Микст гельминтозы в сыворотке крови

Описание

Антитела к антигенам гельминтов (описторхисов, эхинококков, токсокар, трихинелл) lgG — выявление антител, которые вырабатываются иммунной системой в ответ на инфицирование сразу несколькими гельминтами: описторхисов, эхинококков, токсокар, трихинелл.

Описторхоз — одно из самых распространенных паразитарных заболеваний человека, вызываемое гельминтами (печеночные триматоды) из рода Opisthorchis felineus (кошачий сосальщик) и Opisthorchis viverrini (сосальщик Виверры). Заболевание характеризуется длительным течением, поражая, преимущественно, печень, желчный пузырь и поджелудочною железу.

Окончательным источником распространения инфекции является человек, промежуточным — пресноводные моллюски и рыбы из семейства карповых.

Основной путь распространения инфекции — алиментарный, то есть посредством употребления зараженной пищи, а именно сырой или недостаточно обработанной рыбы.

Выделяют две фазы заболевания: острую и хроническую.

Основные симптомы острой стадии заболевания:

  • кожные высыпания;
  • общее недомогание;
  • лихорадка;
  • эозинофилия и лейкоцитоз;
  • ломота в мышцах и суставах;
  • нарушения белкового обмена;
  • субфибрилитет (стойкое повышение температуры тела, в пределах 37–37,9°C в течение нескольких недель);
  • нарушение нормального функционирования желудочно-кишечного тракта.
При хронической фазе заболевания — наблюдается клиническая картина хронического холецистита, гастродуоденита, гепатита, реже панкреатита. На этом этапе после полного избавления от паразитов у пациента остаются необратимые изменения внутренних органов.

В большинстве случаев проявляются нарушения обмена и расстройство нервной системы, анемия, образование иммунных комплексов, снижение защитных сил организма. Гельминты могут вызывать токсические и аллергические синдромы (аскариды, трихинеллы), кровотечения, которые приводят к анемии, травмировать стенку кишечника (анкилостомы), способствовать проникновению патогенных микробов из содержимого кишечника в кровь, закрывать просвет кишки, выводных протоков печени и поджелудочной железы (аскариды). Гельминты используют питательные вещества из кишечника хозяина, что приводит к нарушению обмена веществ и авитаминозам.

Антитела при описторхозе
В ответ на инфицирование гельминтами иммунной системой вырабатываются обеспечивающие иммунный ответ специфические иммуноглобулины классов IgM и IgG.

Антитела класса IgM обнаруживаются в крови через 7 дней после заболевания. Снижение уровня их концентрации наблюдается через 6–8 недель. Иммуноглобулины IgG выявляются на 2–3 неделе и могут обнаруживаться еще на протяжении года. Серологическая диагностика антител в крови относится к ранним методам диагностики при подозрении на инфекцию. При хроническом течении — к вспомогательным методом диагностики.

Антитела к антигенам эхинококка IgG в крови — выявление антител IgG к эхинококкам, которые свидетельствуют о наличии острого или перенесённом в прошлом заболевания.

Эхинококкоз — хроническое паразитарное заболевание, поражающее животных и человека, вызываемое мелкими ленточными паразитическими червями рода Echinococcus granulosis (эхинококк). Заболевание характеризуется хроническим течением, развитием аллергии, а также поражением внутренних органов, зачастую, печени и легких, с образованием эхинококковых кист и развитием серьезных нарушений функций пораженных органов.

Основной путь передачи инфекции — алиментарный, то есть посредством употребления зараженной пищи и воды, обсеменёнными яйцами гельминта.

Источник распространения инфекции — собаки, кошки, лисицы, енотовидные собаки и другие хищники. Промежуточным источником инфекции является больной человек, который не представляет эпидемиологической опасности.

Проникая в организм человека личики эхинококка формируют в печени и легких ларвоцисту — однокамерная киста (стадия развития гельминта). Циста достигает размеров от 1 до 30 см. За 3–10 лет. Лечение, как правило, хирургическое. Исчезновение иммуноглобулинов через 2–3 месяца подтверждает эффективность результата проведенной операции. Увеличение уровня концентрации после снижения является показателем возобновление болезни, в пользу рецидива образования кисты, после кажущегося полного выздоровления. Важно помнить, что у ряда носителей кист с эхинококком антитела не вырабатываются, что затрудняет проведение серологического исследования эхинококка. Низкий уровень антител выявляется на начальной стадии образования кист или на поздней, неоперабельной стадии (на которой нельзя оперировать) заболевания.

