Отбор овощей на гельминты

Вы здесь

Исключение паразитарного загрязнения окружающей среды (почвы, водоемов и т.д.) очень важно для профилактики паразитарных заболеваний. Возможным фактором передачи таких заболеваний может оказаться плодоовощная, плодово-ягодная и растительная продукция, загрязненная яйцами и личинками гельминтов и цистами патогенных простейших.

Санитарно-паразитологический контроль за выращиваемой продукцией, включающий проведение санитарно-паразитологических исследований, осуществляют по рабочей программе (плану) производственного контроля, утвержденного руководителем (юридическим лицом, индивидуальным предпринимателем) сельскохозяйственной фермы, производства и т.д.

Юридические лица, индивидуальные предприниматели проводят санитарно-паразитологические исследования по договорам с учреждениями, имеющими в своем составе аккредитованные и (или) лицензированные лаборатории. У лабораторий должны быть санитарно-эпидемиологические заключения о возможности проведения работ с возбудителями инфекционных заболеваний ПНУ групп патогенности и гельминтами в порядке, регламентированном нормативными документами.

Исследования проводятся в соответствии с календарными графиками отбора проб продукции. В графике указывают количество контролируемых проб и периодичность их отборапо видам производимой продукции с указанием точек отбора проб.

В организациях торговли, общественного питания, на базах, складах санитарно-паразитологические исследования проводят только с целью Госсанэпиднадзора.

Как проводится отбор проб плодоовощной, плодово-ягодной и растительной продукции для проведения санитарно-паразитологических исследований? Пробы для исследования отбирают от каждой партии. Партией считается количество плодоовощной и растительной продукции одного вида, доставленное по одному документу о качестве, транспортной накладной и другим сопроводительным документам.

Отбор проб при выращивании в закрытом и открытом грунте осуществляют в период достижения товарного вида (перед началом сбора урожая при массовой реализации). Виды выращиваемой продукции и сроки созревания указываются при паспортизации объекта.

Для санитарно-паразитологического анализа на наличие возбудителей паразитарных болезней - яиц, личинок гельминтов (аскариды, власоглава) и цист кишечных патогенных простейших - отбирают объединенную пробу, состоящую из трех точечных проб от партии или объекта (поле, теплица, овощехранилище, потребительская тара) одного вида плодоовощной или растительной продукции методом случайной выборки в соответствии с нормативными документами (табл. 1, 2).

Объем объединенной пробы плодов, овощей должен составлять не менее 0,5 кг каждого вида одноименной продукции при количестве продукции в партии от 100 до 500 кг. При партии свыше 500 кг отбирают 0,5 кг с каждых 500 кг продукции.

Объем объединенной пробы столовой зелени, листовых овощей, грибов и т.п. должен составлять не менее 0,1 кг из каждой потребительской тары.

При отборе проб перед реализацией продукции непосредственно на производстве по выращиванию продукции (теплица, поле) отбирают по 0,1 кг с каждых 50 м2 объекта.

Отбор проб у капусты, салатов допускается с поверхностных листьев (прикорневых).

Отбор проб в виде смыва с поверхности допускается только с наземных плодов и бахчевых крупных размеров с гладкой поверхностью (арбузы, тыквы и т.п.).

Отбор проб ягодной продукции проводят по 0,2 кг с каждых 100 кг продукции и (или) по 2 ед. упаковки (рафасовки) из разных мест транспортной тары.

Порядок отбора проб

При производственном контроле за выращиваемой продукцией отбор проб производят перед реализацией продукции (торговым, заготовительным организациям, организациям общественного питания, поставщикам или непосредственно населению), с учетом утвержденных планов-графиков. По эпидемиологическим показаниям отбор проб производится во внеплановом порядке, исходя из сложившейся эпидемиологической обстановки на территории, по предписанию Роспотребнадзора.

Таблица 1

Отбор проб свежих и свежемороженых плодов, ягод, овощей, столовой зелени

Объем объединенной пробы для исследований

Столовая зелень: укроп, петрушка, зеленый лук, сельдерей, лук-перо и т. п.

Листовые овощи: салаты, шпинаты, щавель, капуста салатных сортов, разные травы, употребляемые в пищу

Грибы: собранные для реализации из природных биотопов и искусственно выращенные

Овощи: капуста, кочанный салат

огурцы, салаты, перец сладкий, картофель, свекла, морковь, лук репчатый

С 10-15 экз., верхние и прикорневые листья 0,5 кг

бахчевые: дыни, арбузы, кабачки и т.п. (с гладкой поверхностью)

Смыв с поверхности 20-25 экз.

