нана

Ланцетовидная двуустка, ланцетовидный сосальщик

Лямблии интестиналис, лямблии, кишечные лямблии, ляблиоз

Описторхис фелинеус, кошачья двуустка

Печёночная двуустка, печёночная фасциола, обыкновенная фасциола

Тениаты, тениид, тениидоз, тениоз, цепень свиной

Томинксоз (эуколеоз), томинкс, нитевидные нематоды

Трихуроз (трихоцефалез), власоглав

Шистосома гематобиум, бильгарциоз, урогенитальный (мочеполовой) шистосомоз

Шистосома мансони, кишечный шистосомоз

Шистосома японикум, японский шистосомоз, японский сосальщик, кровяной сосальщик

Энтамеба хистолитика, дизентерийная амеба, амебиаз, амебная дизентерия, амебный колит

Parasep - сендиментационный эфир-формалиновый метод.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить (по согласованию с врачом) прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.), и препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.

Общая информация об исследовании

Кишечные паразитические инфекции распространены по всему миру и являются частой причиной нарушений функций пищеварительного тракта, аллергических заболеваний, а также общесоматических расстройств. Существует несколько сотен видов паразитов, которые могут быть причиной болезни у человека. Наиболее часто кишечные паразитические инфекции вызывают такие гельминты, как аскариды, анкилостомы, острицы, бычьи и свиные цепни, трихинеллы, а также простейшие – лямблии, амебы. Заражение возможно при несоблюдении санитарно-гигиеничных норм, плохой очистке питьевой воды, употреблении немытых овощей и фруктов, недостаточной термической обработке мяса и рыбы. Клинические проявления кишечного паразитоза варьируются от бессимптомного носительства до тяжелой диареи, интенсивных болей в животе, признаков нарушения питания и всасывания питательных веществ, тяжелой анемии.

Основным диагностическим методом, который позволяет выявить яйца гельминтов и цист простейших и подтвердить клинический диагноз, является световая микроскопия кала. Однако чувствительность метода прямой микроскопии в диагностике гельминтозов недостаточно высока в связи с возможной невысокой концентрацией паразитов в материале, непостоянным их выделением из организма. Для увеличения чувствительности исследования применяются концентрационные методы. Ранее применяемые открытые методы обогащения фекального материала являлись достаточно трудоемкими и небезопасными для лабораторного персонала. Исследования с помощью современных закрытых концентрационных систем, среди которых Parasep, – быстрые и надежные способы обнаружения кишечных паразитов в кале.

Концентрационная тест-система Parasep представляет собой более новую модификацию замкнутой системы обогащения, которая может быть легко принята и исследована в любой обычной микробиологической лаборатории. При использовании данного метода материал помещается в трубку тест-системы Parasep с добавлением специальных растворов, центрифугируется, что позволяет за счет разницы в удельном весе различных частиц, в том числе яиц и цист, выделить из субстрата и накопить их в одном слое, а затем исследовать с помощью микроскопии.

Однако в связи с непостоянным выделением яиц гельминтов и цист простейших при отрицательном результате любого микроскопического анализа кала и сохраняющихся клинических симптомах могут потребоваться повторные исследования кала с интервалом в несколько дней.

Для чего используется исследование?

• Диагностика кишечных паразитарных инфекций, а также бессимптомного носительства;
• оценка эффективности проведенного противопаразитарного лечения.

Когда назначается исследование?

• При подозрении на наличие кишечной паразитарной инфекции;
• при диарее, наличии слизи и крови в стуле, боли в животе, тошноте, зуде и высыпаниях на коже по типу крапивницы, повышении температуры, снижении веса, анемии, общей слабости;
• при обследовании людей, прибывших из эндемичной зоны по некоторым гельминтозам;
• при плановом диспансерном обследовании, при прохождении медицинской комиссии (например, для работы, поступления в детский сад, перед плановой госпитализацией).
• после проведенного курса противопаразитарной терапии.

Назначение и область применения

1. Принцип методики

2. Чувствительность метода

3. Оборудование и материалы

5. Приготовление рабочих растворов реактивов

6. Отбор и хранение проб

7. Ход исследования

8. Оценка результатов исследования

Дополнение к разделу 6. Отбор и хранение проб

Дополнение к разделу 7. Ход исследования

Приложение 1. Схема методики санитарно-паразитологического

исследования воды (последовательность операций)

Приложение 2. Цисты патогенных кишечных простейших и яйца

гельминтов, определяемые методикой

санитарно-паразитологического исследования воды

Приложение 3. Яйца гельминтов, определяемые методикой

санитарно-паразитологического исследования воды

Настоящие методические указания являются первым опытом методического обеспечения контроля качества воды питьевой, плавательных бассейнов и источников хозяйственно-питьевого водоснабжения по паразитологическим показателям, вновь внедренным в:

- СанПиН "Требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества" 2.1.4.559-96;

- СанПиН "Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды плавательных бассейнов" 2.1.2.568-96;

- СанПиН "Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации" 3.2.563-96, разработанных в развитие Закона РСФСР "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" и предназначенных для паразитологов городских, районных, областных, краевых и республиканских центров госсанэпиднадзора и специалистов ведомственных лабораторий, осуществляющих контроль качества воды систем централизованного водоснабжения.

Методика предназначена для обнаружения цист патогенных простейших кишечника и яиц гельминтов в воде при осуществлении контроля качества воды по паразитологическим показателям в источниках хозяйственно-питьевого водоснабжения (поверхностных водоемах, ручьях, каптажах, колодцах, артезианских скважинах, в распределительной сети систем коммунального водоснабжения и плавательных бассейнах).