Антитела к антигенам токсокар IgG в крови — маркёр инфицирования человека гельминтами (червями), вызывающими заболевание токсокароз, поражающее, преимущественно, печень, легкие, и другие органы с аллергическими проявлениями.

Токсокароз — один из самых сложных и тяжелых заболеваний гельминтозом. Возбудителем заболевания являются личинки нематод собак (Toxocara canis) и кошек (Toxocara cati), которые не характерны для человека.

Источник инфекции — собаки, кошки и грызуны.

Основной механизм передачи — алиментарный, то есть посредством употребления зараженной пищи и воды, обсеменёнными яйцами токсокар, а также при контакте с животными.

При проникновении яиц токсокар в тонкий кишечник из них формируются личинки, которые, могут попадать в печень, легкие, глаза, мозг и другие органы, вызывая разнообразные клинические проявления. Поражение легких вызывает пневмонию, с сухим кашлем и одышкой. При попадании в глаза может вызвать потерю зрения. Характерным признаком токсокароза является высокая эозинофилия. Выявление токсокар в организме человека вызывает затруднение тем, что эти гельминты не достигают половозрелого состояния, и их нельзя обнаружить в фекалиях и дуоденальном содержимом. Диагностика антител в сыворотке крови является эффективным методом диагностики токсокароза и позволяет оценить эффективность проводимого лечения.

Антитела к антигенам трихинелл в крови IgG — маркёр инфицирования человека гельминтами (червями), вызывающими заболевание трихинеллёз. Течение заболевания характеризуется разнообразными клиническими появлениями и аллергическими реакциями.

Трихинеллёз — острое инвазивное (нематодоз) заболевание человека, вызываемый Trichinella spiralis (круглый червь).

Источник распространения инфекции — заражённые домашние животные (свиньи, собаки) и дикие животные (медведи, кабаны).

Механизм заражения — алиментарный, при употреблении недостаточно термически обработанной пищи, инфицированной трихинеллами (шашлык, копчености, сосиски, сырокопченая и варёная колбаса).

Проникая в организм личинки трихинеллы мигрируют в различные органы и ткани, главным образом в поперечно-полосатую мускулатуру. В мышцах личинки инкапсулируются.

Основные клинические симптомы заболевания:

  • длительная лихорадка (на протяжении 1–6 недель);
  • боли в мышцах;
  • потеря аппетита;
  • диарея, тошнота, рвота;
  • отеки век, одутловатость лица;
  • эозинофилия;
  • высыпания на коже;
  • возможные поражения сердечной мышцы и центральной нервной системы.

Иммуноглобулины к антигенам трихинелл в крови IgG синтезируются через 2–3 недели после инфицирования от употребления мяса домашних животных, при инфицировании от мяса диких животных определение антител может наступать через 4–6 недель. Антитела могут выявляться в крови еще на протяжении более 2-х лет. При подозрении на трихинеллез и получении отрицательного результата исследование рекомендуют провести повторно через 2 недели. Увеличение концентрации антител свидетельствует об инфицировании трихинеллами.

Показания
Антитела к антигенам описторхисов в крови IgG. Основные показания к применению: профилактичекие обследования у лиц, проживающих в эндемичных районах (бассейн рек Волга, Иртышь, Обь, Кама), употребление сырой рыбы, хронические холангиты, высокая эозинофилия.

Антитела к антигенам эхинококка IgG в крови. Основные показания к применению: клиническая картина эхинококка, объемные образования в легких и печени, оценка проведенного хирургического удаления эхинококковой кисты, обследование групп риска — (охотники, звероводы, работники кожевенных предприятий, владельцы собак и члены их семей).

Антитела к антигенам токсокар в крови IgG. Заболевание протекает с поражением печени, легких, и других органов с аллергическими проявлениями. Основные показания к применению: подозрение на токсокароз, дифференциальная диагностика других гельминтозов.

Антитела к антигенам трихинелл в крови IgG. Основные показания к применению: сбор анамнеза и клинические признаки трихинеллеза (лихорадка, одутловатость лица, отек век, боль в мышцах, эозинофилия и др.) после употребления мяса диких и домашних животных, являющегося источником заболевания.