Плодоовощная ягодная продукция: яблоки, груши, вишни, слива, авокадо, хурма, инжир, цитрусовые, земляника, клубника, малина и т.п.

Орехи: без скорлупы (очищенные)

0,1 кг или 1-2 ед. упаковки (расфасовки)

Таблица 2

Отбор проб готовой плодоовощной продукции, кулинарныхизделий, соков, напитков

Объем объединенной пробы для исследований

Сухие овощи, картофель, фрукты, ягоды (в т. ч. дикорастущие)

0,1 кг или 1-2 ед. упаковки (расфасовки)

Полуфабрикаты овощные, фруктовые, плодово-ягодные свежие и свежемороженые

Соки, нектары, напитки, концентраты овощные и фруктовые, ягодные, фруктово-ягодные свежеотжатые, реализуемые без хранения

1-2 ед. упаковки или не менее 100 мл

Напитки овощные и фруктовые, ягодные, фруктово-ягодные, не пастеризованные и без консерванта со сроком годности 30 сут

Хранение и доставка проб для исследования

Перед доставкой в испытательную лабораторию пробы упаковывают в полиэтиленовые пакеты или другую герметично закрывающуюся тару (контейнеры и др.), снабжают этикеткой и сопроводительными документами (акт отбора проб, направленных на исследования).

До исследования пробы свежей продукции необходимо хранить в холодильнике при температуре 4 °С в доставленной упаковке или в полиэтиленовых пакетах. Срок исследования зависит от объема проб, но не может составлять более 10 сут.

Свежемороженую продукцию следует хранить при температуре морозильной камеры в соответствии с видом продукта и (или) маркировкой на этикетке. Многократное размораживание не допускается.

Доставленные пробы готовой продукции - соки, напитки и т.п. - необходимо хранить в соответствии с видом продукта и (или) рекомендациями изготовителя, обозначенными на этикетке.

Кулинарные изделия из сырых овощей и фруктов, салаты и другие полуфабрикаты хранению не подлежат, их исследуют в день доставки в лабораторию.

Исследование продукции с отбором проб методом смывов

При исследовании на гельминты крупных наземных плодов, овощей, бахчевых с гладкой поверхностью можно применять метод смыва.

Для каждой группы исследуемых объектов (одноименных продуктов от партии) берут отдельную пробирку и кисточку, которые соответственно нумеруют. Центрифужные пробирки устанавливают в штативы, в каждую наливают по 4-5 мл 20%-ного раствора глицерина и помещают кисточку.

Кисточкой, смоченной в растворе глицерина, многократно и с нажимом делают смывы с поверхности 10-15 экземпляров одноименного продукта с таким расчетом, чтобы общая площадь смыва составляла 0,5-1 м2. При этом после каждого смыва кисточку ополаскивают в одноименно пронумерованной пробирке и отжимают о края пробирки. После смывов кисточки вкладывают в пробирки и доставляют в лабораторию.

Нормативные документы, регламентирующие работу по профилактике паразитарных болезней и лабораторному контролю продукции:

Настоящие методические указания устанавливают основные исследования проб плодоовощной, плодово-ягодной и растительной продукции, а также полуфабрикатов и готовой продукции, выработанных на их основе, по показателям паразитарной безопасности, проводимые лабораториями с целью государственного санитарно-эпидемиологического надзора, производственного контроля и сертификации.

2.1. Производственный санитарно-паразитологический контроль за выращиваемой продукцией, включающий проведение санитарно-паразитологических исследований, осуществляют по рабочей программе (плану) производственного контроля, согласованной с главным государственным санитарным врачом (заместителем главного врача) территориального центра Госсанэпиднадзора и утвержденной руководителем организации.

