Методы диагностики гельминтозов у свиней

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ГЕЛЬМИНТОЗОВ

Прижизненная диагностика. Прижизненный диагноз на гельминтозы всегда должен подтверждаться специфическими методами гельминтологического исследования, которые дают возможность обнаружить гельминтов или их зародышей (яйца, личинки). Исследованию могут подвергаться все выделяемые животными секреты и экскреты - кал, моча, мокрота, носовые истечения, кРовь, содержимое желудка, абсцессов, а также биопсированные кусочки тканей. В практике чаще всего прибегают к исследованию фекальных масс.

Их исследуют тремя методами:

1) методом гельминтоовоскопии,

2) методом гельминтоларвоскопии

3) методом гельминтоскопии.

Методы гельминтоовоскопии. Для обнаружения яиц применяют чаще всего 5 методов, из которых 4 (нативного мазка, Фюллеборна Дарлинга и Щербовича) эффективны для обнаружения яиц нематод и цестод один (метод последовательного промывания) для обнаружения яиц скребней и трематод.

Метод нативного мазка. На обезжиренное предметное стекло наносят каплю 50%-ного глицерина или воды, затем палочкой или спичкой берут небольшое количество фекашлий из различных участков пробы, вносят в эту каплю и тщательно перемешивают до получения равномерной эмульсии. Твердые частицы из капли удаляют, каплю раздавливают покров стеклом и исследуют под микроскопом при малом увеличением. Исследовать надо не менее 10 мазков из каждой пробы.

Метод Фюллеборна. Пробу фекалий в коляН честве 10 г размешивают в ступке со 100-150 мл насыщенности раствора поваренной соли. Полученную эмульсию фильтрунЯИ через марлю в посуду емкостью не менее 100 мл и отстаивайЯ в течение 40-90 минут. За это время яйца гельминтов всплывают на поверхность насыщенного раствора, так как их удельнцЯ вес меньше его удельного веса. Их собирают проволочной петлеЯИ диаметром 0,8-0,9 мм. На петле, соприкасающейся с новерхностыо раствора, должна образоваться тонкая пленка с яйцамвЯ три такие пленки наносят на предметное стекло, покрываюЯ покровным стеклом и просматривают под микроскопом.

Метод Дарлинга. Пробу фекалий весом 3-5 Я размешивают в ступке с водой в количестве одной центрифужной пробирки. Полученную эмульсию фильтруют через марлю в такую же пробирку, доливают водой до верха и центрифугируются в течение 3 минут. Затем жидкость сливают до осадка, осадок размешивают с жидкостью Дарлинга (насыщенный раствор поваренной соли, смешанной в равных частях с глицерином) центрифугируют 5 минут. Затем с поверхности жидкости собирают яйца, наносят их на предметное стекло и исследуют под микроскопом, как и по методу Фюллеборна.

Метод Щербовича. По этому методу препараты готовят так же, как и по методу Дарлинга, но вместо жидкостям Дарлинга применяют насыщенный раствор сернокислой.

Метод последовательного промывания. Пробу материала весом 5 г размешивают с водой: полученную эмульсию фильтруют через марлю в чашку Петри и дают от строиться в течение 5 минут. Затем жидкость сливают, а к осадку опять приливают чистую воду до краев чашки. Так, промывание повторяют до тех пор, пока вода над осадком не будет прозрачной. После этого осадок просматривают под микроскопом в этой же чашке Петри или переносят на большое компрессорное стекло.

Методы гельминтоларвоскопии. Для обнаружения личинок ГЕЛЬМИНТОВ применяют следующие методы гельминтоларвоскопии. Метод Бермана. На нижний конец воронки (10 см в диаметре) надевают резиновую трубку (10-15 см длины), свободны конец которой опускают в центрифужную пробирку, о воронку наливают теплую воду (40° С) и опускают в нее 5-10 г материала, помещенного на ситечко или марлю. Через 2-12 часов, когда личинки, выйдя из фекалий, осядут на дно пробирки, резиновую трубку плотно зажимают у края пробирки пальцами и осторожно вынимают из пробирки. Содержимое пробирки быстрым движением руки сливают, а оставшееся небольшое количество жидкости на дне пробирки выливают на компрессорные стекла и исследуют под микроскопом.

Метод Вайда. Берут 3-4 шарика фекалий, помещают на часовое или предметное стекло и овлажняют небольшим количеством воды, подогретой до 40° С. Через 15-20 минут фекалии удаляют, а жидкость исследуют под микроскопом.

Метод гельминтоскопии. Этим методом пользуются для обнаружения члеников цестод и для учета эффективности дегельминтизации. Фекалии разбавляют водой в 5-10 раз в любом сосуде. Тщательно размешивают и оставляют стоять до прекращения движения крупных частиц. Затем помутневшую воду сливают, а к осадку приливают чистую и тщательно взбалтывают. И так повторяют до тех пор, пока вода над осадком станет прозрачной. Чистый осадок просматривают порциями на темных и белых кюветах вначале невооруженным глазом, а затем под лупой, помещая осадок в чашки Петри.

Посмертная диагностика. Наилучшим способом посмертной диагностики гельминтозов является метод полных и неполных гельминтологических вскрытий. Сущность его заключается в изолированном и тщательном исследовании каждого органа и каждой ткани. Сняв кожу, осматривают подкожную клетчатку, потом вскрывают грудную и брюшную полости, извлекают органы, размещают их в соответствующую посуду, а полости тщательно осматривают. Собирают для исследования всю кровь, вынимают мозг, вылущивают глаза и т. д. Внутренние органы осматривают с поверхности, и если они имеют просветы, вскрывают их. Макроскопически исследуют серозную и слизистые оболочки, со слизистой оболочки делают соскоб тупой стороной ножа и исследуют его и содержимое органа методом гельминтоскопии. Паренхиматозные органы вскрывают по ходам, делают соскоб со слизистых оболочек и исследуют его компрессорным способом, а органы заливают водой и разминают пальцами на мелкие кусочки. Измельченные органы оставляют в воде на 3-% часа, после чего исследуют по методу гельминтоскопии, просматривая осадок макроскопически на кюветах и под лупой. Все остальные органы исследуют или методом гельминтоскопии или компрессорно.