Цисты патогенных простейших кишечника и яйца гельминтов обнаруживаются при микроскопическом исследовании осадка, получаемого после центрифугирования не менее 4-кратно разведенного раствора флотанта, в который искомые паразитарные агенты попадают из осадка, смываемого с мембранных фильтров после фильтрации через них определенных объемов исследуемой воды. Осаждение цист простейших и яиц гельминтов происходит за счет резкого снижения плотности флотанта, которая после разведения становится ниже таковой паразитарных агентов.

Паразитарные патогены (цисты лямблий, амебы дизентерийной, балантидия кишечного, яйца гельминтов) могут быть обнаружены при содержании их в количестве не менее 1 экземпляра в 25 дм3 воды из водоисточников и в 50 дм3 воды питьевой.

3.1. Устройство для вакуумной фильтрации через мембранные фильтры: стационарное устройство, используемое для бактериологических и химических исследований в лабораториях водоочистных станций и центров ГСЭН (фильтровальный аппарат АФ, выпускаемый заводами Минжилкомхоза РФ; фильтровальный аппарат типа Рублевского или другой аналогичный; при отсутствии указанных стационарных установок может быть использован аппарат Гольдмана, колбы для фильтрования под вакуумом номинальной вместимостью 2000-5000 мл (ГОСТ 6514-63), водоструйный насос (ГОСТ 10696-75) или насос Комовского, а в полевых условиях - ручной велосипедный насос (или другой с алогичными свойствами).

3.2. Мембранные фильтры с размером пор 1-4 микрон и диаметром мембранного диска, соответствующим размерам фильтровальной ячейки фильтровального устройства, - обычно 35 +- 2 мм (фильтры мембранные нитроцеллюлозные N 6 Мытищинской экспериментальной фабрики ультрафильтров; фильтрующие мембраны Владипор марки МФА-МА N 10 Казанского ПО "Тасма", "Миллипор", "Прагопор", "Сарториус" или другие с аналогичными свойствами).

3.3. Лабораторная центрифуга, обеспечивающая 1500-2500 об./мин (600-650 g), позволяющая центрифугировать пробы воды объемом 10 мл (типа ОПН-3, ОПН-8, ЦЛС-31М со сменным ротором).

3.4. Холодильник электрический или газовый, поддерживающий температуру 4-6°С.

3.5. Термостат электрический с автоматическим терморегулятором и термометром с ценой деления 0,2°С (ТС-80 или аналогичный).

3.6. Микроскоп биологический (типа МБИ, "БИОЛАМ" и др.), снабженный препаратоводителем (типа СТ-12) и обеспечивающий увеличение от 50 до 900 крат.

3.7. Осветитель ОИ-19 для микроскопа или другой аналогичный.

3.8. Весы лабораторные для взвешивания в диапазоне 50 мг - 20 г (равноплечные ручные /аптекарские/ с разновесами, ВЛР-200 г или др.).

3.9. Денсиметры (ареометры типа I (АI) с пределами измерения от 1,000 до 1,400 кг/м3 (ГОСТ 1300-74).

3.10. Дозаторы пипеточные ПI-0,1, ПI-0,5, ПI-1,0 мл (ТУ 64-339-81).

3.11. Пинцет анатомический.

3.12. Кисти мягкие (из волоса белки, колонка или соболя) для живописи, NN 12-18.

3.13. Стаканы стеклянные высокие с носиком (ВН) номинальной вместимостью 50-100 мл (ГОСТ 10394-63).

3.14. Пробирки центрифужные градуированные (ПЦГ) емкостью 10 мл (ГОСТ 1770-64).

3.15. Стекла предметные 25 х 75 мм.

3.16. Стекла покровные 18 х 18, 24 х 24 мм (ГОСТ 6672-59).

3.17. Чашки биологические (Петри) по ГОСТу 25336-82.

3.18. Часы песочные на 3-5 мин или часы сигнальные.

3.19. Штативы лабораторные для пробирок (ТУ 64-1-707-80).

3.20. Емкости для отбора проб воды из нейтрального материала, пригодные для обеззараживания принятыми методами: канистры пластмассовые, емкостью 20-25 л, стеклянные бутылки, фляги молочные металлические емкостью 30-35 л, эмалированные бидоны.

3.21. Цилиндры измерительные с носиком 1-00, 1-25, 1-500 (ГОСТ 1770-74).

3.22. Колба 2-50-2, 2-100-2, 1-1000 (ГОСТ 1770-74).

3.23. Капельница для многократной дозировки по Манну (ГОСТ 9876-61).

3.24. Широкогорлые стеклянные или пластиковые флаконы емкостью 100-500 мл с притертыми или завинчивающимися крышками.

3.26. Иглы препаровальные.

4.1. Формальдегид 40%-ный (продажный).

4.2. Сульфат цинка семиводный (ZnSO4 х 7Н2O), х.ч.

4.3. Сахароза, ч.д.а.

4.4. Сульфат магния (MgSO4), ч.д.а.

4.5. Тиосульфат натрия по ГОСТу 244-76.

4.6. Вода дистиллированная по ГОСТу 6709-72.

4.7. Натрий хлористый, х.ч. (ГОСТ 4233-77).

4.8. Йод кристаллический, х.ч.

4.9. Калий йодистый (KJ), х.ч.

4.10. Эозин сухой, х.ч.

4.11. Метиленовый синий сухой, х.ч.

4.12. Кислота молочная, х.ч.

4.14. Пепсин (возможен искусственный).

4.16. Натрий двууглекислый, ч.д.а.

4.17. Спирт этиловый ректифицированный по ГОСТу 5962-67.