2.1.1. В производственной рабочей программе (плане) предусматривают:

- перечень должностных лиц (работников), на которых возложены функции по осуществлению производственного санитарно-паразитологического контроля;

- перечень должностей работников, подлежащих медицинским осмотрам на кишечные гельминтозы и протозоозы в соответствии с законами и иными нормативными правовыми актами Российской Федерации, законами и иными нормативными правовыми актами субъектов Российской Федерации, нормативно-методическими документами в области обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия населения;

- организацию медицинских осмотров (личные медицинские книжки), профессиональную гигиеническую подготовку и аттестацию персонала;

- календарные графики отбора проб продукции и проведения их исследования (испытания), согласованные с территориальными центрами Госсанэпиднадзора;

- количество контролируемых проб и периодичность их отбора по видам производимой продукции с указанием точек отбора проб;

- определение порядка передачи информации по результатам анализа санитарно-паразитологических исследований;

- соблюдение требований санитарных правил и нормативно-методических документов (наличие этих документов у юридических лиц и индивидуальных предпринимателей в соответствии с осуществляемой ими деятельностью) с разработкой и реализацией санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий, направленных на устранение выявленных нарушений;

- порядок и условия санитарно-паразитологического контроля за поливной водой, почвой, удобрениями в соответствии с нормативно-методическими документами;

2.1.2. Санитарно-паразитологические исследования юридические лица и индивидуальные предприниматели проводят на базе производственных лабораторий, при их отсутствии - по договорам с другими лабораториями, аккредитованными и (или) лицензированными, имеющими санитарно-эпидемиологическое заключение о возможности проведения работ с возбудителями инфекционных заболеваний III - IV групп патогенности и гельминтами в порядке, регламентированном нормативными документами.

2.1.3. При выявлении возбудителей паразитарных болезней производители (юридические лица и индивидуальные предприниматели) обязаны своевременно информировать территориальные центры Госсанэпиднадзора и принять меры, направленные на обеззараживание плодоовощной и растительной продукции и устранение источника загрязнения инвазионным материалом. Методы и способы дезинвазии продукции согласовывают с территориальными центрами Госсанэпиднадзора.

2.1.4. Контролируемые показатели паразитарной безопасности плодоовощной, плодово-ягодной и растительной продукции должны соответствовать гигиеническим нормативам.

2.1.5. В организациях торговли, общественного питания, базах, складах санитарно-паразитологические исследования проводят только с целью осуществления государственного санитарно-эпидемиологического надзора.

3.1. Пробы для исследования отбирают от каждой партии (партией считается количество плодоовощной и растительной продукции одного вида, доставленное по одному документу о качестве, транспортной накладной и других сопроводительных документов).

3.1.1. Отбор проб при выращивании в закрытом и открытом грунте осуществляют в период достижения товарного вида (перед началом сбора урожая для массовой реализации). Виды выращиваемой продукции и сроки созревания указывают при паспортизации объекта.

3.2. Для санитарно-паразитологического анализа отбирают объединенную пробу, состоящую из трех точечных проб от партии или объекта (поле, теплица, овощехранилище, потребительская тара и т.п.) одного вида плодоовощной и (или) растительной продукции методом случайной выборки в соответствии с ГОСТ и нормативными документами.

3.2.1. Объем объединенной пробы плодов, овощей должен составлять не менее 0,5 кг каждого вида одноименной продукции при количестве продукции в партии от 100 до 500 кг. При партии свыше 500 кг отбирают 0,5 кг с каждых 500 кг продукции.

3.2.3. Отбор проб у капусты, салатов допускается с поверхностных листьев (прикорневых).

3.2.4. Отбор проб в виде смыва с поверхности допускается только с наземных плодов и бахчевых крупных размеров с гладкой поверхностью (арбузы, тыквы и т.д.).

3.2.5. Отбор проб ягодной продукции проводят по 0,2 кг с каждых 100 кг продукции и (или) по 2 единицы упаковки (расфасовки) из разных мест транспортной тары.

Отбор проб свежих и свежезамороженных плодов, ягод, овощей, столовой зелени

Устанавливают основные исследования проб плодоовощной, плодово-ягодной и растительной продукции, а также полуфабрикатов и готовой продукции, выработанных на их основе, по показаниям паразитарной безопасности, проводимые лабораториями с целью государственного санитарно-эпидемиологического надзора, производственного контроля и сертификации.

Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Санитарно-паразитологические
исследования плодоовощной,
плодово-ягодной и растительной
продукции

Методические указания
МУК 4.2.1881-04

1. Разработаны: Институтом медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И. Марциновского ММА им. И.М. Сеченова Минздрава России (Н.А. Романенко, А.И. Чернышенко, Г.И. Новосильцев, В.И. Касьянов, М.Н. Лебедева, С.В. Трифонов, Р.К. Мирзоева), кафедрой паразитологии, паразитарных и тропических болезней МПФ ППО ММА им. И.М. Сеченова (В.П. Сергиев, О.П. Зеля, Е.А. Черникова), Всероссийским НИИ гельминтологии им. К.И. Скрябина (В.В. Горохов, Н.П. Сорокина, А.В. Успенский), Департаментом Госсанэпиднадзора Минздрава России (С.С. Перель, 3.С. Середа), Федеральным центром Госсанэпиднадзора Минздрава России (Т.Н. Цыбина, Т.Г. Сыскова, Т.А. Семенова, А.А. Иванов), центром Госсанэпиднадзора в г. Москве (Н.И. Тимошенко, Е.Г. Белова), центром Госсанэпиднадзора в Московской области (И.Е. Полякова), Тюменским НИИ краевой инфекционной патологии Минздрава России (Т.Ф. Степанова), центром Госсанэпиднадзора в Новгородской области (В.Н. Игнатьева), центром Госсанэпиднадзора в Астраханской области (В.Ф. Постнова), центром Госсанэпиднадзора в г. Санкт-Петербурге (Л.П. Антыкова), центром Госсанэпиднадзора в г. Белгород-Днестровский (Т.Я. Погорельчук, В.А. Олейник), Курским государственным университетом (Н.А. Плехова, С.С. Пехова, Е.А. Дмитриева, О.В. Ходзаева, М.К. Лунева, О.В. Емельянова).

2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г. Онищенко 3 марта 2004 г.

3. Введены впервые.

санитарный врач Российской Федерации,

Первый заместитель Министра

здравоохранения Российской Федерации

Дата введения: с момента утверждения

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Санитарно-паразитологические исследования плодоовощной, плодово-ягодной и растительной продукции

2.1.1. В производственной рабочей программе (плане) предусматривают:

3.2.3. Отбор проб у капусты, салатов допускается с поверхностных листьев (прикорневых).

Отбор проб свежих и свежезамороженных плодов, ягод, овощей, столовой зелени

1 Санитарно-гельминтологические исследования МЕТОДЫ САНИТАРНО- ГЕЛЬМИНТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ 51

2 Справочно-методические материалы по геогельминтозам Введение Cанитарно-гельминтологические исследования это неотъемлемый компонент комплексной оценки санитарного состояния очага/объекта. Лабораторный санитарнопаразитологический контроль является основным и часто единственным способом установить степень риска заражения населения возбудителями гельминтозов. Эванс и Стеффенсон (Evans AC, Stephenson NP, 1995) показали, что, хотя на фоне применения антигельминтных препаратов можно на время незначительно снизить уровень заболеваемости населения кишечными гельминтозами, в условиях риска реинвазии одного лечения недостаточно. Необходимы меры по охране окружающей среды в интенсивных очагах гельминтозов. В первую очередь это обеспечение населения доброкачественной питьевой водой, внедрение систем санитарной очистки населенных пунктов, улучшение мер личной и общественной гигиены. При выборе объектов для санитарно-гельминтологического исследования следует учитывать, имеется ли потенциальная возможность их обсеменения инвазионным материалом. Например, бесполезно изучать обсемененность яйцами гельминтов участков почвы, плотно утрамбованных и постоянно облучаемых солнцем. При санитарно-гельминтологических исследованиях определяют: наличие, вид и жизнеспособность пропагативных стадий геогельминтов; степень загрязнения объекта (общее количество возбудителей в единице объема или массы исследуемого объекта окружающей среды); степень обсемененности объекта (отношение числа положительных проб к числу исследованных проб). Методы санитарно-гельминтологических исследований основаны на применении флотационных растворов солей разной концентрации. Флотационный раствор с более высокой удельной плотностью, чем у яиц гельминтов, позволяет им всплывать и концентрироваться в поверхностном слое. Для методов флотации используют нижеприведенные насыщенные растворы с заданной плотностью (табл. 9). Таблица 9. Насыщенные растворы, используемые для методов флотации Насыщенный раствор Плотность Состав раствора, на 1 л воды Раствор нитрата натрия (натриевой селитры) 1,38 1,40 NaNO г Раствор нитрата аммония (аммиачной селитры) 1,3 NH 4 NO г Раствор Брудастова В свежем растворе: 1,47 1,48; NaNO г, через 24 часа снижается до 1,40 KNO г Раствор тиосульфата (гипосульфита) натрия 1,4 Na 2 S 2 O 3 5H 2 O 1750 г 52