Неполные гельминтологические вскрытия сводятся к макроскопическому обследованию отдельных органов.

Консервирование паразитических червей.
Собранных Паразитических червей сохраняют в консервирующих жидкостях Трематод, цестод и акантоцефалов помещают этиловый спирт, нематод в жидкость Барбагалло (3%-ный раствор формалина на физиологическом растворе). Внутри посуды (лучше плоскодонные пробирки, банки), где хранятся гельминты, помещают этикетку, на сторонах которой помечают простым карандашом):

1) вид животного, название органа, где найдены, и их количество;

2) место и дату вскрытия, фамили собравшего материал.

Для определения видовой принадлежности гельминтов иН просветляют: цестод, трематод, акантоцефалов - в 50%-ном глицерине; нематод - в молочной кислоте. При этом толстых, плотных гельминтов предварительно выдерживают под прессом. При необходимости проводится специальное окрашивание цестод, трематод и акантоцефалов.

Наиболее точно гельминтозы диагностируются посмертно. Поэтому в практике нередко используют метод диагностических вскрытий, для чего мелких животных, подозрительных в заболевании, подвергают обычным методам патологоанатомических вскрытий. На трупах животных гельминтозы, вызываемые визуально заметными гельминтами соответствующего вида, особенно при высокой интенсивности инвазии, без особых затруднений диагностируются и при обычных методах паталогоанатомических вскрытий. Но гельминтозы, вызываемые мелкими гельминтами и при том рассеянными в различных органах и тканях животных, обычными методами патологоанатомических вскрытий не всегда могут быть точно диагностированы. Для этого необходимо сочетать метод патологоанатомических вскрытий со специальными гельминтологическими методами вскрытий трупов и органов животных, предложенными впервые академиком К.И. Скрябиным.

Известны следующие модификации гельминтологических вскрытий трупов и органов животных — метод:

• 1) полных гельминтологических вскрытий трупов, органов и тканей животных;
• 2) парциальный — полных гельминтологических вскрытий трупов, органов и тканей животных;
• 3) полных гельминтологических вскрытий отдельных органов;
• 4) неполных гельминтологических вскрытий.
• 1. Метод полных гельминтологических вскрытий трупов, органов и тканей животных. Этот метод применяется только в научно-исследовательской работе. Он довольно трудоемкий, требует затрат времени и трудно применим в условиях производства. Сущность этого метода заключается в следующем. После снятия кожи тщательно осматривают ее и подкожную клетчатку. Обнаруженных при этом гельминтов собирают в отдельную посуду, заполненную физиологическим раствором поваренной соли, а затем, по окончании вскрытия, фиксируют соответствующей жидкостью (жидкостью Барбагалло — нематод, 70° спиртом — гельминтов других классов) и хранят в ней для последующего диагностирования. Затем труп животного вскрывают согласно патологоанатомической методике, извлеченные из грудной и брюшной полостей органы, не нарушая их целостности, помещают каждый в отдельную посуду, этикетируют, а затем вскрывают.

Трубчатые органы, находящиеся в отдельных емкостях (тазики, баки, кюветы и т.п. с водой), разрезают по всей длине ножницами.

Содержимое органов смывают в ту же емкость, внутреннюю поверхность органа хорошо промывают в нем же, делают со слизистой оболочки соскоб тупым краем ножа и выбрасывают с последующей утилизацией. Оставшееся содержимое емкости сливают в новую емкость, но уже цилиндрической формы, доливают воды и оставляют отстаиваться в течение не менее 20 минут. Затем верхний слой жидкости сливают, а к осадку добавляют новую порцию воды, вновь отстаивают, сливают и повторяют такие процедуры до тех пор, пока надосадочная вода не будет прозрачной.

Трубчатые части паренхиматозных органов (желчные ходы печени, бронхи легких) тоже вскрывают ножницами в емкостях с водой или физиологическим раствором, а паренхиму органов разрывают руками на мелкие кусочки. Полученную массу сливают для отстаивания в цилиндрической формы посуду, отстаивают и подвергают обработке также способом последовательных сливов.

Хорошо отмытые осадки (матриксы) исследуют затем малыми порциями последовательно в черных и белых кюветах или чашках Петри на черном и белом фоне, обнаруживаемых гельминтов собирают в банки или пробирки с водой для отмывания. Матрикс, осмотренный сначала невооруженным глазом, исследуют затем при 10-кратном увеличении лупы. Обнаруживаемых при этом гельминтов помещают в ту же посуду для отмывания в воде. По окончании исследования всего матрикса какого-то органа обнаруженных гельминтов определяют до класса, сосчитывают, помещают в отдельные пузырьки или пробирки, фиксируют и этикетируют.

Органы от мелких животных исследуют компрессионным или сухим способом. Для этого весь орган (например, глаз мышки) или кусочек, отрезанный от какого-то органа (кусочек легкого), помещают на стеклянную пластинку, покрывают другой такой же пластиной, раздавливают между ними исследуемую ткань и в сдавленном состоянии просматривают под препаровальной лупой или микроскопом при малом увеличении. При обнаружении гельминтов верхнее стекло снимается, паразит извлекается из ткани, омывается в воде, а затем, как обычно, фиксируется.