5.1. Флотанты, любой из 3-х названных:

- 33%-ный водный раствор семиводного сульфата цинка: 331 г семиводного сульфата цинка (ZnSO4 х 7H2O) растворяют в 1 дм3 кипящей дистиллированной воды;

- 30%-ный водный раствор сахарозы: 300 г сахарозы ч.д.а. растворяют в 1 дм горячей дистиллированной воды;

- раствор, состоящий из смеси насыщенных растворов сульфата магния, тиосульфата натрия и дистиллированной воды, соотношение компонентов 3:3:1.

После приготовления флотанта и снижения его температуры до 18°С контролируют его удельную плотность ареометром. Для выделения цист простейших и яиц гельминтов, представляющих непосредственную опасность заражения человека при заглатывании с водой, удельная плотность флотанта должна быть 1,3. Если величина этого показателя ниже, ее нужно откорректировать, добавляя более концентрированные растворы соответствующих веществ.

5.2. 2%-ный раствор Люголя: 1 г йода кристаллического и 2 г калия йодистого растворяют в 100 мл дистиллированной воды (первым растворяют калий йодистый), выдерживают в темноте при 37°С в течение 3 суток, после чего используют в работе.

5.3. 2%-ный водный раствор формалина: 1 часть продажного 40%-ного формальдегида растворяют в 20 частях дистиллированной воды.

5.4. Жидкость Барбагалло: приготовляют 3% формалина на физиологическом растворе (0,85%) хлорида натрия.

5.5. Приготовляют 1%-ный водный раствор эозина.

5.6. Приготовляют раствор, состоящий из 1 части метиленового синего и 50 000 частей дистиллированной воды.

5.7. Приготовляют смесь, состоящую из 0,5 г панкреатина, двууглекислой соды - 0,9 г, дистиллированной воды - 5 мл.

Отбор проб воды производится в чистые (желательно стерильные) емкости. Большие емкости - молочные фляги, металлические ведра и пр. могут быть предварительно обработаны путем обжига их внутренней поверхности с использованием этилового спирта.

Пробы необходимого объема могут доставляться в паразитологическую лабораторию без обработки или в целях облегчения их транспортирования - после предварительной обработки - концентрирования материала путем фильтрования на месте отбора проб, в лаборатории водопроводной станции и др. Пробы, не прошедшие предварительную обработку, могут храниться при температуре 15-20°С не более 2-х суток.

Питьевая вода исследуется в объеме 50 дм3; вода водоисточников - в объеме 25 дм3.

Исследуемый объем воды с помощью фильтровального устройства пропускает через мембранные фильтры (см. п.3.2). По мере замедления процесса фильтрации из-за загрязнения фильтра его заменяют новым, а использованные фильтры с осадком помещают в широкогорлую емкость (стаканчики ВН) с помощью стерильного пинцета и заливают исследуемой водой в количестве 10-50 мл для сохранения их во влажном состоянии.

По окончании фильтрации всей пробы осуществляется смыв осадка с фильтров. Каждый фильтр стерильным пинцетом опускается в стаканчик с дистиллированной водой; придерживая пинцетом фильтр, осторожно смывают осадок при помощи мягкой кисточки, затем фильтр еще раз прополаскивают в другой порции дистиллированной воды. По окончании отмывки всех фильтров кисточку также тщательно прополаскивают в небольшом объеме дистиллированной воды (5-10 мл). Процедура отмывки фильтров и кисточки требует особой тщательности во избежание возможных потерь цист простейших и яиц гельминтов.

Весь полученный смыв центрифугируют в пробирках емкостью 10 мл в течение 5 мин при 1500 об./мин (600g). Надосадочную жидкость сливают. При отсутствии необходимости определения жизнеспособных цист и яиц гельминтов осадок ресуспендируют в 6-8 мл 2%-ного водного формалина. Если предполагается определение жизнеспособности паразитарных патогенов, к осадку добавляют воду. Суспензии вновь центрифугируют в прежнем режиме, после чего удаляют надосадочную жидкость, а к осадку добавляют 3 мл одного из флотантов (предпочтительнее 33%-ный водный раствор семиводного сульфата цинка). Центрифугируют 5 мин при 2000 об./мин, после чего надосадочную жидкость переливают в центрифужную пробирку, разбавляют в 4 раза и более дистиллированной водой. Центрифугируют в прежнем режиме, удаляют надосадочную жидкость, а из осадка готовят препараты на предметных стеклах.

В зависимости от задач исследования препарат либо не окрашивают, либо подвергают окраске. Если нужно провести подсчет паразитарных агентов без определения их жизнеспособности или требуется визуальное определение вероятной жизнеспособности цист кишечных простейших и яиц гельминтов, препарат не окрашивается или его окрашивают 1 каплей 2%-ного раствора Люголя. Вероятную жизнеспособность цист лямблий можно определять, окрашивая препарат 1 каплей 1%-ного водного эозина.

Готовые препараты накрывают покровным стеклом и микроскопируют с использованием 100-600-кратного увеличения (объективы - 10х, 40х, окуляры - 10х, 15х) сухой оптической системы или водной иммерсии. Таким образом микроскопируется весь объем полученного осадка. При необходимости проводят визуальную оценку вероятной жизнеспособности цист лямблий и других простейших, а также яиц гельминтов.

При микроскопии подсчитывают число паразитарных патогенов во всем объеме осадка, что соответствует их числу во всей исследованной пробе, пересчитывают на содержание их в 1 л (дм3), одновременно определяют систематическую принадлежность обнаруживаемых паразитических организмов; идентификация их проводится по следующим признакам.