Референсные значения: отрицательный результат

Положительный результат:

  • исследование свидетельствует о наличии гельминтоза, однако могут быть ложноположительные результаты при соматических и инфекционных заболеваниях, сопровождающихся обширными деструктивными процессами в пораженных органах (цирроз печени, туберкулез легких и других тканей, онкологические заболевания).
Отрицательный результат:

  • исследование указывает на отсутствие антител к антигенам данных гельминтов у пациента и в большинстве случаев об отсутствии инфицирования. Однако отрицательный результат не может в полной мере исключить инфицирование.
Сомнительный результат:

  • при получении сомнительного результата исследование необходимо повторить через 10–14 дней.
Ложноположительные результаты на эхинококк возможны при появлении неспецифических антител, которые появляются при заболевании печени (цирроз), легких (туберкулез), онкологических заболеваниях, заболеваний, протекающих с деструктивными процессами. Возможны ложноположительные результаты при других гельминтозах — описторхоз, фасцилёз, цистицеркоз.

Определение специфических антител к гельминтам Opistorchis, Toxocara, Trichinella и Echinococcus, используемое для скрининга паразитических заболеваний человека.

Скрининговое обследование на возбудителей описторхоза, токсокароза, трихинеллеза и эхинококкоза.

Синонимы английские

Gastrointestinal parasites screening test;

Screening for Opisthorchiasis, Toxocariasis, Trichinosis, and Echinococcosis.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Opistorchis, Toxocara, Trichinella и Echinococcus – это паразитические черви, являющиеся возбудителями гельминтозов. Описторхоз возникает при попадании в организм плоских червей рода Opistorchis при употреблении зараженной речной рыбы. При этом заболевании преимущественно поражаются желчевыводящие пути и протоки поджелудочной железы. Возбудителями токсокароза являются круглые черви рода Toxocara. При токсокарозе могут вовлекаться самые разнообразные органы, в том числе легкие, глаза, головной мозг и кишечник. Трихинеллез возникает при употреблении мяса, содержащего цисты круглых червей рода Trichinella, и протекает с преимущественным поражением скелетной мускулатуры. Возбудителями эхинококкоза являются ленточные черви Echinococcus granulosus. При этом заболевании может поражаться практически любой орган, в том числе головной мозг, костная ткань, печень, глаза. В этой группе гельминтозов наиболее часто в России встречается описторхоз.

Несмотря на наличие особенностей течения разных гельминтозов, дифференциальная диагностика этой группы заболеваний не может быть осуществлена на основании клинической картины. Кроме того, часто гельминтозы протекают в стертой форме или бессимптомно. Поэтому в основе скрининга гельминтозов лежит лабораторное обследование. Скринингу этой группы гельминтозов подлежат пациенты с наличием в анамнезе указаний на употребление в пищу сырой речной рыбы (описторхоз), сырого мяса (трихинеллёз), а также контактирующие по роду деятельности с зараженными животными, почвой и водой (ветеринары, работники коммунальных служб, садоводы – токсокароз и эхинококкоз). Для идентификации возбудителей используют разные методы, в том числе микроскопический анализ кала на наличие яиц паразитов, микроскопический анализ аспирата дуоденального содержимого и мокроты на наличие личиночных форм, методы молекулярной диагностики, а также серологические тесты. Одним из наиболее точных методов диагностики гельминтозов является иммуноферментный анализ (ИФА), позволяющий определять специфические антитела к разным возбудителям.

Метод ИФА имеет несколько преимуществ по сравнению с анализом кала. С помощью анализа кала паразитов удается выявить только при достаточном их количестве. Напротив, если инфекция носит ограниченный характер, можно получить ложноотрицательный результат. С другой стороны, если гельминтоз протекает тяжело и сопровождается поражением и обструкцией желчевыводящих путей, яйца или личинки паразита могут вовсе не попадать в кишечник и поэтому не определяться в кале. Метод ИФА основан на определении в крови специфических антител к паразитам, что обуславливает его более высокую по сравнению с микроскопией кала чувствительность, которая составляет 91-92 %.