По окончании исследований всех органов результаты вскрытия записывают в журнал вскрытий, обнаруженные гельминты фиксируются, на флаконы с паразитами помещаются этикетки, на которых простым карандашом обозначаются: вид животного, подвергшегося вскрытию, номер, под которым произведено вскрытие, орган, в котором обнаружены гельминты, название класса (или вида), к которому они отнесены, и число экземпляров гельминтов. На тыльной стороне этикетки обозначают дату, место и фамилию лица, произведшего вскрытие.

2. Парциальный метод полных гельминтологических вскрытий.

Техника вскрытий этим методом такая же, как и методом полных гельминтологических вскрытий, но исследованию подвергается не весь матрикс, полученный от вскрытия того или иного органа, а лишь его часть (1/4, 1/10), что значительно ускоряет процесс исследования и сокращает время на его производство.

Владельцы патента RU 2386417:

Изобретение относится к области ветеринарии. Для исследования берут 1 г фекалий свиней и размешивают в 13 мл комбинированной флотационной жидкости. Флотационная жидкость состоит из насыщенного раствора NaCl (420 г на 1 л) и сахара (1670 г на 1 л), взятых в соотношении 6:1. Затем взвесь фильтруют и центрифугируют в течение 2 минут при 1500 об/мин, после чего микроскопируют поверхностную пленку. Способ позволяет быстро поставить диагноз, одновременно выявить яйца гельминтов при ассоциативных инвазиях, обладает высокой диагностической эффективностью, дает возможность экономить компоненты флотационной жидкости. 1 табл.

Данное изобретение относится к области ветеринарии и связано с разработкой копрологического метода диагностики кишечных гельминтозов свиней.

Кишечные гельминтозы свиней причиняют большой ущерб животноводству, который складывается из снижения продуктивности, ухудшения вкусовых качеств мяса из-за резкого снижения содержания аминокислот, витаминов, макро- и микроэлементов. Большинство половозрелых гельминтов, в том числе и желудочно-кишечного тракта, локализуются в просвете кишечника, а их личиночные стадии - в легких, в глубоких слоях кишечника и других органах. Животные, пораженные кишечными гельминтозами, выделяют во внешнюю среду огромное количество яиц и личинок с яйцами.

Основой специфической профилактики гельминтозов у животных являются профилактические и легочные дегельминтизации, целесообразность проведения которых определяется результатами гельминтокопроскопических исследований.

Для диагностики кишечных гельминтозов свиней применяются различные методы.

1. Метод Фюллеборна. При этом методе пробу фекалий весом 3-5 г помещают в стакан, заливают небольшим количеством флотационной жидкости, тщательно размешивают, затем добавляют 50-100 мл этого раствора и процеживают через металлическое сито или марлю в один слой в сухой чистый стакан. Взвесь отстаивают 40-60 мин, затем прикосновением петли снимают поверхностную пленку, переносят ее на предметное стекло для микроскопирования [1].

Недостатком метода является то, что флотация яиц происходит длительно (40-60 минут) и метод является недостаточно эффективным.

2. Метод Котельникова-Хренова. Техника проведения этого метода аналогична методу Фюллеборна, но в качестве флотационной жидкости применяется нитрат аммония (техническая гранулированная аммиачная селитра), используемый как удобрение [2].

Недостатком этого метода является то, что из-за сверхнасыщенности флотационного раствора из аммиачной селитры происходит быстрое высыхание и кристаллизация капель на предметном стекле, что затрудняет просмотр материала и в конечном итоге отрицательно влияет на эффективность исследований.

3. Метод Маллори [3] также по технике схож с методом Фюллеборна, но в качестве флотационного раствора используется насыщенный раствор сахара.

Недостатком этого метода является то, что раствор сахара является густым, при этом происходит неполное всплывание яиц гельминтов. Также следует отметить, что просмотр капли на предметном стекле при микроскопировании затруднен, что также связано с густотой флотационного раствора, состоящего из сахара.

Два этих недостатка значительно снижают ценность и эффективность данного метода.

4. Метод Котельникова-Вереничева с хлоридом цинка [4] заключается в следующем: пробу фекалий величиной с грецкий орех помещают в 40-60 мл воды и тщательно размешивают до появления равномерной взвеси. При постоянном помешивании взвесь процеживают через металлическое сито или марлю в чистый стакан. После 5 минут отстаивания надосадочную жидкость сливают. На дне оставляют такое количество взвеси, которое бы вместилось в центрифужную пробирку и центрифугируют 1-2 минуты при 3000 об/мин, после чего всю жидкость до осадка сливают, а к осадку добавляют насыщенный раствор хлорида цинка. Осадок взбалтывают до получения взвеси и снова центрифугируют 1-2 минуты при 1500 об/мин. После этого металлической петлей снимают поверхностную пленку, переносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом.

Недостатком этого метода является то, что после центрифугирования из-за большого удельного веса флотационной жидкости (1,82) вместе с яйцами гельминтов поднимаются на поверхность и непереваренные частицы корма, что затрудняет просмотр материала и в конечном итоге снижает диагностическую эффективность.

Также следует особо подчеркнуть, что используемый в качестве флотационной жидкости насыщенный раствор хлорида цинка является токсичным химическим соединением.

Задача изобретения - разработка способа диагностики гельминтозов свиней в целях определения истинной гельминтологической ситуации для проведения соответствующих лечебно-профилактических мероприятий в исследуемых группах.

Способ диагностики гельминтозов свиней проводится по следующей схеме. Вначале готовят комбинированную флотационную смесь из двух ингредиентов 1. В 1 л кипящей воды растворяют 420 г натрия хлорида (ρ=1,19). 2. В 1 л кипящей воды растворяют 1670 г сахара. Плотность раствора - 1,28. Для получения комбинированной флотационной жидкости эти растворы смешивают в соотношении 6:1.