Цисты лямблий - овальная форма, размеры 10-14 микрон в длину и 6-10 микрон в ширину; незрелые цисты содержат 2 ядра, зрелые - 4; ядра находятся у переднего полюса цисты. Оболочка цисты отчетливо выражена и большей частью отстает от протоплазмы, что является одним из характерных отличий цист лямблий от цист других простейших. Внутри цисты вдоль по средней линии проходят две опорные нити - аксостили; в косом или поперечном направлении лежат характерные парабазальные тела (2 - в незрелых и 4 - в зрелых цистах), нередко заметен сложно свернутый жгутиковый аппарат.

Цисты амебы дизентерийной - округлая, редко овальная форма, размеры от 10 до 16 микрон; молодые цисты содержат 1-2 ядра с центрально расположенной звездчатой кариосомой, зрелые цисты содержат 4-6 ядер; в зрелых четырехядерных и незрелых двухядерных цистах ядра расположены в различных плоскостях; оболочка цист двухконтурная в виде светлого прозрачного ободка. Одноядерные цисты почти всегда содержат в большом количестве гликоген, который в виде крупной вакуоли с нерезкими очертаниями занимает обычно больше половины цисты и раствором Люголя окрашивается в темно-коричневый цвет.

Цисты балантидия кишечного - правильная круглая форма. Плотная двухконтурная оболочка. Средний размер около 50 микрон. Внутри цист имеется крупное бобовидное ядро. Протоплазма однородна, гликоген в ней распылен равномерно. Под оболочкой в некоторых цистах заметно углубление, представляющее собой редуцированный цитостом - органеллу, соответствующую началу пищеварительной трубки многоклеточных. Ресничный покров отсутствует. Ниже приводятся признаки, по которым идентифицируются яйца гельминтов, представляющих непосредственную угрозу заражения человека при заглатывании их с водой.

Яйца аскариды человеческой (свиной) - оплодотворенные яйца овальной или шаровидной формы. Наружная оболочка крупнобугристая, толстая, коричневого цвета (иногда встречаются яйца без наружной бугристой оболочки). Размер яиц 50-70 х 40-50 микрон. Яйцеклетка мелкозернистая и шаровидная, расположена в центре яйца.

Инвазионное яйцо (способное заразить при заглатывании), находящееся на последней стадии созревания, содержит внутри живую подвижную личинку, свернувшуюся кольцевидно или перекрестно.

Яйца токсокары (аскариды собачьей) - почти круглые, 65-75 микрон в диаметре, с нежноячеистой наружной толстой оболочкой темно-коричневого цвета, внутри яйца видна округлая зародышевая клетка. Зрелые инвазионные яйца содержат внутри подвижную свернувшуюся кольцом или перекрестно личинку.

Яйца власоглава - симметричные, имеют лимонообразную или бочонкообразную форму. Оболочка темно-коричневая, толстая. На обоих полюсах имеются светлоокрашенные пробковидные образования. Размеры яиц 50-54 х 23-26 микрон. В зрелых инвазионных яйцах видна подвижная личинка.

Яйца острицы - асимметричные. Одна сторона заметно уплощена, другая выпукла. Размеры 50-60 х 30-32 микрон. Оболочка тонкая, гладкая и бесцветная. Яйца могут быть на различных стадиях созревания, до головастикоподобной личинки включительно.

Яйца цепня карликового - оболочка яйца бесцветная, тонкая, гладкая. Форма овальная. Размер яиц 40 х 50 микрон, эмбриофора (зародыш) почти шаровидная (29 х 30 микрон), с длинными нитевидными придатками на полюсах.

Онкосферы тениид - овальная форма, размеры 31-40 х 2-30 микрон; имеют тонкую наружную оболочку и толстую радиально-исчерченную внутреннюю оболочку темно-коричневого цвета. Внутри онкосферы находится зародыш-эмбриофора с шестью зародышевыми крючьями.

Оценка вероятной жизнеспособности цист патогенных простейших и яиц гельминтов визуально проводится по следующим критериям, подтверждающим жизнеспособность:

- целостность наружной оболочки (отсутствие ее разрывов, вдавлений, выбухания, сморщивания);

- четкая внутренняя структура цисты или яйца: для цист - четко видны ядра, отсутствует зернистость (для цист лямблий дополнительно должны быть видны аксостили, жгутиковый аппарат, медиальное тело); для яиц гельминтов - наличие дробящейся зародышевой клетки или подвижной личинки (для аскарид, токсокар, власоглавов, остриц), попарное расположение зародышевых крючьев у живых и беспорядочное у мертвых онкосфер тениид и яиц карликового цепня;

- при окраске препарата 1%-ным водным раствором эозина жизнеспособные цисты лямблий не воспринимают окраску в течение первых 5 минут, мертвые окрашиваются сразу же в розовый цвет. Поэтому указанную окраску следует использовать до микроскопии только в том случае, когда на изучение препарата потребуется не более 5 минут. Часто просмотр мазка длится 15-30 минут, тогда 1%-ный водный эозин можно вводить аккуратно, не сдвигая препарат, под покровное стекло пипеткой в точке, где при предварительном просмотре уже обнаружены цисты лямблий;

- жизнеспособность онкосфер тениид и яиц аскарид, содержащих личинку, определяют путем окрашивания препарата смесью, содержащей метиленовый синий. Живые онкосферы и личинки, находящиеся внутри яиц аскарид, не окрашиваются в течение первых 15 минут. Мертвые окрашиваются сразу в синий цвет;

- жизнеспособность онкосфер тениид можно также определить по движению зародышей при воздействии на них пищеварительными ферментами. Для этого исследуемый осадок, содержащий онкосферы, помещают на часовое стекло в искусственный дуоденальный сок (см. п.5.7). Стекло ставят в термостат при 36-38°С на 4 часа. Живые зародыши освобождаются от оболочек, а мертвые - нет.