Следует отметить некоторые ограничения метода ИФА. Так, положительный результат исследования не позволяет дифференцировать текущую инфекцию и инфекцию в прошлом. По этой причине исследование не предназначено для оценки эффективности проведенного лечения. Также исследование не позволяет уточнить локализацию процесса. Результат исследования антител к эхинококку будет положительным как при изолированном поражении печени, так и при диссеминированном эхинококкозе. Следует помнить, что титр антител не всегда отражает объем поражения.

Специфичность исследования несколько уступает его чувствительности. Из-за наличия сходств в антигенной структуре этих и других гельминтов иногда могут наблюдаться ложноположительные реакции. По этой причине интерпретацию результата следует производить с учетом дополнительных клинических и лабораторных данных, в том числе результата микроскопии кала.

Так как в исследовании определяют уровень антител, результат анализа в значительной степени зависит от состояния иммунной системы организма. При наличии у пациента иммуносупрессии (ВИЧ-инфекция, прием глюкокортикоидов и других иммуносупрессантов, старческий возраст) возможен ложноотрицательный результат. Следует помнить, что иммуноглобулины класса IgG могут быть определены через 2-4 недели от начала инфекции.

Для этой группы гельминтозов характерна эозинофилия, типичная для всех инвазивных гельминтозов. Также при длительно текущей инфекции могут наблюдаться нарушения показателей общеклинических тестов (признаки мальабсорбции, анемия), поэтому при обследовании пациента с подозрением на гельминтозы из этой группы проводят дополнительные лабораторные тесты.

Для чего используется исследование?

  • Для скрининга описторхоза, токсокароза, трихинеллёза и эхинококкоза.

Когда назначается исследование?

  • При обследовании пациентов с указанием на употребление в пищу сырой речной рыбы (описторхоз), сырого мяса (трихинеллёз), а также контактирующих по роду деятельности с зараженными животными, почвой и водой (ветеринары, работники коммунальных служб, садоводы – токсокароз и эхинококкоз);
  • при оформлении ребенка в детский сад, лагерь, бассейн, при госпитализации;
  • при устройстве на работу декретированных групп населения.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

  • описторхоз, токсокароз, трихинеллёз или эхинококкоз, текущая инфекция;
  • описторхоз, токсокароз, трихинеллёз или эхинококкоз, инфекция в анамнезе;
  • ложноположительный результат (другие гельминтозы).

Что может влиять на результат?

  • Состояние иммунной системы организма;
  • время, прошедшее с момента заражения.


  • Результат анализа следует оценивать вместе с данными дополнительных анамнестических, лабораторных и инструментальных исследований;
  • исследование не позволяет дифференцировать текущую инфекцию и гельминтоз в анамнезе и не предназначено для оценки эффективности лечения;
  • исследование не позволяет определить локализацию и объем поражения.

10 Общий анализ крови

11 Анализ кала на цисты простейших

62 Аскаридозы, ДНК [ПЦР] (кал, мокрота)

22 Ascaris lumbricoides, IgG, титр

86 Anisakis, IgG

15 Гистологическое исследование биоптатов органов и тканей (за исключением печени, почек, предстательной железы, лимфатических узлов)

Кто назначает исследование?

Инфекционист, врач общей практики, педиатр.

1.1. Настоящие методические указания предназначены для специалистов паразитологических, микробиологических лабораторий Роспотребнадзора, медицинских организаций, а также научно-исследовательских институтов (структурных подразделений), осуществляющих лабораторную диагностику паразитарных болезней, а также могут быть использованы организациями, занимающимися лабораторной диагностикой паразитарных болезней, и носят рекомендательный характер.

1.2. В методических указаниях изложен порядок применения методов иммунологической диагностики паразитарных болезней и отбора проб биологического материала.

2.1. Отбор проб, хранение и транспортирование проб.
Общие положения

2.1.1. При иммунологических исследованиях используют биологический материал от людей: кровь, спинномозговую жидкость, кал.

2.1.2. Взятие крови для серологических исследований проводят в утренние часы после 12-часового ночного голодания. Накануне взятия проб крови пациент должен воздержаться от физических нагрузок, приема алкоголя и лекарств. Оптимальным временем для взятия проб крови на лабораторные исследования является промежуток с 7 до 10 часов утра.

2.1.3. Взятие спинномозговой жидкости (СМЖ) не требует определенных временных условий.