3 Санитарно-гельминтологические исследования Большое значение при выполнении санитарно-гельминтологических исследований имеет правильный отбор проб. Почва Отбор проб Отбор проб почвы для санитарно-гельминтологических исследований производят: во дворах с поверхности (1 3 см); на огородах, в садах, на полях орошения с поверхности и с глубины см. С каждого исследуемого объекта (пробной площадки) отбирается проба массой 200 г, состоящая из 10 точечных проб (по 20 г каждая). Точечные пробы отбирают методом конверта или любым другим способом с учетом того, что каждая проба должна представлять собой часть почвы, типичной для горизонтов или слоев данного типа. Пробы отбирают ножом, совком или шпателем, послойно. При необходимости отбор проб проводят из более глубоких (40 60 см) слоев почвы, также послойно. Пробы помещают в контейнеры с крышками или пластиковые пакеты и маркируют с указанием места отбора, даты, глубины, характера исследуемого участка (в тени или на солнце, состав почвы, наличие растительности и т. д.). Количество и площадь пробных участков на обследуемой территории устанавливают с учетом эпидемиологической значимости данного объекта и его общей площади. Периодичность санитарно-паразитологического исследования почвы зависит от эпидемиологической значимости объекта. Санитарно-гельминтологическое исследование проб почвы при возможности проводят в день доставки их в лабораторию. В остальных случаях пробы хранят в холодильнике при температуре около 5 C (почву без обработки хранят не более 1 месяца). Во время хранения необходимо проводить регулярное (раз в неделю) увлажнение и аэрацию проб для предотвращения пересыхания и развития личинок. Для этого пробы почвы извлекают из холодильника и оставляют на 3 ч при комнатной температуре, при потере влаги увлажняют, а затем вновь помещают в холодильник. Если хранить пробы почвы необходимо длительное время (более месяца), применяют консервирующие средства жидкость Барбагалло или 3%-ный раствор соляной кислоты, которые добавляют к пробе, предварительно поместив ее в стеклянный сосуд или кристаллизатор, и затем хранят пробу в холодильнике. Перед началом исследования объединенную пробу почвы необходимо: очистить от посторонних объектов (корней растений, мелких камней, насекомых, угля и др.); растереть в ступке фарфоровым пестиком; просеять через сито с диаметром ячеек 1 мм. 53

4 Справочно-методические материалы по геогельминтозам Питьевая вода и вода открытых водоемов Для отбора проб воды используют специально предназначенные для этой цели одноразовые или многоразовые контейнеры. Последние изготавливают из материалов, выдерживающих обработку кипячением. Пробы питьевой воды отбирают из водопроводной сети, колодцев, резервуаров, плавательных бассейнов и др. Из открытых водоемов пробы отбирают с поверхности и с различных глубин. Речную воду отбирают в контейнеры емкостью 1,5 2,0 л с интервалом 2 3 минуты. Общий объем проб должен составлять л. Отобранные пробы воды доставляют в лабораторию с предварительной обработкой или без нее. Предварительная обработка осуществляется с целью уменьшить объем доставляемой пробы и может проводиться двумя способами: с применением реактивов (коагулянтов); с применением фильтровальных приборов или фильтров. Метод коагуляции В пробу воды на месте отбора добавляют коагулянт (сульфат аммония, железа или меди в дозе 0,1 0,3 г/л), пробу тщательно перемешивают и отстаивают в течение 1 2 ч. После этого надосадочную жидкость удаляют, а осадок переносят в сосуды емкостью 1 л и доставляют в лабораторию. Метод фильтрации Перед началом фильтрации мембранные фильтры должны быть подвергнуты 10-минутному кипячению в дистиллированной воде для удаления из пор фильтров посторонних частиц, препятствующих оптимальному проведению процесса фильтрации. Исследуемый объем воды с помощью фильтровального устройства пропускают через мембранные фильтры c диаметром пор 3,0 5,0 мкм. По мере замедления процесса фильтрации из-за загрязнения фильтра его заменяют новым, а использованные фильтры с осадком помещают с помощью чистого пинцета в широкогорлую емкость, заливают исследуемой водой в количестве мл для сохранения их во влажном состоянии и отправляют в лабораторию. Хранение и транспортировка проб воды Пробы воды должны быть доставлены в лабораторию в течение 24 часов после отбора. Пробы, не прошедшие предварительную обработку, хранят при температуре С не более двух суток. Концентрированные пробы можно хранить в холодильнике при температуре 2 4 С в течение не более трех суток. Сточные воды Пробы сточных вод отбирают на этапах очистки (механическая очистка, аэро и биостанции, компактные установки) и при выходе с очистных сооружений. Количество сточных вод на одну пробу должно быть не менее 3 л после механической очистки и 10 л во всех остальных случаях. Отдельные порции сточных вод сливают в широкогорлые пластиковые или стеклянные емкости соответствующего объема. Пробы маркируют, регистрируют в журнале и доставляют в лабораторию, где их хранят в прохладном месте не более суток. 54