Оболочки жизнеспособных онкосфер растворяются также в подкисленном пепсине и в щелочном растворе трипсина через 6-8 часов при температуре 38°С.

В случае, если первичная обработка воды пробы (фильтрование) проводилась вне паразитологической лаборатории, использованные фильтры помещают в широкогорлый флакон, добавляют 10-15 мл исходной воды; закрывают флакон завинчивающейся или притертой крышкой, маркируют, указывая дату, место отбора, количество профильтрованной воды, и транспортируют в паразитологическую лабораторию для дальнейшего исследования. При невозможности исследования в день отбора материал хранят при 4°С не более суток; при отсутствии необходимости определения жизнеспособности цист кишечных простейших и яиц гельминтов материал хранят не более 3-4 суток после добавления в него формальдегида с таким расчетом, чтобы концентрация его в суспензии составила 2%.

Перед началом фильтрации мембранные фильтры должны быть подвергнуты 10-минутному кипячению в дистиллированной воде для удаления посторонних частиц из пор фильтров, препятствующих оптимальному проведению процесса фильтрации.

Схема выполнения методики санитарно-паразитологического исследования воды и изображения, определяемых с ее помощью цист кишечных патогенных простейших и яиц гельминтов, представлены в приложениях 1, 2, 3.

Для яиц гельминтов характерна определенная морфологическая структура. Они имеют оболочку специфического строения, что сразу жебтличает их от сходных образований, обнаруживаемых в почве, воде, осадке сточных вод, нечистотах и т.д. Яйца гельминтов содержат яйцеклетку, бластомеры, развитые личинки или желточ- ные клетки; имеют постоянные размеры, известна и плотность некоторых из них. B связи с этим мы даем краткую характеристику морфологических особенностей зародышей наиболее распространенных возбудителей болезней и приводим краткое описание яиц и личинок гельминтов.

Общая характеристика яиц трематод. Форма яйца трематоды чаще овальная, округленная, реже удлиненная, окраска золотистая, желто-коричневая, бурая и светло-серая. Ha одном из полюсов у, большинства яиц имеется крышечка. Внутри яйца — яйцеклетка, вокруг которой расположены желточные клетки в виде шаров или' же сформировавшийся мирацидий. Ha наружной поверхности одних яиц имеется бугорок или шип, у других — филаменты в виде 2 ни- тей, идущих OT полюсов (рис. 7).

Ф а с ц и о л a (Fasciola hepatica). У фасциол яйца овальные, очень крупные (130—145 X 70—90 мкм), желтовато-бурого цвета, имеют двухконтурную оболочку с крышечкой на одном полюсе и утолщением оболочки на противоположном; внутри яйца желточные клет- ки, которые заполняют все яйцо.

Фасциола гигантская (Fasciolagigantica).Яйцaтaкиeжe, как и у предыдущего вида, размер их 150—190 x 75—90 мкм. Яйца фасциолы овальной формы, на одном полюсе крышечка, на другом штифтик; величина вариабельна. Яйца фасциол сходны с яйцами парамфистомы. При исследовании объектов окружающей среды необходимо их строго дифференцировать. Отличительные признаки: яйца парамфистомы серой или светло-серой окраски (яйца фасциол жщіто-золотистого цвета); пространство у полюса, на котором име- етЬя крышечка, не заполнено клетками, тогда как у яиц фасциол желточные клетки заполняют всю полость.

Д и к p о ц e л и у м (Dicrocoelium lanceatum). Яйца мелкие (38—45 X x 22—30 мкм), асимметричные, с толстой двухконтурной пигментированной оболочкой (коричневого цвета); слабо заметная крышечка находится на уплотненном полюсе яйца. B зрелых яйцах виден зародыш — мирацидий, в основании которого выделяются 2 крупные овальные клетки. Одна сторона яйца уплощена и слегка вогнута.

Описторх (СфлзФогсЫзГеНпеиз^Яйцабледно-желтой окраски, с нежной двухконтурной тонкой, гладкой оболочкой, с крышечкой на одном полюсе и утолщением скорлупы на противоположном кон-

Рис. 7. Яйца трематод.

1 — Nanophyetus schikhobalowi; 2 — Opisthorchis felineus; 3, 4 — Dicrocoelium lanceatuni незрелое и зрелое; 5 — Clonorchis sinensis; 6 — Paragonimus westermanii; 7 — Metagonimus yokogawai; 8 — Fasciola hepatica; 9 — Schistosoma japonicum; 10 — S. haematobium; 11 — S. mansoni; 12 — Fasciolopsis buski.

це; их размер 11—19 x 23—34 мкм. Нижняя половина яйца расширена. Содержимое мелкозернистое.

Шистосома Мэнсона (Schistosomamansoni)^fluaBBHfle длинного овала с крупным боковым шипом в виде загнутого крючка, их размер 130—180 x 60—80 мкм.

Шистосома японская (SchistosomajaponicumKutsurada). Яйца бледно-желтого цвета, овальные (в виде укороченного овала), без крышечки, с рудиментарным боковым (не постоянно) крючком; их размер 70—100 x 50—65 мкм.

Клонорх (Clonorchis sinensis). Размеры яиц 27—35 x 12—19мкм, форма грушевидная, разница в радиусах полюсов значительная. Асимметрия яиц выражена не всегда. Оболочка шершавая, толстая. Выступы оболочки перед крышечкой хорошо выражены. Границы крышечки в виде извилистой линии, крышечка высокая.

Метагонимус (Metagonimusjokogawai). Яйца по форме напоминают лимон, симметричны, оболочка гладкая, тонкая. Выступы области перед крышечкой не выражены, граница крышечки в виде ровной тонкой линии. Крышечка плоская, слабо различима. Бугорок на противоположном полюсе крышечки хорошо заметен. Размер яиц 26—28 x 15—17 мкм.

П a p а г о н и м у с (Paragonimus westermani). Яйца золотисто-желтого или коричневого цвета, овальные, крупные с крышечкой на несколько уплощенном полюсе, крышечка как бы несколько вдавлена в яйцо. Размер яиц 80—118 X 48—60 мкм.

Нанофиетус (Nanophyetus schikhobalowi, Skrjabini et Podja- polskaja, 1933). Зрелые яйца размером 62—72 x 43—48 мкм, овальные, светло-коричневого цвета с золотистым отливом; в середине — зародышевая клетка, окруженная крупными желточными клетками.

Фасциолопсис (FascioIopsis buski). Яйца крупные (130— 140 X 80—95 мкм), овальной формы, суженные к обоим полюсам, серовато-желтого цвета, с тонкой скорлупой. Ha одном полюсе яйца имеется крышечка, на другом тупое утолщение скорлупы (либо ме- дианно, либо асимметрично).

Гетерофиес (Heterophyes heterophyes). Яйцаразмером 28—‘ 30 X 15—17 мкм, овальные, с толстой скорлупой коричневого или! желтого цвета, с крышечкой на одном полюсе и утолщением скорлупы на другом; внутри яйца сформированная личинка.

Общая характеристика яиц цестод. Яйца различаются по форме. Наружная оболочка у одних яиц тонкая, легко разрушается, у других толстая; внутри зародыш или онкосфера овальной формы, с эмбриональными крючками. Снаружи яйца некоторых цестод имеют филаменты в виде нитей. Окраска яиц чаще светлая, светло-жел- тая> реже желто-коричневая (рис. 8).

, , Рис. 8. Яйца цестод.

1, 2 — Taeniidae spec., яйцо и онкосфера; 3 — Hymenotepis nana; 4

- HymenoIepis dìminuta; 5 — DiphyIlothrium latum; 6, 7 — Dipilidiuńrcaninum, Яйцо и кокон.

■ JI e н т e ц ш и p о к и й (Diphyllobothrium latum). Яйцо овальное с гладкой прозрачной оболочкой желтоватогоцвета. Ha одном полюсе яйца имеется крышечка, на другом бугорок, более выпуклый, чем у яйца нанофиетуса, часто один его край приподнят над поверхностью оболочки. Размеры 70—83 x 50—54 мкм.

Лентец чаек (ОірЬуІІоЬоіЬгіитбепбгйісигп).Яйцосходнос яйцом лентеца широкого, но меньше него. Размеры 50—87 x 38— 48 мкм.

Дипилидиум (Dipilidium caninum). Яйца овальной, почти круглой формы, с прозрачной оболочкой красноватого оттенка. Размеры 35—40 мкм. Похожи на яйца карликового цепня, но у них отсутствуют филаменты в межуточном веществе, между оболочками яйца и онкосферы. B яйце находится 6-крючная онкосфера. Яйца (8—115) собраны в овальные капсулы размером 20 x 130 мкм.

Вооруженный (Taenia solium) и невооруженный цепенц (Taeniarhynchus saginatus). Яйца имеют тонкую прозрачную оболочку, снабженную двумя нитевидными придатками (филаментами). Внутри яйца находится зародыш (онкосфера), заключенный в толстую двухконтурную радиально исчерченную оболочку желтовато- коричневого цвета. Размер онкосферы 28—44 x 28—38 мкм. Зародыш снабжен 3 парами крючьев.

Цепень карликовый (НутепоІерізпапа).Яйцозллипсоид- ной формы с прозрачными бесцветными оболочками. B яйце находится развитая 6-крючная онкосфера. Оболочки онкосферы (размер 18— 29 мкм) на полюсах прерываются, в отверстиях образуются небольшие выпячивания наружу, от которых отходят в межуточное вещество по 4 филамента, которые, по-видимому, и удерживают онкосферу в центре яйца. Размер яиц 45 x 37 мкм.

Цепень крысиный (Нутепо1ерІ8сВтіпЩа).Яйцопочтиша- ровидной формы с толстой двухконтурной оболочкой, с едва заметной поперечной исчерченностью, желтоватого цвета. B яйце находится 6-крючная онкосфера. Размер яйца 60—80 x 72—86 мкм, онкосферы 18 X 36 мкм.

Эхинококк и альвеококк (Echinococcusgranulosisand alveococcus multilocularus). Размер яиц 36 X 32 мкм.

Общая характеристика яиц нематод. Яйца различной формы и величины; чаще встречаются овальные, округлые, симметричные, но бывают бочковидные с пробочками на полюсах, вытянутые и асимметричные. Покрыты скорлупой, состоящей из нескольких оболочек, защищающих зародыш от воздействия механических и химических факторов. Наружная поверхность у одних яиц гладкая, у Других ячеистая или бугристая (рис. 9). Окраска неодинаковая: одни из них желтовато-коричневые, другие бесцветные. Яйца выделяются во внешнюю среду в предсегментационный период, с шарами Дробления и развившейся личинкой ребышев H.B. и др., 1997].

A с к a p и д a (Ascaris Iumbricoides). Оплодотворенное яйцо оваль-

ной формы с толстой многослойной оболочкой. Наружная белковая оболочка крупнобугристая, желто-коричневого цвета. Внутри яйца шаровидный бластомер, занимающий центральное положение. Размер оплодотворенных яиц 50—70 x 40—50 мкм. Иногда яйца лишены белковой бугристой оболочки. Яйцо бесцветное или с серозеленым оттенком. Неоплодотворенное яйцо сильно вытянуто. Наружная белковая оболочка тонкая, мелкобугристая с отдельными большими и резко выступающими буграми, уплощена на полюсах, темно-желтого цвета. Содержимое яйца заполнено крупными полигональными желточными клетками. Размер неоплодотворенных яиц 50—106 X 40—50 мкм.

A с к a p и д а с в и н e й (Ascaris suum). Яйца морфологически неотличимы от яиц аскариды человека, овальной формы, размером 50— 75 X 40—50 мкм, покрыты толстой крупнобугристой скорлупой; внутри яйца расположена округлая зародышевая клетка; окраска темно-коричневая или бурая.

Власоглав (Trichocephalus trichiurus). Яйца бочкообразной формы с толстой многослойной оболочкой, желто-коричневого цвета.

Острицы (Enterobius vermicularis). Яйца овальной асимметричной формы, одна сторона выпуклая, другая уплощена. Оболочка гладкая, бесцветная, многослойная. Внутри яйца зародыш — на разных стадиях развития, вплоть до личинок. Размер 50—60 X 20— 30 мкм.

Анкилостома (Ancylostoma duodenale). Яйцо овальной формы с тупозакругленными полюсами, с тонкой прозрачной оболочкой, бесцветные. Только что выделившиеся яйца имеют 1—2—4 бластомера. Размер яйца 56—60 X 34—40 мкм.

Некатор ^Mecator americanus). Яйца имеют то же строение и те же особенности, что и яйца анкилостомы, но немного длиннее и yжe (64—76 X 38—40 мкм).

T p и X о с т p о н г и л и д ы (Trichostrongylidae). Яйца удлиненные, с одним слегка заостренным и другим более тупым полюсом. Выделяемые самками сегментированные яйца содержат 8—24 шара дробления (бластомера); размер 30—70 X 40—43 мкм.

Стронгилиды (Strongylidae). Яйца эллипсоидной формы, размером 50—30 мкм. Из отложенных самкой яиц еще в кишечнике человека вылупляются рабдитовидные личинки длиной 200—300 мкм, характеризующиеся двойным расширением пищевода.

M e т а с т p о н г и л и д ы (Metastrongylidae). Яйца эллипсоидной формы, с бугристой оболочкой, содержат развитую личинку. Размер яйца 50—60 X 32—36 мкм.

Г e п а т и к о л a (Hepaticolas hepatica). Яйца коричневого цвета, бо- чонковидной формы, с пробочками на полюсах; скорлупа яйца состоит из 4 оболочек, радиально исчерчена; размер 49—54 x 28—32 мкм.

4 Гангилонема (Gangylonema oulchrum). Яйца прозрачные, с йшстой скорлупой, содержат сформированную личинку; размер 50—67 X 23—37 мкм.

T о к с о кара (Toxascaris Ieonina). Яйца округлой формы с толстой гладкой оболочкой; между оболочкой и зародышевой клеткой имеется слоистость.

Токсокара кошачья (ТохосагатузІах).Яйцаокруглой формы, на скорлупе мелкие ячеистые вдавливания; размер 65^ 77 X 60 мкм.

Аскарида птиц (АзсапсИа§аШ).Яйцаовальные,сероватог0ь цвета, размер 70—86 X 42—51 мкм; внутри яиц находится недиф- ференцированная зародышевая клетка, с обоих полюсов внутренняя полость остается не заполненной зародышем.

Общая характеристика яиц скребней (акантоцефал). Яйца бесцветные, овальной и веретенообразной формы, различной величины (92—105 X 46 мкм), скорлупа состоит из нескольких оболочек, внутри зародыш. Сходны с яйцами гельминтов.

B почве, воде водоемов, осадке сточных вод, в смывах, нечистог тах могут встречаться различные образования, имеющие некоторое сходство с яйцами гельминтов фис. 10). 1

Начинающие лаборанты могут принимать за яйца гельминтов пузырьки воздуха, пыльцу хвойных деревьев, растительные клетки из непереварившейся клетчатки, имеющие подчас толстые двухконтурные оболочки. Однако эти артефакты не имеют четкой внутренней структуры, характерной для яиц гельминтов.

Ha объектах окружающей среды можно обнаружить и споры съедобных губчатых грибов с правильной и четкой структурой, которые напоминают яйца гельминтов, но имеют более мелкие размеры (длина до 9—15 мкм); они значительно меньше яиц власоглавов.

Иногда в препаратах обнаруживаются растительные волоски, принимаемые за личинки Strongyloides stercoralis, но они не имеют характерного для гельминтов строения.

B почве часто могут встречаться яйца мелких клещей — светло- желтого цвета,овальные,крупные,размерами 107—123 X 68—81 мкм.

При исследовании объектов внешней среды необходимо дифференцировать также обнаруживающиеся в них споры, ооцис- ты, крахмальные зерна, имеющие некоторое сходство с яйцами гельминтов.

Общая характеристика личинок нематод. Личинки удлиненные, круглые (на сечении), подвижные, светло-серого цвета или бесцветные, задний конец нередко утонченный, внутренняя структура зернистая, а у личинок старшего возраста выполнена кишечными клетками.

Л и ч и н к и S t r о n g у 1 о i desSt e r с о r a 1 i s имеютдгшну 500 мкм, без чехлика, пищевод занимает около половины длины тела, хвост тупой или разветвленный.

Рис. 10. Организмы, отдельные клетки и различные образования, стимулирующие яйца и личинки гельминтов (для сравнения представлены яйца некоторых гельминтов).

1, 8 — растительная клетка; 2 — спора растений; 3 — спора сморчка; 4 — спора ликоподия; 5 — яйцо коловратки; 6 — пыльца хвойных деревьев; 7 — спора белого гриба; 9 — ооциста кокцидий; 10 — волосок; 11 — Balanfidium coli; 12 — клетка картофеля; 13 — неоплодотворенное яйцо Asc. lumbricoides; 14 — деформированная онкосфера Taeniidae spec.; 15 — яйцо Fasciola hepatica; 16 — яйцо Enterobius

Личинки TrichostrongyIus 8рр.имеютдлинутелаоко- ло 750 мкм. Просвет кишечника не прямой, а зигзагообразный, хвостовой конец закруглен и имеет форму кнопки.

Личинки Necator arnericanus имеютдлинутелаоколо 590 мкм, чехлик заметно исчерчен, особенно в хвостовой части тела, ротовой выступ кажется темным; передний конец тела (но не чех- лика) закруглен подобно концу куриного яйца, передняя часть кишечной трубки такого же диаметра, как бульбус пищевода, хвостовой конец резко заострен.

Л и ч и н к и A n с у 1 о s t о m a d u о d e n a I e имеют длину около 660 мкм, длина чехлика 720 мкм, исчерченность чехлика менее выражена; ротовой выступ менее заметен; передний конец тела (нр не чехлика) тупой, диаметр кишечной трубки меньше, чем бульбус пищевода, хвостовой конец тупой.

Характеристика цист отдельных видов патогенных кишечных простейших. B окружающей среде могут быть обнаружены цистьГ следующих видов патогенных кишечных простейших: дизентерийной амебы, лямблий и балантидий. Bo внешнюю среду выделяются также цисты непатогенных кишечных простейших, имеющих дифференциально-диагностическое значение. K ним относятся цисты кишечной амебы, амебы Гартмана, карликовой амебы, йодаме- ба Бючлии, амебы Мошковского, хиломастикс Меснили. Цисты каждого вида кишечных простейших отличаются друг от друга размерами, строением оболочки, морфологической структурой цитоплазмы и ядра, имеют различное количество ядер в цитоплазме (рис. 11).

Дизентерийная амеба (Entamoebahistolytica).^CTbiHa неокрашенных препаратах округлые, бесцветные, с двухконтурной оболочкой,диаметром 10—15мкм.Средниеихразмеры ll,7il,2 мкм. B свежем препарате заметна бесцветная оболочка. Четырехъядерные цисты размерами до 10 мкм относятся к Entamoeba hartmanni. Ha окрашенных раствором Люголя препаратах хорошо заметны ядра (1—2—4) с расположенной в центре кариосомой и окрашенная в коричневый цвет гликогеновая вакуоль, которая особенно сильно выражена у незрелых (одноядерных) цист. Зрелые цисты имеют 4 ядра. Ha окрашенных железным гематоксилином препаратах цитоплазма серого цвета. B ней содержится по 1—4 ядра с серпообразно расположенными на их внутренней оболочке зернами хроматина и лежащей в центре точечной кариосомой. B цитоплазме незрелых цист четко контролируются гликогеновая вакуоль в виде светлого пятна и палочковидные с закругленными концами хроматоидные включения черного цвета, размеры и количество которых у отдельных цист варьируют. Хроматоидные включения обнаруживаются у 10—50 % цист гистолитической амебы.

Лямблия (Lamblia intestinalis). Цисты овальные, размером 10,8—16 X 6,7—10,8 мкм, средний их размер 8,3 X 11,9 мкм. Оболоч-

Рис. 11. Цисты кишечных простейших.

_3___ кишечной амебы; 4—6 — дизентерийной амебы; 7—9 — амебы Гартмана;

0nrl2 — подамебы Бючлии; 13—15 — карликовой амебы; 16—18 — лямблии;

Балантидий (Balantidium coli). Цистыокруглые, размером' 40—60 мкм, оболочка толстая, двухконтурная. 1

Ha окрашенных препаратах хорошо видны макронуклеус, а иног* да и вакуоли.

Цисты непатогенных кишечных простейших. K и ш e ч н а я а м e«

б a (Entamoeba coIi). Цисты округлые, размером 14—20 мкм, имеют бесцветную хорошо заметную оболочку, содержат 1—2—4—8 ядер, гликогеновую вакуоль, иногда хроматоидные тельца с заостренными концами. Зрелые цисты имеют 8 ядер. Вакуоли выявляются в нативных и окрашенных раствором Люголя препаратах.

Карликовая амеба (ЕпбоНтахпапа).Цистысферические, овальные, иногда неправильной формы, размер 5—8 мкм, содержат 2—4 ядра, кариосома в ядрах цисты обычно прилегает к ядерной оболочке.

И о д а м e б а Б ю ч л и и (Jodamoeba butschlii). Цисты сферические, овальные или неправильной формы, размером 8—16 мкм, содержат 1, а иногда 2 ядра, прилегающие к оболочке. Ядро окружено ахроматической зоной. B цитоплазме цисты имеется крупная вакуоль, содержащая гликоген, хорошо видимая на окрашенных препаратах. Раствором Люголя вакуоль окрашивается в интенсивно коричневый цвет.

A м e б a M о ш к о в с к о г о (Entamoeba Moshkovskii). Амеба обнаруживается в сточных водах. Цисты 2—4-ядерные, не отличаются по своему строению от цист дизентерийной амебы.

Хиломастикс Меснили (ChilomastixMesnili).4HCTbi грушевидной формы, размером 5—10 X 4—6 мкм, оболочка толстая. B окрашенной цисте заметно ядро с разбросанным хроматином и кариосомой, которое располагается сбоку от вертикальной оси.

Клетки, симулирующие кишечные простейшие, бластоцистис (Blastocystis hominis) могут напоминать цистные формы кишечных простейших неопределенного вида (рис. 12).