2.1.4. Кал для исследований доставляется в лабораторию в день дефекации. Допускается хранение кала в течение ночи при температуре от 2 до 8 °С. Следует избегать примесей мочи, выделений из половых органов.

2.2. Отбор, хранение и транспортирование проб крови

2.2.1. Взятие проб крови на исследование проводит медицинский персонал в процедурном кабинете медицинских организаций.

2.2.2. Для проведения серологических исследований берется венозная кровь в объеме 3 - 5 мл или капиллярная кровь в объеме не менее 1 мл в стеклянные, пластиковые или вакуумные пробирки (вакутейнеры), предназначенные для биохимических и серологических исследований.

При проведении иммунологических исследований на паразитарные болезни используют пробирки без наполнителей и активаторов свертывания крови!

2.2.3. Пробирки этикетируют в соответствии с данными направления на обследование (ФИО, возраст пациента, предварительный диагноз), проставляют дату взятия и номер анализа или используют штрихкодирование пробирки.

2.2.5. Центрифугирование проб крови проводят после полного свертывания крови в пробирках. Время свертывания зависит от типа вакуумных пробирок и составляет 1 - 2 часа. Перед проведением центрифугирования проверяют, все ли пробирки, стаканы для них, вкладыши одинаковы по весу, форме. Для уравновешивания ротора при центрифугировании подбирают одинаковые пары пробирок и каждую из них устанавливают в симметричные противоположные гнезда ротора центрифуги. При непарном количестве проб можно использовать дополнительную пробирку с водой нужного объема. Пробирки центрифугируют в течение 10 - 15 минут при 1000 - 1500 об./мин. При использовании вакуумных пробирок рекомендованная скорость центрифугирования - 3500 об./мин.

После центрифугирования образцы сыворотки переносят в микропробирки. Микропробирки с образцами сыворотки маркируют в соответствии с этикеткой пробирки.

2.2.6. Сроки хранения пробы сыворотки при температуре холодильника (4 °С) - не более 4 дней. Хранение проб сывороток от 7 дней до 1 года осуществляют в замороженном виде при температуре не выше минус 18 °С. Длительное хранение проб (более года) осуществляется при температуре не выше минус 40 °С. Длительное хранение пробы сыворотки приводит к частичной потере активности антител (АТ), особенно иммуноглобулинов класса М (IgM), за счет агрегации неспецифических иммуноглобулинов, что приводит к получению ложноположительных результатов.

2.2.7. Транспортирование замороженных проб сывороток должно происходить при температурных условиях, не допускающих размораживания, с использованием сумки-холодильника, термоконтейнера или термоса со льдом, допускается использовать сухой лед.

2.2.8. Сыворотку перед исследованием необходимо полностью разморозить и тщательно перемешать во избежание нарушения концентрации антител.

2.3. Отбор проб, хранение и транспортирование проб
спинномозговой жидкости

2.3.1. Пробы СМЖ собирают в любое время. Исследование проводят в день доставки материала. При доставке образцов СМЖ в лабораторию в течение 1 ч - пробы не охлаждают, до трех часов - пробы СМЖ следует хранить на льду, но не замораживать. Транспортирование следует осуществлять в термоконтейнере при температуре 4 °С.

2.4. Отбор проб, хранение и транспортирование проб кала

2.4.1. Пробы кала (нативный, без консерванта) для исследования должны быть собраны в чистую сухую стеклянную (пластиковую) посуду с широкой горловиной.

2.4.2. Исследования проводят в день доставки материала в лабораторию или пробы замораживают. Пробы хранят при минус 18 °С до двух недель. Перед проведением исследования образцы необходимо разморозить.

3.1. Иммунологические методы

3.1.1. Иммунологические методы диагностики гельминтозов и протозоозов относятся к косвенным методам, когда выявляются не сами паразиты, а их растворимые антигены (АГ) или специфические антитела, которые вырабатываются в организме инвазированного человека в ответ на поступление антигенов паразитов.

3.1.2. Иммунологические методы являются дополняющими к комплексу паразитологических, клинических и лабораторно-инструментальных методов диагностики паразитарных болезней. В диагностике гельминтозов и протозоозов применяются как методы определения специфических антител, так и методы определения антигенов возбудителей.