6 Справочно-методические материалы по геогельминтозам полного покрытия центрифужной пробирки. Через минут стекла снимают, переворачивая нижней поверхностью вверх. На предметные стекла с поверхностной пленкой наносят 1 2 капли 30%-ного раствора глицерина, затем их накрывают гидрофильным целлофаном и микроскопируют. Для обнаружения яиц гельминтов препарат просматривают при увеличении х80, а для определения степени их развития или деформации х400. Для оценки результатов число яиц, обнаруженных в четырех порциях пробы, умножают на 10, получая показатель содержания яиц в 1 кг исследуемой почвы. Эффективность метода колеблется от 59,6 до 83,1%, в среднем составляя 73,0%. Для определения истинной обсемененности почвы яйцами аскарид и власоглава можно использовать поправочные коэффициенты для различных типов почв, предложенные Н.А. Романенко (2000) (табл. 10). Таблица 10. Поправочные коэффициенты для определения истинной обсемененности почв яйцами аскарид и власоглавов Яйца геогельминтов Тип почвы аскарид власоглавов Дерново-подзолистая (супесь) 1,23 1,43 Дерново-подзолистая (суглинок) 1,45 1,50 Торфяно-глоевые 1,84 2,40 Чернозем обыкновенный 1,60 1,85 Чернозем типичный 1,70 2,30 Чернозем выщелоченный 1,43 2,10 Чернозем каштановый (супесь) 1,28 1,95 Чернозем каштановый (суглинок) 1,64 2,15 Аллювиально-лугово-лесная 1,37 1,65 Сероземы 1,39 1,60 Черноземная лесная коричневая 1,49 1,71 Горная лесная бурая 1,54 1,72 Желтоземы 1,79 1,94 Метод Васильковой и Гефтер Из объединенной пробы берут 50 г почвы, помещают в центрифужную пробирку емкостью 250 мл. Одновременно проводят обработку почвы из четырех проб. Отобранные навески заливают 3%-ным раствором щелочи (NaOH, KOH) или 1%-ным раствором стирального порошка без биодобавок в соотношении 1 : 2 и выдерживают в течение 60 минут для размягчения почвы. Содержимое пробирок тщательно перемешивают в течение 5 минут, а затем центрифугируют в течение 5 минут 56

7 Санитарно-гельминтологические исследования при об/мин. Надосадочную жидкость сливают (при исследовании черноземной, торфяной почвы или илового осадка обработку щелочью повторяют, почву промывают от 1 до 5 раз, в зависимости от ее типа, до получения прозрачной надосадочной жидкости). К осадку добавляют насыщенный раствор нитрата натрия (удельная плотность 1,38 1,40) в соотношении 1 : 2, тщательно перемешивают в течение 5 минут и центрифугируют в течение 5 минут при об/мин. Эту процедуру повторяют 3 раза. После каждого центрифугирования раствор над уплотненным осадком сливают в отдельную емкость для дальнейшего фильтрования. Раствор фильтруют через мембранные фильтры с диаметром пор 35 мм. С фильтра делают покровным стеклом соскоб осадка, помещают его в каплю 50%-ного раствора глицерина и микроскопируют. Исследование почвы на личинки гельминтов Метод Бермана Из объединенной пробы берут 20 г почвы и помещают на металлическую сетку, которую устанавливают в аппарат Бермана. Систему закрепляют в штативе, наполняют теплой (45 50 C) водой, затем металлическую сетку с почвой помещают в воронку так, чтобы нижняя часть ее соприкасалась с водой. Воронку с почвой ставят в термостат при температуре 37 C. Личинки гельминтов, обладая термотропностью, мигрируют из почвы через сито в теплую воду и оседают на дно пробирки. Через 3 4 часа осторожно отсоединяют пробирку от воронки, сливают верхний слой жидкости, а осадок переносят в чашки Петри и микроскопируют в стереоскопическом микроскопе (при его отсутствии осадок центрифугируют, надосадочную жидкость сливают, затем осадок переносят на предметные стекла и микроскопируют). Метод Супряги В химический стаканчик помещают 10 г почвы, заливают теплым (40 C) физиологическим раствором так, чтобы он полностью покрывал пробу. Через 20 минут жидкость сливают в чашку Петри и исследуют под стереоскопическим бинокулярным микроскопом. По эффективности этот метод не уступает методу Бермана. Дифференциальная диагностика личинок свободноживущих и паразитических нематод Метод Корта Принцип метода Корта заключается в воздействии на личинки нематод формалином. При этом личинки свободноживущих нематод погибают быстрее, чем паразитические. Личинки помещают в воду, в чашку Петри или на часовое стекло. При добавлении 40%-ного раствора формалина к жидкости с личинками нематод в соотношении 1 : 5 личинки свободноживущих нематод гибнут через 5 8 минут, а паразитические остаются живыми в течение минут, но их подвижность замедляется; при добавлении формалина в соотношении 1 : 25 первые гибнут через 12 минут, тогда как вторые в 95% случаев сохраняют нормальную подвижность. 57