Плотность комбинированной флотационной жидкости должна составлять 1,23.

С каждой пробы пинцетом берут фекалии массой 1 г, кладут в цилиндрический стакан (объемом 50 мл), с помощью дозатора заливают 5 мл флотационной жидкости и тщательно размешивают палочкой до получения гомогенной взвеси. При постоянном помешивании добавляют остальную часть раствора, доводя объем до 13 мл. Полученную суспензию фильтруют через сито в другой стаканчик. Содержимое переливают в центрифужную пробирку и центрифугируют при 1500 об/мин в течение 2 мин. После прикосновения петли к поверхностной пленке взвеси снимают три капли на предметное стекло для микроскопирования.

Пример. Сравнительное изучение диагностической эффективности флотационного метода Фюллеборна и нового способа диагностики гельминтозов у свиней проводилось в 2006-2008 годах на 8 группах свиней разного возраста и пола в количестве 541 голов.

Полученные результаты приведены в таблице.

Новым способом диагностики гельминтозов у этих же исследованных 68 животных выделены в 34 пробах (50,0%) яйца аскарисов, в 51 пробах (75%) яйца эзофагостом и в 13 пробах (19,1%) яйца трихоцефал. Следовательно, с помощью нового метода выявлено яйца аскарисов больше на 26,5%, эзофагостом на 33,8% и трихоцефал на 11,7%.

Кроме того, эти исследования также показали, что кишечные гельминтозы свиней в данном хозяйстве представлены 3 видами гельминтов: аскарисами, эзофагостомами и трихоцефалами.

В этом же районе в КП им. Тукая исследовали пробы фекалий от 110 свиней на откорме, которые ранее также не были обработаны против гельминтов. Исследования показали, что в кишечнике у животных данной группы паразитируют аскарисы и эзофагостомы, а диагностическая эффективность нового метода выше, чем известного. Например, методом Фюллеборна из 110 проб выявлено яиц аскарисов в 8 случаях (7,3%), эзофагостом в 25 случаях (22,7%). Новым методом выявлено зараженных аскарисами больше на 10,9%, а эзофагостомами на 28,2%.

3-х возрастных групп (поросята отъемыши, свиноматки и свиньи на откорме), которые ранее не подвергались дегельминтизации. Путем гельминтоовоскопии 98 проб фекалий у свиней на откорме было установлено наличие в их кишечнике гельминтов 3-х видов (см. табл.). В этой группе новым способом диагностики гельминтозов выявлено больше, чем существующим методом, аскарисов на 26,2%, эзофагостом - 41,6% и трихоцефал - 17,8%.

Таким образом, исследования, проведенные с пробами фекалий, взятыми от 541 свиней 8 половозрастных групп из 5 хозяйств различных районов РТ, показали, что методом Фюллеборна яиц аскарисов выявлено у 13,9%, эзофагостом у 34,0%, трихоцефал у 5,7% животных. Новым способом диагностики гельминтозов дополнительно установлено наличие аскарисов у 17%, эзофагостом у 29% и трихоцефал у 10,8% животных. Эти данные говорят о более высокой диагностической эффективности нового метода.

В литературе данный способ не описан, поэтому он является новым, соответствует критерию изобретательского уровня и промышленной применимости.

2. Лутфуллин М.Х., Латыпов Д.Г., Корнишина М.Д. Гельминто-копроскопические исследования животных. Казань, 2002, 24 с.

Способ диагностики гельминтозов свиней, заключающийся в том, что берут 1 г фекалий, размешивают в 13 мл комбинированной флотационной жидкости, состоящей из насыщенного раствора NaCl (420 г на 1 л) и сахара (1670 г на 1 л), взятых в соотношении 6:1 соответственно, фильтруют, отфильтрованную взвесь центрифугируют в течение 2 мин при 1500 об/мин, после чего микроскопируют поверхностную пленку.

Диагностика (от греч. diagnostikos — способный распознавать) — методы исследования животных для распознавания болезней и состояния организма с целью назначения необходимого лечения и проведения профилактических мероприятий.

Диагностика гельминтозов имеет свои особенности, и точный диагноз может быть установлен в случае выявления возбудителей болезни. С этой целью применяют методы прижизненной и посмертной диагностики. В зависимости от цели диагностику гельминтозов проводят для научно-исследовательских или профилактических работ, для установления экстенсивности и интенсивности инвазии, а также для дифференциации возбудителей.

Прижизненная диагностика базируется на изучении эпизоотологических данных (зональные особенности болезни, видовой состав возбудителей, порода и возраст животных, время года, источник инвазии), клинических симптомов болезни и результатов лабораторных исследований.

Основное значение придают гельминтокопроскопическим и специальным исследованиям крови, мочи, молока, кожи, мышц, сухожилий, истечений из глаз, содержимого желудка. При положительных результатах обнаруживают яйца, личинки, половозрелых гельминтов или их фрагменты, эозинофилию.

Гельминтокопроскопические исследования разделяют на гельминтоскопические (обнаружение половозрелых гельминтов или их фрагментов), гельминтоовоскопические (от лат. ovum — яйцо) и гельминтоларвоскопические (от лат. larva — личинка), во время которых находят яйца или личинки паразитических червей.

Для исследований рукой в резиновой перчатке берут 4-10 г фекалий из прямой кишки или с пола, если они свежие и известно, какому животному принадлежат. От свиней, телят, овец, коз фекалии следует брать средним и указательным пальцами в перчатках. У кроликов фекалии (несколько шариков) получают нажатием на брюшную стенку в участке прямой кишки. От птиц, пушных зверей, плотоядных животных, диких хищников (в зоопарках) фекалии собирают с пола клеток (групповые пробы).

Гельминтоскопические методы диагностики. Гельминтоскопию применяют для обнаружения половозрелых и молодых паразитических червей ил и их фрагментов в фекалиях, а также в полостях и органах больных животных.

Гельминтоовоскопические методы диагностики. Гельминтоовоскопия охватывает большое количество исследовательских приемов, которые используют для обнаружения яиц паразитических червей. Следует помнить, что интенсивность выделения яиц гельминтами зависит от многих факторов. Например, в период лактации у овец значительно повышается выделение яиц кишечных нематод. Наоборот, осенью со снижением температуры воздуха у возбудителей диктиокаулеза наступает половая депрессия.

Яйца гельминтов нужно дифференцировать от спор грибов, яиц клещей и т. п. Основными признаками яиц паразитических червей является определенная структура их оболочек (гладкая или с выемками, наличие крышечки, бугорков, пробочек) и внутренняя организация (зародыш на разных стадиях развития). Размеры яиц возбудителей очень колеблются. В зависимости от размеров их разделяют на: очень большие — длиной 0,15 мм и больше (Nematodirus spathiger); большие — 0,1 — 0,14 мм (Paramphistomum ichikawai); средние — 0,06 — 0,09 мм (Dioctophyme renale); мелкие — 0,03 — 0,05 мм (Tetrameres fissispina) и очень мелкие — 0,02 мм и меньше (Opisthorchis felineus). Яйца разных видов гельминтов отличаются друг от друга по величине, форме, строению и цвету оболочек и состоянию развития зародыша.

Гельминтоларвоскопические методы применяют для обнаружения личинок паразитических червей в фекалиях (диктиокаулез), молоке (стронгилоидоз, неоаскароз), выделениях из глаз (телязиоз), на коже (онхоцеркоз). Они дифференцируются по размеру, строению, форме.

Специальные диагностические исследования проводят сравнительно реже. Для этого исследуют мочу (диоктофимоз), кровь (сетариоз, дирофиляриоз) и т. п.

Иммунобиологические методы диагностики приобретают все более широкое применение при эхинококкозе, ценурозе, мониезиозе, диктиокаулезе, трихинеллезе и некоторых других гельминтозах. По чувствительности иммуноферментный метод диагностики (ELISA) значительно превосходит РИГА, РИД, РГА и прочие серологические реакции. Все чаще применяют методы молекулярно-биологической диагностики инвазионных болезней (полимеразная цепная реакция — ПЦР).

Перспективными могут оказаться серологические исследования, при которых антигенами являются живые личинки трематод, цестод и нематод. Их вносят в сыворотку крови больных животных. На этой основе ставят реакции микропреципитации и сколекспреципитации. Преципитины в течение 24ч концентрируются вокруг ротового (на хоботке или сколексе) и полового отверстий личинок паразитических червей.

Диагностическая дегельминтизация. С целью ранней диагностики гельминтозов, если возбудители еще не достигли половой зрелости, больным животным назначают антгельминтики. Этот метод часто применяют при кишечных цестодозах и аскаридатозах. У плотоядных животных и птиц паразитические черви выделяются с фекалиями во внешнюю среду уже через 5 — 6 ч, у жвачных животных — через 12 — 18 ч.

Методы посмертной диагностики дают возможность обнаружить возбудителей на разных стадиях развития в организме животных после их вскрытия. К. И. Скрябин предложил методику полного и неполного гельминтологического вскрытия трупов. При полном гельминтологическом вскрытии тщательно исследуют все органы и ткани с целью обнаружения в них гельминтов. Этот метод применяют преимущественно во время выполнения научно-исследовательских работ. Неполное гельминтологическое вскрытие используют для установления диагноза. При этом исследуют только отдельные органы с целью выявления в них паразитических червей.

Обязательно нужно исследовать мясные туши свиней и крупного рогатого скота на наличие в них гельминтов или их личинок (цистицеркоз, трихинеллез у свиней).

Исследование промежуточных и резервуарных хозяев гельминтов. Возбудителями многих болезней животных являются биогельминты, поэтому исследования промежуточных, дополнительных, резервуарных хозяев паразитических червей дают возможность выяснить гельминтологическую ситуацию, прогнозировать появление паразитозов в конкретных населенных пунктах, районах, областях.

Промежуточными хозяевами биогельминтов могут быть пресноводные и сухопутные моллюски, ракообразные (бокоплавы, циклопы, дафнии, водяные ослики), насекомые (муравьи, стрекозы, мухи, комары, мошки, мокрецы, жуки), орибатидные клещи, дождевые черви. Их исследуют под бинокулярной лупой или при малом увеличении микроскопа. Личинки гельминтов локализуются в разных органах и тканях промежуточных хозяев.

Моллюски в естественных условиях нередко заражаются личинками трематод и некоторых видов нематод. Местом локализации личинок является преимущественно печень. Она размещена в верхушке ракушки. Личинок исследуют компрессорным методом под микроскопом. По форме церкарии трематод напоминают головастиков лягушек.

Орибатидные клещи — промежуточные хозяева мониезий и других лентецовых червей семейства Anoplocephalidae. Они мелких размеров (до 1 мм длиной), живут в верхних слоях почвы. Цистицеркоиды цестод диаметром 0,15-0,19 мм имеют четыре присоски и хвостовой придаток. Личинки развиваются в брюшной полости клещей.

Промежуточными и дополнительными хозяевами гельминтов могут быть насекомые: муравьи — Dicrocoelium dendriticum, стрекозы — Prosthogonimus ovatus, мухи-коровницы — Thelazia sp., комары — Dirofilaria sp., мошки и мокрецы — Onchocerca sp., жуки — Macracanthorhynchus hirudinaceus.

Бокоплавы живут в морских и пресных водоемах. Они достигают в длину 2 см и являются промежуточными хозяевами возбудителей тетрамероза, стрептокароза и полиморфоза птиц. Личинок гельминтов обнаруживают при компрессорном исследовании этих ракообразных.

Циклопы являются промежуточными хозяевами возбудителей гименолепидозов водоплавающих птиц. Живут в стоячих водоемах, даже в лужах.

Дафнии зарегистрированы промежуточными хозяевами возбудителей эхинуриоза и тетрамероза водоплавающих птиц. Живут преимущественно в прудах.

Водяные ослики — промежуточные хозяева возбудителей филиколлеза водоплавающих птиц. Распространены в пресноводных водоемах.

Дождевые черви, живущие в почве и навозе (олигохеты), являются промежуточными хозяевами Metastrongylus sp. В их теле спиралевидные личинки локализуются в тканях пищевода и кровеносных сосудах. Некоторые виды дождевых червей, живущих в водоемах, являются промежуточными хозяевами возбудителей гистрихоза и пороцекоза уток. Личинки Hystrichis tricolor до 3 см длиной, беловатого цвета, просвечиваются через кожные покровы червя. Личинки Porrocaecum crassum намного меньших размеров (до 3 мм). Их находят в заднем отделе кишок промежуточных хозяев.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Источник: под ред. В.Ф. Галата и А.И. Ятусевича. Руководство по ветеринарной паразитологии. Минск: ИВЦ Минфина, 2015. — 496 с.

В процессе гельминтоовоскопии важным является соблюдение определенных стандартов. Считается, что на результаты исследования (независимо от его метода) влияют: величина массы пробы фекалий, время флотации или седиментации, размер ячеек фильтрационной сетки, диаметр кольца петли, форма, высота и объем стаканчиков и другие факторы (Г. А. Котельников, В. М. Хренов,1984).

В связи с этим во Всероссийском институте гельминтологии им. академика К.И. Скрябина отработаны параметры, соблюдение которых позволяет получить наиболее объективные результаты. Вот перечень некоторых из них.

1. Масса пробы фекалий при применении методов флотации, седиментации или их комбинаций должна составлять 3 г.

2. Соотношение массы фекалий к раствору должно быть 3 :50.

3. Лучшие результаты исследований получают при применении раствора аммиачной селитры (плотность 1,3) через 10—15 мин от начала флотации.

4. Более точные результаты исследований при флотации получают с использованием стеклянных мензурок объемом 50 мл, с применением проволочной петли для снятия яиц с поверхности раствора с диаметром кольца 8—10 мм при исследовании не менее 3 капель поверхности взвеси пробы.

Метод Ф. Фюллеборна — один из наиболее распространенных методов диагностики гельминтозов. Он заключается в том, что в стакане емкостью 200 мл размешивают 8—10 г свежих фекалий животных с 20-кратным объемом насыщенного раствора хлорида натрия. После тщательного размешивания взвесь фильтруют через металлическое или капроновое ситечко (можно через марлю) в другой чистый стакан емкостью 100 мл и оставляют на 45—60 мин. Затем проволочной петлей с поверхности взвеси стакана берут 3—6 капель н наносят на хорошо обезжиренное предметное стекло, покрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом. После каждого исследования стаканы, стекла и стеклянные палочки моют, стекла обезжиривают, а металлические петли обжигают на пламени спиртовки или газовой горелки, что предупреждает перенос яиц паразитов из одной пробы в другую.

В связи с тем, что плотность насыщенного раствора поваренной соли составляет 1,18—1,20, этим методом выделяется только часть яиц нематод, так как плотность яиц трихоцефал составляет 1,16—1,22, неоплодотворенных яиц аскарид— 1,26.

Метод флотации с аммиачной селитрой по Г. А. Котельникову и В. М. Хренову — один из наиболее эффективных методов диагностики аскаридатозов, трихоцефалезов, стронгилятозов, мониезиозов, стронгилоидозов, эймериозов и других паразитозов сельскохозяйственных и домашних животных.

Суть метода состоит в том, что пробу фекалий массой 3 г кладут в стаканчик, добавляют раствор аммиачной селитры плотностью 1,3 и тщательно размешивают стеклянной палочкой. Затем раствор соли порциями доливают до 50 мл. Полученную взвесь фильтруют через металлическое или капроновое ситечко в другой стаканчик и дают отстояться в течение 10 мин. При диагностике стронгилятозов достаточно, чтобы взвесь отстоялась в течение 3—5 мин. После этого металлической петлей с поверхности взвеси снимают 3—6 капель с разных мест и переносят их на предметное стекло. Исследование проводят при малом увеличении микроскопа сразу же после нанесения капель на предметное стекло, так как со временем в каплях образуются кристаллы аммиачной селитры, что затрудняет просмотр препарата.

Метод флотации с аммиачной селитрой и с центрифугированием нашел широкое применение в научной и практической работе ветеринарных специалистов Беларуси. Он отличается высокой эффективностью при диагностике ряда цестодозов, аскаридатозов, стронгилятозов, эймериозов и других паразитозов животных.

Пробу фекалий массой 3 г в стаканчике размешивают с 50 мл раствора аммиачной селитры плотностью 1,3. Полученную взвесь фильтруют через металлическое или капроновое ситечко с диаметром ячеек 0,5х0,5 мм в пробирку и центрифугируют 2 мин со скоростью 1500 об/мин. Затем металлической петлей с поверхности взвеси в пробирке снимают 3—6 капель и микроскопируют.

Поверхностный слой в центрифужной пробирке можно снять и таким способом. Если пробирка заполнена взвесью до краев, ее покрывают покровным стеклом, чтобы поверхность взвеси в пробирке прикоснулась к предметному стеклу. Через несколько минут предметное стекло снимают и микроскопируют.

Метод флотации с применением натриевой селитры считается высокоэффективным при применении раствора с плотностью 1,38—1,40 для диагностики аскаридатозов, стронгилятозов, трихоцефалезов, стронгилоидозов, эймериозов и других паразитозов.

Технически исследования проводятся так же, как и методом флотации с применением аммиачной селитры. Капли с поверхности стаканчика или центрифужной пробирки можно снимать через 8—10 мин для проведения исследований.

Метод Дарлинга состоит в том, что берут пробу свежих фекалий массой 5 г, смешивают в стакане с водой в соотношении 1 : 10, через ситечко процеживают в пробирку, центрифугируют 2 мин при скорости 1500 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют в равных частях глицерин и насыщенный раствор хлористого натрия. Чистой стеклянной палочкой взвесь тщательно размешивают и повторно центрифугируют. При наличии в пробе фекалий яиц гельминтов они всплывают на поверхность жидкости в центрифужной пробирке. Проволочной петлей берут 3—6 капель с поверхности взвеси, наносят на предметное стекло и микроскопируют.

Метод И. А. Щербовича предполагает в качестве флотационного раствора применять насыщенный раствор сульфата магния. Пробу фекалий из 3—5 г помещают в стаканчик и размешивают в воде в соотношении 1:10,отстаивают 5 мин, сливают, оставляя 10 мл осадка. Взвесь фильтруют в пробирку, центрифугируют в течение 2 минут со скоростью 1500 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют насыщенный раствор сульфата магния и повторно центрифугируют. После этого с поверхностного слоя жидкости в пробирке проволочной петлей снимают 3—6 капель, помещают на предметное стекло и микроскопируют. Диагностируют аскаридатозы, стронгилятозы, эймериозы и другие паразитозы.

Метод флотации с использованием гипосульфита натрия с плотностью 1,4 в обычном исполнении (как и с аммиачной селитрой) применяется для диагностики ряда нематодозов жвачных и свиней, эймериозов. Время флотации 10 мин.

Метод В. Н. Трача предназначен для количественного подсчета яиц гельминтов. Для этого пробу фекалий (крупного рогатого скота и свиней — 5 г, мелких жвачных — 2,5 г) помещают в стаканчик диаметром 5 см и емкостью 100 мл. Периодически помешивая, в стаканчик наливают раствор аммиачной селитры плотностью 1,3. Взвесь отстаивают и через 45 мин с ее поверхности металлической петлей диаметром 5 мм берут (с центра и периферии стаканчика) 5 капель, переносят на предметное стекло и микроскопируют. Подсчитывают все яйца гельминтов в 5 каплях взвеси. Затем определяют количество яиц паразитов в одной капле. Для определения количества яиц в пробе площадь поверхности стаканчика делят на площадь петли и умножают на количество яиц в одной капле. Полученное число делят на массу фекалий в пробе и определяют количество яиц паразитов в 1 г фекалий.

Эти методы основаны на принципе осаждения взвешенных яиц гельминтов, промывания осадка и его исследования.

Метод последовательных промываний состоит в том, что 3 г свежих фекалий кладут в стаканчик (100 мл) и тщательно размешивают с водой, доводя объем до 50 мл. Полученную смесь фильтруют через металлическое или капроновое ситечко, отстаивают в течение 10 мин. Надосадочную жидкость осторожно сливают, оставляя в стакане 3—5 мл осадка и к нему добавляют опять 50— 70 мл воды, снова отстаивают и сливают надосадочную жидкость. Так повторяют несколько раз, пока надосадочная жидкость не станет прозрачной. Затем ее сливают, осадок выливают на предметное стекло (или чашку Петри) и микроскопируют.

Этим методом можно диагностировать фасциолез, парамфистоматидозы, дикроцелиоз и другие гельминтозы.

Флотационно-седиментационный метод Н. В. Демидова применяют для диагностики фасциолеза. Для этого от крупного рогатого скота берут пробу фекалий массой 5 г (от овец - 3 г), помещают ее в стакан емкостью 200 мл, при постоянном помешивании доливают 200 мл насыщенного раствора хлористого натрия и отстаивают 20 мин. Металлической сеточкой удаляют с поверхности взвеси крупные частицы. Надосадочную жидкость сливают или отсасывают спринцовкой, оставляя на дне 25-30 мл ее. Затем оставшийся осадок размешивают стеклянной палочкой, фильтруют в чистый стакан через металлическое сито или марлю и отстаивают 5 мин. После этого надосадочную жидкость отсасывают спринцовкой, оставшиеся 15-20 мл осадка переливают в конические стаканы, отстаивают 5 минут, надосадочную жидкость сливают и осадок опять промывают. Так повторяют несколько раз, потом осадок помещают на предметное стекло и микроскопируют.

Метод седиментации с целлофановыми пленками по Г. А. Котельникову и В. М. Хренову. Вначале заготовляют целлофановые пленки. Для этого из гидрофильного целлофана толщиной 22 мкм нарезают прямоугольные кусочки размером 2х3 см и помещают их на 24 ч в чашку Петри, содержащую 50%-ный раствор молочной кислоты (можно глицерина). На 500 целлофановых пленок необходимо иметь 100 мл раствора молочной кислоты.

После подготовки целлофановых пленок берут пробу фекалий массой 2 г и размешивают их в стаканчике с небольшим количеством воды. Взвесь фильтруют через металлическое ситечко в другой чистый стакан емкостью 50 мл, отстаивают в течение 5 мин, сливают надосадочную жидкость, а к осадку добавляют 35-40 мл водопроводной воды, опять отстаивают 5 мин, надосадочную жидкость сливают, осадок переносят на предметное стекло и покрывают целлофановой пленкой. Через 8-10 минут проводят микроскопирование препарата. Метод применяется для диагностики фасциолеза, парамфистоматидозов, аскаридатозов, трихоцефалезов и других паразитозов животных.

Метод А. Ю. Вишняускаса применяется для диагностики фасциолеза, парамфистоматидозов, трихоцефалезов, мониезиоза и стронгилятозов желудочно-кишечного тракта.

Суть метода состоит в том, что берут 3 г фекалий крупного рогатого скота (или 1 г фекалий мелких жвачных), помещают в ступку, добавляют 45-50 мл воды и размешивают. Полученную взвесь фильтруют через металлическое или капроновое сито в мерный стакан или мензурку емкостью 100 мл. Ступку и сито прополаскивают водой и доводят объем взвеси до 100 мл, отстаивают 5 мин. Затем верхний слой осторожно сливают (или отсасывают с помощью груши) с таким расчетом, чтобы на дне стакана осталось 20 мл взвеси с осадком. Осадок аналогичным образом еще раз промывают водой, отстаивают и надосадочную жидкость сливают, оставляя в стакане 10 мл осадка с жидкостью. Для дальнейшего исследования необходимо иметь центрифужные пробирки (10 мл) с шлифованными краями. В такую пробирку наливают оставшиеся в стакане 10 мл жидкости с осадком и центрифугируют 1-2 минуты со скоростью 1500 об/мин. Затем верхний слой жидкости сливают, а к осадку добавляют раствор сульфата цинка (ZnSO₄ ·7H₂O) с плотностью 1,24. Мениск жидкости должен быть выше краев центрифужной пробирки. После этого центрифужную пробирку покрывают покровным стеклом таким образом, чтобы жидкость полностью с ним соприкасалась. Затем центрифугируют в течение 0,5-1 минут со скоростью 1500 об/мин. Всплывшие при этом яйца гельминтов прилипают к покровному стеклу, которое снимают с пробирки, помещают на предметное стекло и микроскопируют.

Метод Я. Д. Никольского состоит в том, что в стаканчик емкостью 100 мл наливают 20 мл водопроводной воды и помещают туда 8—10 г фекалий овец. Если в стаканчиках свежие фекалии, их встряхивают через 5 мин, если подсохшие - через 15 минут. Вслед за этим жидкость из стаканчиков сливают в серологические пробирки, отстаивают ее в течение 2 часов, а фекалии выбрасывают. Затем жидкость из пробирок отсасывают грушей с длинным наконечником, а осадок наносят на стекло и микроскопируют. Этот метод применяют для диагностики мониезиоза овец.

где а - количество осадка, мл; б — количество обнаруженных яиц фасциол, шт.; в—количество взятых для исследования фекалий, мл; г — количество исследованного осадка, мл; х—число яиц фасциол в 1 мл фекалий.

Комбинированный метод с раствором аммиачной селитры по Г. А. Котельникову и В. М. Хренову состоит в том, что берут пробу фекалий массой 3 г, помещают в стаканчики емкостью 50 мл и хорошо размешивают с водой. Полученную взвесь фильтруют в стаканчик, отстаивают, сливают, а осадок в количестве 10 мл помещают в пробирки и центрифугируют 2 минуты со скоростью 1500 об/мин. После удаления надосадочной жидкости к осадку добавляют раствор аммиачной селитры, размешивают стеклянной палочкой (после каждой пробы ее надо тщательно промывать) и повторно центрифугируют в течение 2 мин при указанной скорости. После этого с поверхности жидкости пробирки металлической петлей снимают 3-6 капель взвеси, помещают их на обезжиренное предметное стекло и микроскопируют. Оставлять предметное стекло с каплями взвеси на какое-либо время не следует, так как аммиачная селитра быстро образует кристаллы, что мешает просматривать препарат.

Этот метод эффективен для диагностики аскаридатозов, трихоцефалезов, метастронгилеза, стронгилоидозов, стронгилятозов желудочно-кишечного тракта, тениидозов и эймериозов.

Овоскопия нативных препаратов по К. Като. Перед проведением диагностических исследований готовят целлофановые полоски размером 8,2 см 2 . Их готовят из гидрофильного целлофана путем погружения в специальную смесь следующего состава: к 500 мл 6%-ного раствора карболовой кислоты добавляют 6 мл 3%-ного водного раствора малахитовой зелени и 500 мл глицерина. На 1000 целлофановых пленок расходуется 200 мл указанной смеси. Срок подготовки полосок составляет 24 ч.

Суть метода К. Като состоит в том, что на обезжиренное предметное стекло наносят 0,1 г свежих фекалий, покрывают целлофановой полоской и придавливают. Препарат микроскопируют в течение часа после приготовления, а в теплое время года через 30—40 минут. Методику К. Като можно применять для диагностики аскаридиоза, гетеракидоза и капилляриоза птиц. Эффективность ее при гельминтозах свиней ниже, чем метода флотации. Для диагностики гельминтозов жвачных ее применять нецелесообразно (Г. А. Котельников, В. М. Хренов, 1984).

Метод Столла. Он заключается в том, что в градуированный цилиндр наливают 0,56 мл раствора едкого натрия, который готовят путем добавления к 1 л воды 4 г щелочи. Затем в цилиндр вносят 4 см 3 свежих фекалий и 10 стеклянных дробинок диаметром 3 мм. Цилиндр закрывают пробкой, взбалтывают в течение 2 мин, а затем сразу же отбирают 0,15 мл взвеси (в которой содержится 0,01 см 3 фекалий) и помещают на предметное стекло в виде двух капель. Их покрывают стеклами и подсчитывают под микроскопом количество яиц в обеих каплях и умножают на 100. Полученное число определяет количество яиц гельминтов в 1 см 3 фекалий.