Эффективность иммунологических методов исследования зависит от стадии инвазии, количества паразитов в организме, состояния иммунной системы инвазированного человека, особенностей организма возбудителя и места его локализации, а также от иммунохимических характеристик диагностического набора, условий хранения и сроков годности реагентов.

Одним из проявлений иммунного ответа является выработка антител. В ответ на поступление антигенов гельминтов в организме человека вырабатываются антитела всех известных классов. Однако использование иммунологических методов выявления антител при паразитарных инвазиях имеет ряд естественных ограничений: генетическая неоднородность популяционного иммунитета, перекрестные реакции с антигенами человека и возбудителя, наличие у паразитов механизмов защиты от иммунного ответа хозяина (молекулярная мимикрия, антигенная мозаичность, иммуносупрессивное действие). Все это обусловливает возможность регистрации ложноположительных и ложноотрицательных результатов.

Ложноотрицательный результат может быть получен при проведении исследования пробы крови, содержащей низкий уровень антител, например: очень ранняя стадия инвазии, когда уровень специфических антител еще ниже порогового уровня их выявления; при хронической стадии инвазии описторхидами, если не было повторных заражений; при низкой интенсивности инвазии; при легочной локализации эхинококковой кисты, при обызвествлении ее оболочек; на фоне иммунодефицитных состояний вследствие сопутствующих хронических заболеваний или индуцированных приемом медикаментов (антибиотиков, глюкокортикостероидов, химиопрепаратов); при наличии в крови специфических антител и циркулирующих антигенов в эквивалентных количествах, что приводит к их связыванию в иммунные комплексы, не выявляющиеся диагностическим набором; при отсутствии в диагностическом наборе эпитопов антигена на имеющиеся в крови специфические антитела.

3.1.3. Иммунологические методы определения антител к антигенам гельминтов и простейших широко используются для массового обследования населения конкретной территории, для оценки уровня эндемии в отношении какого-то паразита, для выявления групп лиц, находящихся в условиях высокого риска заражения (профессиональных, возрастных и т.д.), для оценки эффективности проводимых оздоровительных мероприятий, а также как вспомогательные методы при постановке диагноза паразитарного заболевания.

3.1.4. Иммунологические методы выявления антител и антигенов гельминтов и простейших: иммуноферментный анализ (ИФА) (иммуноферментный анализ антител, иммуноферментный анализ антигенов, иммуноферментное определение индекса авидности (ИА) антител класса G, иммунный блоттинг), иммунохроматографический анализ (ИХА), реакция непрямой гемагглютинации (РИГА), реакция непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ).

Иммунологические исследования проводят с использованием наборов реагентов, зарегистрированных к применению на территории Российской Федерации в установленном законодательством порядке согласно инструкциям по их применению.

3.2. Иммуноферментный анализ

3.2.3. При динамическом наблюдении больного с целью подтверждения диагноза и контроля эффективности лечения следует проводить повторные исследования ИФА, используя метод постановки парных сывороток крови от одного и того же больного, при котором одновременно исследуют два образца сыворотки крови: первый образец, сохраненный после первичного обследования (хранится в замороженном виде), второй образец - взятый в день повторного исследования.

3.2.4. Набор реагентов для ИФА включает: иммуносорбент - твердофазный носитель с адсорбированным на нем активным ингредиентом системы (антигеном, моноклональными или поликлональными антителами); контрольные тест-сыворотки: диагностические, отрицательные, положительные, для контроля хода реакции и оценки результатов анализа; растворы конъюгатов; растворы хромогена и стоп-реагента; разводящие и отмывающие растворы.

3.3. Иммуноферментный анализ антител к антигенам паразитов

3.3.2. В настоящее время на рынке представлены зарегистрированные ИФА-тест-системы для определения антител разных классов к антигенам аскарид, анизакид, токсокар, трихинелл, описторхисов, клонорхисов, эхинококков, стронгилоидеса, лямблий, токсоплазм.

3.4. Иммуноферментное определение концентрации
аллергенспецифических IgE к антигенам паразитов

3.4.1. Метод является разновидностью иммуноферментного анализа антител к антигенам паразитов.

Принцип метода. Метод основан на применении твердофазного иммуноферментного анализа и проводится в три стадии.

3.4.2. На первой стадии калибровочные образцы с известной концентрацией IgE, контрольный и исследуемые образцы инкубируют в лунках стрипированного планшета с иммобилизованными моноклональными антителами (МКАТ) к иммуноглобулину класса IgE человека. Затем планшет отмывают.

3.4.3. На второй стадии в лунки с калибровочными образцами добавляют биотинилированные антитела к IgE (конъюгат 1), а в лунки с контрольным и исследуемыми образцами вносят соответствующие биотинилированные аллергены. После инкубации планшет отмывают и в лунки планшета добавляют конъюгат стрептавидина с пероксидазой хрена (конъюгат 2).

Метод применяется для повышения эффективности иммунологической диагностики.

3.5. Иммуноферментное определение индекса авидности
антител класса IgG к антигенам паразитов

3.5.1. Определение ИА иммуноглобулинов класса G к антигенам паразитов в сыворотке крови человека может быть использовано для подтверждения диагноза острой инфекции, уточнения сроков инфицирования и дифференцирования острой и хронической стадии инвазии. Авидность характеризует степень прочности связи специфических антител с соответствующими антигенами. При формировании иммунного ответа вначале образуются IgG с низкой авидностью, по мере хронизации инвазии прочность связи, и, соответственно, индекс авидности, увеличивается.

3.5.3. В настоящее время на рынке представлена ИФА-тест-система для определения ИА к IgG, специфичным к антигенам токсокплазм.

3.6. Иммуноферментный анализ циркулирующих
иммунных комплексов, включающих антиген паразита

3.6.2. В настоящее время на рынке представлена ИФА-тест-система для определения ЦИК, включающих антигены описторхисов.

3.7. Иммуноферментный анализ антигенов паразитов

3.7.2. В настоящее время на рынке представлены зарегистрированные ИФА-тест-системы для определения антигенов лямблий, криптоспоридий, энтамебы в фекальных образцах.

3.8. Метод иммунного блоттинга

3.8.1. Метод является модификацией ИФА, в котором антигены нанесены на нитроцеллюлозную мембрану (стрип). Это высокоспецифичный и высокочувствительный референсный метод, подтверждающий диагноз для пациентов с положительными или неопределенными результатами анализов, полученными в других методах.

3.8.2. Принцип метода. В основе теста лежит метод непрямого иммуноферментного анализа на нитроцеллюлозной мембране, на которую методом электропереноса нанесены основные индивидуальные белки искомого возбудителя, полученные при электрофоретическом разделении антигенов. Специфические антитела (при наличии их в исследуемой сыворотке крови) связываются с индивидуальными белками паразита, сорбированными на мембране (стрипе). Полученные иммунные комплексы затем связываются с конъюгатом, ферментативная активность которого приводит к появлению окрашенных полос на стрипе в зонах локализации соответствующих индивидуальных белков паразита. Расположение окрашенных полос на стрипе соответствует молекулярным массам индивидуальных белков.

3.8.3. В настоящее время на рынке представлена тест-система для диагностики эхинококкоза методом иммуноблота.

4.1. Оценку результатов ИФА проводят в том случае, если окраска субстратной смеси в лунках с контрольными образцами соответствует параметрам, указанным в инструкции по применению набора реагентов.

4.2. Исследуемую пробу считают положительной, если значение ее ОП в диагностическом разведении равно или превышает значение ОП диагностического уровня, указанного в инструкции по применению набора реагентов.

4.3. Учет результатов ИФА осуществляют в соответствии с инструкцией по применению тест-системы, в которой даны расчетные формулы для определения положительных и отрицательных результатов исследования.

4.4. При количественном учете результатов исследования к набору прилагается диагностический образец (образцы) с известным количеством антител (или антигенов) и по прилагаемой формуле или по калибровочной кривой вычисляется количество антител (или антигена) в испытуемом образце.

Ниже приведены варианты учета результатов.

4.5. Определение титра антител в анализируемой сыворотке крови.

4.5.1. За титр антител принимают наибольшее разведение испытуемой сыворотки, при котором ее значение ОП равно или превышает значение ОП диагностического уровня. Вычисление диагностического уровня (критическое значение ОП) проводят с помощью формулы и коэффициентов, рассчитанных для каждой серии диагностических наборов и указанных в инструкции к тест-системе, например:

Читайте также:

Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!
При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.

Copyright © Иммунитет и инфекции