11 Санитарно-гельминтологические исследования температуре C. Чашки Петри следует открывать 1 2 раза в неделю для лучшей аэрации и снова увлажнять фильтровальную бумагу чистой водой. Наблюдения за развитием яиц гельминтов ведут не реже 2 раз в неделю. Отсутствие признаков развития в течение 2 3 месяцев свидетельствует о нежизнеспособности яиц. Признаками развития яиц гельминтов являются стадии дробления, затем деление содержимого яйца на отдельные бластомеры. В течение первых дней развивается до 16 бластомеров, которые переходят во вторую стадию морулу и т. д. Яйца анкилостомид культивируют в стеклянном цилиндре (высотой 50 см и диаметром 7 см), закрытом пробкой. Смесь из равных объемов стерильного песка, древесного угля и испражнений с яйцами анкилостомид, разведенную водой до полужидкой консистенции, осторожно наливают на дно цилиндра при помощи стеклянной трубки. В течение 1 2-суточного отстаивания в темноте при температуре C из яиц выходят сформировавшиеся рабдитовидные личинки, а через 5 7 суток они становятся уже филяриевидными: личинки выползают вверх по стенкам цилиндра, где видны даже невооруженным глазом. Определение жизнеспособности личинок анкилостомид и стронгилид Метод Фюллеборна Личинки анкилостомид и стронгилид культивируют на агаре в чашке Петри с добавлением животного угля. После выдерживания в термостате при температуре C в течение 5 6 часов личинки расползаются по агару, оставляя за собой дорожку из бактерий. Оформление результатов санитарно-гельминтологических исследований объектов окружающей среды Санитарно-гельминтологические исследования регистрируются в специальных журналах с указанием характера материала (вода, почва и др.), места и времени забора, даты доставки и исследования пробы, а также количества материала, взятого на исследование. При микроскопировании подсчитывают число паразитарных патогенов во всем объеме исследуемой пробы, а результат пересчитывают на 1 кг или 1 л пробы. 61

12 Справочно-методические материалы по геогельминтозам Рекомендуемая литература Василькова З.Г. Методы исследования почвы на яйца гельминтов. Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 1948; 2: Крастин Н.И. Методы гельминтологического исследования объектов внешней среды. Лабораторная практика. 1938; 5: Новожилов К. А., Черникова Е. А. Актуальность и совершенствование санитарногельминтологических методов исследования почвы. Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2014; 1: Романенко Н.А., Падченко И.К., Чебышев Н.В. Санитарная паразитология. Москва: Медицина; Хижняк Н.И. Сравнительная эффективность методов исследования почвы на яйца гельминтов. Врачебное дело. 1977; 12: Gnani Charitha V, Rayulu VC, Kondaiah PM, Srilatha Ch. Comparative evaluation of flotation techniques for the detection of soil borne parasites. J. Parasit. Dis. 2013; 37: Integrated guide to sanitary parasitology. World Health Organization, Regional office for Eastern Mediterranean, Regional Centre for Environmental Health Activities. Amman; Mhaskar KS. The diagnosis of hookworm infection. Indian J. Med. Res. 1923; 10:

Читайте также: